菟丝子总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠模型的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮对脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)联合人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)致大鼠多囊卵巢综合征(olycystic ovary syndrome,PCOS)模型的影响。方法:70只SD大鼠,10只正常组除外,其余大鼠上午颈背部注射DHEA 0. 06 mg·g-1,下午皮下注射1. 5 U HCG/只,连续21 d。造模第16天,阴道涂片,实施动情周期监测。挑选成模大鼠60只,分为模型组,达英-35组(0. 339 2 mg·kg-1),菟丝子总黄酮高、中、低剂量组(0. 2,0. 1,0. 05 g·kg-1),每组10只。分组当天按照组别分别进行给药,正常组和模型组给予等体积溶剂,连续给药21 d。末次给药2 h后,腹主动脉取血,测血清睾酮(testosterone,T),雌二醇(estrogen,E2),促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)的含量;脱颈处死大鼠,取每只大鼠同一部位的卵巢固定于10%甲醛溶液中,进行苏木素-伊红(HE)染色光镜观察卵巢的形态变化;取另一相同部位的卵巢,免疫组化法测量卵巢中雄激素受体(androgen receptor,AR)和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax),观察相关蛋白在卵巢中的表达情况;取下丘脑和垂体,免疫组化法检测下丘脑中促性腺激素释放激素(gonadotropinreleasing hormone,GnRH),垂体促性腺激素释放激素受体(gonadorelin releasing hormone receptor,GnRHR)的表达情况。结果:PCOS大鼠模型复制成功。与模型组比较,各给药组可以显著降低PCOS大鼠血清T,E2和LH含量,显著升高血清FSH含量(P 0. 01);显著升高卵巢Bcl-2水平(P 0. 01),不同程度升高垂体GnRHR水平(P 0. 05,P 0. 01);不同程度降低卵巢AR和Bax水平(P 0. 05,P 0. 01),显著降低下丘脑中GnRH水平(P 0. 01)和显著改善PCOS大鼠卵巢组织的病理性改变。结论:PCOS大鼠模型复制成功。菟丝子总黄酮可能通过调节雌雄激素分泌、抑制卵巢凋亡蛋白的表达、影响下丘脑-垂体-卵巢轴途径发挥对PCOS模型大鼠的保护作用。     

电针“三阴交”对自然围绝经期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的影响

目的:观察电针"三阴交"对自然围绝经期大鼠的影响,探讨其对下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴紊乱的调节机制。方法:将3月龄SD雌性大鼠8只作为正常组,11~15月龄SD雌性大鼠阴道涂片法筛选符合围绝经期综合征表现者16只,随机分为模型组和电针组,各8只。电针组取两侧"三阴交"穴做电针,每次20min,隔日1次,共治疗15次。采用酶联免疫法测定各组大鼠下丘脑中促性腺激素释放激素(GnRH),垂体中卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)和卵巢中雌二醇(E2)的含量。结果:与正常组相比,模型组E2水平显著降低(P0.01),FSH、LH、GnRH水平均显著升高(P0.01);与模型组相比,电针组E2水平明显升高(P0.05),FSH、LH和GnRH含量均有不同程度下降(P0.05)。结论:电针"三阴交"能够对围绝经期大鼠紊乱的HPO轴功能起到良性调节作用。     

逆针灸关元对去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴影响

目的观察逆针灸“关元”对去卵巢大鼠的影响,探讨其调节围绝经期综合征下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴的机制。方法将3月龄SD雌性大鼠48只随机分为正常组、假手术组、去卵巢组、逆针关元组、逆灸关元组。术前30 d给逆针关元组和逆灸关元组予以针刺或艾灸,随后制作去卵巢大鼠模型,除正常组和假手术组外,其余组均行去卵巢手术。采用酶联免疫法测定大鼠下丘脑、垂体及子宫的促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)、雌激素受体(ER)的水平变化。结果与正常组比较,模型组E2、ER和GnRH水平显著降低(P＜0.01),FSH和LH的水平显著升高(P＜0.01)。与模型组比较,逆针和逆灸组E2、ER和GnRH水平均不同程度升高(P＜0.05),FSH和LH水平不同程度降低(P＜0.05)。逆针组和逆灸组比较,组间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论逆针和逆灸“关元”均能良性地调节去卵巢大鼠HPO轴的紊乱,其对HPO轴的作用强度基本相同。     

菟丝子总黄酮对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用

【目的】 探讨菟丝子总黄酮通过卵泡刺激素（FSH）-环磷酸腺苷（cAMP）信号轴对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用。 【方法】 从68只雌性SD大鼠中抽取10只为正常组,其余构建卵巢储备功能减退模型。将成功建模的48只大鼠随机分为抑制剂组、模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组,每组12只。抑制剂组灌胃H-89 0.1 mg/kg,抑制剂+菟丝子总黄酮组灌胃H-89 0.1 mg/kg+菟丝子总黄酮 530.1 mg/kg,菟丝子总黄酮组灌胃菟丝子总黄酮530.1 mg/kg,模型组、正常组灌胃等体积生理盐水,均连续4周,每周休息1 d。给药4周后,称取各组大鼠卵巢湿质量,计算卵巢指数,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测大鼠血清性激素水平,苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织形态学变化,ELISA 法检测卵巢组织中 cAMP 含 量,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测卵巢组织卵泡刺激素受体（FSHR）、蛋白激酶A（PKA）及磷酸化PKA（p-PKA）表达。 【结果】 模型组大鼠进食、二便、毛色、动情周期出现异常,卵巢萎缩明显,卵泡数量、黄体减少;与模型组比较,抑制剂组大鼠进食、二便、毛色、动情周期异常情况更严重,卵巢萎缩更明显,卵泡与黄体数量更少,而抑制剂组+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组大鼠进食、二便、毛色、动情周期,卵巢、卵泡与黄体数量明显改善。与正常组比较,抑制剂组、模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数降低,FSH、FSH/LH、E2水平升高,卵巢组织中cAMP含量降低,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与抑制剂组比较,模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与模型组比较,抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与抑制剂+菟丝子总黄酮组比较,菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。【结论】 菟丝子总黄酮可能通过FSH-cAMP信号轴改善大鼠卵巢储备功能减退。     

电针不同穴位对去卵巢大鼠HPO轴的影响

目的:观察电针太溪(KI3)、三阴交(SP6)、关元(RN4)穴对去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴的调节作用,探讨腧穴主治作用的特异性。方法:以3.5月龄去卵巢大鼠为更年期模型,选取太溪、关元、三阴交穴进行电针刺激,30d后测定雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清E2水平显著降低(P<0.01),FSH、LH、GnRH水平明显升高(P<0.01)。与模型组相比,各穴位组电针治疗后,E2水平显著升高(P<0.05);FSH、LH、GnRH水平明显降低(P<0.05),尤以电针三阴交组、电针关元组降低显著。结论:电针对去卵巢大鼠紊乱的HPO轴功能具有良性调节作用,且不同穴位具有特异性。     

针刺对痛经大鼠神经-内分泌影响的机制初探

目的:探讨针刺对痛经大鼠下丘脑-垂体-卵巢功能活动的影响。方法:雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、益母草膏组,每组10只,己烯雌酚灌胃12 d建立痛经模型。针刺组取"关元",双侧"地机"三阴交"穴,留针30 min;益母草膏组采用益母草膏(每日80 g/kg)灌胃治疗。两组均在灌服己烯雌酚的第5天开始治疗,每日1次,连续7 d。末次给予己烯雌酚1 h后,腹腔注射催产素,观察各组大鼠的扭体反应潜伏期和30 min内扭体数;放射免疫法检测血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)的水平;RT-PCR检测各组大鼠下丘脑、卵巢促性腺激素释放激素(GnRH),垂体促性腺激素释放激素受体(GnRH-R),子宫雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)mRNA表达的差异。结果:①针刺组和益母草膏组的大鼠扭体次数明显低于模型组,潜伏期高于模型组(P<0.05);②针刺组和益母草膏组与模型组比较,FSH、LH、E2含量显著降低(P<0.05),P含量明显升高(P<0.05);③针刺组和益母草膏组下丘脑、卵巢GnRH,垂体GnRH-R,子宫ER mRNA表达水平均低于模型组(P<0.05),子宫PR mRNA表达水平高于模型组(P<0.05)。结论:针刺治疗原发性痛经的神经-内分泌机制可能与针刺调节大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的性激素及其受体表达有关。     

逆针“关元”“三阴交”对去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的影响

目的:观察逆针"关元"三阴交"穴对去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴的调节作用,探讨腧穴主治作用的特异性。方法:选取3月龄SD大鼠,设正常对照组(6只)、假手术组(6只)、模型组(6只)、逆针关元组(11只)、逆针三阴交组(11只)、逆针关元续针组(11只)、逆针三阴交续针组(11只),共7组。4组逆针组预先电针15次(隔日1次)后与模型组一同去除大鼠双侧卵巢造模。两组续针组于造模12d后继续电针5次(隔日1次)。采用酶联免疫法测定各组大鼠下丘脑中促性腺激素释放激素(GnRH),垂体中卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)和子宫中雌二醇(E2)的含量。结果:与正常组相比,模型组大鼠E2水平显著降低(P<0.05),FSH、LH、GnRH水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,各电针组E2水平均有不同程度升高,FSH、LH、GnRH水平均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01);但各电针组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:逆针"关元"三阴交"能够良性调节去卵巢大鼠紊乱的HPO轴功能,两穴之间未表现出明显穴位特异性。     

抑睾调经汤对多囊卵巢综合征模型大鼠排卵功能障碍的干预作用

目的:研究抑睾调经汤对多囊卵巢综合征模型大鼠排卵功能障碍的干预作用,为健脾化痰,活血化瘀法应用于PCOS的治疗提供科学依据.方法:将雌性SD大鼠60只随机分为正常对照组、模型对照组、达英-35对照药组、抑睾调经汤高剂量治疗组、抑睾调经汤低剂量治疗组五组各12只,采用Poresky L法,皮下注射绒毛膜促性腺激素(HCG)、中性胰岛素,制备出PCOS模型大鼠.各组动物等容灌胃,正常对照组和模型对照组给予生理盐水,达英-35组、抑睾调经汤高、低剂量分别灌胃14 d,日2次.观察大鼠胰岛素(INS)、黄体生成激素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、卵巢病理组织学的变化.结果:①抑睾调经汤组可显著降低PCOS模型大鼠血清LH水平,与模型组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);并能升高FSH,与模型组比较差异有统计学意义.②抑睾调经汤组能明显降低PCOS模型大鼠血清INS水平,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05).③抑睾调经汤组能使PCOS模型大鼠恢复排卵,增加卵泡壁颗粒细胞层数和黄体组织数量.结论:抑睾调经汤具有调整下丘脑—垂体—卵巢轴,降低胰岛素水平,恢复排卵的作用.     

电针对多囊卵巢综合征大鼠下丘脑Kisspeptin蛋白表达的影响

目的:探讨电针对来曲唑诱导的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠下丘脑Kisspeptin蛋白表达及下丘脑-垂体-卵巢轴的影响。方法:SD雌性大鼠分为正常组、模型组、针刺组,每组6只。采用来曲唑连续灌胃21 d建立PCOS大鼠模型。针刺组大鼠给予双侧"带脉"电针治疗,20 min/次,1次/d,共治疗15 d。每4日测量1次体质量,治疗结束后用放射免疫法检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)水平,HE染色法观察卵巢黄体及囊状卵泡数量,Western blot法检测下丘脑Kisspeptin蛋白表达水平。结果:与同时点正常组比较,模型组体质量增加(P<0.05),血清LH、T含量升高(P<0.05,P<0.01),卵巢囊状卵泡明显增多(P<0.01),黄体数量明显减少(P<0.01),下丘脑Kisspeptin蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组大鼠血清LH、E2、T含量降低(P<0.05),卵巢囊状卵泡数明显减少(P<0.01),黄体数量明显增多(P<0.01),下丘脑Kisspeptin蛋白表达下降(P<0.05)。结论:电针可改善PCOS大鼠性腺轴功能,其机制可能与下丘脑Kisspeptin蛋白表达有关。     

电针不同穴位对多囊卵巢综合征大鼠卵泡发育及相关因素的影响

目的:观察电针不同穴位对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵泡发育、促性腺激素、促性腺激素相关受体表达及卵巢抗苗勒氏管激素(AMH)、抑制素B(INHB)水平的影响,探讨电针治疗PCOS的可能机制。方法:雌性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、足三里组、关元组、三阴交组、综合组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠用来曲唑连续灌胃21 d诱导PCOS模型,足三里组、关元组、三阴交组分别选取"足三里""关元""三阴交"进行电针干预,综合组3穴同时进行电针干预,均干预14 d。干预结束后用HE染色法进行大鼠卵泡计数,用酶联免疫吸附法检测血清促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、INHB、AMH水平,用免疫组织化学法检测卵巢FSH受体(FSHR)和LH受体(LHR)的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠的生长期卵泡数及血清LH、LH/FSH、AMH、INHB水平均明显升高(P<0. 05,P<0. 01),而FSH水平、早期卵泡中FSHR和LHR表达明显降低(P<0. 01,P<0. 05)。与模型组比较,三阴交、关元和综合组的生长期卵泡数明显下降(P<0. 05,P<0. 01),关元、足三里和综合组INHB水平明显下降(P<0. 01),4个电针组的LH、LH/FSH、AMH水平均明显下降(P<0. 01),而4个电针组的FSH均明显升高(P<0. 01),足三里组大鼠早期卵泡FSHR阳性表达明显升高(P<0. 05),足三里组和关元组大鼠早期和晚期卵泡LHR阳性表达均明显升高(P<0. 01,P<0. 05)。结论:电针"关元""三阴交""足三里"及电针3穴均可减少PCOS大鼠生长期的卵泡数量并调节大鼠性腺激素的表达水平。在上调血清FSH和下调LH/FSH比值、AMH、INHB及改善促性腺激素受体表达方面,电针"关元"和电针"足三里"的作用明显优于电针"三阴交";而在下调LH水平方面,电针"三阴交"的作用明显优于电针"关元";但3个穴位之间没有协同作用。     

坤泰胶囊对卵巢储备功能下降大鼠卵巢凋亡调控蛋白Bcl-2,Bax表达的影响

目的:探讨坤泰胶囊对去氧乙烯基环己烯(4-vinylcyclohexene diepoxide,VCD)所致卵巢储备功能下降(decreasing ovarian reserve,DOR)大鼠凋亡调控蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,研究该药的作用机制。方法:SD雌性大鼠连续腹腔注射VCD(80 mg·kg~(-1))15 d,建立与人类相似的生理性卵巢储备功能下降模型。将动物分为正常组,模型组,坤泰胶囊高、中、低剂量组(1.89,0.63,0.21 g·kg-1),补佳乐(戊酸雌二醇,0.13 mg·kg~(-1))组,于造模第1天开始灌胃给药,每天1次,连续45 d。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清激素卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢、子宫的病理组织变化,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测卵巢组织Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组FSH与LH明显升高,E_2明显降低(P0.05);模型组卵巢、子宫体积明显缩小,原始卵泡与初级卵泡数目明显减少,子宫内膜变薄,腺体数目减少;模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显增加(P0.05),Bcl-2/Bax显著下降(P0.01)。与模型组比较,坤泰胶囊高、中、低剂量组FSH明显降低,E_2明显升高(P0.05);补佳乐组FSH,LH明显降低,E2明显升高(P0.05)。各给药组卵巢、子宫体积增大,原始卵泡与初级卵泡数目增多,子宫内膜变厚,腺体数目增加,改善程度顺序依次为坤泰胶囊低、中、高剂量组、补佳乐组。坤泰胶囊高、中、低剂剂量组及补佳乐组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01);坤泰胶囊高、中、低剂量组及补佳乐药组大鼠卵巢Bax蛋白表达减少(P0.05);坤泰胶囊高、中、低剂量组及补佳乐组大鼠卵巢Bcl-2/Bax升高(P0.05,P0.01)。结论:坤泰胶囊可能通过上调卵巢Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白表达,抑制卵泡的凋亡,从而改善卵巢功能。     

桂枝茯苓丸联合黄连素对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗患者的影响

目的:观察桂枝茯苓丸联合黄连素对多囊卵巢综合征(PCOS)伴胰岛素抵抗患者的影响.方法:112例PCOS患者随机分为观察组(桂枝茯苓丸联合黄连素)和对照组(达英-35联合二甲双胍),各56例,比较两组患者治疗前后糖代谢、血脂水平、性激素水平的变化,观察临床表现和排卵及妊娠情况.结果:治疗后两组空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显下降(P＜0.05).两组空腹血糖(FPG),FINS,HOMA-IR无差异性.观察组患者总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平明显下降.两组的高密度脂蛋白(HDL-C)上升明显,尤其观察组HDL-C[(1.91-±0.29)mmol·L-1]改善程度较对照组[(1.63±0.28)mmol·L-1]明显(P＜0.05).两组患者雄激素(T)、黄体生成素(LH)、LH/卵泡刺激素(FSH)明显下降,FSH,雌二醇(E2)水平明显上升(P＜0.05或0.01).观察组LH,LH/FSH,E2改善程度较对照组明显(P＜0.05),且观察组月经稀发、痤疮、卵巢体积增大改善的程度较对照组明显(P＜0.05),排卵率明显高于对照组.结论:桂枝茯苓丸联合黄连素治疗PCOS合胰岛素抵抗的患者,能通过不同途径改变空腹胰岛素和雄激素水平,改善胰岛素敏感度,恢复月经周期,提高妊娠率.     

加味二陈汤对肾虚痰湿型多囊卵巢综合征患者卵巢多囊样改变、内分泌及代谢的影响

目的:探讨加味二陈汤对肾虚痰湿型肥胖型多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者卵巢多囊样改变、内分泌及代谢的影响。方法:选取2015年3月—2016年3月河南省中医院收治的肾虚痰湿型肥胖型PCOS患者157例,以该批患者为研究对象,按随机数字表法分为治疗组(78例),对照组(79例)。对照组PCOS患者给予醋酸环丙孕酮片,治疗组在此基础上给予加味二陈汤,两组均进行3个月经周期的治疗,结束后对两组患者疗效、卵巢多囊样改变、内分泌功能、糖脂代谢及脂肪细胞因子进行比较。结果:治疗组患者总有效率为94.87%,对照组为81.01%,治疗组高于对照组(P0.05);经过治疗,两组患者均较治疗前双侧卵巢体积与卵泡数目明显降低,且治疗组低于对照组(P0.05);经过治疗后两组患者均较治疗前促黄体生成激素(luteotropic hormone,LH),卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)与卵泡刺激素(Testosterone,T)水平明显降低,雌二醇(estradiol,E2)水平明显升高,且治疗组患者效果优于对照组(P0.05);经过治疗,两组患者在治疗前糖脂代谢指标糖化血红蛋白(hemoglobin Alc,Hb A1c),空腹胰岛素(fasting insulin,FINS),胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,HOMA-IR),总胆固醇(total cholesterol,TC),甘油三脂(triglycerid,TG)均较治疗前明显降低,且治疗后治疗组显著低于对照组(P0.05);通过治疗,两组患者均较治疗前内脂素(visfatin,VF),瘦素(leptin,LEP)水平明显降低,脂联素(adiponectin,APN)水平明显升高,且治疗组优于对照组(P0.05)。结论:加味二陈汤对肾虚痰湿型肥胖型PCOS具有积极的治疗效果,可以改善患者多囊样改变、内分泌功能以及糖脂代谢,值得在临床上推广。     

龙胆泻肝汤对PCOS模型大鼠的影响

目的:研究龙胆泻肝汤对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠药效观察及机制,为龙胆泻肝汤临床PCOS的应用提供初步实验依据。方法:将SD大鼠50只,随机分为2组,即正常组10只、模型制备组40只,采用胰岛素(INS)联合人绒毛膜促性腺激素(HCG)法复制大鼠PCOS模型,造模成功的大鼠分为模型组、达英-35(0.21 g·kg-1)及龙胆泻肝汤高、低剂量组(29.6,7.4 g·kg-1),除正常组外,其余各组连续灌胃给药15 d;动物处理后测量卵巢质量及体积大小,检测各组大鼠血清中促黄体生成素(LH)/卵泡刺激素(FSH),睾酮(T),空腹血糖,空腹胰岛素(INS)激素水平及炎症因子白细胞介素-2(IL-2),IL-4,IL-6,IL-10水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析各组卵巢组织中JAK2,STAT3,p-STAT3和IL-6蛋白的表达量。结果:与正常组比较,模型组卵巢质量及体积明显升高,血清LH/FSH,T,空腹血糖及INS均明显升高,IL-2,IL-6,IL-10水平明显升高,JAK2,STAT3和IL-6蛋白的表达量明显升高(P0.05);与模型组比较,龙胆泻肝汤高、低剂量组明显降低卵巢质量及体积,血清LH/FSH,T,空腹血糖及INS,IL-2,IL-6,IL-10水平,升高JAK2,STAT3蛋白的表达量,降低p-STAT3和IL-6蛋白的表达量(P0.05)。结论:龙胆泻肝汤对PCOS大鼠具有明显疗效,主要通过降低激素水平和抑制炎症反应;且其机制可能与JAK2/STAT3通路相关。     

七子益肾理冲汤对DOR大鼠卵巢储备的影响

[目的]探讨七子益肾理冲汤对脱氧乙烯基环己烯(VCD)致卵巢储备功能低下(DOR)大鼠卵巢储备功能的影响。[方法]60只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药低、中、高剂量组及脱氢表雄酮(DHEA)组。模型组采用VCD注射制作DOR大鼠模型。观察卵巢指数,HE染色观察卵巢组织形态,放射免疫法检测促卵泡刺激素(FSH)、血清雌二醇(E2)及抗穆勒管激素(AMH)水平。[结果]与空白组比较,模型组卵巢组织萎缩,各级卵泡数目减少,卵巢指数和E2、AMH水平降低,FSH水平升高(P0.05);与模型组比较,中药高剂量组卵巢指数上升,卵巢组织形态明显改善,原始卵泡和黄体增加,闭锁卵泡减少;E2、AMH水平升高,FSH水平降低(P0.05)。[结论]七子益肾理冲汤可修复卵巢储备的损失,促进卵泡生长,抑制卵泡闭锁。     

补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢Bcl-2/Bax表达的影响

目的:观察补肾调冲方对雷公藤多苷片所致卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)雌性大鼠卵巢性激素水平和卵巢中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2),促进凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)蛋白及mRNA表达的影响,探讨补肾调冲方的预防作用。方法:SD雌性大鼠42只,随机分为正常组,模型组,结合雌激素组,补肾调冲方预防高、中、低剂量组。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中雌二醇(estradiol,E_2),卵泡刺激素(follicule-stimulating hormone,FSH),黄体生成素(luteinizing hormone,LH),孕酮(progesterone,P)水平。蛋白质免疫印迹(Western blot)法和逆转录-聚合酶链式方应(RT-PCR)法检测卵巢组织中Bcl-2,Bax蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH,LH含量明显升高,E_2的含量明显降低,卵巢组织中Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显降低,Bax蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.01);补肾调冲方各给药组和结合雌激素组E_2的含量均高于模型组(P0.01),其中补肾调冲方低、中、高剂量和结合雌激素组E_2含量与正常组比较,差异无统计学意义。补肾调冲方各给药组和结合雌激素组FSH,LH的含量均低于模型组(P0.01);低、中、高剂量组和结合雌激素组FSH,LH含量与正常组比较,差异无统计学意义。各组与正常组P含量比较差异无统计学意义。补肾调冲方预防低、中、高剂量组和结合雌激素组Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显高于模型组(P0.01);Bax蛋白及mRNA的表达明显低于模型组(P0.01)。结论:补肾调冲方对卵巢具有一定的保护作用,可以预防卵巢早衰的发生。其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,维持Bcl-2,Bax的平衡,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡的过度凋亡,改善卵巢的功能。     

养阴舒肝颗粒对VCD诱导卵巢功能下降大鼠Bcl-2,Bax及Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨养阴舒肝颗粒对卵巢功能下降模型大鼠卵巢功能及;B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的影响。方法:选取动情周期规则的雌性SD大鼠,取10只作为正常组,其余大鼠均采用160 mg·kg~(-1)去氧乙烯基环己烯(VCD)腹腔注射诱导卵巢功能下降模型,取造模成功的56只大鼠按体质量随机分为模型组,养阴舒肝颗粒低(2.1 g·kg~(-1)),中(4.2 g·kg~(-1)),高剂量组(8.4 g·kg~(-1))和坤泰胶囊组,每组11只(模型组12只)。采用养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊进行灌胃给药,干预治疗4周后进行卵巢称质量,计算各级卵泡的数目,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清性激素水平卵泡刺激素(FSH),雌二醇(E_2),抗缪勒氏管激素(AMH),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠的卵巢质量和卵巢指数下降(P0.01),闭锁卵泡数目增多(P0.01),FSH水平升高(P0.01),E_2和AMH水平下降(P0.05),卵巢组织Bcl-2蛋白的表达减少(P0.01),Bax,Caspase-3蛋白的表达(P0.01);与模型组比较,养阴舒肝颗粒可以增加模型大鼠的双侧卵巢质量(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊可以增加卵巢指数(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒可以减少闭锁卵泡的数目(P0.05);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊均可以降低FSH水平(P0.05),升高E_2和AMH水平(P0.05),增加卵巢组织Bcl-2的表达(P0.01),同时抑制Bax,Caspase-3的表达(P0.01)。结论:养阴舒肝颗粒可以提高卵巢功能下降模型大鼠的卵巢功能,其机制可能与抗细胞凋亡有关。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨温肾助阳调周法对肾阳虚证PCOS患者性激素、胰岛素及排卵的影响

目的:探讨肾阳虚证多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜组织中胰岛素的磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路中Akt的表达及其活化程度,并分析温肾助阳调周法对PCOS患者性激素、胰岛素及排卵的影响。方法:选取贵州中医药大学第一附属医院2017年2月至2018年7月收治的60例肾阳虚证PCOS患者,按随机数字表法分为两组,各30例。对照组采取口服炔雌醇环丙孕酮片治疗,观察组在对照组的基础上给予温肾助阳调周法治疗,两组均治疗3个月后随访。测定所有患者的性激素水平、空腹血糖及胰岛素水平,采用稳态模型评估法计算的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),运用蛋白免疫印迹法检测子宫内膜组织中Akt,p-Akt蛋白的表达水平。观察两组治疗前后性激素、胰岛素及排卵的情况。结果:与本组治疗前比较,治疗后两组卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平均下降,雌二醇(E2)性激素水平上升(P<0.05),观察组治疗后FSH,LH水平均低于对照组,E2性激素水平高于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组FPG,FINS均明显降低(P<0.05),观察组治疗后FPG,FINS水平明显低于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组患者的HOMA-IR及血清脂联素均有明显下降(P<0.05),观察组治疗后HOMA-IR及血清脂联素明显低于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组卵巢体积、窦卵细胞数目均明显降低,子宫内膜厚度增加(P<0.05),观察组治疗后卵巢体积、窦卵细胞数目明显低于对照组,子宫内膜厚度明显大于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后观察组与对照组子宫内膜Akt和p-Akt蛋白明显降低,观察组治疗后子宫内膜Akt和p-Akt明显低于对照组(P<0.05)。结论:采用温肾助阳调周法可有效的改善肾阳虚证PCOS患者性激素水平,调控胰岛素,促进卵巢功能恢复,这可能与阻断Akt磷酸化,抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

滋阴安神方对实验性更年期模型大鼠的影响

目的:观察滋阴安神方对实验性更年期模型大鼠及正常小鼠的影响,为滋阴安神方的临床应用提供实验依据。方法:采用摘除卵巢的方法建立更年期大鼠模型,随机分为更年期模型组、滋阴安神方高、中、低剂量(10,5,2.5 g·kg~(-1))组、戊酸雌二醇(0.09 mg·kg~(-1))组、更年安片(0.48 g·kg~(-1))组,另设假手术组,每组12只。连续灌胃给药30 d,放射免疫法测定大鼠血浆促卵泡生成素(FSH),黄体生成素(LH),雌二醇(E_2),孕酮(P)含量,光镜下测量大鼠子宫内膜厚度。雌性ICR小鼠随机分为正常组、滋阴安神方高、中、低剂量(16.69,8.34,4.17 g·kg~(-1))组和地西泮(0.001 g·kg~(-1))组,每组12只。灌胃给药7 d,腹腔注射戊巴比妥钠(0.03 g·kg~(-1)),记录翻正反射消失的小鼠数及入睡潜伏期。雌性ICR小鼠随机分为正常组、滋阴安神方高、中、低剂量(16.69,8.34,4.17 g·kg-1)组和百忧解(0.03 g·kg~(-1))组,每组12只。灌胃给药7 d,进行悬尾实验,记录小鼠后4 min的累计不动时间。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血浆FSH显著升高(P0.01),E_2明显降低(P0.05),子宫内膜厚度显著下降(P0.01);与模型组相比,滋阴安神方各组、戊酸雌二醇组及更年安片组大鼠血浆中E_2水平及子宫内膜厚度都有一定程度升高,且滋阴安神方高、中剂量能降低血浆FSH水平。小鼠行为学实验中,滋阴安神方高剂量及地西泮可显著提高与阈下剂量戊巴比妥钠协同催眠小鼠的入睡率(P0.05,P0.01);同时滋阴安神方低剂量及百忧解可显著缩短悬尾试验小鼠累计不动时间(P0.05,P0.01)。结论:滋阴安神方可提高更年期大鼠血浆E_2水平,降低FSH水平,增加子宫内膜厚度,并具有一定的催眠及抗抑郁的作用。