药效组分中药"黄金菊"对甲型流感病毒的抑制作用

目的:研究"黄金菊"抗甲型流感病毒PR8(A/PR8/34/H1N1)的活性,为药效组分中药的发现提供科学依据.方法:采用MTT掺入比色法测定药效组分中药"黄金菊"对狗肾传代细胞(MD-CK)的毒性及对PR8的有效性,同时设定阳性药物对照组及空白对照组;采用生物效价二剂量法对该药物与阳性药物的等效剂量进行比较.结果:该药物对MDCK细胞的TD50为1.9061mg·mL-1;TD0为0.625mg·mL-1;对流感病毒PR8的MIC为312.5μg·mL-1,IC50为112.8694μg·mL-1.双黄连粉针与"黄金菊"等反应剂量比为184.91%;病毒唑与"黄金菊"等反应剂量比为46.17%.结论:"黄金菊"具有对甲型流感病毒的直接抑制作用,且存在明显的量效反应关系,作用优于市场应用较广泛的双黄连粉针,开发前景广阔.     

利巴韦林联合双黄连口服液治疗甲型HIN1流感13例

目的观察利巴韦林联合双黄连口服液治疗轻型甲型H1NI流感患者的临床效果，分析其对轻型H1N1流感的疗效。方法2011年11月至2012年4月期间，我院共收治轻型甲型H1N1流感患者13例，对其采用利巴韦林联合双黄连1：1服液的治疗方法，并对患者进行动态临床观察，记录咽部充血消退，体温下降、血象恢复正常、扁桃体肿大消失、X线恢复正常等所需平均时间，分析两药联用治疗轻型甲型H1N1流感的疗效。结果经过积极进行利巴韦林联合双黄连口服液治疗，患者均痊愈出院。未出现明显典型的不良反应。其中咽部充血消退时间为（45±0．5）d，体温下降至正常所需时间为（3±1）d，血象恢复正常时间为（3．5±1）d，扁桃体肿大消失时间为（4±O．5）d，X线恢复正常时间为（5．5±o．5）d。结论采用利巴韦林联合双黄连口服液治疗轻型甲型H1N1流感患者具有明确的临床疗效，值得在临床推广应用。甲型HINl流感的临床特点与季节性流感相同，其预后良好，临床表现较为温和。     

中药黄金菊汤剂君药的6种抗炎药效组分含量测定

目的：分析中药黄金菊君药野菊花中6种抗炎组分含量。方法：反相高效液相色谱法（RP—HPLC）。结果：分析得到了君药中6种抗炎组分含量，即绿原酸，术犀草素．木犀草苷．蒙花苷，3，5二咖啡酰奎宁酸。结论：野菊花在黄金菊汤剂中的抗炎药效组分为绿原酸-咖啡酸-木犀草素-木犀草苷-蒙化苷-3．5二咖啡酰奎宁酸（10：1：1：4：17：6）．为组分中药的发现和中药药效组分质量评价方法的建立提供了科学基础数据。     

注射用黄金菊冻干粉针质量标准研究

目的：建立注射用黄金菊（冻干）的质量标准。方法：采用薄层色谱法鉴别处方中4种药效组分；并用RP-HPLC法对制剂中的4种药效组分进行定量分析。色谱柱：Agela Venusil HPLC Clumns（4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.6%磷酸水（12∶88～30∶70）；检测波长：340nm。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰。黄芩苷在1.652～9.912μg范围内线性关系良好，平均回收率为99.59%;绿原酸在0.1096～0.6576μg范围内线性关系良好，平均回收率99.39%；荭草苷在0.1944～1.164μg范围内线性关系良好，平均回收率为99.13%；牡荆苷在0.0472～0.2832μg范围内线性关系良好，平均回收率为99.19%。结论：本方法简便易行，可有效地控制黄金菊粉针质量。     

甲型H1N1流感诊疗须知（3）

甲型H1N1流感确诊病例的诊断标准为：出现流感样临床表现，同时有以下一种或几种实验室检测结果：1．甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性（可采用real—time RT—PCR和RT—PCR方法）；2．分离到甲型H1N1流感病毒；3．血清甲型H1N1流感病毒的特异性中和抗体水平呈4倍或4倍以上升高。     

中医辨证治疗甲型H1N1流感疗效观察

目的：探讨中医治疗甲型H1N1流感疗效。方法：回顾性分析我院2009年9月至2010年1月间46例甲型H1N1流感病例，随机分为治疗组和对照组，每组23例，治疗组在奥司他韦治疗基础上给予中医辨证治疗；对照组仅给予奥司他韦治疗。结果：两组，6-有效率为100％，治疗组显效率（78．26％）优于对照组（47．83％）。结论：中医辨证治疗甲型H1N1流感疗效显著。     

一叶抗流感胶囊抑制甲型H1N1流感病毒感染的体内外研究

目的:研究一叶抗流感胶囊体内外抗甲型H1N1流感病毒的作用。方法:ICR小鼠随机分为对照组、利巴韦林组(0.07 g·kg-1)、抗病毒颗粒组(4.24 g·kg-1)、一叶抗流感胶囊(1.5,0.75,0.38 g·kg-1),采用甲型H1N1流感病毒(FM1,PR8)滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,治疗给药于感染后连续ig 4 d,预防给药4 d后再感染病毒,计算肺指数、死亡率、死亡保护率、平均存活天数和生命延长率;体外Cytopathic effect(CPE)法观察一叶抗流感胶囊抗流感病毒的作用,犬肾上皮细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞密度为1×105个/mL,药物质量浓度为2.5,1.25,0.62,0.31 g·L-1,作用时间为48 h,每组4个样本。结果:与正常组比较,采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8病毒株感染小鼠后,治疗给药和预防给药下,病毒组肺指数均明显增高,治疗给药组的死亡率分别为90%和90%、预防给药组的死亡率为85%和55%,治疗给药组的平均存活天数分别为9.20 d和9.25 d、预防给药组的平均存活天数分别为9.35,11.60 d;一叶抗流感胶囊高、中剂量组治疗性给药后能明显降低流感病毒FM1株和PR8株感染后小鼠的肺指数(高剂量组1.03±0.28,0.88±0.13;中剂量组1.08±0.14,0.92±0.10);延长平均存活天数[高剂量组(11.05±2.86),(11.20±2.86)d,中剂量组(10.95±2.78)d,(10.90±2.86)d,一叶抗流感胶囊高、中剂量组预防性给药明显延长平均存活天数(11.15±2.30),(11.75±2.24)d。一叶抗流感胶囊在体外对FM1毒株的IC50为0.89 g·L-1,治疗指数为6.75。结论:一叶抗流感胶囊对甲型H1N1流感亚型FM1株体内、体外均有明显的治疗作用;对PR8株仅体内治疗给药有效。     

外用双黄连粉针治疗早期带状疱疹30例

目的：观察双黄连粉针配合利多卡因外涂治疗早期带状疱疹的临床疗效。方法：采用双黄连粉针（600mg／支）5支～8支配合2％利多卡因共5mL外敷患处，结合抗病毒、对症支持治疗。结果：30例患者中，痊愈25例，显效4例，有效1例，总有效率100％。结论：双黄连粉针配合利多卡因外涂治疗早期带状疱疹是一种操作简单、经济、疗效佳的外治方法。     

甲型H1N1流感9例临床观察

目的：探讨甲型H1N1流感患者治疗及愈后。方法：对我科收治的9例确诊康复患者进行回顾性分析。结果：甲型H1N1流感经抗病毒及中医药结合是可控、可治的。结论：认识甲型H1N1流感的诊治，有助于正确诊断、预防及治疗，避免患者及民众谈“甲流”色变情绪。     

清瘟败毒散加大椎叩刺放血治疗甲型H1N1流感临床观察

目的探讨清瘟败毒散加大椎叩刺放血治疗甲型H1N1流感的临床疗效。方法将80例确诊为甲型H1N1流感的7～14岁儿童随机分为观察组与对照组各40例，观察组予以清瘟败毒散汤剂口服，加隔日1次大椎叩刺放血；对照组采用扎那米韦10mg吸入，每日2次。疗程均为6d。结果观察组有效率高于对照组；1个月后随访，观察组复发率为8．82％，显著低于对照组之18．75％。结论清瘟败毒散加大椎叩刺放血治疗甲型H1N1流感有较好的临床疗效，较之于扎那米韦有更好的预防甲型H1N1流感复发的功效。     

基于甲型H1N1流感病毒致MDCK细胞损伤保护作用的双黄连组方HPLC特征图谱谱效关系研究

构建双黄连组方HPLC特征图谱与甲型H1N1流感病毒致MDCK(Madin-Darby canine kidney)细胞损伤保护作用的相关性。在双黄连原方的基础上按正交法L₉(3⁴)组成9个不同配比的组方,分别进行HPLC分析和MDCK细胞损伤的保护作用试验,采用细胞病变效应法(cytopathic effect, CPE)观察病毒感染力,MTT染色结果作为浓度筛选和细胞损伤保护作用的判定指标。除组方1外,其他各组方对甲型H1N1流感病毒致MDCK细胞损伤均具有显著的保护作用(P<0.01,P<0.001),对所获得的HPLC数据和药效数据应用SPSS软件进行逐步回归分析,结果双黄连各组方17个特征共有色谱峰中与甲型H1N1流感病毒致MDCK细胞损伤的保护作用相关性较大的组分为2,3,6,8和12号峰。将组方数据与药效数据进行逐步回归分析,发现金银花、连翘与细胞损伤的保护作用呈正相关。通过HPLC图比对,2,3和12号峰来自金银花,而6和8号峰来自连翘。通过对照品保留时间进一步比较,确定了其中4个色谱峰分别为绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷B和3,4-二咖啡酰奎宁酸。推测双黄连组方中与甲型H1N1流感病毒致MDCK细胞损伤保护作用相关性较大的的主要成分为金银花和连翘中咖啡酰类衍生物。     

桂枝挥发油抗甲型流感病毒作用

目的:观察桂枝挥发油及其主要成分桂皮醛体外对甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)增殖的影响及对该流感病毒株感染小鼠的治疗作用。方法:MTT法检测受试药物对狗肾传代细胞(MDCK)的半数中毒浓度(TC50)及最大无毒浓度(TC0);血凝法测定甲型流感病毒(H1N1)对MDCK细胞的感染性;MTT法和细胞病变法(CPE)测定两种药物体外抑制流感病毒增殖的有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。计算肺指数及HE染色观察药物对流感病毒(H1N1)感染小鼠的治疗作用。结果:桂枝挥发油和桂皮醛对MDCK细胞的TC50分别为5.38×10-3mg/ml和5.49×10-3mg/ml,TC0均为2.5×10-3mg/ml。桂枝挥发油和桂皮醛能抑制流感病毒在MDCK细胞内的增殖,其IC50分别为5.80×10-5mg/ml与5.31×10-5mg/ml,TI分别为92.82和103.35。桂枝挥发油0.174mg/kg和桂皮醛0.132mg/kg连续灌胃5d,明显降低病毒感染小鼠的肺指数,抑制率分别为26.7%和27.4%,并对病理组织形态有改善作用。结论:桂枝挥发油与桂皮醛体外明显抑制甲型流感病毒(H1N1)在MDCK细胞中的增殖,并对流感病毒株感染小鼠有较好的治疗作用。表明桂枝挥发油及桂皮醛具有抗甲型流感病毒作用,桂皮醛是桂枝挥发油抗病毒效应的主要有效成分之一。     

克感复方对流感病毒抑制作用的实验研究

目的:探讨克感复方在MDCK细胞上抗流感病毒的作用并对其机制进行初步研究。方法:以利巴韦林为阳性对照药物,运用抑制试验、预防试验、中和试验3种方法,以MTT法检测细胞存活率,研究克感复方抗流感病毒的作用并判断其作用原理。同时,通过药物血凝抑制实验分析其抗流感病毒作用是否与病毒血凝素相关。结果:克感复方对MDCK细胞的半数毒性浓度(CC50)为(2.84±0.65)mg/mL,抑制流感病毒增殖的半数有效浓度(EC50)为(0.18±0.12)mg/mL,选择性指数(SI)为15.78。有细胞外杀流感病毒作用,但作用较弱,最高抑制率未超过50%。无阻断流感病毒吸附的作用。无药物血凝抑制作用。结论:克感复方在MDCK细胞上具有抗流感病毒的作用,其中抑制流感病毒增殖的能力最强。     

滨蒿总黄酮对H1N1流感病毒感染的A549细胞先天免疫信号通路的影响＊

目的 探讨滨蒿总黄酮（Total flavonoids from Artemisia scoparia Waldst. et Kit.，ASTF）对抗流感病毒作用及H1N1流感病毒感染的人肺癌A549细胞先天免疫反应过程中起调控作用。方法 定量检测H1N1流感病毒致犬肾上皮MDCK细胞病变（Cytopathic effect， CPE）作用；用TRIzol提取总RNA，RT-qPCR检测ASTF对流感病毒相关信号通路的抗病毒效果，并用流式微球技术（Cytometric bead array， CBA）和ELISA检测ASTF对H1N1流感病毒感染的A549细胞分泌炎性细胞因子的影响。结果 ASTF在体外对H1N1流感病毒有一定抑制作用，可降低H1N1感染的A549细胞先天免疫通路中的RIG-I、AKT、P38、PI3K、STING、PKR和Viperin mRNA表达水平及炎性细胞因子IL-2、IL-6、IL-17A的分泌。结论 ASTF通过抑制胞内先天免疫信号通路RLRs、PI3K/AKT、P38 MAPK发挥免疫调节和抗炎作用，从而达到抗流感的效果。     

荆芥挥发油体外抗甲型流感病毒作用及机制的研究

目的:观察荆芥挥发油及其主要成分胡薄荷酮与薄荷酮体外对甲型流感病毒(H1N1)增殖的影响,并探讨其TLR/IFN信号通路机制。方法:MTT法检测受试药对狗肾传代细胞(MDCK)的半数中毒浓度(TC50)及最大无毒浓度(TC0);血凝法测定甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)对MDCK细胞的感染性;MTT法和细胞病变法(CPE)测定三种药物体外抑制流感病毒增殖的有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。Real-Time PCR法观察药物对H1N1感染MDCK细胞后8h细胞TLR7、IFN-βmRNA表达水平的影响。结果:荆芥挥发油、胡薄荷酮和薄荷酮对MDCK细胞的TC50分别为0.20mg/ml、0.36mg/ml与0.43mg/ml,TC0分别为0.10mg/ml、0.10mg/ml与0.25mg/ml。荆芥挥发油和胡薄荷酮3.1×10-3～0.1mg/ml浓度时能抑制流感病毒增殖,其IC50分别为1.7×10-3mg/ml与1.9×10-3mg/ml,TI分别为120.83、184.54,呈一定量效关系;薄荷酮对流感病毒染毒的MDCK细胞几乎无保护作用。荆芥挥发油3.1×10-3～0.10mg/ml浓度,胡薄荷酮1.3×10-2～0.10mg/ml及薄荷酮7.8×10-3～0.10mg/ml浓度时对流感病毒具有明显直接杀灭作用,其IC50分别为3.1×10-3、7.2×10-3与1.9×10-3mg/ml,TI分别为63.99、50.00和82.88。荆芥挥发油和胡薄荷酮0.1mg/ml浓度时均显著提高TLR7、IFN-βmRNA表达水平,0.25mg/ml薄荷酮显著提高TLR7mRNA表达水平。结论:荆芥挥发油与胡薄荷酮体外明显抑制甲型流感病毒(H1N1)在MDCK细胞中的增殖,薄荷酮作用不明显;三者均对流感病毒有显著直接杀灭作用。其抗病毒作用机制可能与其激活TLR7,诱导IFN-β高表达,激活病毒模式识别系统有关。     

空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒作用

[目的]以空心莲子草有效部位提取物为研究对象,进一步验证其抗甲型H3N2流感病毒的生物活性,为其开发应用提供依据。[方法]以利巴韦林注射液作为空心莲子草有效部位提取物抗病毒实验的阳性对照药物,观察甲型H3N2流感病毒感染幼犬肾（MDCK）细胞后引起的细胞病变效应（CPE）,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活性,采用治疗指数（TI）作为药物抗病毒效果的评价指标,评价空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒的生物活性。[结果]空心莲子草有效部位提取物对流感病毒有明显抗病毒生物合成作用,其TI为（2．43±0．01）,但其阻止流感病毒吸附与直接杀伤流感病毒的作用不明显。[结论]空心莲子草有效部位提取物有较强的抗流感病毒作用,其作用方式为抗病毒生物合成,且呈剂量依赖性。     

锦带花体外抗流感病毒有效部位研究

目的:筛选锦带花抗流感病毒的有效部位,为锦带花药效物质基础阐明提供依据。方法:体外用MTT法检测锦带花有效部位对传代狗肾细胞MDCK的毒性浓度,观察锦带花有效部位抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用(CPE),MTT检测锦带花有效部位对流感病毒的抑制率。结果:锦带花的各有效部位均有抗流感病毒(H1N1)的作用,其中锦带花乙酸乙酯提取物的抑制流感病的作用与利巴韦林相似;而石油醚提取物的抑制作用最弱。结论:锦带花具有确切的抗流感病毒作用,锦带花的乙酸乙酯提取物为抗流感病毒的有效成分集中部位。     

清开灵和双黄连口服液体内抗禽流感病毒作用

目的 评价清开灵和双黄连口服液体内抗禽流感病毒药效,探讨其对感染流感病毒小鼠免疫功能的影响.方法 建立H9N2亚型禽流感病毒鼠肺适应株人工感染BALB/c小鼠模型,以肺指数抑制率、生命保护率和肺病毒滴度为主要评价指标,研究清开灵和双黄连口服液对感染H9N2亚型禽流感病毒小鼠的防治效果;以脾指数、胸腺指数和T细胞亚群比率(CD4+/CD8+)为主要评价指标,探讨清开灵和双黄连口服液对感染流感病毒小鼠免疫功能的影响.结果 清开灵和双黄连口服液均能显著抑制H9N2亚型禽流感病毒引起的小鼠肺炎实变,攻毒后第4天小鼠肺指数抑制率分别为34.1%、26.3%.清开灵和双黄连口服液对感染小鼠有显著的生命保护作用,存活率分别为70.0%、60.0%,显著高于病毒对照组的存活率(30.0%),鼠肺病毒滴度显著低于病毒组(P＜0.01).清开灵和双黄连口服液对感染病毒后小鼠脾脏和胸腺萎缩具有显著的抑制作用,并能提升感染小鼠脾脏中CD4+/CD8+值.结论 清开灵和双黄连口服液具有显著的抗禽流感病毒作用,对病毒复制的抑制及对病毒感染导致的小鼠免疫功能下降的调节作用是其发挥抗病毒功效的重要机制.     

中药组合方作用于流感病毒H1N1感染MDCK细胞的实验研究

目的：观察中药方剂大青叶、马齿苋、甘草组合物在流感病毒H1N1感染的MDCK细胞模型中抗流感病毒的作用。方法：建立流感病毒H1N1感染MDCK细胞模型,试验分为药物组、正常对照组和病毒对照组,37℃、5%CO2培养箱中培养18h后观察各组细胞的增殖变化,收集细胞上清液,检测各组流感病毒血凝效价及ELISA法检测TNF-ɑ、IFN-γ、IL-2与IL-6的含量。结果：与病毒对照组相比,用药后流感病毒的血凝效价从2-8降为2-4,二组流感病毒血凝效价比较,P〈0.01。与病毒对照组相比,中药方剂大青叶、马齿苋、甘草组合物组TNF-ɑ水平下降（P〈0.05）,IFN-γ水平升高（P〈0.05）,差异均有统计学意义,IL-2有升高的趋势（P〉0.05）。结论：用流感病毒H1N1感染MDCK细胞模型,可以较好的评价中药抗流感病毒的作用。中药方剂大青叶、马齿苋、甘草组合物可通过降低TNF-ɑ的含量以减轻病毒对宿主细胞的免疫病理损伤,并通过促进IFN-γ、IL-2等的分泌以提高机体的抗病毒能力;同时该中药组合物可较好的抑制流感病毒的复制。     

众生丸在小鼠体内抗H5N1亚型禽流感病毒的实验研究

目的：研究众生丸在小鼠体内对禽流感病毒H5N1亚型的抑制作用。方法：以达菲为阳性对照，观察众生丸对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用和对染毒小鼠的死亡保护作用，从而判定其抗流感病毒作用。结果：与病毒对照组相比较，众生丸可降低禽流感病毒性肺炎小鼠肺指数，调节T淋巴细胞亚群，降低小鼠血清中TNF-α含量，促进IFN-γ和IL—10产生，减轻肺间质、肺泡内炎症；众生丸低剂量组对H5N1亚型禽流感病毒所致小鼠的死亡有降低作用，并延长生存时间。结论：众生丸对H5N1禽流感病毒感染小鼠所致肺病变具有抑制作用。