运用HPLC和GC-MS研究开心散有效抗抑郁成分作用研究

目的:明确开心散提取物经大鼠灌胃后有效抗抑郁成分的吸收情况。方法:用水蒸气蒸馏法回收石菖蒲挥发油部分,用50%乙醇提取开心散复方有效成分,按原方比例予Wistar大鼠灌胃,分离含药血清和脑组织。含药血清经HPLC检测,定性分析有效抗抑郁成分人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、3,6’-二芥子酰基蔗糖;脑组织匀浆离心后分离上清液,经萃取后,GC-MS定性分析复方中石菖蒲挥发油有效抗抑郁成分α-细辛醚和β-细辛醚入脑情况。结果:HPLC得到人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、3,6’-二芥子酰基蔗糖;GC-MS得到α-细辛醚和β-细辛醚。结论:开心散的5种有效抗抑郁成分均能被大鼠吸收,进一步明确了开心散抗抑郁疗效的物质基础。     

基于“五原则”的开心散质量标志物（Q-Marker）的预测分析

开心散是治疗“好忘”的经典名方,现收录于《古代经典名方目录（第一批）》,可治疗心失所养、痰阻心窍、心肾不交所致之善忘。临床常用于改善记忆力衰退、语言障碍、认知功能障碍、人格改变等神经精神疾病的症状。通过梳理开心散的化学成分、质量控制、药动学、药理作用以及临床应用等相关文献,基于“五原则”对开心散的中药质量标志物（quality marker,Q-Marker）进行预测分析,人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、细叶远志皂苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖、远志(口山)酮III、茯苓酸、β-细辛醚、α-细辛醚的专属性高、可测性强,可作为开心散的Q-Marker,为其质量控制研究提供参考。     

基于3,6'-二芥子酰基蔗糖在记忆障碍模型大鼠体内表征的 单体、远志及其经典方开心散药代动力学

目的:建立RP-HPLC测定大鼠血清中3,6′-二芥子酰基蔗糖浓度的方法,研究3,6′-二芥子酰基蔗糖、远志及开心散中3,6′-二芥子酰基蔗糖在记忆障碍模型大鼠体内的药动学特点,评价远志药材中其他成分和复方中其他配伍对3,6′-二芥子酰基蔗糖药动学的影响.方法:大鼠腹腔注射东莨菪碱致记忆障碍模型,分别灌胃给予3,6′-二芥子酰基蔗糖对照品、远志水提物和开心散水提物,腹主动脉采血,离心,取血清适量,加0.1 mmol磷酸二氢钾-乙腈沉淀蛋白,取上清液氮气吹干,水溶解,过滤,用HPLC分析,以C18为固定相,流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱,在330 nm检测3,6′-二芥子酰基蔗糖血药浓度,Kinetics 4.4软件处理数据.结果:3,6′-二芥子酰基蔗糖血清在0.052 ～2.08 mg·L-1线性关系良好,血浆中最低定量限为52μg·L-1.记忆障碍模型大鼠灌胃给予3,6′-二芥子酰基蔗糖对照品、远志水提物和开心散水提物后的药-时曲线均使用非房室模型处理,主要药动学参数AUC0-∞,Cmax在3,6′-二芥子酰基蔗糖对照品、远志提取物和开心散各组间均有差异(P＜0.05).结论:建立的RP-HPLC测定法,专属、准确、灵敏,适用于3,6′-二芥子酰基蔗糖在大鼠体内的药动学研究.口服开心散全方和远志提取物后3,6′-二芥子酰基蔗糖呈现双峰吸收,达峰时间均为15,150 min,口服开心散全方的3,6′-二芥子酰基蔗糖AUC值是单味药远志的1.60倍,T1/2是单味药远志的1.57倍,表明通过复方配伍,可在提高生物利用度、加速吸收、延长有效血药浓度时间诸方面,调节其药动学特性,从而更有利于发挥其药效作用.     

开心散化学成分、药理作用的研究进展及质量标志物的预测分析

开心散为益气养心、安神定志的经典名方，具有改善学习记忆能力、抗氧化、抗衰老、促进神经细胞分化和再生等药理作用，现代临床多用于治疗健忘、抑郁、痴呆等症。该文对开心散的化学成分、药理作用研究进展进行整理综述，同时根据中药质量标志物(Q-marker)概念中的传递与溯源、特有性、有效性、可测性及复方配伍环境对开心散的质量标志物进行预测分析，提示西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志■酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷A、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁、茯苓酸、β-细辛醚和α-细辛醚可作为开心散的质量标志物，为建立开心散复方制剂的质量控制体系和全过程质量溯源体系提供科学参考依据。     

经典名方开心散的基准样品关键质量属性研究

该研究使用不同批次饮片制备15批开心散基准样品粉末，建立开心散HPLC特征图谱，并进行特征峰归属和相似度分析；以西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志口山酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、人参皂苷Rb₁、β-细辛醚、α-细辛脑和去氢茯苓酸为指标性成分建立开心散多成分含量测定方法，以均值的70%～130%为界限设定各质量控制指标的量值波动范围。15批开心散基准样品的特征图谱共有22个特征峰，指认出8个色谱峰，相似度在0.992～0.999;15批基准样品中西伯利亚远志糖A5质量分数在0.34～0.55 mg·g^-1、西伯利亚远志糖A6 0.43～0.57 mg·g^-1、远志口山酮Ⅲ0.12～0.19 mg·g^-1、3,6′-二芥子酰基蔗糖1.08～1.78 mg·g^-1、人参皂苷Rb₁ 0.33～0.62 mg·g^-1、β-细辛醚2.34～3.72 mg·g^-1、α-细辛脑0.11～0.22 mg·g^...     

开心散60Co-γ射线辐照灭菌工艺优化及不同灭菌方式对其质量影响研究

目的 优选开心散最佳⁶⁰Co-γ射线辐照灭菌工艺,并对比不同灭菌方式对开心散的灭菌效果及质量的影响。方法 以西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志(口山)酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖、人参皂苷Rb₁、β-细辛醚、α-细辛醚、去氢茯苓酸的含量和灭菌率的综合评分为指标,采用层次分析(analytic hierarchy process,AHP)法确定各指标权重系数,考察开心散不同辐照剂量的灭菌效果,优化开心散辐照灭菌工艺参数;通过微生物限度检测、指标成分含量及特征图谱检测,并结合灭菌后的制剂性状,对比辐照灭菌、湿热灭菌、干热灭菌和乙醇灭菌的灭菌效果和对开心散质量的影响。结果 按照确定的权重系数进行综合评价,确定开心散最佳⁶⁰Co-γ射线辐照灭菌工艺条件为辐照剂量6 kGy;不同方式灭菌样品的微生物限度检查均符合药典规定;与未灭菌制剂相比,经辐照灭菌后样品中西伯利亚远志糖A6、3,6’-二芥子酰基蔗糖含量降低,人参皂苷Rb₁、β-细辛醚和α-细辛醚含量增加;与辐照灭菌相比,经干热灭菌后多种指标成分...     

石菖蒲开窍醒神物质基础的药学系列研究

目的 探讨石菖蒲开窍醒神作用的物质基础。方法 采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法建立石菖蒲挥 发油特征指纹图谱;采用GC-MS及HPLC法比较石菖蒲、水菖蒲、九节菖蒲成分的异同;采用GC-MS法分析水煎液 与醇提液主要化学成分;采用HPLC法测定β-细辛醚、α-细辛醚含量;采用GC-MS法分析挥发油入脑成分。结果 以 甲基丁香酚、顺式甲基异丁香酚、反式甲基异丁香酚、γ-细辛醚、β-细辛醚、α-细辛醚6个特征成分为指标, 建立了挥发油的GC-MS指纹图谱辨识技术;石菖蒲、水菖蒲及九节菖蒲挥发油以及β-细辛醚、α-细辛醚的含量 存在明显差异,不应混用;在GC-MS可检出成分中,石菖蒲水煎剂、醇提液除含挥发油外,尚含有2,3-二氢-3,5二 羟基-6-甲基-4H-吡喃-4-酮(4H-Pyran-4-one,2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl-)与5-羟甲基糠醛(2- Furancarboxaldehyde,5-[hydroxymethyl]-)等成分;精制β-细辛醚纯度达99％以上;6批次药材中β-细辛 醚含量为1．09％-2．87％,α-细辛醚含量为0．011％-0．172％;顺式甲基异丁香酚、γ-细辛醚、β-细辛醚、α-细 辛醚4个挥发油成分能进入脑组织。结论 石菖蒲挥发油及β-细辛醚可能是药效活性的最主要有效部位(成分)。     

GC-MS分析石菖蒲挥发油透大鼠血脑屏障的成分研究

目的：探讨石菖蒲挥发油中有哪些成分能透过血脑屏障进入脑组织。方法：采用GC－MS法对石菖蒲挥发油灌胃给药后进行大鼠脑组织中的挥发油成分进行分析。结果：顺式甲基异丁香酚，榄香素，β－细辛醚，α－细辛醚4个成分能进入脑组织，结论：石菖蒲挥发油开窍醒神的作用可能是多个成分综合作用的结果。     

石菖蒲及其复方开心散中β-细辛醚的肠吸收特性研究

目的通过对石菖蒲及其复方开心散中β-细辛醚的肠吸收特性研究与对比,评价开心散配伍前后石菖蒲中有效成分β-细辛醚的肠吸收特性变化。方法采用大鼠翻转肠囊法,进行开心散和石菖蒲的肠吸收实验,用HPLC-DAD分析,选用Waters XbridgeTMshield C18色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,254 nm检测肠吸收液中β-细辛醚的含量,计算获得肠吸收动力学参数。结果开心散全方和石菖蒲提取物中β-细辛醚累积吸收药量均随时间线性增加,高、中、低三个剂量中β-细辛醚吸收速率常数(K_a)均无显著性差异,符合一级吸收模型。两个提取物中β-细辛醚的表观渗透系数(Paap)在三个剂量组间均无显著性差异,Paap均大于1×10~(-4)cm/min,吸收较好。综合Ka和Paap信息,开心散全方和石菖蒲提取物中β-细辛醚在大鼠小肠的吸收机制可能属被动扩散。结论对比石菖蒲提取物与开心散提取物中β-细辛醚的吸收百分率,开心散配伍前后β-细辛醚的吸收无显著性差异,说明开心散复方配伍对来自石菖蒲的类药成分β-细辛醚肠吸收无明显影响。     

经典名方开心散不同温度高压蒸汽灭菌条件下9种指标成分含量变化研究

目的建立UHPLC-DAD同时测定开心散中西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、细叶远志苷A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、β-细辛醚、α-细辛醚的含量,并比较不同高压蒸汽灭菌温度对开心散中9种指标性成分的含量影响,为开心散灭菌工艺选择提供参考。方法高压蒸汽灭菌法(灭菌温度111、121、131℃;保持时间60 s)灭菌处理开心散散剂;采用Acquity UPLC?BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)进行检测;以乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,进样体积2μL,柱温30℃,检测波长203 nm。结果 9种指标性成分分离度良好,各成分均具有较宽的线性范围和良好的线性关系(r²>0.999),有良好的精密度、稳定性、重复性和加样回收率。不同的高压蒸汽灭菌温度对9种指标性成分的含量均存在一定的差异,通过对不同灭菌温度灭菌后的开心散菌检和其中9种指标性成分的含量的检测对比,高压蒸汽灭菌111℃、保留60 s,菌检符合药典要求,且各成分含量变化和灭菌前样品差异最小。结论建立的UHPLC-DAD方法可用于同时测定开心散9种指标性成分的含量,该方法操作简便、灵敏度高、准确性好、实用可靠,开心散质量控制研究提供理论依据。     

地黄饮子的GC-MS指纹图谱研究

目的 对地黄饮子(熟地黄、山茱萸、五味子、巴戟天、麦冬等)中挥发性成分进行分析,建立其挥发性成分的气相色谱-质谱联用(GC-MS)指纹图谱.方法 采用GC-MS联用技术对自制10批地黄饮子的挥发性成分进行分析,建立其指纹图谱,确定共有色谱峰并对其进行归属认定.结果 10批自制地黄饮子指纹图谱中共标定18个共有色谱峰,分别由五味子、石菖蒲、远志和肉桂四味药材贡献产生.结论 地黄饮子的GC-MS指纹图谱特征性及专属性强,该指纹图谱可作为地黄饮子挥发性成分质量控制的稳定方法.     

生脉拆方系列注射液的制备及质量标准研究

目的对生脉注射液不同拆方配伍制备的注射液进行制备工艺及质量标准研究，为生脉注射液在体药物配伍关系研究提供物质基础及质量保证。方法参照生脉注射液制备方法，规范了7种注射液的制备工艺，并采用HPLC及TLC法分别对系列注射液人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、五味子醇甲及麦冬药材进行定量或定性分析。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re在0．9424～9．424μg与0．624—6．24μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9995、r2=0．9997），平均回收率为97．0％～100．4％，RSD为0．45S～3．44％。TLC检出人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、五味子醇甲成分及麦冬对照药材主斑点。结论本试验确定的制备工艺稳定，质量控制方法便捷，结果准确可靠、重现性好，可为生脉注射液在体药物配伍关系研究提供试验基础与保证。     

三七总皂苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1对光化学反应诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓的抑制作用——三七主要成分抑制细静脉血栓

目的：三七总皂苷（PNS）、三七皂苷R1（R1）、人参皂苷Rb1（Rb1）、人参皂苷Rg1（Rg1）是三七的主要水溶性成份。含有PNS、R1、Rb1、Rg1的中药复方制剂复方丹参滴丸（CP）能抑制光化学反应诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓的形成。但是有关PNS、R1、Rb1、Rg1对血栓形成的在体影响尚不清楚。本研究探讨PNS、R1、Rb1、Rg1对光化学反应（PR）诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓形成的抑制作用。方法：将麻醉的雄性SD大鼠（200～250g）的肠系膜展开至观察板上，经大鼠股静脉注入血啉甲醚（HMME，1mg/kg），用倒置荧光显微镜100瓦汞灯作光源经蓝光滤光片照射在选定的大鼠肠系膜细静脉上。在照射开始时，设定显示器的时间为0分，在血栓达到细静脉管径的1／2时停止照射，通过连接在显微镜上的CCD连续观察并记录30min内细静脉血栓出现的时间、血栓到达细静脉直径一半的时间、血栓与照射的血管面积比。一部分大鼠在光化学反应前10min，经颈静脉分别一次性注入PNS、R1、Rb1、Rg1（各10mg／kg．BW）、或阿斯匹林（ASP，200mg／kg．BW）提前60min灌胃。结果：光化学反应组在照射13．67±2．67s后细静脉开始出现血栓，血栓与血管径的面积比迅速增加。PNS、R1、Rb1、Rg1、ASP可以延长由照射开始到血栓出现的时间，减少血栓的面积。结论：PNS、R1、Rb1、Rg1可以抑制光化学反应后细静脉血栓的形成，其效果与ASP近似。     

病窦康口服液质量标准的研究

采用双波长薄层扫描法测定了复方制剂病窦康口服液中人参皂甙Ｒｇ１的含量，建立了乌头碱限量检查方法并对甘草、附子进行了薄层定性鉴别。     

三七总皂苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1对光化学反应诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓的抑制作用——三七主要成分抑制细静脉血栓

目的:三七总皂苷(PNS)、三七皂苷R1(R1)、人参皂苷Rb1(Rb1)、人参皂苷Rg1(Rg1)是三七的主要水溶性成份.含有PNS、R1、Rb1、Rg1的中药复方制剂复方丹参滴丸(CP)能抑制光化学反应诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓的形成.但是有关PNS、R1、Rb1、Rg1对血栓形成的在体影响尚不清楚.本研究探讨PNS、R1、Rb1、Rg1对光化学反应(PR)诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓形成的抑制作用.方法:将麻醉的雄性SD大鼠(200～250g)的肠系膜展开至观察板上,经大鼠股静脉注入血啉甲醚(HMME,1mg/kg),用倒置荧光显微镜100瓦汞灯作光源经蓝光滤光片照射在选定的大鼠肠系膜细静脉上.在照射开始时,设定显示器的时间为0分,在血栓达到细静脉管径的1/2时停止照射,通过连接在显微镜上的CCD连续观察并记录30min内细静脉血栓出现的时间、血栓到达细静脉直径一半的时间、血栓与照射的血管面积比.一部分大鼠在光化学反应前10min,经颈静脉分别一次性注入PNS、R1、Rb1、Rg1(各10mg/kg.BW)、或阿斯匹林(AsP,200mg/kg.BW)提前60min灌胃.结果:光化学反应组在照射13.67±2.67s后细静脉开始出现血栓,血栓与血管径的面积比迅速增加.PNS、R1、Rb1、Rg1、ASP可以延长由照射开始到血栓出现的时间,减少血栓的面积.结论:PNS、R1、Rb1、Rg1可以抑制光化学反应后细静脉血栓的形成,其效果与AsP近似.     

七龙天胶囊HPLC指纹图谱研究及4种成分的含量测定

目的:建立七龙天胶囊HPLC指纹图谱分析方法,并同时测定红景天苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量。方法:Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);乙腈-水溶液梯度洗脱;检测波长:203nm;流速:1mL/min;进样量:10μL;温度:25℃。结果:15批七龙天胶囊的HPLC图谱有11个共有峰,相似度均>0.9,通过与混合对照品比对,指认出4种化学成分:红景天苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1。4种成分分别在46.2~595.3、55.7~717.1、46.9~604.0、76.7~845.7μg/mL内呈良好的线性关系,平均回收率在99.53%~100.38%。结论:该方法稳定可行,可用于七龙天胶囊的质量控制。     

GC-MS建立石菖蒲挥发油特征指纹图谱方法学研究

目的 :建立石菖蒲挥发油GC-MS分析色谱条件 ,初步拟定挥发油指纹特征图谱指标成分群。方法 :采用GC-MS法分析 10批石菖蒲挥发油化学成分。结果 :在进样口温度 250℃ ,接口温度 230℃ ,载气流速 1.3mL·min^-1,柱压 80kPa ,电离电压 1.4kV ,升温速率 3℃·min^-1的色谱条件下 ,石菖蒲挥发油主成分可达到较好分离 ;挥发油主要含有甲基丁香酚 (2.13% )、顺式甲基异丁香酚 (4.48% )、反式甲基异丁香酚 (0.82% )、γ-细辛醚 (4.51% )、β-细辛醚 (66.15% )、α-细辛醚 (6.35% )等 6个特征成分 ;以此 6个主要共有峰为评价指标 ,GC-MS色谱条件的精密度、稳定性、重现性良好。结论 :方法准确可靠 ,重复性好 ,可用于石菖蒲挥发油指纹图谱的研究。     

腰肾膏指纹图谱研究

目的:建立腰肾膏挥发性成分气相色谱指纹图谱及其膏团内成分的高效液相色谱指纹图谱。方法:使用挥发油提取器提取腰肾膏膏体中挥发性成分,用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠脱水后进行气相色谱指纹图谱分析;提取后膏体弃去水液并干燥,加50%甲醇超声提取60 min,提取液滤过后进行高效液相色谱指纹图谱分析。结果:气相色谱指纹图谱以水杨酸甲酯作为参照峰,得到了51个共有峰,对其中20个共有峰进行了药材归属;高效液相色谱指纹图谱以蛇床子素作为参照峰,得到了52个共有峰,对其中20个共有峰进行了药材归属。结论:结合高效液相色谱和气相色谱指纹图谱能比较全面地反映腰肾膏中有效成分的组成,有助于腰肾膏的质量控制。     

逍遥散和开心散“同病异治”抑郁症的网络药理学作用机制研究

目的采用网络药理学的方法,研究逍遥散与开心散的活性成分、作用靶点及生物学意义,探讨其"同病异治"抑郁症的作用机制。方法采用TCMID、Batman-TCM、TCM database@Taiwan分别获取逍遥散和开心散的成分和靶点,通过TTD、Pharm Gkb、CTD、Genecard、OMIM、Drug Bank筛选抑郁症相关的蛋白,构建蛋白相互作用网络(PPI),通过Cytoscape的Network Analyzer工具进行靶点的拓扑属性分析,运用其插件Cluster Viz的MCODE算法进行聚类分析,DAVID通路进行生物过程和通路富集分析。结果网络分析结果表明两方可能通过INS、AKT1、TP53、IL6、CREB1等关键蛋白,神经活性配体-受体相互作用、c AMP信号通路、5-羟色胺能神经突触、Calcium信号通路和胆碱能突触发挥抗抑郁的作用。PIK3CA、BDNF、PIK3R1、NGF蛋白所在的PI3K-Akt、钙离子等信号通路为逍遥散特有的抗抑郁机制;CCND1、PRKACA、GCLM、GCLC蛋白所在的Oxytocin信号通路、胆碱能突触等通路为开心散特有的抗抑郁机制。结论逍遥散和开心散由于组方差异,在抗抑郁靶点方面既有相同也有不同;通过对靶点和通路的分析初步阐明抑郁症"同病异治"的科学内涵。