肉桂醛对白念珠菌定植下DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠治疗作用及对dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路的影响

观察肉桂醛对白念珠菌(Candida albicans,Ca)定植+葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用,以及对dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路的影响。将C57BL/6小鼠随机分为正常组、DSS组、DSS+Ca组、肉桂醛(75 mg·kg~(-1))组和美沙拉嗪(200 mg·kg~(-1))组。DSS+Ca组小鼠每日灌服Ca(1×10~8 CFU/只),连续4 d后给予3.0%DSS溶液,自由饮用7 d;肉桂醛组和美沙拉嗪组则在DSS+Ca组的基础上,在给予DSS的同时,分别给予药物灌胃治疗;正常组和DSS组给予蒸馏水对照处理。每日观察小鼠的一般状态,记录小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI),平板培养检测小鼠粪便真菌载荷量。末次给药次日,人道处死小鼠,测量结肠长度,计算结肠黏膜损伤指数(colon mucosa damage index,CMDI),HE染色法进行组织病理学分析。ELISA法检测血清抗酿酒酵母抗体(anti-saccharomces cerevi-siae antibody,ASCA)、β-1,3-葡聚糖以及血清和组织中细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8,IL-10)的含量。免疫荧光染色法检测结肠组织β-1,3-葡聚糖含量和巨噬细胞浸润程度。Western blot法和免疫组织化学染色法检测结肠组织dectin-1,TLR2,TLR4和NF-κB的蛋白表达情况。结果显示,肉桂醛可显著改善Ca定植下UC小鼠的一般状态,降低DAI评分和病理学评分;减轻肠道黏膜充血、糜烂和结肠缩短的程度;减少小鼠肠道Ca的载荷;下调血清ASCA和β-1,3-葡聚糖含量;降低血清和结肠组织中TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-8的含量,升高IL-10的含量,抑制结肠巨噬细胞的浸润,下调结肠组织dectin-1,TLR2,TLR4和NF-κB的蛋白表达水平。结果表明,肉桂醛对Ca定植下DSS诱导的小鼠UC具有治疗作用,其机制可能在于肉桂醛能够显著抑制Ca增殖,调节dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路,协调促炎因子和抗炎因子之间的平衡。     

基于高通量转录组测序研究三黄汤缓解白念珠菌定植下DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎的作用机制

利用高通量转录组测序技术探讨三黄汤(Sanhuang Decoction,SHD)治疗白念珠菌(Candida albicans,Ca)定植小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的作用机制。采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合Ca灌胃方式构建Ca定植下DSS诱导的小鼠UC模型,并予以SHD灌肠治疗;观察小鼠一般状态、疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠长度和结肠黏膜损伤指数(colon mucosa damage index,CMDI)变化;HE染色法进行组织病理学分析;平板培养法检测小鼠肠道Ca载荷;ELISA法检测小鼠血清抗酿酒酵母抗体(anti-saccharomces cerevisiae antibody,ASCA)和β-1,3-葡聚糖的含量,以及血清和肠组织TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平;高通量转录组测序技术分析对照组、模型组和三黄汤组的差异表达基因,并对差异表达基因进行GO和KEGG pathway富集分析;qRT-PCR和Western blot检测差异基因显著富集的NOD样信号通路相关基因NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的表达水平。结果显示,SHD灌肠治疗可改善UC小鼠的一般状态,降低DAI评分;SHD能减少肠道Ca载荷,减轻肠道充血、糜烂和结肠缩短程度,并且降低血清β-1,3-葡聚糖含量,下调血清和肠道组织TNF-α、IL-1β和IL-6水平;SHD组vs模型组有383个差异表达基因,显著富集于免疫系统过程、细菌防御反应和固有免疫反应等生物学过程,KEGG pathway分析提示差异基因显著富集于NOD样受体信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用和视黄醇代谢等信号通路;SHD下调UC小鼠结肠组织NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白表达水平。以上结果表明,SHD可缓解Ca定植的小鼠UC,其作用机制可能与其对NOD样受体信号通路调控有关。     

苦豆子总碱对急性期溃疡性结肠炎小鼠血清IL-1β,IL-4的影响

目的:观察苦豆子总碱(total alkaloid of Sophora alopecuroides,TASA)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)致急性期溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用及对血清IL-1β,IL-4水平的影响.方法:C57BL/C小鼠随机分为6组:对照组、模型组、总碱高、中、低剂量组、柳氮磺吡啶组.5%DSS水溶液自由饮用8 d以产生小鼠急性期UC模型同时灌服相应药物.观察小鼠一般活动状态及大便性状、潜血便血情况,结肠大体形态学及组织病理学改变,进行疾病活动指数评分(disease activity index,DAI),酶联免疫吸附法(ELISA)法检测小鼠血清IL-1β,IL-4的水平.结果:苦豆子总碱能显著改善DSS致结肠炎小鼠的一般状态,减轻其结肠组织病理学损伤.模型组小鼠结肠黏膜DAI比正常组明显增高(P<0.01).而各给药组较模型组DAI均有不同程度的降低(P<0.01).IL-1β与模型组相比均有不同程度的降低(P<0.01),而IL-4在数值上与模型组相比有所升高,但不具有统计学意义.结论:TASA对UC小鼠急性期损伤的大肠黏膜有明显的修复作用,可能通过抑制肠道免疫反应,减少促炎因子的过度表达,调节促炎因子与抗炎因子间的平衡而发挥其抗炎作用.     

白头翁汤正丁醇提取物对外阴阴道念珠菌病小鼠阴道黏膜中性粒细胞趋化的影响

该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠阴道黏膜中性粒细胞趋化的影响。将SPF级雌性昆明小鼠72只,随机分为正常组,模型组,氟康唑组,BAEB低、中、高剂量组,皮下注射苯甲酸雌二醇致假发情期,再阴道接种白念珠菌2×10~6 CFU·mL~(-1),药物治疗7 d。革兰染色法观察小鼠阴道分泌物中白念珠菌形态;平板法检测小鼠阴道真菌载荷;HE染色法观察小鼠阴道组织病理情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠灌洗液中LDH,IL-6,TNF-α水平;巴氏染色法观察阴道灌洗液中性粒细胞并计数;ELISA法检测阴道黏膜趋化因子中IL-8和MIP-2水平;qRT-PCR法检测小鼠阴道黏膜中IL-8和MIP-2的mRNA水平。结果表明,与正常组相比,VVC模型组阴道内有大量菌丝生成且大量的真菌载荷,阴道黏膜层结构完全破坏,中性粒细胞数量增多,IL-8和MIP-2的蛋白和mRNA水平上调。经BAEB治疗,与模型组相比,治疗组小鼠阴道内菌丝减少,真菌载荷量降低,黏膜损伤有所改善,炎症因子含量降低,IL-8和MIP-2的蛋白和mRNA水平均下调。上述结果提示,BAEB可能通过抑制趋化因子以阻断中性粒细胞向阴道腔的募集而发挥治疗VVC的作用。     

艾灸神阙穴对溃疡性结肠炎小鼠血清促炎性因子及肠黏膜紧密连接蛋白的影响

目的观察艾灸神阙穴对DSS诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的疗效,探讨艾灸神阙穴对UC小鼠炎性反应及肠黏膜屏障的影响。方法以32只雄性ICR小鼠为研究对象,随机选取8只作为空白对照组,其余24只通过自由饮用3.5%DSS溶液8 d制成UC模型,造模成功后再随机分为模型组、艾灸组和阳性药物组,每组8只。持续干预8 d:艾灸组小鼠每日抓取放入固定器固定,艾灸神阙穴20 min,每日1次;空白对照组和模型组每日进行同艾灸组同样的抓取固定,但不进行其他操作,每日1次;阳性药物组小鼠按0.4 g/kg体质量灌服美沙拉嗪溶液,每日1次。干预结束后取小鼠血清用ELISA法检测促炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,取小鼠结肠组织用Western blotting法检测紧密连接蛋白1(ZO-1)、Occludin蛋白表达水平,采用HE染色法观察结肠组织病理切片,通过疾病活动指数评分(DAI)观测UC小鼠的恢复情况。结果与空白对照组相比,UC模型小鼠体质量减轻,大便稀软并带有脓血便,模型组小鼠DAI评分显著升高(P 0.05),病理组织切片显示结肠黏膜组织严重损伤,有明显炎性反应,促炎性因子IL-6、TNF-α含量明显升高(P 0.05),结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白表达均显著降低(P 0.01)。与模型组相比,艾灸组与阳性药物组小鼠结肠组织病理损伤有显著改善,炎性反应下调,DAI评分显著降低(P 0.05),血清中IL-6、TNF-α含量显著降低(P 0.05),结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白表达均显著升高(P 0.01)。结论艾灸神阙穴能有效缓解UC症状,升高结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,改善结肠组织损伤,降低UC小鼠血清炎性因子IL-6和TNF-α含量,对UC小鼠有治疗作用;提示艾灸对UC的起效机制可能与肠上皮黏膜屏障有关。     

DSS模型小鼠结肠组织变化及葛根芩连汤干预的实验研究

目的探究DSS模型小鼠结肠组织病理结构的变化及葛根芩连汤干预对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织结构的影响。方法以葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用建立小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型。按照实验内容的不同,随机分组,实验分为两个部分,第一部分随机分成4组:正常组,DSS组,中药组,中药+DSS组;第二部分随机分为4组:正常组,UC组,中药组,中药+UC组。观察各组小鼠结肠长度变化;光镜下观察各组小鼠结肠组织结构的变化。结果第一部分实验中,正常组小鼠结肠长度和DSS组以及中药+DSS组相比,均有统计学意义(P0.05);光镜下见正常组及中药组小鼠结肠组织结构完整,无病理改变出现;DSS组小鼠结肠组织病理改变明显;中药+DSS组小鼠结肠组织病理变化较DSS组轻;第二部分实验中,正常组小鼠结肠长度和UC组以及中药+UC组相比,差异具有统计学意义(P0.05);光镜下见正常组及中药组小鼠结肠组织结构完整,无病理改变出现;UC组小鼠结肠组织病理改变明显;中药+UC组小鼠结肠组织病理变化较UC组轻。结论 DSS诱导的UC小鼠模型,在疾病的发生发展过程中,葛根芩连汤对结肠组织起到了很好的保护作用;在病变发生后,葛根芩连汤对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织起到了明显的治疗作用。     

竹节参总皂苷对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠PPAR-γ信号通路及炎症因子的影响

目的:观察竹节参总皂苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的改善作用及对PPAR-γ信号通路和炎症因子的影响。方法:将小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶(SASP)阳性对照组及竹节参总皂苷高、低剂量组。通过自由饮用4%DSS诱导建立小鼠UC模型,各组连续灌胃给予不同药物10 d,正常对照组和模型组给予等体积溶剂。记录疾病活动指数(DAI)。以HE染色、免疫组化、分光光度法和ELISA法分别检测结肠病理变化、PPAR-γ表达、结肠匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性和血清IL-1β、IL-10、IL-17、IFN-γ含量。结果:竹节参总皂苷能显著降低UC模型小鼠的DAI,减轻结肠黏膜损伤,降低结肠组织MPO活性和血清IL-1β、IL-17、IFN-γ含量,而升高结肠组织PPAR-γ的表达及血清IL-10的含量。结论:竹节参总皂苷可能通过上调PPAR-γ的表达,抑制促炎因子IL-1β、IL-17、IFN-γ的释放,提升IL-10水平而产生对实验性UC的保护作用。     

白花蛇舌草对葡聚糖硫酸钠诱导的慢性溃疡性结肠炎小鼠的影响

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物(EEHDH)治疗慢性溃疡性结肠炎(UC)及抑制肠炎组织异常增生的作用。方法小鼠随机分为对照组,模型组,EEHDH低、中、高剂量(2.5、10.0、20.0 g/kg)组,葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC模型,每天记录小鼠体质量、便血、便形等症状改变,HE染色评估小鼠结肠黏膜组织病理改变,ELISA和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测血清及肠组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化,免疫组化分析肠上皮细胞中核抗原Ki67阳性率。结果与模型组比较,EEHDH中、高剂量组小鼠体质量下降相对缓慢,停止DSS刺激后恢复也较快;同时小鼠腹泻、便血症状改善明显,病理损伤和肠组织异常增生显著降低(P0.05、0.01);小鼠血清及肠组织中IL-6、TNF-α的表达及Ki67阳性率显著降低(P0.05、0.01)。结论 EEHDH能够有效改善DSS诱导的UC症状,并通过抑制IL-6等炎症因子表达降低肠组织的病理损伤、炎症浸润及异常增生,EEHDH对UC的治疗及肠炎相关肿瘤的预防具有重要的价值。     

低聚葡萄籽原花青素对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的影响及作用机制

目的探讨低聚葡萄籽原花青素(GSPE)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的影响及作用机制。方法将SPF级C57小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组(柳氮磺吡啶组)及GSPE低、中、高剂量(125、250、500 mg/kg)组,对照组给予正常饮用水,其他组均自由饮用3%DSS水溶液,连续饮用7 d,诱导小鼠UC模型,每天记录小鼠体质量、便血、便型等症状变化,药物干预治疗7 d后断头取血,收集结肠和脾脏,记录结肠长度、脾脏质量变化情况。HE染色评估小鼠结肠黏膜组织病理变化,ELISA法检测血清和结肠组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及细胞因子一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫组化分析结肠组织上皮细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)、核转录因子-κB(NF-κB)、转录因子E2相关因子2(Nrf2)及Keap-1蛋白表达水平。结果与模型组比较,GSPE中、高剂量组小鼠体质量下降相对缓慢,小鼠腹泻、便血症状改善明显;给药后小鼠血清及结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、NO、MDA水平较模型组显著降低,SOD水平则显著升高(P0.01);病理组织切片分析发现,GSPE高剂量组小鼠结肠黏膜病理损伤显著降低。免疫组化分析结果显示GSPE低、中、高剂量可显著降低NF-κB及Keap-1蛋白表达水平,升高Nrf2、HO-1蛋白表达水平(P0.01)。结论 GSPE能够有效改善DSS诱导的UC症状,通过调节氧化应激相关蛋白Nrf2、HO-1和炎症通路蛋白NF-κB的表达,进而影响氧化应激指标SOD、MDA和炎症因子的变化,降低结肠组织的病理损伤,对UC的治疗与预防具有重要的价值。     

白花蛇舌草总黄酮对实验性溃疡性结肠炎的作用及免疫学机制研究

目的：观察不同剂量白花蛇舌草总黄酮（FOD）对溃疡性结肠炎（UC）模型小鼠结肠NF-κB及IL-8,TNF-α,IL-10表达的影响,探讨其抗UC的免疫学机制。方法：60只雄性昆明小鼠随机分成6组：对照组（Cont）蒸馏水灌胃,其余5组均自由饮用4%右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）水溶液7 d以造成急性UC,同时给予下列药物灌胃：蒸馏水（DSS组）,柳氮磺胺吡啶（SASP）500 mg·kg^-1·d^-1（DSS+SASP组）,FOD 60 mg·kg^-1·d^-1（DSS+FOD-H组）,FOD 40 mg·kg^-1·d^-1（DSS+FOD-M组）,FOD 26.7 mg·kg^-1·d^-1（DSS+FOD-L组）。造模给药期间,每天对各组小鼠进行疾病活动指数（DAI）评分。造模7 d后处死小鼠,取结肠组织标本,对结肠黏膜进行病理组织学损伤评估;用免疫组化法检测NF-κB p65的表达,ELISA法检测结肠组织中IL-8,TNF-α及IL-10的表达。结果：自由饮用4%DSS水溶液7 d可成功造成小鼠急性UC,与对照组比较,DSS组小鼠的DAI、结肠病理组织学损伤评分明显上升,结肠组织中NF-κB p65及IL-8,TNF-α表达显著增多,IL-10表达明显降低（P<0.05）。 FOD可对抗DSS所致的小鼠急性UC,FOD以60,40 mg·kg^-1·d^-1预防给药7 d,可完全或部分对抗DSS引起的上述改变。与DSS组比较,DSS+FOD-H组、DSS+FOD-M组的DAI、结肠病理组织学损伤评分降低,IL-8,TNF-α及NF-κB p65表达下调,IL-10 表达上调（P<0.05）。结论：FOD有明显的抗小鼠UC的作用,其机制可能与抑制NF-κB p65激活,从而减少促炎因子IL-8,TNF-α的表达,增加抗炎因子IL-10表达有关。     

穴位埋线调控NLRP3炎症小体及IL-27表达对溃疡性结肠炎大鼠的黏膜保护作用

目的：观察穴位埋线对溃疡性结肠炎(UC)大鼠NLRP3炎症小体及IL-27表达的调控作用,探讨其治疗UC的作用机制。方法：SD大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、药物组和穴位埋线组,每组各10只。除空白组外,其余各组采用葡聚糖硫酸钠 (DSS) 法制备UC大鼠模型。药物组给予柳氮磺胺吡啶(SASP)连续灌胃14 d,穴位埋线组给予穴位简易埋线,每7 d 干预1次,共3次。观察各组大鼠一般状况,记录疾病活动度指数(DAI)、黏膜损伤指数(CMDI)和结肠长度变化;HE 染色观察大鼠结肠组织病理形态改变;ELISA测定大鼠血清IL-18、IL-1β、IFN-γ、IL-27炎性因子水平;Western-blot及RT-PCR检测大鼠结肠组织中NLRP3、caspase-1及IL-27的蛋白和mRNA表达。 结果：与模型组比较,穴位埋线治疗可有效改善 UC大鼠一般状况,降低DAI和CMDI评分,增加大鼠结肠长度,并减轻结肠组织病理损伤;同时降低了大鼠血清中IL-18、IL-1β、IFN-γ水平,升高IL-27的水平(P＜0.05);下调结肠组织中NLRP3、 caspase-1的蛋白和mRNA表达,上调了IL-27的表达(P＜0.05)。 结论：穴位埋线疗法对DSS所诱导的UC大鼠模型具有明显的治疗作用,其机制可能是通过上调IL-27的表达,抑制NLRP3炎症小体通路激活及炎性细胞因子的表达,从而减轻UC肠黏膜炎性损伤。     

藿香正气口服液对DSS 诱导结肠炎小鼠肠黏膜屏障的保护作用及机制研究

目的探讨藿香正气口服液对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导结肠炎小鼠肠黏膜屏障的保护作用及机制。 方法将32 只C57BL/6 小鼠随机分为正常对照组、DSS 模型组、藿香正气口服液组（5 mL·kg-1）和柳氮磺吡啶 组（SASP,1.5 g·kg-1）。灌胃给药,给药体积10 mL·kg-1,每日1 次,连续8 d。给药第2 天开始,采用2% DSS 连续干预7 d 建立急性结肠炎小鼠模型。给药干预后,测定小鼠体质量、结肠长度、疾病活动指数（DAI）;采 用HE 染色法观察结肠组织的病理学变化并计算病理评分;采用ELISA 法测定血清中炎症因子肿瘤坏死因子α （TNF-α）、白细胞介素（IL）1β（IL-1β）、IL-6 及IL-10 的含量;采用偶氮基质显色法测定血清中脂多糖（LPS） 的含量;采用异硫氰酸荧光素（FITC-D）标记的右旋葡聚糖法以及肠系膜淋巴结细菌移位率来检测结肠黏膜通 透性;采用免疫荧光染色法检测结肠组织中紧密连接蛋白Claudin-1 和ZO-1 蛋白的表达。结果与正常对照 组比较,DSS 模型组小鼠的体质量从第3 天开始持续降低（P＜0.05,P＜0.01）,结肠长度明显缩短（P＜0.01）, DAI 评分明显升高（P＜0.01）;结肠组织病理评分显著升高（P＜0.01）;血清TNF-α、IL-1β 及IL-6 水平明显 升高（P＜0.01）,而IL-10 水平明显降低（P＜0.01）;血清LPS 含量、结肠黏膜FITC-D 渗透率以及细菌移位率 均显著升高（P＜0.01）;结肠组织中紧密连接蛋白Claudin-1 和ZO-1 蛋白表达减弱。与DSS 模型组比较,藿香 正气口服液组小鼠的体质量有所回升（P＜0.05,P＜0.01）,结肠长度明显延长（P＜0.05）,DAI 评分明显降低 （P＜0.05）;结肠组织病理评分显著降低（P＜0.01）;血清TNF-α、IL-1β 及IL-6 水平明显降低（P＜0.05,P＜ 0.01）,而IL-10 水平明显升高（P＜0.01）;血清LPS 含量、结肠黏膜FITC-D 渗透率及细菌移位率均明显降低 （P＜0.05,P＜0.01）;结肠组织中紧密连接蛋白Claudin-1 和ZO-1 蛋白表达增强。结论藿香正气口服液可 降低DSS 诱导的结肠炎模型小鼠肠黏膜的通透性,对结肠炎小鼠的肠黏膜屏障具有保护作用。     

基于高通量测序技术研究靛玉红对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的影响

目的研究靛玉红对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型小鼠肠道菌群的影响及其作用机制。方法雄性昆明种小鼠随机分为对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶(125mg/kg)组和靛玉红低、中、高剂量(7.5、15.0、30.0 mg/kg)组,采用3%DSS自由饮用7 d诱导小鼠UC模型,第8天ig药物,连续干预7 d后,观察小鼠体征进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分;采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠结肠组织病理变化;采用ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8、IL-10、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;各组收集5份小鼠肠道内容物样本,采用细菌16S r RNA基因V4～V5区高通量测序,分析小鼠肠道内容物的菌群变化。结果与模型组比较,靛玉红组小鼠DAI评分显著降低(P0.05),结肠组织损伤减轻,炎性细胞浸润减少,血清中促炎细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α水平显著降低(P0.05),抗炎细胞因子IL-10水平呈升高趋势。16S rRNA基因测序结果显示,模型组小鼠肠道菌群多样性降低,靛玉红组小鼠肠道菌群多样性升高,在门水平主要表现为拟杆菌门与厚壁菌门比例回升,属水平7个菌属Lachnospiraceae_FCS020_group、Ruminiclostridium_9、Eubacterium_brachy_group、别样棒菌属Allobaculum、链球菌属Streptococcus、Erysipelotrichaceae_UCG_003和Tyzzerella可能与靛玉红对UC的治疗作用相关。结论靛玉红能够通过调节UC小鼠肠道菌群、抑制肠道炎性反应,从而治疗UC。     

参苓白术散对溃疡性结肠炎小鼠NLPR3,NLPR6蛋白及相关炎症因子表达的影响

目的:探讨参苓白术散对3%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗作用及相关的作用机制。方法:60只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,柳氮磺吡啶组(0.52 g·kg~(-1)),参苓白术散高、中、低(31.2,15.6,7.8 g·kg~(-1))剂量组。除正常组外小鼠饮用3%葡聚糖硫酸钠蒸馏水1周造成UC模型。造模结束后每日给药1次,正常组和模型组按20 mL·kg~(-1)给予0.9%生理盐水,共14 d。每日观察小鼠体质量、粪便性状及隐血情况并计成疾病活动指数(DAI)评分。给药结束后取血收集血清,取小鼠结肠称质量测量长度并制作病理切片。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素-18(IL-18),IL-1β含量;苏木素-伊红(HE)及阿利新蓝-过碘酸雪夫氏(AB/PAS)染色观察结肠病理情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLPR3),NLPR6蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠DAI评分显著升高(P0.01),结肠质量增加、长度变短(P0.01);结肠黏膜病理受损严重;血清中IL-1β含量明显增高(P0.05); NLRP3蛋白表达升高,NLRP6表达降低(P0.01)。给药后,与模型组比较,SASP组与高剂量组DAI评分降低(P0.05),结肠质量、长度、病理情况均改善;血清中IL-1β含量降低(P0.05); NLRP3蛋白表达降低(P0.01),NLRP6蛋白表达上调(P0.05,P0.01)。结论:参苓白术散有治疗DSS诱导UC小鼠的作用,其作用机制可能与其调节NLRP3,NLRP6蛋白及相关炎症因子,从而减轻肠道炎症反应,缓解肠黏膜损伤有关。     

人参皂苷Rg3对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠Th1/Th2失衡的影响

目的:观察人参皂苷Rg3对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠Th1/Th2失衡的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)200mg/kg组、人参皂苷Rg3 20mg/kg、40mg/kg组。除正常对照组以外的各组小鼠自由饮用3%的DSS溶液5天,后替换为正常饮用水。正常对照组和模型组给予蒸馏水灌胃,其余各组灌胃相应药物。每天观察小鼠一般状况、体重变化。第9天处死小鼠,测量结肠长度,对结肠组织进行组织形态学分析,ELISA法测定小鼠血浆中的IL-6、TNF-α和IL-10细胞因子浓度,QRT-PCR法检测结肠组织中IL-6、TNF-α和IL-10 mRNA的表达水平,Western blot测定结肠组织中NF-κB p65和p-NF-κB p65水平。结果:人参皂苷Rg3 40mg/kg组可显著增加小鼠体重和结肠长度,降低结肠病理评分,显著减少血浆TNF-α、IL-6的浓度,显著增加血浆IL-10的浓度,降低结肠组织中IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的水平,提高IL-10 mRNA的水平。降低结肠组织中p-NF-κB p65/NF-κB p65的水平。结论:人参皂苷Rg3对DSS诱导的UC小鼠有明确的治疗作用,其机制可能是通过下调TNF-α、IL-6,上调IL-10水平,调节Th1/Th2平衡,抑制NF-κB活化,从而调节肠道免疫,促进肠道粘膜的修复。     

清肠温中方对DSS诱导慢性溃疡性结肠炎模型小鼠Th1/Th2平衡的干预作用

目的研究清肠温中方对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导慢性溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠Th1/Th2平衡的干预作用。方法 90只雄性BALB/c小鼠随机分为6组,除空白组外其余均自由饮用3%DSS溶液7d,之后换蒸馏水饮用7、14d为1个周期,共3个周期复制模型。用蒸馏水、清肠温中方高、中、低剂量和美沙拉嗪缓释颗粒灌胃干预14d,记录疾病活动指数(DAI),酶联免疫吸附法检测血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),免疫组化染色检测结肠黏膜NF-κBp50表达。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分明显升高(P0.01),血清IL-1β、IL-6及TNF-α明显增多(P0.01),IL-4、IL-5明显减少(P0.01),结肠黏膜NF-κBp50表达明显增多(P0.01)。与模型组比较,清肠温中方各剂量组均能降低DAI评分(P0.05),减少血清IL-1β、IL-6及TNF-α(P0.05)、增加IL-4、IL-5(P0.05)含量,并减少结肠黏膜NF-κBp50表达(P0.05),尤其以清肠温中方中剂量组和美沙拉嗪组效果最明显。结论对于DSS诱导的慢性UC模型小鼠,清肠温中方可以减少Th1、增加Th2细胞,减少肠黏膜中的NF-κB表达,恢复Th1/Th2平衡从而起到治疗作用。     

清热化湿调枢方对溃疡性结肠炎小鼠肠道黏膜的影响北大核心CSCD

目的观察清热化湿调枢方对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠肠道黏膜的影响并分析其机制。方法选用36只SPF级小鼠,除正常组6只外,其余小鼠予2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液自由饮用7天以制备UC模型。将制备成功的小鼠按随机对照原则平均分为模型组,美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高、中、低剂量组,每组6只。正常组和模型组予0.5 mL纯水灌胃;美沙拉嗪对照组给予0.5 mL剂量为0.52 g/(kg·d)美沙拉嗪混悬液灌胃;清热化湿调枢方低、中、高剂量组分别给予0.5 mL剂量为0.845、1.69、3.38 g/(kg·d)清热化湿调枢方混悬液灌胃。各组均连续干预10天后,观察各组小鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度,ELISA法检测结肠组织细胞因子TNF-α、IL-10、C-反应蛋白(CRP)以及肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(slgA)水平,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)法检测小肠黏膜通透性,并取小鼠结肠组织HE染色以观察病理形态改变。结果与正常组比较,模型组小鼠体重减轻,IL-10和slgA含量降低,结肠长度减短(P<0.05),DAI评分、TNF-α和CRP水平、血清FITC-D含量升高(P<0.05),结肠黏膜上皮显著缺损、隐窝结构紊乱、腺体变形且数量减少、大量炎性细胞浸润。与模型组比较,美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高剂量组DAI评分差值升高(P<0.05),美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高、中剂量组小鼠体重差值、IL-10和slgA含量、结肠长度增加(P<0.05),TNF-α和CRP水平、血清FITC-D含量降低(P<0.05),美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高剂量组小鼠结肠黏膜均显著改善,黏膜上皮稍欠光滑,隐窝和腺体结构大致完整,极少炎性细胞浸润。结论清热化湿调枢方对DSS诱导的UC小鼠肠道黏膜损伤及腹泻、便血等症状有一定改善作用,其效应机制可能与改善肠道通透性有关。     

黄芩汤对葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠结肠黏膜NF-κB p65的影响

目的:探讨黄芩汤对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠结肠黏膜NF-κB p65的影响。方法:用DSS诱导结肠炎小鼠模型,实验设对照组、DSS组、DSS+黄芩汤组(130mg/kg)、DSS+美沙拉嗪组(7.4mg/kg),每组8只;3.5%DSS自由饮用7d制成结肠炎小鼠模型后第2天进行治疗,连续7d。观察小鼠体质量变化和结肠病理组织评分,异硫氰酸荧光素葡聚糖灌胃检测肠道通透性,Western blot法检测小鼠结肠组织NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与模型组比较,黄芩汤能增加DSS诱导的结肠炎小鼠体质量(P<0.01),降低结肠病理组织评分(P<0.05),对肠道上皮屏障功能具有保护作用,降低结肠组织中NF-κB p65蛋白表达水平(P<0.01)。结论:黄芩汤能够对DSS诱导的结肠炎小鼠模型起到保护作用,其作用机制可能与保护肠道上皮屏障功能、抑制NF-κB p65活化有关。     

半夏泻心汤通过抑制炎症抑制小鼠溃疡性结肠炎

[目的]观察半夏泻心汤古方剂量及现代临床常用剂量对采用葡聚糖硫酸钠（DSS）自由饮用诱导建立的溃疡性结肠炎（UC）模型小鼠（DSS-UC小鼠）炎症因子的影响,探索其合理的临床用量并从免疫角度探讨其治疗溃疡性结肠炎的作用机制。[方法]将32只C57BL6/J小鼠随机分为空白组8只、模型组8只、半夏泻心汤古方组8只和半夏泻心汤药典组8只。采用2.5%的DSS自由饮用7 d诱导溃疡性结肠炎模型,造模同时对各组小鼠每日对应给予生理盐水、半夏泻心汤古方量方、半夏泻心汤药典量方灌胃14 d。随后苏木精-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学变化,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清及结肠组织中炎症因子水平。[结果]半夏泻心汤可显著恢复DSS-UC模型小鼠的体质量、降低疾病指数（DAI）。升高DSS-UC小鼠血清及结肠组织中5-羟色胺（5-HT）、白介素（IL）-10水平,降低血清及结肠组织中IL-4、肿瘤坏死因子（TNF）-α水平,但对IFN-γ水平无显著改善。[结论]半夏泻心汤可以通过升高DSS-UC小鼠血清及结肠组织中IL-10、5-HT水平,降低血清及结肠组织中IL-4、TNF-α水平进而改善DSS-UC小鼠肠道炎症反应,改善组织损伤情况,从而发挥治疗UC的治疗作用,且以古方量效果为佳。     

木瓜总三萜对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠PPARγ/SIRT1/NF-κBp65信号通路及黏膜屏障的影响

观察木瓜总三萜对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠PPARγ/SIRT1/NF-κBp65信号通路及结肠黏膜屏障的影响。将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、木瓜总三萜(50,100 mg·kg~(-1))组和柳氮磺吡啶(250 mg·kg~(-1))组。实验小鼠通过自由饮用2.5%DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)模型,在自由饮用2.5%DSS前3 d,各给药组灌胃给予相应的药物,正常组和模型组给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液,每天1次,连续10 d。每天观察实验小鼠一般状况、记录疾病活动指数(DAI)。末次给药次日,取血,进行血液中TNF-α,IL-1β,IL-6,IFN-γ,IL-4,IL-10含量检测;取结肠进行长度测量、结肠黏膜损伤指数(CMDI)计算、MPO活性检测和组织形态学分析;实时定量PCR法检测结肠组织中E-cadherin,occludin,MUC2,TFF3 mRNA表达,Western blot法检测结肠组织中SIRT1,IKKβ,p-IKKβ,IκBα,p-IκBα及胞浆和胞核中PPARγ,NF-κBp65蛋白表达。结果显示,木瓜总三萜(50,100 mg·kg~(-1))可显著改善DSS诱导的UC模型小鼠一般状况,降低DAI,CMDI和组织病理学评分,增加结肠长度,减轻结肠黏膜溃疡、糜烂及炎性浸润,恢复黏膜屏障的正常功能,降低血液中促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IFN-γ含量,升高抗炎因子IL-4,IL-10含量,抑制结肠组织中MPO活性,上调结肠组织中黏膜屏障保护因子E-cadherin,occludin,MUC2,TFF3 mRNA表达,下调结肠组织胞浆中PPARγ,组织中p-IKKβ,p-IκBα和胞核中NF-κBp65蛋白表达,降低p-IKKβ/IKKβ和p-IκBα/IκBα的比值,上调胞核中PPARγ,组织中SIRT1和胞浆中NF-κBp65蛋白表达(P0.05或P0.01),且随着剂量的增加,其作用效果更加明显。表明木瓜总三萜对DSS诱导的小鼠UC有显著治疗作用,其作用机制可能与其调节PPARγ/SIRT1/NF-κBp65信号通路、抑制促炎因子生成、上调肠黏膜屏障保护因子的蛋白表达有关。