衰老小鼠脑组织mtDNA缺失呼吸链酶复合体活性的变化以及独活作用机制的实验研究

目的:研究独活及其醇提物对衰老小鼠脑组织线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活性的影响。方法:用聚合酶链反应(PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果:自然衰老小鼠脑组织m tDNA缺失较青年小鼠明显增多,线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活性较青年小鼠明显下降。独活及其醇提物可减少自然衰老小鼠脑组织的m tDNA缺失,提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活性。结论:独活及其醇提物对自然衰老小鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及滋补脾阴方药作用机制的实验研究

目的：本项研究旨在通过对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织线粒体DNA(mtDNA)缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的研究，探讨脾阴虚衰老状态下mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化的规律，进一步揭示脾阴虚衰老的病理实质和滋补脾阴方药的作用机制，从而为脾实质的研究提供客观依据。方法：建立大鼠脾阴虚证衰老模型，观察脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化；观察滋补脾阴方药对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的调控。结果：脾阴虚衰老状态下，大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失较青年组和正常老年组明显增多，线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活力较青年组和正常老年组明显下降，滋补脾阴方药可减少脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织的mtDNA缺失，提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活力。结论：脾阴虚衰老机体细胞mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力发生异常改变，滋补脾阴方药对脾阴虚衰老时机体mtDNA、呼吸链酶复合体活力有调控作用。     

脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及滋补脾阴方药作用机制的实验研究

目的:本项研究旨在通过对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织线粒体DNA(mtDNA)缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的研究,探讨脾阴虚衰老状态下mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化的规律,进一步揭示脾阴虚衰老的病理实质和滋补脾阴方药的作用机制,从而为脾实质的研究提供客观依据.方法:建立大鼠脾阴虚证衰老模型,观察脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化;观察滋补脾阴方药对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的调控.结果:脾阴虚衰老状态下,大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失较青年组和正常老年组明显增多,线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活力较青年组和正常老年组明显下降,滋补脾阴方药可减少脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织的mtDNA缺失,提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活力.结论:脾阴虚衰老机体细胞mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力发生异常改变,滋补脾阴方药对脾阴虚衰老时机体mtDNA、呼吸链酶复合体活力有调控作用.     

肾虚衰老与线粒体DNA氧化损伤关系的研究

目的:观察肾虚衰老与外周血线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链复合酶活力的相关性。方法:用聚合酶链反应(PCR)和酶动力学技术。结果:老年肾虚组线粒体DNA缺失较青年组和老年对照组明显增多、呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ的活力较青年组和老年对照组明显降低。补肾方五子衍宗丸可明显减少线粒体DNA缺失、提高呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ的活力。结论:提示线粒体DNA的氧化损伤可能是肾虚的重要原因之一。     

党参水提物对D-半乳糖致衰老模型小鼠肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性及线粒体结构的影响

目的:研究党参水提物对D-半乳糖致衰老模型小鼠肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性和线粒体结构的影响,探讨党参在延缓衰老中的作用及其机制。方法:将100只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组和党参水提物低、中、高剂量组5组。除正常对照组外,其余4组每日每只小鼠颈背部皮下注射5%D-半乳糖溶液,注射量为0.025 m L/g,正常对照组注射同体积生理盐水。党参低、中、高剂量组每日上午依次按相当于生药量5,10,15 g/kg个剂量给致衰老小鼠灌服党参水煎液,与造模同步,连续服药42 d。采用分光光度法测定肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性,电镜观察肝、肾线粒体结构损伤。结果:党参水提物中、高剂量组小鼠肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性均升高,其中高剂量组的肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性与模型对照组对比,差别有统计学意义(P0.01)。党参水提物高剂量组小鼠肝、肾线粒体结构异常变化明显改善,党参水提物高剂量组肝、肾线粒体损伤程度显著低于模型对照组(P0.05)。结论:高剂量的党参水提物能通过某种机制减缓或阻止线粒体结构的异常改变,改善或维持其正常功能的执行,起到延缓衰老的作用,具体的机制还有待进一步的研究。     

五子衍宗丸及其拆方对老年大鼠心脑线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及ATP合成的影响

目的研究五子衍宗丸及其拆方对线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法用聚合酶链反应(PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果五子衍宗丸及其拆方的枸杞子、菟丝子可减少老年大鼠脑组织线粒体DNA缺失(P＜0.01),提高脑线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ活力和ATP的合成(P＜0.05,P＜0.01);枸杞子、菟丝子还可减少老年大鼠心线粒体DNA缺失(P＜0.05,P＜0.01)。结论五子衍宗丸、枸杞子、菟丝子对老年大鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

电针对SAMP8小鼠海马线粒体呼吸链酶复合体活性的影响

目的观察电针对SAMP8小鼠海马线粒体呼吸链酶复合体活性的影响,从线粒体角度探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法选取8月龄SAMP8小鼠16只,随机分为模型组8只,电针组8只,另选取8只8月龄的SAMR1小鼠为对照组,疗程结束后,采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,分光光度法检测海马线粒体呼吸链酶复合体的活性。结果模型组与对照组相比,模型组鼠平均逃避潜伏期明显延长,原平台象限停留时间缩短,海马线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性降低(P<0.01,P<0.05);电针组与模型组比较,电针组平均逃避潜伏期缩短,原平台象限停留时间延长,海马线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论电针治疗AD的可能机制是提高海马线粒体呼吸链酶复合体活性,改善线粒体功能。     

五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的影响

目的：研究五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活力的影响。方法：38例男性老年肾虚者采用单盲法，随机分为五子衍宗丸治疗组和安慰剂对照组，服药3个月。分别用聚合酶链反应（PCR）和酶动力学方法检测治疗前后外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体的活力。结果：五子衍宗丸可提高男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体呼吸链酶复合体I、Ⅳ活力，减少线粒体DNA缺失（P＜0．05，P＜0．01）。结论：五子衍宗丸对男性老年肾虚者白细胞线粒体DNA氧化损伤有保护作用。     

五子衍宗丸及其拆方对老年大鼠心脑线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及ATP合成的影响

目的 :研究五子衍宗丸及其拆方对线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果 :五子衍宗丸及其拆方的枸杞子、菟丝子可减少老年大鼠脑组织线粒体DNA缺失 (P <0 0 1) ,提高脑线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ活力和ATP的合成 (P <0 0 5,P <0 0 1) ;枸杞子、菟丝子还可减少老年大鼠心线粒体DNA缺失 (P<0 0 5,P <0 0 1)。结论 :五子衍宗丸、枸杞子、菟丝子对老年大鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

松花粉对衰老小鼠肾脏线粒体DNA缺失突变的影响

目的:研究松花粉对衰老小鼠肾脏线粒体DNA(mtDNA)缺失突变的影响。方法:取昆明种衰老小鼠随机分为松花粉处理组和老年对照组,同时随机选取1组为青年对照组。松花粉处理组每天给予750 mg.kg-1的松花粉灌胃;青年对照组与老年对照组以等体积的0.9%氯化钠注射液灌胃。连续60 d后,采用聚合酶链反应(PCR)技术和光密度扫描检测3组mtDNA的缺失突变情况;测定小鼠肾脏组织中SOD活性、MDA含量。结果:老年对照组小鼠肾脏mtDNA含量及mtDNA缺失明显增多(P<0.05);与老年对照组比较,松花粉组能显著减少衰老小鼠肾脏mtDNA的缺失(P<0.05)。松花粉能明显增加衰老小鼠肾脏组织中SOD活性及减少衰老小鼠肾脏MDA含量(P<0.05)。结论:松花粉可以抑制衰老小鼠肾脏mtDNA的缺失突变,提示松花粉能减少mtDNA的氧化损伤,对mtDNA有保护作用,从而从分子水平提供了松花粉延缓衰老的可能机制。     

肾气丸对2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响

目的:观察肾气丸对2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组12只和造模组48只,造模组48只大鼠予以高糖高脂饲料喂养3周后,采用小剂量链脲佐菌素加氢化可的松注射造模,观察2周制备2型糖尿病(阳虚证)大鼠,随机分为模型组、肾气丸组、补阳组、罗格列酮组。给药3周后处死大鼠,采用酶联免疫分析(ELISA)法分别测定大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶的活性。结果:模型组Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性低于正常组(P0.01);肾气丸组、罗格列酮组Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性明显高于模型组(P0.05),但组间差异无统计学意义(P0.05);补阳组Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性明显低于肾气丸组(P0.01)。结论:肾气丸能改善2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及ATP酶的活性。     

康欣口服液对老年小鼠肝线粒体DNA缺失的影响

目前认为线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)缺失突变随增龄积累是导致衰老的重要因素之一.哺乳动物的mtDNA是一种双链环状分子,大约由16.5kb左右的碱基对组成,包含37种基因,分别编码12s和16srRNA,22种tRNA及13种氧化磷酸化的酶复合体亚基.由于mtDNA裸露于产生高氧自由基的线粒体内膜下,损伤修复系统有限,故易受氧自由基的侵袭而被氧化损伤,从而产生缺失突变.康欣口服液是补肾健脾养血活血法延缓衰老的代表方,大量的研究表明该方具有改善衰老症状积分,抗自由基损害,免疫调节,调节脂代谢,改善内分泌水平,调节神经生理学功能等延缓衰老的作用[1,2].本研究采用聚合酶链技术,观察康欣口服液对老年小鼠肝线粒体DNA缺失的影响,以期从分子水平探讨康欣口服液延缓衰老的机理.     

玉竹水提物对衰老模型小鼠线粒体DNA含量的影响

目的:从氧自由基和肝细胞线粒体DNA(mtDNA)的含量,研究玉竹抗衰老的可行性和可能的作用机制.方法:5%D-半乳糖皮下注射建立衰老小鼠模型,同时灌胃给予玉竹水提物,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水.检测肝细胞mtDNA的相对含量、血清SOD活性及MDA含量作比较.结果:玉竹水提物能够降低衰老状态下小鼠肝细胞mtDNA相对含量及血清MDA含量,提高血清SOD活性(P<0.01).结论:玉竹水提物具有减轻D-gal诱导亚急性衰老动物模型的氧化损伤,保护肝细胞mt DNA,从多方面延缓机体衰老的作用.     

二仙汤对自然衰老小鼠卵巢颗粒细胞线粒体的改善作用

目的:观察二仙汤对自然衰老小鼠卵巢颗粒细胞线粒体的改善作用。方法:昆明种小鼠分为3组:2月龄青年对照组,11月龄老年空白对照和11月龄二仙汤30 g/kg实验组。分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续用药60天。实验结束后分离卵巢颗粒细胞。采用生物发光法测定ATP含量,测定线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性,电镜和荧光染色观察线粒体的数目、形态和结构,JC-1染色观察线粒体膜电位,Western blot法检测PCG-1α、OPA1和PINK1的蛋白表达水平。结果:和青年小鼠比,衰老小鼠卵巢颗粒细胞ATP含量明显降低,线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅲ活性显著提高,线粒体数目减少,碎片物增多,膜电位降低,PCG-1α和PINK1蛋白水平下调,而二仙汤30 g/kg组可以显著提高衰老细胞的ATP含量,改善线粒体数目和结构,提高线粒体膜电位,促进PCG-1α和PINK1的表达。结论:线粒体功能降低可能是小鼠卵巢颗粒细胞衰老的机制之一,而二仙汤能够改善衰老的线粒体功能,这种改善很可能是通过促进线粒体自我更新的动力过程进行的。     

独活及其醇提物延缓脑老化机制的实验研究

探讨独活及其醇提物延缓脑老化的自由基和免疫炎症方面的作用机制 ,为延缓机体衰老提供实验依据。10月龄昆明种小鼠随机分为 5组 ,采用D 半乳糖脑老化模型 ,给药 8周 ,水迷宫试验测定学习记忆能力 ,定磷法与薄层层析法测定大脑皮层、海马、纹状体的生物膜磷脂组分 ,放免法测定血清IL 2含量。结果显示 ,各组小鼠造模后水迷宫实验错误次数明显增加 (P <0 0 1) ,独活药物组的迷宫测试结果均明显低于模型对照组 (P <0 0 1) ;在大脑皮层、海马、纹状体部位 ,模型组小鼠PC含量明显降低 ,SM含量增加 ,膜老化指数SM /PC明显增高 ,用药后 ,PC含量增加 ,SM含量降低 ,SM /PC降低 ;模型对照组小鼠IL 2含量明显低于正常对照组 (P <0 0 1) ,独活药物组的结果均明显高于模型对照组 (P <0 0 1) ,独活醇提物组与正常对照组无差别 (P >0 0 5 )。提示 :独活及其醇提物通过修复大脑皮层、海马、纹状体不同部位的膜磷脂结构 ,提高衰老模型小鼠的IL 2含量 ,抗御自由基及炎症损伤 ,从而起到提高衰老模型小鼠的学习记忆能力 ,延缓脑老化的作用     

塔本文都苏提取液对衰老小鼠脑组织端粒酶表达的影响

目的比较塔本文都苏(Tabenwendusu,TBWDS)水提取液与乙醇提取液对小鼠脑组织端粒酶的影响。方法 D-半乳糖连续ip建立衰老小鼠模型,并ig给予TBWDS水提液和醇提液,分别检测脑组织的端粒酶、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果 TBWDS水提液和醇提液均可明显提高衰老小鼠脑组织端粒酶及GSH含量和SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,用药组与衰老模型组比较有明显差异(P0.01或P0.05)。结论 TBWDS水提液和醇提液均可明显提高衰老小鼠脑组织抗氧化能力和端粒酶含量,具有延缓脑组织细胞衰老的作用,但水提液和醇提液之间没有明显差异。     

生姜醇提物对脑缺血再灌注小鼠脑组织ATP酶和 自由基代谢的影响

目的：研究生姜醇提物对小鼠全脑缺血再灌注的保护作用及神经保护机制。方法：采用结扎小鼠双侧颈总动脉反复缺血再灌注模型，化学比色法测定假手术组，模型对照组，尼莫地平组，生姜醇提物高、中、低剂量组小鼠脑组织Na^＋，K^＋ -ATP酶、Ca^2＋ -ATP酶、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果：与假手术组比较，模型对照组小鼠脑组织Na^＋，K^＋ -ATP酶Ca^2＋ -ATP酶活性降低．SOD活性与MDA含量无明显变化。生姜醇提物能显著增加全脑缺血再灌注模型小鼠脑组织Na^＋ ，K^＋ -ATP酶、Ca^2＋ -ATP酶和SOD活性，显著降低MDA含量。结论：生姜醇提物对缺血再灌注脑组织损伤的保护作用机制与增强ATP酶活性和抗氧化有关。     

蛇菰水提物对自然衰老小鼠的抗衰老作用研究

目的：研究蛇菰水提物对自然衰老小鼠的抗衰老作用。方法：自然衰老昆明小鼠,15个月龄,12只,先用改良的Morris水迷宫训练自然衰老小鼠,然后随机分为正常组和蛇菰水提物组,蛇菰水提物组灌胃给予蛇菰水提物50mg/kg,连续10天,正常组给予同等剂量的生理盐水。第11天用改良的Morris水迷宫测验小鼠的学习记忆能力,30min后处死小鼠,取脑组织,检测脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果：小鼠行为实验结果表明,与正常组相比,蛇菰水提物能明显提高小鼠的学习记忆能力（P〈0.05）。蛇菰水提物能显著提高小鼠脑组织SOD活性（P〈0.05）,降低MDA的含量（P〉0.05）。结论：蛇菰水提物对自然衰老小鼠抗衰老作用,其机制可能与抗氧化作用有关。     

定志小丸水提物和醇提物对老龄小鼠学习记忆作用的比较研究

目的:研究定志小丸水提物和醇提物对自然衰老小鼠学习记忆的影响。方法:12~13月龄雄性KM小鼠,用小鼠跳台仪测试行为学指标,用生化法测定SOD、MDA和AchE。结果:定志小丸醇提物5g/kg和20g/kg能明显降低小鼠错误次数,醇提物20g/kg能明显提高小鼠的错误潜伏期;5g/kg、20g/kg均能明显提高血清和脑组织SOD含量,降低血清MDA的含量和脑组织AchE含量。结论:定志小丸醇提物在提高自然衰老小鼠的学习记忆能力、增强胆碱能神经功能及提高机体抗氧化能力方面优于定志小丸水提物。     

苍术苷抑制氧化磷酸化的作用机制研究

目的 探讨苍术苷（ATR）抑制氧化磷酸化电子传递链可能的作用靶点。方法 将制备好的线粒体悬液分为对照组、N -乙酰- L -半胱氨酸（NAC）组、鱼藤酮（ROT）组、NAC和ROT联合组,每组再分为4小组,分别用0,20,40,100 μmol·L-1的ATR处理。测定各组线粒体呼吸链中4种蛋白质复合体和ATP酶的活性。结果 ATR能够抑制复合体Ⅰ、Ⅳ和2种ATP酶的活性,且其抑制作用和剂量相关。结论 ATR可能影响呼吸链电子传递的始端复合体Ⅰ、末端状态复合体Ⅳ和ATP酶活性,最终抑制ATP的形成。