衰老小鼠脑组织mtDNA缺失呼吸链酶复合体活性的变化以及独活作用机制的实验研究

目的：研究独活及其醇提物对衰老小鼠脑组织线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活性的影响。方法：用聚合酶链反应（PCR）、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果：自然衰老小鼠脑组织mtDNA缺失较青年小鼠明显增多，线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活性较青年小鼠明显下降。独活及其醇提物可减少自然衰老小鼠脑组织的mtDNA缺失，提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活性。结论：独活及其醇提物对自然衰老小鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及滋补脾阴方药作用机制的实验研究

目的:本项研究旨在通过对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织线粒体DNA(mtDNA)缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的研究,探讨脾阴虚衰老状态下mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化的规律,进一步揭示脾阴虚衰老的病理实质和滋补脾阴方药的作用机制,从而为脾实质的研究提供客观依据.方法:建立大鼠脾阴虚证衰老模型,观察脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化;观察滋补脾阴方药对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的调控.结果:脾阴虚衰老状态下,大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失较青年组和正常老年组明显增多,线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活力较青年组和正常老年组明显下降,滋补脾阴方药可减少脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织的mtDNA缺失,提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活力.结论:脾阴虚衰老机体细胞mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力发生异常改变,滋补脾阴方药对脾阴虚衰老时机体mtDNA、呼吸链酶复合体活力有调控作用.     

脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及滋补脾阴方药作用机制的实验研究

目的：本项研究旨在通过对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织线粒体DNA(mtDNA)缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的研究，探讨脾阴虚衰老状态下mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化的规律，进一步揭示脾阴虚衰老的病理实质和滋补脾阴方药的作用机制，从而为脾实质的研究提供客观依据。方法：建立大鼠脾阴虚证衰老模型，观察脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化；观察滋补脾阴方药对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的调控。结果：脾阴虚衰老状态下，大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失较青年组和正常老年组明显增多，线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活力较青年组和正常老年组明显下降，滋补脾阴方药可减少脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织的mtDNA缺失，提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活力。结论：脾阴虚衰老机体细胞mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力发生异常改变，滋补脾阴方药对脾阴虚衰老时机体mtDNA、呼吸链酶复合体活力有调控作用。     

肾虚衰老与线粒体DNA氧化损伤关系的研究

目的:观察肾虚衰老与外周血线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链复合酶活力的相关性。方法:用聚合酶链反应(PCR)和酶动力学技术。结果:老年肾虚组线粒体DNA缺失较青年组和老年对照组明显增多、呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ的活力较青年组和老年对照组明显降低。补肾方五子衍宗丸可明显减少线粒体DNA缺失、提高呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ的活力。结论:提示线粒体DNA的氧化损伤可能是肾虚的重要原因之一。     

党参水提物对D-半乳糖致衰老模型小鼠肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性及线粒体结构的影响

目的:研究党参水提物对D-半乳糖致衰老模型小鼠肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性和线粒体结构的影响,探讨党参在延缓衰老中的作用及其机制。方法:将100只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组和党参水提物低、中、高剂量组5组。除正常对照组外,其余4组每日每只小鼠颈背部皮下注射5%D-半乳糖溶液,注射量为0.025 m L/g,正常对照组注射同体积生理盐水。党参低、中、高剂量组每日上午依次按相当于生药量5,10,15 g/kg个剂量给致衰老小鼠灌服党参水煎液,与造模同步,连续服药42 d。采用分光光度法测定肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性,电镜观察肝、肾线粒体结构损伤。结果:党参水提物中、高剂量组小鼠肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性均升高,其中高剂量组的肝、肾线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性与模型对照组对比,差别有统计学意义(P0.01)。党参水提物高剂量组小鼠肝、肾线粒体结构异常变化明显改善,党参水提物高剂量组肝、肾线粒体损伤程度显著低于模型对照组(P0.05)。结论:高剂量的党参水提物能通过某种机制减缓或阻止线粒体结构的异常改变,改善或维持其正常功能的执行,起到延缓衰老的作用,具体的机制还有待进一步的研究。     

五子衍宗丸及其拆方对老年大鼠心脑线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及ATP合成的影响

目的研究五子衍宗丸及其拆方对线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法用聚合酶链反应(PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果五子衍宗丸及其拆方的枸杞子、菟丝子可减少老年大鼠脑组织线粒体DNA缺失(P＜0.01),提高脑线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ活力和ATP的合成(P＜0.05,P＜0.01);枸杞子、菟丝子还可减少老年大鼠心线粒体DNA缺失(P＜0.05,P＜0.01)。结论五子衍宗丸、枸杞子、菟丝子对老年大鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

五子衍宗丸及其拆方对老年大鼠心脑线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及ATP合成的影响

目的 :研究五子衍宗丸及其拆方对线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果 :五子衍宗丸及其拆方的枸杞子、菟丝子可减少老年大鼠脑组织线粒体DNA缺失 (P <0 0 1) ,提高脑线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ活力和ATP的合成 (P <0 0 5,P <0 0 1) ;枸杞子、菟丝子还可减少老年大鼠心线粒体DNA缺失 (P<0 0 5,P <0 0 1)。结论 :五子衍宗丸、枸杞子、菟丝子对老年大鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

电针对SAMP8小鼠海马线粒体呼吸链酶复合体活性的影响

目的观察电针对SAMP8小鼠海马线粒体呼吸链酶复合体活性的影响,从线粒体角度探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法选取8月龄SAMP8小鼠16只,随机分为模型组8只,电针组8只,另选取8只8月龄的SAMR1小鼠为对照组,疗程结束后,采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,分光光度法检测海马线粒体呼吸链酶复合体的活性。结果模型组与对照组相比,模型组鼠平均逃避潜伏期明显延长,原平台象限停留时间缩短,海马线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性降低(P<0.01,P<0.05);电针组与模型组比较,电针组平均逃避潜伏期缩短,原平台象限停留时间延长,海马线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论电针治疗AD的可能机制是提高海马线粒体呼吸链酶复合体活性,改善线粒体功能。     

肾气丸对2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响

目的:观察肾气丸对2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组12只和造模组48只,造模组48只大鼠予以高糖高脂饲料喂养3周后,采用小剂量链脲佐菌素加氢化可的松注射造模,观察2周制备2型糖尿病(阳虚证)大鼠,随机分为模型组、肾气丸组、补阳组、罗格列酮组。给药3周后处死大鼠,采用酶联免疫分析(ELISA)法分别测定大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶的活性。结果:模型组Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性低于正常组(P0.01);肾气丸组、罗格列酮组Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性明显高于模型组(P0.05),但组间差异无统计学意义(P0.05);补阳组Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性明显低于肾气丸组(P0.01)。结论:肾气丸能改善2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及ATP酶的活性。     

五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的影响

目的：研究五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活力的影响。方法：38例男性老年肾虚者采用单盲法，随机分为五子衍宗丸治疗组和安慰剂对照组，服药3个月。分别用聚合酶链反应（PCR）和酶动力学方法检测治疗前后外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体的活力。结果：五子衍宗丸可提高男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体呼吸链酶复合体I、Ⅳ活力，减少线粒体DNA缺失（P＜0．05，P＜0．01）。结论：五子衍宗丸对男性老年肾虚者白细胞线粒体DNA氧化损伤有保护作用。     

二仙汤对自然衰老小鼠卵巢颗粒细胞线粒体的改善作用

目的:观察二仙汤对自然衰老小鼠卵巢颗粒细胞线粒体的改善作用。方法:昆明种小鼠分为3组:2月龄青年对照组,11月龄老年空白对照和11月龄二仙汤30 g/kg实验组。分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续用药60天。实验结束后分离卵巢颗粒细胞。采用生物发光法测定ATP含量,测定线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性,电镜和荧光染色观察线粒体的数目、形态和结构,JC-1染色观察线粒体膜电位,Western blot法检测PCG-1α、OPA1和PINK1的蛋白表达水平。结果:和青年小鼠比,衰老小鼠卵巢颗粒细胞ATP含量明显降低,线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅲ活性显著提高,线粒体数目减少,碎片物增多,膜电位降低,PCG-1α和PINK1蛋白水平下调,而二仙汤30 g/kg组可以显著提高衰老细胞的ATP含量,改善线粒体数目和结构,提高线粒体膜电位,促进PCG-1α和PINK1的表达。结论:线粒体功能降低可能是小鼠卵巢颗粒细胞衰老的机制之一,而二仙汤能够改善衰老的线粒体功能,这种改善很可能是通过促进线粒体自我更新的动力过程进行的。     

黄芩水煎液对CCl_4肝损伤小鼠肝线粒体的影响

目的:观察黄芩水煎液对CCl4致肝损伤小鼠肝线粒体的影响,揭示黄芩保肝的作用机制。方法:将48只小鼠,随机分为正常对照组、模型组、联苯双酯对照组、黄芩组。正常对照组、模型组每日给予0.2 m L/10 g生理盐水,联苯双酯组每日给予0.150 mg/g联苯双酯,黄芩组每日灌服6 g/kg黄芩水煎液,连续灌胃7天。末次给药2小时后,除正常对照组外,其余各组均腹腔注射0.1%CCl4橄榄油溶液0.1m L/10 g建立小鼠肝损伤模型,正常对照组腹腔注射等体积橄榄油。18小时后,剖取肝脏,检测肝线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性,观察肝线粒体超微结构损伤。结果:黄芩水煎液可明显增强小鼠肝线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活性(P0.05);电镜观察显示,模型组线粒体肿胀,嵴缩短、消失,基质出现空泡变性;黄芩组多数线粒体超微结构正常。结论:黄芩水煎液可通过增强线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅳ酶活力及稳定和保护线粒体的结构,改善CCl4致小鼠肝脏能量代谢障碍,而起到保护肝脏的作用。     

独活及其醇提物延缓脑老化机制的实验研究

探讨独活及其醇提物延缓脑老化的自由基和免疫炎症方面的作用机制 ,为延缓机体衰老提供实验依据。10月龄昆明种小鼠随机分为 5组 ,采用D 半乳糖脑老化模型 ,给药 8周 ,水迷宫试验测定学习记忆能力 ,定磷法与薄层层析法测定大脑皮层、海马、纹状体的生物膜磷脂组分 ,放免法测定血清IL 2含量。结果显示 ,各组小鼠造模后水迷宫实验错误次数明显增加 (P <0 0 1) ,独活药物组的迷宫测试结果均明显低于模型对照组 (P <0 0 1) ;在大脑皮层、海马、纹状体部位 ,模型组小鼠PC含量明显降低 ,SM含量增加 ,膜老化指数SM /PC明显增高 ,用药后 ,PC含量增加 ,SM含量降低 ,SM /PC降低 ;模型对照组小鼠IL 2含量明显低于正常对照组 (P <0 0 1) ,独活药物组的结果均明显高于模型对照组 (P <0 0 1) ,独活醇提物组与正常对照组无差别 (P >0 0 5 )。提示 :独活及其醇提物通过修复大脑皮层、海马、纹状体不同部位的膜磷脂结构 ,提高衰老模型小鼠的IL 2含量 ,抗御自由基及炎症损伤 ,从而起到提高衰老模型小鼠的学习记忆能力 ,延缓脑老化的作用     

定志小丸水提物和醇提物对老龄小鼠学习记忆作用的比较研究

目的:研究定志小丸水提物和醇提物对自然衰老小鼠学习记忆的影响。方法:12~13月龄雄性KM小鼠,用小鼠跳台仪测试行为学指标,用生化法测定SOD、MDA和AchE。结果:定志小丸醇提物5g/kg和20g/kg能明显降低小鼠错误次数,醇提物20g/kg能明显提高小鼠的错误潜伏期;5g/kg、20g/kg均能明显提高血清和脑组织SOD含量,降低血清MDA的含量和脑组织AchE含量。结论:定志小丸醇提物在提高自然衰老小鼠的学习记忆能力、增强胆碱能神经功能及提高机体抗氧化能力方面优于定志小丸水提物。     

马齿苋多糖对衰老模型小鼠心肌线粒体能量代谢的影响

目的:探讨马齿苋多糖对衰老模型小鼠心肌线粒体(Mt)的保护作用.方法:采用小鼠注射D-半乳糖(D-gal)制成衰老模型,马齿苋多糖灌胃30d.观察了心肌细胞Mt的形态学改变,测定丙二醛(MDA)含量、心磷脂(CL)相对含量及复合体Ⅰ和复合体Ⅱ Ⅲ活性.结果:马齿苋多糖能降低衰老模型组小鼠心肌Mt内MDA含量(P＜0.05),提高CL相对含量及复合体Ⅰ和复合体Ⅱ Ⅲ活性(P＜0.05).结论:马齿苋多糖可通过抑制心肌Mt磷脂的过氧化、改善呼吸链酶活性而实现对Mt的保护作用.     

塔本文都苏提取液对衰老小鼠脑组织端粒酶表达的影响

目的比较塔本文都苏(Tabenwendusu,TBWDS)水提取液与乙醇提取液对小鼠脑组织端粒酶的影响。方法 D-半乳糖连续ip建立衰老小鼠模型,并ig给予TBWDS水提液和醇提液,分别检测脑组织的端粒酶、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果 TBWDS水提液和醇提液均可明显提高衰老小鼠脑组织端粒酶及GSH含量和SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,用药组与衰老模型组比较有明显差异(P0.01或P0.05)。结论 TBWDS水提液和醇提液均可明显提高衰老小鼠脑组织抗氧化能力和端粒酶含量,具有延缓脑组织细胞衰老的作用,但水提液和醇提液之间没有明显差异。     

醒脾解郁法对抑郁大鼠肝脏能量代谢的调控机制研究

目的观察抑郁大鼠模型肝脏线粒体能量代谢特征及其与抑郁症行为学指征变化的动态相关性,并揭示以益气健脾为主的醒脾解郁方调节情志的效应机制。方法采用慢性不可预见性温和应激方法应激6周,应激同时灌胃给药,糖水偏爱实验、强迫游泳行为学评价作为造模成功标志,肝脏取材,并使用化学法检测线粒体损伤指标(呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ含量)和能量指标(ATP、Na-K-ATP酶、Ca-Mg-ATP酶含量)。结果检测模型大鼠肝组织线粒体指标、能量指标发现:应激2周后,与正常组相比,模型组肝组织内呼吸链复合体Ⅲ含量显著降低(P 0. 05),与模型组比较,各治疗组未见明显改善(P 0. 05);应激6周后,与正常组相比,模型组肝组织内呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和ATP、Ca-Mg-ATP酶含量减少(P 0. 05),与模型组比较,中药高剂量组可显著增加肝组织内呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和ATP、Ca-Mg-ATP酶的含量(P 0. 05),西药舍曲林组可显著增加肝组织内呼吸链复合体Ⅳ含量(P 0. 05)。结论醒脾解郁方可以明显改善抑郁大鼠肝脏线粒体能量代谢功能,发挥抗抑郁效应。     

苍术苷抑制氧化磷酸化的作用机制研究

目的 探讨苍术苷（ATR）抑制氧化磷酸化电子传递链可能的作用靶点。方法 将制备好的线粒体悬液分为对照组、N -乙酰- L -半胱氨酸（NAC）组、鱼藤酮（ROT）组、NAC和ROT联合组,每组再分为4小组,分别用0,20,40,100 μmol·L-1的ATR处理。测定各组线粒体呼吸链中4种蛋白质复合体和ATP酶的活性。结果 ATR能够抑制复合体Ⅰ、Ⅳ和2种ATP酶的活性,且其抑制作用和剂量相关。结论 ATR可能影响呼吸链电子传递的始端复合体Ⅰ、末端状态复合体Ⅳ和ATP酶活性,最终抑制ATP的形成。     

川楝子不同炮制品对人正常肝细胞LO2的体外肝毒性研究

目的:比较川楝子不同炮制品体外对人正常肝细胞LO2的毒性作用,初步探讨川楝子炮制减毒的原理。方法:以人正常肝细胞LO2细胞为研究对象,采用MTT法检测川楝子不同炮制品对LO2细胞活性的影响,并测定线粒体复合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性。结果:与阴性对照组比较,生川楝子在125～2 000μg/mL能够显著抑制LO2细胞的增殖。与生川楝子相比,醋川楝子和盐川楝子在62.5～2 000μg/mL能显著降低对LO2细胞的增殖抑制作用;而酒川楝子在62.5～500μg/mL却能显著增加对LO2细胞的增殖抑制作用。川楝子各炮制品体外对LO2细胞的毒性作用顺序为:酒川楝子生川楝子焦川楝子盐川楝子醋川楝子。与阴性对照组相比,川楝子生品对线粒体呼吸酶链复合物酶Ⅰ～Ⅳ活性均有显著抑制作用。与生川楝子相比,醋炙品可显著降低对线粒体呼吸酶链复合体Ⅰ、Ⅲ的抑制作用;炒焦品可显著降低对线粒体呼吸酶链复合体Ⅰ的抑制作用;盐炙品可显著降低对线粒体呼吸酶链复合体Ⅰ的抑制作用。结论:不同川楝子的炮制品均在体外对LO2细胞具有毒性作用,炮制可降低川楝子的体外肝毒性作用,其炮制减毒机制可能与线粒体功能障碍减轻有关。     

脾阴虚证与自由基、能量代谢的相关性及理脾阴正方对其的作用

目的:通过观察理脾阴正方对脾阴虚证大鼠回肠组织中MDA含量、GSH-PX以及线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅳ活性的影响,探讨其对脾阴虚证大鼠自由基代谢和细胞能量代谢的恢复机理。方法:以复合因素损害大鼠,对正常对照组、脾阴虚模型组、脾阴虚中药反证组用比色法检测回肠组织中丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及回肠组织线粒体Ⅰ、Ⅳ活性。结果:(1)脾阴虚模型组MDA含量明显高于正常组(P<0.05)、GSH-Px、线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅳ活性明显低于正常组(P<0.05)。(2)脾阴虚中药反证组MDA含量低于脾阴虚模型组(P<0.05)、GSH-Px、线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅳ活性活性高于模型组(P<0.05)。结论:理脾阴正方能提高大鼠回肠组织中GSH-Px、线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅳ的活性,降低大鼠回肠组织中脂质过氧化物MDA的含量,这可能是理脾阴正方对脾阴虚证大鼠自由基修复和细胞能量代谢障碍的保护机理。