无毒棉籽水提物对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的对抗作用

目的 :探讨无毒棉籽水提物 (CTN-W)抗抑郁、抗焦虑作用的可能机理。方法与结果 :提取大鼠大脑皮层突触膜并与CTN-W 0.01,0.03,0.10,0.30mg·mL^-1直接孵育 ,放免法测定腺苷酸环化酶 (AC)活性的改变 ,发现CTN-W可剂量依赖地激活AC ;MTT比色法研究表明 ,CTN-W 0.08,0 .40,2.00mg·mL^-1与皮质酮 2×10-4mol·L^-1共孵PC12细胞 48h后可防止皮质酮所致的PC12神经细胞损伤。结论 :CTN-W的作用可能与信号转导系统AC cAMP通路的激活 ,从而对损伤神经元产生保护作用有关 ,此二者共同组成了CTN-W的部分作用机制。     

红花注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤的疗效及机制研究

目的：探讨红花注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤的疗效及机制。方法: 将75只SD大鼠分为正常对照组、缺血再灌注组、红花注射液低剂量(62.5 mg·kg^-1)、中剂量(125 mg·kg^-1)和高剂量治疗组(250 mg·kg^-1),建立肾缺血再灌注损伤模型,采用血清肌酐、尿素氮和血尿渗透压值评价肾功能,TUNEL检测肾组织细胞凋亡率,免疫组化检测肾组织caspase-3蛋白表达的变化。结果: 缺血再灌注损伤后,肾功能明显减退,细胞凋亡率和caspase-3表达显著升高(P<0.01)；运用红花注射液治疗后,肾功能显著改善,细胞凋亡率和caspase-3表达显著降低 (P<0.01)。结论: 红花注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤所致的肾功能损害具有显著的保护作用,该作用可能与红花抑制细胞凋亡及caspase-3表达有关。     

巴戟天醇提取物的抗抑郁作用

 目的 探索巴戟天醇提物的抗抑郁作用。方法 采用大小鼠强迫性游泳和大鼠低速率差式强化程序(DRL 72 s)法。结果 在小鼠强迫性游泳模型上,po醇提物200～400 mg·kg^-1,或醇提物A 50 mg·kg^-1,与ip地昔帕明10 mg·kg^-1的作用类似,明显缩短小鼠的不动时间;同样,po 醇提物50～150 mg·kg^-1或醇提物A 25 mg·kg^-1也显著缩短大鼠强迫性游泳的不动时间,po 地昔帕明40 mg·kg^-1也有类似的效果。另外,在大鼠DRL 72 s模型上,ip醇提物100 mg·kg^-1或醇提物A 20 mg·kg^-1,显著增加大鼠的强化数,其效应与ip地昔帕明5 mg·kg^-1的相当,并显示明显的剂量依赖性。但与此同时,醇提物和醇提物A并不影响大鼠的反应数和效应比率。结论 巴戟天醇提物也同样具有抗抑郁作用。     

葛根素对脑缺血诱导神经细胞凋亡的保护作用

 目的探讨葛根素(puerarin,Pur)对脑缺血诱导神经细胞凋亡和凋亡蛋白抑制剂XIAP表达的影响。方法SD大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)的同时ip50,100mg·kg^-1Pur,MCAO50min后再灌注24h,用TTC染色法、Annexin-V和PI双荧光标记结合流式细胞检测法、半定量RT-PCR等技术分别检测大鼠脑水肿、梗死体积、细胞凋亡和坏死率、caspase-3活性、XIAP mRNA表达。结果Pur(100mg·kg^-1)明显缓解缺血引起的脑水肿和神经行为障碍(P<0.05);减少脑梗死体积,以皮层尤其显著(P<0.01)。Pur(100mg·kg^-1)还显著降低背外侧皮层的细胞凋亡和坏死率,抑制caspase-3活性,逆转缺血诱导的XIAP mRNA表达下调(P<0.05,P<0.01)。结论Pur通过调节神经细胞XIAP mRNA表达,抑制细胞凋亡而保护缺血性脑损伤。     

原钒酸钠对2型糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达的影响

 目的 观察原钒酸钠(sodium orthovanadate)对2型糖尿病大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA表达的影响。方法 用高脂饲料灌胃正常大鼠10 d,引起肥胖,再用四氧嘧啶(120mg·kg^-1)腹腔注射,建立2型糖尿病大鼠模型。筛选空腹血糖值大于16.7 mmol·L^-1的大鼠,随机分成5组:原钒酸钠大剂量组(9 mg·kg^-1·d^-1)、原钒酸钠中剂量组(3 mg·kg^-1·d^-1)、原钒酸钠小剂量组(1 mg·kg^-1·d^-1)、糖尿病模型组、苯乙双胍组(75 mg·kg^-1·d^-1)。连续用药7d,用快速血糖仪测空腹血糖值。用胰岛素放免试剂盒测血清胰岛素值。用骨骼肌GLUT4原位杂交试剂盒检测骨骼肌GLUT4 mRNA的表达。结果①2型糖尿病大鼠经原钒酸钠灌胃给药后,空腹血糖值与模型组相比有明显的降低(P<0.05);②用药组大鼠血清胰岛素值与模型组相比无显著差异;③用药组大鼠的骨骼肌GLUT4 mRNA表达量与模型组相比均有明显增多。结论 原钒酸钠对2型糖尿病大鼠有明显的降糖作用,对血清胰岛素的分泌无明显影响,对2型糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4 mRNA的表达有促进作用。     

口服猪脾来源免疫制组分对小鼠免疫功能的影响

 目的：研究口服Mr小于5000的猪(Sus xrofa domeastica Brisson)脾来源免疫抑制组分(SISC-p)的有效性。方法：通过给小鼠ig SISC-p,实验其时小鼠巨噬细胞吞噬功能、迟发型超敏反应(DTH)及绵羊红细胞(SRBC)特异杭体生成的影响。结果：加SISC-p对小鼠巨噬细胞吞噬功能、DTH及SRBC特异杭体生成均有抑制作用,时巨噬细胞吞噬功能的影响,较高剂量(20mg·kg^-1)和较低剂量(5mg·kg^-1)的作用效果均不如中剂量(10mg·kg^-1);对DTH的影响,较低剂量(3.8mg·kg^-1)的作用效果较好;而时SRBC.特异杭体生成的影响,则较高剂量((20mg·kg^-1)表现出了较好的作用效果。结论：po SISC-p对小鼠的免疫功能有抑制作用,但对非特异性、特异性和体液免疫功能产生抑制作用的剂量不同。     

蚓激酶对缺血再灌注大鼠脑内 JAK-STAT 通路的作用

 目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织 JAK1 和 STAT1 蛋白及 mRNA 的表达以及给予蚓激酶（ lumbrokinase ）后二者的变化。 方法 线拴法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型，随机分为蚓激酶高剂量组（ 1.2 mg·kg^-1 ）、蚓激酶中剂量组（ 0.6 mg·kg^-1 ）、蚓激酶低剂量组（ 0.3 mg·kg^-1 ）、阳性药脉络宁组（ 1.1 mL·kg^-1 ）、模型组和假手术组。再灌注开始时给予蚓激酶，连续给药 3 d ，用免疫荧光染色法检测 JAK1,STAT1 蛋白的表达，半定量 RT-PCR 方法检测 JAK1 mRNA,STAT1 mRNA 的表达。 结果 模型组 JAK1, STAT1 蛋白和 mRNA 的表达均较假手术组显著升高；蚓激酶 1.2 mg·kg ^-1 组和蚓激酶 0.6 mg·kg ^-1 组 JAK1 蛋白和 mRNA 的表达均高于模型组；蚓激酶 1.2 mg·kg^-1 组 STAT1 蛋白和 mRNA 的表达均低于模型组。 结论 JAK1 有抗神经细胞凋亡作用， STAT1 有促进神经细胞凋亡作用，蚓激酶可能通过增加脑组织 JAK1 蛋白和 mRNA 表达、减少 STAT1 蛋白和 mRNA 的表达起到对脑组织的保护作用。     

蜜环菌多糖对环磷酰胺损伤小鼠骨髓细胞的保护作用

目的:观察蜜环菌多糖对环磷酰胺所致小鼠骨髓细胞损伤的保护作用。方法:纯系昆明小鼠 50 只,随机分为5组,正常对照组;阳性对照组(rhG-CSF 20μg·kg^-1·d^-1);环磷酰胺(150 mg·kg^-1·d^-1)损伤组;蜜环菌多糖(25 0 mg·kg^-1·d^-1)低剂量保护组;蜜环菌多糖(50.0 mg·kg^-1·d^-1)高剂量保护组。阳性对照组sc rhG CSF 6 d,ip环磷酰胺3 d。保护组 ip蜜环菌多糖8 d,ip环磷酰胺3 d。记数外周血WBC,RBC,PLT和骨髓细胞悬液WBC,BM NC,骨髓象分析。结果: 保护组、阳性对照组外周血中的WBC,RBC,PLT,骨髓细胞悬液中WBC,BMNC明显高于损伤组,P<0.01;保护组中骨髓早幼粒、分叶核细胞数,高剂量组比低剂量组明显增多。结论: 蜜环菌多糖对环磷酰胺所致小鼠骨髓细胞损伤有较好的保护作用。     

大豆苷元抗心律失常作用的研究

目的 :研究大豆苷元抗心律失常作用。方法 :常规抗心律失常方法。结果 :大豆苷元 (3.0,5.0mg·kg^-1)对氯仿诱发的小鼠室颤有明显的预防作用 ,大豆苷元 (0.8,1.0mg·kg^-1)对乌头碱诱发的大鼠心律失常有明显的治疗效果。大豆苷元 (0.2,0.3mg·kg^-1)还能对抗肾上腺素诱发的家兔心律失常 ,大豆苷元 (0.03% ,0.05%)能明显降低蟾蜍离体坐骨神经动作电位振幅。大豆苷元 (0.8,1.0mg·kg^-1)对氯化钙诱发的大鼠室颤具有预防作用 ,且能明显的降低大鼠的死亡率。以上作用具有明显的剂量依赖性。结论 :大豆苷元有明显的抗心律失常作用。其抗心律失常作用可能与其抑制Na⁺内流或Ca²⁺ 内流及与阻断-β 肾上腺素受体有关。     

人参总皂苷抗皮质酮诱导的海马星形胶质细胞可塑性损伤的作用研究

目的：观察人参总皂苷（GTS）对皮质酮（CORT）诱导的小鼠抑郁样行为以及海马星型胶质细胞（AS）可塑性损伤的影响,探讨GTS抗抑郁的作用机理。方法：60只C57BL/6N小鼠随机分成6组,即Control、CORT、阳性药、低剂量GTS、中剂量GTS以及高剂量GTS。CORT组连续5周皮下注射CORT制备小鼠抑郁模型,各给药组在模型复制的后3周灌胃给予低剂量GTS（GTSL,每日12.5mg·kg^-1）、中剂量GTS（GTSM, 每日25mg·kg^-1）、高剂量GTS（GTSH,每日50mg·kg^-1）和氟西汀（Flu,每日10mg·kg^-1）。在用药处理3周之后,进行行为学试验和血清CORT测定,并采用Western-blot法检测海马胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）蛋白的表达水平,采用免疫组化染色和体视学方法定量海马（GFAP）阳性细胞的数目。结果：与对照组相比,CORT组在行为学检测中,静止不动时间明显增加,GDNF、GFAP蛋白表达水平及海马GFAP阳性细胞数目显著下调。GTS各组均能改善模型小鼠的抑郁样行为,上调GDNF、GFAP蛋白水平,增加海马GFAP阳性细胞的数目。结论：GTS对CORT诱导的小鼠抑郁样行为及海马AS可塑性损伤均有改善作用。     

Protective effects of aqueous extract from Acanthopanax senticosus against corticosterone-induced neurotoxicity in PC12 cells

Ethnopharmacological relevance

Acanthopanax senticosus, classified into the family of Araliaceae, has been known for thousands of years as a remedy and is used to treat various diseases in traditional Chinese medicine system including hypertension, ischemic heart disease and hepatitis.

Aim of the study

This study aimed to examine the protective effects of aqueous extract from Acanthopanax senticosus (ASE) on corticosterone-induced neurotoxicity and its possible mechanisms, using PC12 cells as a suitable in vitro model of depression.

Materials and methods

In this paper, PC12 cells were treated with 200 μM of corticosterone in the absence or presence of ASE in varying concentrations for 24 h. Then, cell viability was measured by MTT assay. The release amount of lactate dehydrogenase (LDH) was quantified using LDH assay kit. Apoptosis of PC12 cells was measured by Annexin V-FITC and PI labeling. The intracellular Ca²⁺ content was tested by fluorescent labeling. The mRNA level of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) was examined by real-time RT-PCR, and the expression of cAMP response element binding protein (CREB) was determined by western blotting.

Results

The results showed that treatment with 200 μM of corticosterone could induce cytotoxicity in PC12 cells. However, different concentrations of ASE (50, 100, 200, and 400 μg/mL) significantly increased the cell viability, decreased the LDH release, suppressed the apoptosis of PC12 cells, attenuated the intracellular Ca²⁺ overloading, up-regulated the BDNF mRNA level and CREB protein expression compared with the corresponding corticosterone-treated group.

Conclusion

The present results suggest that ASE exerts a neuroprotective effect on corticosterone-induced neurotoxicity in PC12 cells, which may be one of the acting mechanisms that accounts for the in vivo antidepressant activity of ASE.     

Protective effects of paeoniflorin against corticosterone-induced neurotoxicity in PC12 cells

Neuroprotection has been proposed as one of the acting mechanisms of antidepressants. Paeoniflorin, a monoterpene glycoside, has been reported to display antidepressant-like effects in animal models of behavioural despair. The present study aimed to examine the protective effect of paeoniflorin treatment on corticosterone-induced neurotoxicity in cultured rat pheochromocytoma (PC12) cells. Paeoniflorin was shown to elevate cell viability, decrease levels of intracellular reactive oxygen species (ROS) and malondialdehyde (MDA) in corticosterone-treated PC12 cells. Paeoniflorin also reversed the reduced nerve growth factor (NGF) mRNA level caused by corticosterone in PC12 cells. The results suggest that paeoniflorin exerts a neuroprotective effect on corticosterone-induced neurotoxicity in PC12 cells, at least in part, via the inhibition of oxidative stress and the up-regulation of NGF expression. This neuroprotective effect may be one of the action pathways that accounts for the in vivo antidepressant activity of paeoniflorin.     

丹参素钠的抗抑郁作用

目的：研究丹参素钠的抗抑郁作用以及对PC12细胞损伤的保护作用。方法：在大鼠强迫游泳、小鼠强迫游泳、小鼠悬尾实验3种急性抑郁模型上,将动物随机分为空白对照组、丹参素钠低、中、高剂量组和阿米替林组,观察药物预先单次灌胃对大/小鼠强迫游泳不动时间、悬尾不动时间的影响;并在细胞水平建立皮质酮损伤PC12细胞模型,观察丹参素钠对PC12细胞存活率的影响。结果：在大鼠强迫游泳实验中,空白对照组不动时间为（139±34）s,丹参素钠（12,24,48 mg·kg^-1）可分别缩短大鼠的强迫游泳不动时间至（107±23）,（89±18）,（76±18）s,与空白对照组相比有显著差异（P<0.05）;在小鼠强迫游泳和小鼠悬尾实验中,空白对照组不动时间分别为（123±39）,（110±26）s,丹参素钠（18,36,72 mg·kg^-1）可分别缩短小鼠的强迫游泳不动时间至（97±28）,（89±23）,（78±19）s;缩短小鼠的悬尾不动时间至（92±24）,（83±26）,（67±15）s,与空白对照组相比有显著差异（P<0.05）。PC12细胞经皮质酮损伤,细胞存活率显著降低吸光度（A）为0.68±0.08,与空白对照组A 1.41±0.39相比,有显著差异（P<0.05）。丹参素钠（1,10,100 mg·L^-1）可显著提高 PC12细胞的存活率,与皮质酮组比较有显著差异。结论：丹参素钠具有抗抑郁作用,作用机制可能与其细胞保护作用有关。     

血竭含药血清对雪旺氏细胞NGF,BDNF,CNTF,LNGFR,TrkA,GDNF,GAP-43和NF-H表达的影响

目的:观察血竭含药血清对雪旺氏细胞NGF,BDNF,CNTF,LNGFR,TrkA,GDNF,GAP43和NF-H表达的影响,探讨其促进周围神经再生的可能机制.方法:SD大鼠随机分为血竭给药组(灌服血竭的香油溶液)和空白对照组(等体积香油),制备血竭含药血清和空白对照血清.选取出生3 dSD大鼠双侧坐骨神经制备雪旺氏细胞;将培养的雪旺氏细胞分为血竭组和空白对照组,分别用10％血竭含药血清和空白对照血清干预培养.48 h后应用RT-PCR法检测各组雪旺氏细胞NGF,BDNF等基因mRNA表达水平.结果:镜下观察到大部分雪旺氏细胞呈双极梭形,细胞呈肩对肩或端对端排列,免疫细胞化学鉴定均呈阳性;与空白组比较,血竭组NGF,LNGFR,GDNF和GAP43 mRNA表达上调(P＜0.01),BDNF mRNA表达下调(P＜0.05),CNTF和TrkA的mRNA均下调(P＜0.01),NF-H mRNA无显著差异.结论:中药血竭可能是通过上调NGF,LNGFR,GDNF,GAP-43的mRNA的表达,同时下调BDNF,CNTF,TrkA mRNA来发挥其促进神经修复作用.     

中药复方开心散调控神经营养因子抗抑郁物质基础与作用机制研究

目的：观察开心散调控神经营养因子抗抑郁的物质基础与作用机制。方法：制备开心散大孔树脂乙醇洗脱部位,采用悬尾和强迫游泳评价抗抑郁效果。采用ELISA法测定海马中神经生长因子（NGF）与脑源性神经营养因子（BDNF）的含量。利用大鼠星型胶质瘤C6细胞系和大鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞系,评价不同乙醇洗脱部位促进NGF与BDNF表达和促进PC12细胞分化的作用。结果：开心散各效用部位均能显著缩短小鼠悬尾与强迫游泳不动时间,其中70%乙醇洗脱部位抗抑郁效用最强,该部位还能通过cAMP信号通路上调C6细胞中NGF与BDNF的表达。10%乙醇洗脱部位促PC12细胞分化的能力最强。人参皂苷是促进神经营养因子表达的主要效用成分。结论：开心散调控神经营养因子是其抗抑郁效用的重要作用机制。     

银杏内酯诱导嗜铬细胞瘤细胞表达低氧诱导因子-1α

 目的研究银杏内酯(ginkgolides,Gin)对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导分化的嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的影响以及与其相关的信号通路。方法通过MTT比色法观察不同浓度Gin对PC12细胞活性的影响,RT-PCR和Western Blot法分析Gin对PC12细胞低氧诱导因子-1(αhypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达以及MAPK信号通路的影响。结果一定浓度范围的Gin可促进PC12细胞的活性,在37.5 mg·L^-1作用24 h效果最明显。37.5 mg·L^-1 Gin单独处理PC12细胞24 h可诱导HIF-1αmRNA表达增强和蛋白水平上调。Gin还引起p-ERK水平的明显提高。Gin增加PC12细胞HIF-1α蛋白的稳定性存在一定的时间和剂量依赖关系,PD98059可部分抑制Gin的增强作用,金雀异黄素可完全阻断之;与此相对应的是,Gin以时间和剂量依赖方式诱导PC12细胞p-ERK水平的增高,PD98059和金雀异黄素均能完全阻断Gin的诱导作用。结论Gin可诱导PC12细胞表达HIF-1α,主要与MEK-ERK信号通路激活有关,可能是其促进分化的PC12生长的原因。     

Herbal formula SYJN protect PC12 cells from neurotoxicity induced by corticosterone

Aim of the study

SYJN is a Chinese herbal formula, containing four herbs: Bupleurum chinense DC., Curcuma aromatica Salisb., Perilla frutescens (Linn.) Britt. and Acorus tatarinowii Schott. Previous studies on the formula in our laboratory revealed an antidepressant-like effect on animal models of behavioral despair. However,the mechanisms underlying such antidepressant-like effect are yet to be understood. The aim of this work was to verify the previously established antidepressant-like effects on cell level using corticosterone-induced neurotoxicity in rat pheochromocytoma (PC12) cells to see if SYJN possesses any neuroprotective properties.

Materials and methods

PC12 cells were treated with 200 μM corticosterone in the absence or the presence of various concentrations of SYJN for 48 h. Then, cell viability, apoptosis, intracellular Ca²⁺ ([Ca²⁺]i) concentration and caspase-3 activity were determined.

Results

Following the exposure of PC12 cells to 200 μM corticosterone for 48 h, there were reductions in cell survival rate but increases in lactate dehydrogenase (LDH) release. In parallel, corticosterone caused significant elevations in DNA fragmentation, [Ca²⁺]i concentration and caspase-3 activity. However, when the PC12 cells were incubated with SYJN at different concentrations (10, 50 and 100 mg/L) in the presence of 200 μM corticosterone for 48 h, the above effects were evidently alleviated in a dose-dependent manner.

Conclusion

SYJN could generate a neuroprotective effect on corticosterone-induced neurotoxicity in PC12 cells, suggesting a possible action pathway of SYJN in vivo by decreasing the [Ca²⁺]i concentration and caspase-3 activity.     

补肾醒脑解毒方对培养神经元单纯疱疹病毒感染后NGF和BDNF表达的影响

观察补肾醒脑解毒中药复方对HSV-1感染后神经元内NGF、BDNF表达的调节作用.用HSV-1感染原代培养大鼠海马神经元造成急性感染与潜伏感染,然后运用Northern杂交方法检测中药煎液对感染神经元NGF和mRNA表达水平的影响.结果显示(1)正常培养海马神经元内有微量NGF和BDNF表达,加入中药煎液后NGF和BDNF表达明显提高;(2)感染0.1MOI HSV-1后6-12h出现BDNF与NGF表达增加,24h后下降,48h后显著低于正常水平,4d后表达消失.加中药煎液后NGF和BDNF表达时间延长;(3)补肾醒脑解毒方能使潜伏感染神经元NGF和BDNF表达持续增加,并维持潜伏感染神经元存活达10周以上.结果表明补肾醒脑解毒方对HSV-1感染神经元NGF和BDNF表达具有上增性调节作用.     

逍遥散抗抑郁作用的BDNF/CREB信号机制

目的:探讨逍遥散抗抑郁作用的BDNF/CREB信号机制。方法:采用小鼠慢性温和不可预知应激(CUMS)结合孤养抑郁模型,逍遥散水煎液30g/kg灌胃给药4周,测定小鼠体重、自主活动及糖水消耗量的变化以评价药物的抗抑郁效应。ELISA法测定血清BDNF水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)测定小鼠海马及皮质部位CREB、BDNF mRNA表达,Western-blot方法测定小鼠脑内ERK1/2及磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的蛋白表达量。结果:与模型组比较,逍遥散30g/kg能提高模型小鼠体重、自主活动及糖水消耗量,并有提高模型动物血清BDNF含量的趋势;逍遥散30g/kg显著增加模型小鼠海马BDNF、CREB mR-NA及皮质BDNF mRNA的表达量,对模型动物海马部位pERK1/2的表达量有提高趋势。结论:逍遥散对CUMS结合孤养的小鼠抑郁模型具有抗抑郁效应,作用机制与干预BDNF/CREB信号途径的关键分子的表达与功能有关。