几种中药注射剂与西药注射剂的豚鼠致敏性研究

目的采用豚鼠模型比较不同中、西药注射剂的致敏性。方法对清开灵、双黄连、丹参注射剂和盐酸左氧氟沙星氯化钠注射剂、甘草酸二铵注射剂进行豚鼠致敏性试验,以豚鼠血浆中5-羟色胺变化水平为依据,分析比较各注射剂的致敏性。结果注射清开灵注射剂致敏的豚鼠在攻击后30 min,血浆中5-羟色胺升高率平均为85.47%;注射双黄连注射剂致敏的豚鼠在攻击后30 min血浆中5-羟色胺升高率平均为48.34%;注射丹参注射剂致敏的豚鼠在攻击后30 min血浆中5-羟色胺升高率平均为9.37%;注射左氧氟沙星氯化钠注射剂致敏的豚鼠在攻击后30 min血浆中5-羟色胺升高率平均为69.71%;注射甘草酸二铵注射剂致敏的豚鼠在攻击后30 min血浆中5-羟色胺升高率平均为12.51%。结论中、西药注射剂均会产生不同程度不良反应,因此,目前所提出的中药注射剂的安全性差或过敏反应发生率高于西药注射剂的说法是不严谨的。     

基于免疫指纹图谱法筛查双黄连注射剂的致敏成分

该文采用免疫指纹图谱法,以酶联免疫吸附法(ELISA)结合HPLC/MS法筛查双黄连注射剂(SHLI)的致敏性成分,制备SHLI的鼠抗兔血清免疫球蛋白E抗体(抗Ig E抗体),通过ELISA包埋抗Ig E抗体可成功吸附SHLI及其不同给药途径的含药血浆样品中的致敏原,提示SHLI可引起大鼠产生Ⅰ型超敏反应。建立抗Ig E抗体吸附前后各样品的HPLC指纹图谱和质谱图,由HPLC指纹图谱的相似度和MS图谱归纳结果可知,不同给药方式可改变SHLI的致敏性,SHLI及其含药血浆中可被特异性抗Ig E抗体吸附的成分有22种,多为酸类、酯类及含氮化合物,基于超分子理论推断这些酸类、酯类及含氮化合物来源于SHLI或机体,可能形成超分子半抗原,致使其口服不过敏而作为注射剂使用时具有免疫毒性引发过敏反应。比较传统的中药注射剂致敏原筛查方法,免疫指纹图谱法不仅限于单成分致敏原筛查,该方法纳入成分更全面,灵敏度高,操作方便,可为今后中药注射剂过敏反应的研究方法提供参考。     

佐剂提高过敏反应动物模型敏感性研究

目的:通过观察茵栀黄注射液和生脉注射液佐剂组与未联用佐剂组在过敏反应发生时的敏感指标的含量变化,研究此类佐剂提高BN大鼠过敏反应动物模型稳定性和灵敏度的能力。方法:将弗氏完全佐剂与双黄连注射液、生脉注射液联用,对BN大鼠进行致敏和激发,比较联用弗氏佐剂组与未加弗氏佐剂组动物在过敏反应发生率、过敏反应发生程度;激发前后血浆中组胺、类胰蛋白酶、β-氨基己糖苷酶、Ig E含量及增长率;被动皮肤过敏试验大鼠皮下是否出现蓝斑以及蓝斑面积大小。结果:(1)联用佐剂组过敏反应的发生率以及过敏反应的发生程度均高于未加佐剂组;(2)茵栀黄注射液组激发前后血浆中组胺、类胰蛋白酶、β-氨基己糖苷酶、Ig E的含量与生理盐水组比较无显著性差异;联用佐剂后血浆中Ig E、组胺以及β-氨基己糖苷酶的含量均升高,与生理盐水组相比具有显著性的差异,激发前后四种指标的变化率均高于茵栀黄注射液未加佐剂组;生脉注射液组激发前后血浆中四种指标的含量与生理盐水组比较无显著性差异;联用佐剂后血浆中Ig E、β-氨基己糖苷酶的含量均升高,与生理盐水组相比具有显著性的差异,激发前后四种指标的变化率均高于生脉注射液未加佐剂组;(3)联用佐剂组的被动皮肤过敏反应的阳性率均高于未加佐剂组。结论:弗氏完全佐剂可提高过敏反应动物模型的敏感性,有利于中药注射剂安全性中过敏反应的再评价。     

Ⅰ型过敏试验动物模型比较研究

目的:通过观察速发型过敏反应发生时的敏感指标的含量变化,比较常用于中药注射剂速发型过敏反应的几种动物模型的优劣.方法:①以卵蛋白为致敏原,直接对SD大鼠、BN大鼠、豚鼠进行致敏和激发,通过观察过敏反应的症状,ELISA法测量血清中的IgE、组胺、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的含量变化.②SD大鼠皮下注射致敏后的动物血清进行被动皮肤过敏试验,观察大鼠皮下是否出现蓝斑以及蓝斑面积.结果:①在致敏和激发途径、注射卵蛋白的剂量、次数、间隔时间相同的情况下,SD大鼠、BN大鼠、豚鼠血清中IgE、组胺、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的含量与相应的生理盐水组比均具有显著性的差异.其中豚鼠血清中IgE、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的变化率均高于SD大鼠和BN大鼠.BN大鼠血清中的组胺变化率高于豚鼠和SD大鼠.②被动过敏试验显示:BN大鼠卵蛋白组在SD大鼠上可造成明显的蓝斑.结论:仅采用豚鼠作为评价中药注射剂过敏反应的动物模型尚不能完全反映注射剂是否能引起过敏反应,增加不同品种试验动物以及相关检测指标,能更加全面的评价中药注射剂的致敏性.     

注射用双黄连与生脉注射液对Hartley豚鼠与BN大鼠主动全身过敏反应的影响

目的:研究注射用双黄连、生脉注射液对Hartley豚鼠与棕色挪威(BN)大鼠的主动全身过敏反应(active systemic anaphylaxis,ASA)及其相关指标,为完善中药注射剂过敏性评价提供实验依据。方法:取Hartley豚鼠或BN大鼠随机分为卵蛋白(OVA)组、注射用双黄连(双黄连)组、生脉注射液(生脉)组、正常组。2种动物分别隔日ih受试药物致敏液3次,于致敏后第14天静脉注射相应的激发液,观察激发后30 min动物的全身过敏反应症状,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变。放射免疫法检测BN大鼠在致敏前及激发后血清总免疫球蛋白E(Ig E)水平的变化、致敏激发后血清类胰蛋白酶变化。结果:对Hartley豚鼠或BN大鼠,OVA组、双黄连组动物均呈现过敏反应症状,肺组织病理切片显示均有明显淋巴细胞浸润等炎症病理表现,但双黄连组较轻。生脉组则未见过敏反应症状以及肺组织病理异常。与正常组比较,OVA组、双黄连组、生脉组大鼠激发后血清总Ig E水平显著升高(P0.05,P0.01)。与致敏前同组动物血清总Ig E水平比较,激发后OVA组、双黄连组血清总Ig E水平显著升高(P0.05,P0.01)。与正常组比较,OVA组、双黄连组大鼠激发后血清类胰蛋白酶水平显著升高(P0.01,P0.05),生脉组有升高趋势,但是无显著差异。结论:采用不同品种实验动物及增加相关检测的指标,能更全面评价注射用双黄连、生脉注射液潜在的致敏性。     

双黄连注射剂中黄芩苷致敏家兔后血清中特异性抗体的测定

目的酶联免疫吸附法(ELISA)检测双黄连注射剂中小分子半抗原物质黄芩苷致敏家兔后血清中特异性抗体效价。方法取新西兰种家兔10只,分为空白组、黄芩苷组,每组各5只。自家兔耳缘动脉采血10 m L,制备致敏前血清。将被液相色谱-质谱-血清白蛋白结合系统检测的黄芩苷与家兔血清体外孵育,制成黄芩苷-血浆蛋白完全抗原。将此完全抗原以皮下注射的方式对家兔进行免疫,免疫次数共5次。最后一次免疫结束后,间隔1周时间,将其麻醉,用采血针自家兔腹主动脉采血制备黄芩苷-血浆蛋白全抗原的抗血清。用ELISA法检测抗血清的抗体效价(OD值);间接竞争ELISA法测定家兔抗血清的特异性抗体;采用兔免疫球蛋白E(Ig E)ELISA试剂盒检测各组家兔抗血清中Ig E抗体的含量。结果黄芩苷的抗体效价(OD)与阴性对照组的(OD)比值2,因此说明黄芩苷具有致敏性。家兔体内产生的抗血清中的抗体具有一定的特异性。家兔体内明显产生了外源性Ig E型抗体。结论黄芩苷对家兔具有致敏性。     

双黄连注射剂中连翘酯苷A致敏家兔后血清中特异性抗体的测定

目的 ELISA法检测双黄连注射剂中小分子半抗原物质连翘酯苷A致敏家兔血清中的特异性抗体效价。方法取新西兰种家兔,自耳中心动脉采血10 m L,制备致敏前血清。将连翘酯苷A与家兔血清体外孵育,制成连翘酯苷A-血浆蛋白完全抗原。将完全抗原皮下注射以免疫动物,1月内共5次。末次注射后7 d,麻醉动物,自腹主动脉取血,制备血清,即为连翘酯苷A-血浆蛋白全抗原的抗血清,用ELISA法检测抗血清的抗体效价(D值)。若1∶128稀释血清的D值大于致敏前血清D值的2倍,即可判定产生了外源性抗体。用间接竞争ELISA法测定家兔抗血清的特异性抗体,并绘制抑制曲线,以证明其抗体是由连翘酯苷A-血浆蛋白特应性产生的。由于药物引起过敏反应与产生Ig E型抗体有关,因此采用兔免疫球蛋白E(Ig E)ELISA试剂盒检测家兔抗血清中Ig E抗体的含有量。结果抗体效价测定结果表明,连翘酯苷A的抗体效价高于致敏前血清D值的两倍,说明连翘酯苷A有潜在的致敏性。间接竞争ELISA测定抗体特异性结果表明,连翘酯苷A免疫后的家兔抗血清中的抗体具有一定的特异性。Ig E型抗体浓度的测定结果表明,经过多次免疫后的家兔体内产生了外源性Ig E型抗体。结论连翘酯苷A在此实验条件下对家兔有致敏性。     

BN大鼠用于评价中药注射液速发型过敏反应模型的建立及适用性评价

以清开灵注射液、双黄连注射液、黄芩苷、绿原酸为受试样本,以豚鼠为对照,通过观察BN大鼠(brown norway rats)过敏反应的特异性来建立中药注射液速发型过敏反应的动物模型,并对两者在评价中药注射液过敏反应中的适用性进行比较.本研究以中药注射液为致敏原,直接对BN大鼠进行致敏和攻击后,通过观察过敏症状、过敏反应率、过敏反应程度、组胺释放量、靶器官病变率和病变程度的变化,来评价BN大鼠过敏反应动物模型.结果显示中药注射剂致敏后,BN大鼠出现明显的过敏症状、血清和组织中组胺含量明显增加,肺组织和气管出现明显的病理改变,同时以青霉素和天花粉蛋白为阳性对照,也出现速发型过敏反应的表现;BN大鼠的过敏反应发生率、过敏反应程度、靶器官病变率和病变程度均显著高于豚鼠.试验结果说明BN大鼠为评价中药注射液过敏反应的适宜动物模型,且其敏感性高于豚鼠.     

双黄连注射剂中绿原酸致敏家兔后血清中特异性抗体的测定

目的:ELISA法检测双黄连注射剂中小分子半抗原物质绿原酸致敏家兔血清中的特异性抗体效价。方法:取新西兰种家兔,自家兔耳中心动脉采血10ml,制备致敏前血清。将绿原酸与家兔血清体外孵育,制成绿原酸-血浆蛋白完全抗原,将完全抗原皮下注射以免疫动物,1月内共5次。末次注射后7天,麻醉动物,自腹主动脉取血,制备血清,即为绿原酸-血浆蛋白全抗原的抗血清,用ELISA法检测抗血清的抗体效价(OD值);间接竞争ELISA法测定家兔抗血清的特异性抗体;采用兔免疫球蛋白E(Ig E)ELISA试剂盒检测家兔抗血清中Ig E抗体的含量。结果:绿原酸的抗体效价高于致敏前血清OD值的2倍,说明绿原酸有潜在的致敏性。绿原酸免疫后的家兔抗血清中的抗体具有一定的特异性。经过多次免疫后的家兔体内产生了外源性Ig E型抗体。结论:绿原酸在本实验条件下对家兔有致敏性。     

中药注射剂对I型变态反应试验的影响

目的:研究中药注射剂的过敏反应,测定致敏动物血清IgE抗体和组织胺含量,观察其与过敏反应是否具有相关性,为提高Ⅰ型过敏反应试验预测的准确性提供实验依据.方法:选用3种中药注射剂进行PCA,ASA试验和类过敏反应研究,用ELISA法对致敏动物血清进行血清OVA-sIgE、血清总IgE、组织胺水平检测.结果:3种中药注射剂的PCA试验结果为阴性,血清总IgE水平与生理盐水组无明显差异;3种中药注射剂+OVA(不引起过敏反应的剂量)的研究中双黄连注射液(SHL)、鱼腥草注射液(YXC)的PCA试验均为阳性,OVA-sIgE水平明显增加,清开灵注射液(QKL)的PCA试验为阴性,OVAsIgE水平增加不明显,各组血清总IgE水平增加不明显;3种中药注射剂的ASA试验结果为阳性,3种中药注射剂(临床剂量和临床等效剂量)均引起了豚鼠的类过敏症状,且反应强弱呈现剂量和注射速度依赖性,各给药组血清组织胺水平均较生理.盐水组明显增高,血清总IgE水平无明显差异.结论:SHL和YXC具有增加豚鼠对卵蛋白敏感性的作用,SHL,YXC,QKL均能引起豚鼠的类过敏反应,3种中药注射剂的过敏反应的发生与特异性IgE抗体和组织胺水平有相关性.     

马钱子碱和士的宁的硅胶柱色谱与半制备高效液相色谱法联用分离纯化

目的通过硅胶柱色谱与半制备高效液相色谱法联用,建立一种高效、快速分离高纯度活性单体马钱子碱和士的宁的方法。方法马钱子总生物碱粗提物经硅胶柱色谱分离,再经半制备高效液相分离纯化,以Silica C18M 10E(250 mm×10 mm,5μm)为色谱柱,乙腈(A)∶水-冰乙酸-氨水(230∶2.4∶0.4)(B)=12∶88为流动相进行等度洗脱2m L/min,检测波长254 nm,柱温25℃,进样量500 u L。结果单次进样50 mg可纯化得到9.65mg马钱子碱和17.91 mg士的宁,纯度分别为98.84%,98.06%,收率分别为73.32%,83.48%。结论该方法简单、快速,可用于高纯度中药活性单体的制备。     

中药注射剂致敏物质筛选方法

中药注射剂不良反应病例报道逐渐增多,中药注射剂的安全性问题,引起了政府、企业、医生、患者以及社会其他人员的质疑和空前关注。建立准确、早期、快速的中药过敏反应检测方法势在必行。本文综述了筛选中药注射剂中致敏物质的体内和体外方法,为探求过敏原,选择高效、灵敏的致敏检测方法,提高准确率,解决中药注射剂的不良反应,保证临床安全用药提供有益的参考。     

壮阳作用药酒中枸橼酸西地那非非标研究

目的研究并建立高效液相色谱法及薄层色谱法测定壮阳作用药酒中枸橼酸西地那非非法添加方法。方法高效液相色谱法及薄层色谱法。结果薄层色谱法:GF254薄层板,以正己烷-乙醇-氨水(30∶70∶1)为展开剂,在碘蒸汽中熏5分钟后,置254nm紫外灯下检视。高效液相色谱法:C18柱,流动相为0.05mol/L磷酸三乙胺(取7ml三乙胺用水稀释至1000ml,用磷酸调至3.0)-甲醇-乙腈(58∶25∶17),检测波长290nm。结论此高效液相色谱法及薄层色谱法测定壮阳作用药酒中枸橼酸西地那非可靠有效。     

高效液相色谱法测定刺五加浸膏中苷E的含量

目的：建立以高效液相色谱法测定刺五加浸膏中紫丁香树脂苷（苷E）含量的方法。方法：色谱柱YMC-ODS柱,流动相为甲醇-水（20∶80）,检测波长λs=220nm,流速1.0L/min,柱温30℃,进样量10μL。结果：苷E在0.0168-0.084μg（r=0.9993）范围内呈良好的线性关系。平均回收率为97.43%（RSD=1.21%）。结论：本方法简便、准确、重现性好。     

感冒灵胶囊中咖啡因的体外溶出度研究

目的建立感冒灵胶囊中咖啡因的溶出度测定方法。方法溶出度采用第三法(小杯法),用高效液相色谱法测定。色谱柱:Ultimate XB-C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流速为1.0 mL/min;柱温:30℃;流动相:乙腈-0.2%磷酸(11∶89);检测波长:270 nm;进样量:10μL。结果采用0.1 mol/L的盐酸作为溶出介质考察咖啡因的溶出度较好。结论该方法简单、准确,可作为感冒灵胶囊的质量控制。     

板蓝根中多糖的分离以及高效液相色谱分析

目的：探讨板蓝根中多糖的分离以及高效液相色谱分析方法.方法：采用超声波方法提取板蓝根中的葡萄糖,应用高效液相色谱进行含量与回收率试验.色谱条件：分离柱：METROSEP CARB1（150mm×4.0mm）;淋洗液：6mmol/L NaOH溶液,再生液：200mmol/L NaOH;流速：1.0mL/min,进样量：20μL,柱温：32℃.结果：超声提取得到粗多糖,得率为95.78%,重现性试验显示相对偏差小,样品的加标回收率为95.9%～ 96.3%,定量检测出200mg样品中含葡萄糖0.106 9mg.结论：建立了中药中多糖的分离以及高效液相色谱分析方法,可作为中药中多糖提取方法的参考.     

高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量

目的:探讨高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量。方法:色谱条件:流动相为甲醇-水-乙腈,流速为1mL/min,紫外检测波长为250nm,进样量10μL,柱温35℃。结果:标准曲线方程为Y=013.614X-1.4897,相关系数R=0.9979;本实验方法精密度符合要求,回收率高,稳定性强,黄芪苷在24h内稳定性良好,高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量为3.39mg/5g。结论:高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量操作简便迅速,精密度和稳定性均较理想,回收含量高,可为测定中药中黄芪苷物质含量提供方法依据。     

大黄的炮制及不同炮制品番泻苷A和番泻苷B含量测定方法的建立

目的建立反相高效液相色谱法测定大黄不同炮制品中番泻苷A和番泻苷B的含量。比较其含量差异,揭示中药炮制前后物质基础的变化规律。方法建立采用HPLC法,色谱柱为Inertsil 0DS-3 C_(18)柱(4.60 mm×250 mm, 5μm),流动相∶甲醇-0.1%磷酸(28∶72),检测波长329 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃,进样量10μL,梯度洗脱。结果反相高效液相色谱法测定番泻苷A和番泻苷B,线性方程为:番泻苷A:Y=836.27X-12.551,番泻苷B:Y=668.74X-12.965,分别在0.120 5-1.205(R~2=0.999 7)、0.116-1.160(R~2=0.999 1)的线性范围内呈良好线性关系,大黄不同炮制品中番泻背A和番泻背B的含量差异显著,或增或减,说明炮制工艺对中药大黄各成分影响不同。结论:建立了高效液相色谱法测定大黄不同炮制品中番泻苷A和番泻苷B的含量,该方法可作为大黄及其不同炮制品的质量控制研究的方法。     

HPLC法测定茯珍儿科胶囊中茯苓酸含量

目的建立高效液相色谱法测定茯珍儿科胶囊中茯苓酸含量。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Diamonsil C_(18)柱(4.6×250 mm,5μm)分析柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,检测波长为242 nm,流速为1.0 m L/min,进样量10μL,柱温为35℃。结果茯苓酸在5.05~30.75μg/m L浓度范围呈现良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为98.2%,RSD为1.45%。结论本方法简便、快速、准确,重复性好,可用于茯珍儿科胶囊的质量控制。     

高效液相色谱法测定消糜阴道片中人参皂苷Re的含量

目的：建立消糜阴道片中人参皂苷Re的高效液相色谱测定方法。方法：采用高效液相色谱法,选用C18柱,流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液,柱温：25℃,检测波长：230nm,流速：1ml/min。结果：人参皂苷Re的量在0.2016~1.0080μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为97.28%,RSD=1.20%。结论：该法简便,快速,准确,适用于制剂中芍药苷得含量测定。