18β-甘草次酸通过调控PIM1对宫颈癌细胞及裸鼠移植瘤自噬与凋亡的影响

[目的] 探究18β-甘草次酸（18β-GA）通过调控莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1（PIM1）对宫颈癌细胞及裸鼠移植瘤自噬与凋亡的影响。[方法] 以浓度梯度（50、100、150 μmol/L）18β-GA作用于宫颈癌Hela细胞,明场与免疫荧光染色观测细胞形态变化,AutoDock Vina软件对18β-GA与PIM1进行分子对接。用100 μmol/L 18β-GA处理敲低及过表达PIM1的Hela细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测增殖抑制率,蛋白印迹检测蛋白表达变化。以Hela细胞构建裸鼠宫颈癌移植瘤模型,成瘤后随机分为18β-GA实验组与对照组,每日分别灌胃100 mg/kg 18β-GA与等量生理盐水溶液。14 d后取移植瘤切片,行苏木精-伊红（HE）染色对比两组移植瘤组织形态,免疫荧光染色与蛋白印迹检测对比移植瘤蛋白表达水平。[结果] 与对照组相比,随着18β-GA作用浓度的增加,PIM1、B细胞淋巴瘤-2（BCL-2）表达降低,自噬蛋白Beclin-1表达升高,细胞增殖抑制率增高（P<0.05）。敲低PIM1与敲低PIM1后加18β-GA处理组比较细胞增殖抑制率、PIM1、Beclin-1与BCL-2表达水平无明显差异（P>0.05）,而过表达PIM1与过表达PIM1后加18β-GA处理组比较上述结果有显著差异（P<0.05）。18β-GA可以与PIM1稳定结合于PHE-100,结合能为 -7.3 kcal/mol。18β-GA可抑制裸鼠移植瘤组织中PIM1与白细胞介素-6（IL-6）表达,降低信号转导和转录激活因子3（STAT3）磷酸化,进而抑制增殖细胞核抗原（PCNA）、抗凋亡蛋白BCL-2表达,增加Beclin-1表达（P<0.05）。[结论] 18β-GA通过抑制PIM1进而下调BCL-2促进Beclin-1表达,促进宫颈癌细胞自噬与凋亡,减少裸鼠移植瘤STAT3磷酸化,降低PCNA、IL-6表达,进而发挥对Hela宫颈癌小鼠的抑瘤作用。     

反相HPLC测定甘草提取物中的三种活性成分

甘草的主要活性成分有甘草素(gly-cyrrhizin)或甘草酸(glycyrrhizic acid,GL),18α-甘草次酸(18α—Glucurrhetihic acid,18α-GA),和18β-甘草次酸(18β-Glycyrrhetimicacid,18β-GA)。本文报道采用一次分析步骤同时测定甘草提取物中GL,18α-GA和18β-GA含量的方法。仪器:HPLC系统由U_(6k)型进样器,2个510型泵,441型检测器,990型光电二极管阵列检测器和740型积分仪组成,洗脱在具有保护栓的Lichrospher 100RP-18(5μm)的封端栓(125×4mml.D.E.Merck)上进行。检测     

甘草酸、18β-甘草次酸、熊果酸和齐墩果酸抗人肺癌细胞侵袭作用及其机理的研究

目的 :探讨甘草酸、18β -甘草次酸、熊果酸和齐墩果酸抗人肺癌细胞增殖和侵袭的作用 ,并探讨其抗侵袭作用的机理。方法 :用 4种单体药物分别作用于高转移人肺癌细胞 (PGCL3) ,用细胞增殖抑制试验、软琼脂集落形成试验、侵袭试验、运动试验、粘附试验以及组织蛋白酶B活性测定观察细胞侵袭能力的变化。结果 :甘草酸、18β -甘草次酸、熊果酸和齐墩果酸处理 96h均可降低PGCL3细胞增殖能力并呈剂量依赖性 ,均能抑制PGCL3 细胞的侵袭能力 (P <0 0 1)且有剂量依赖性。抗侵袭作用机理的分析结果显示上述的 4种药物对细胞的运动、粘附能力及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用 (P <0 0 5和P <0 0 1) ;软琼脂集落形成率也显著降低 (P <0 0 1)。结论 :甘草酸、18β -甘草次酸、熊果酸和剂墩果酸均有抗PG CL3 人肺癌细胞增殖和侵袭作用 ,其抗侵袭机理是通过对癌细胞趋化运动、对层粘连蛋白的粘附作用和组织蛋白酶B分泌的抑制实现的     

甘草酸和甘草次酸的抗肝毒活性的比较

采用体内和体外测定方法,比较研究了甘草酸(18β-GL)和甘草次酸(18β-GA)的抗肝毒活性。在D-半乳糖胺处理前1,24和48h,对大鼠经口投与18β-GA.在D-半乳糖胺给药后24h,18β-GA可明显减少血清转氨酶活性的增加,但18β-GL未能抑制血清转氨酶活性的增加。D-半乳糖胺处理前1h,腹腔注射18β-GA,可恢复血清转氨酶活性的增加。在四氯化碳诱导初级培养大鼠肝细胞的毒性中,在5～50μg/ml剂量时,18β-GA保护四氯化碳诱导的转氨酶渗漏。但     

飞天蜈蚣七对实验性肝纤维化大鼠胰岛β细胞功能的影响

目的 :探讨应用飞天蜈蚣七抗肝纤维化时对大鼠胰岛 β细胞功能的影响。方法 :以四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型 ,设立正常组、模型组和飞天蜈蚣七组。正常组于实验开始时取胰腺 ,模型组和飞天蜈蚣七组则分别于造模后 3周、 6周取胰腺作胰岛细胞的分离与培养 ,然后测定其培养上清液胰岛素含量。结果 :3周模型组大鼠空腹血清胰岛素与正常组差异无显著意义 ,而 6周模型组大鼠空腹血清胰岛素为 ( 5 3 8± 3 1 )mU/L ,正常组为 ( 2 4 5± 2 5 )mU/L ,两组比较q=1 2 87,P <0 0 5 ;3、 6周飞天蜈蚣七组大鼠空腹血清胰岛素与相应模型组差异无显著意义。 3周模型组大鼠胰岛细胞的基础胰岛素分泌与正常组差异无显著意义。而 6周模型组大鼠胰岛细胞的基础胰岛素分泌量为 ( 5 0 90±1 2 86) μU/mL ,正常组为 ( 3 4 87± 5 1 6) μU/mL ,两组比较q =1 1 0 8,P <0 0 1 ;3、 6周飞天蜈蚣七组大鼠胰岛细胞的基础胰岛素分泌量分别为 ( 1 5 6 0 1± 7 1 1 ) μU/mL和 ( 1 41 43± 3 9 0 1 ) μU/mL ,均显著高于相应模型组 ,F值分别为 65 80和 1 2 66,P <0 0 1。结论 :飞天蜈蚣七可增加四氯化碳所致肝纤维化 3、 6周大鼠胰岛 β细胞的基础胰岛素分泌量。     

血清CA125、癌胚抗原及甲胎蛋白鉴别附件肿块良恶性的价值

目的　探讨联合检测血清肿瘤标记物CA12 5、癌胚抗原 (CEA)、甲胎蛋白 (AFP)对鉴别附件肿块良恶性的价值。方法　 130例附件肿块患者 ,术前测定血清肿瘤标记物CA12 5 ,CEA ,AFP ,术后病理检查组织学分型 ,结果进行比较。结果　良恶性附件肿块间CA12 5 ,CEA ,AFP水平相比均有显著性差异 ,以CA12 5≥ 35× 10 3 U/L ,CEA≥ 5 μg/L ,AFP≥10 μg/L判断为恶性 ,敏感性分别是 6 5 .9% ,2 9.5 % ,2 5 .0 % ;特异性分别是 86 .0 % ,98.8% ,98.8% ;准确性分别是 79.2 % ,75 .4 % ,73.8% ;三者联合检测敏感性为 84 .1%、特异性为83.7%、准确性为 83.8%。结论　肿瘤标记物CA12 5 ,CEA ,AFP联合检测是鉴别附件肿块良恶性、早期诊断卵巢癌的有效方法之一     

葛根提取物诱导人肝癌细胞分化的研究

目的 :探讨葛根提取物对Bel-740 2人肝癌细胞的作用。方法 :实验组Bel-740 2人肝癌细胞用葛根提取物处理 ,对照组用培养液处理 ,观察并对照两组AFP ,γ -GT ,ALD ,TAT ,OCT ,ALP的分泌量。结果 :治疗组AFP分泌量、γ -GT和ALD活力明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而OCT ,TAT和ALP的活力则明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,差异均具有显著性。结论 :葛根提取物能有效诱导Bel-740 2人肝癌细胞的分化。     

中西医结合治疗慢性肾功能衰竭的研究

目的　探讨中西医结合治疗慢性肾功能衰竭 (CRF)的临床疗效。方法　将 6 0例CRF患者随机分为治疗组 (35例 )和对照组 (2 5例 )。对照组给予常规西药治疗。治疗组在对照组的治疗基础上辨证、辨病加服中药汤剂治疗。 2组均以 3个月为 1个疗程。结果　治疗组治疗后血尿素氮 (BUN ,(13.5 3± 7.82 )mmol/L)和血肌酐 (SCr,(398± 35 .15 ) μmol/L)均显著低于对照组 (分别为 (15 .38± 8.0 4 )mmol/L、(42 5± 4 4 .18) μmol/L) ,P均 <0 .0 5 ;内生肌酐清除率(Ccr,(2 4 .30± 14 .4 6 )mL/min)显著高于对照组 ((2 2 .84± 13.85 )mL/min) ,P <0 .0 5。治疗组总有效率为 90 % ,对照组为 5 7% ,2组疗效差异显著 (P <0 .0 5 )。结论　中西医结合治疗CRF可降低BUN、SCr,提高Ccr ,疗效优于单纯西医治疗。     

甘草甜素对HBsAg低表达HepG2.2.15细胞株HBV感染及TLR2、4的影响

目的探讨甘草甜素(GL)对HepG2.2.15细胞上清HBV DNA、e抗原分泌,Toll样受体2、4(TLR2、4)信号分子的表达及对细胞增殖的影响.方法实时荧光定量PCR检测HBV DNA表达,ELISA检测HBV所分泌抗原,MTT检测细胞增殖活性,直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率,并与空白对照组对比.结果HBsAg在该细胞株低表达,但HBeAg则明显阳性,因此研究了GL对e抗原的影响,给药后第3 d e抗原总体均数间差异显著(P＜0.01),但只有400 μg/ml组与对照组间比较显著降低(P＜0.05),800 μg/ml组则较其余GL组明显升高(P＜0.01).HBV DNA给药后第3 d总体均数间比较差异有显著性,只有50 μg/ml组较对照组降低,但无统计学意义(P＞0.05),其余各组均较对照组升高;各组TLR2、4数值总体均数间有显著差异(P＜0.01).除200 μg/ml组外,各剂量组与对照组比较显示两者均显著上调(P＜0.05),但均无剂量依赖关系;MTT实验显示200 μg/ml以下三个剂量组均可促进细胞增殖,但只有200 μg/ml组与对照组间差异显著(P＜0.05);400、800 μg/ml两组均显著抑制细胞增殖(P＜0.01);而MTT分别与HBeAg、HBV DNA呈显著负相关(P＜0.05).结论研究表明,GL对HepG2.2.15变异株的病毒复制及e抗原分泌可能具有双向作用;细胞的存活数与病毒复制及e抗原呈负相关;TLR2在变异株低表达,GL呈非剂量依赖关系上调TLR2、4表达,至少在该细胞株GL影响HBV的机理与TLR2、4信号的改变无关,但有可能在体内通过免疫途径影响HBV.     

核桃仁抗超氧阴离子自由基能力的研究

目的　探讨核桃仁清除超氧阴离子自由基 (O·-2 )的能力。方法　用AP -TEMED系统产生O·-2 ,比色法测定其浓度 ,比较不同品种核桃仁水提液及维生素C存在时O·-2 浓度的变化 ,并计算其清除率。结果　标准管O·-2 浓度为 (2 .7± 0 .0 6 1) μmol/L ,O·-2 清除率为 0 ,加核桃仁后O·-2 总浓度为 (1.87± 0 .13) μmol/L ,O·-2 清除率为 (30 .86± 6 .2 7) % ;加维生素C后O·-2浓度为 (0 .16± 0 .14 ) μmol/L ,O·-2 清除率为 93.97% ;加两种不同品种的核桃仁后O·-2 浓度分别为 (1.4 8± 0 .2 3) μmol/L和 (2 .2 6± 0 .0 2 ) μmol/L ,O·-2 清除率分别为 (45 .2 9± 9.0 2 ) %和 (16 .4 1±3 5 1) % ,比较均有明显差别 ,P <0 .0 0 1。结论　核桃仁体外有明显的清除O·-2 能力 ,且不同品种间有明显差异     

阴阳升降理论探析与启迪

通过梳理《内经》及相关医家关于阴阳升降的论述,探讨阴阳升降的内容及阴阳升降的不同内涵。从阐述人体生理变化和脏腑特点、阐述疾病的病机、解释治则治法和方药配伍应用等方面分析阴阳升降对临床的启迪作用。     

谈人参在《伤寒论》中的应用

人参为五加科植物人参的根。最早见于《神农本草经》,列为上品,书云:“人参味甘微寒,主补五脏,安精神,定魂魄,止惊悸,除邪,明目,开心,益智。”其味甘、微苦,性微温。归脾(胃)、肺、心经。具有大补元气,补脾益肺,益气生津,宁心安神之功效。在《伤寒论》中,仲景应用人参共40次,入     

非酒精性脂肪肝诊治的问题及对策

目的探讨非酒精性脂肪肝临床治疗中有效对策。方法结合近代非酒精性脂肪肝治疗研究现状部分问题,运用中医辨证和辨病论治结合现代药理学研究进展方法,防治非酒精性脂肪肝。结果中西医结合防治此病有效。结论中西医结合辨证和辨病结合论治防治此病为有效对策。     

《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》虚劳病精气神调治原则与方法

从中医精气神辨识角度认识虚劳病,总结虚劳病病因病机。通过观察面容、形态、神色、五官、舌象、脉象等辨识精气神状态,确立虚劳病精气神调治原则。在精气神辨识理论指导下,对《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》相关条文、方药进行解析,总结虚劳病相关治则治法。根据精气神调养原则,为虚劳病临床应用提供指导。     

五脏补血法理论及临床应用探讨

血液的生成与五脏关系密切,据此确立五脏补血法:养心补血法、健脾补血法、润肺补血法、滋肝补血法、益肾补血法。     

从“方药离合”看中医学的方药共荣

通过对历代方剂与本草的应用演变和发展过程的论述,揭示了中医方药共荣关系,并以黄柏、升麻等药为例,强调方药配伍运用是方药共荣的核心环节.随后,结合中医发展的现实环境,分析了坚持方药共荣的正确方向,对于防止重药轻方的错误倾向,提高中医临床疗效,启迪现代研究思路,均具有重要的学术价值和现实意义.     

全蝎配伍蜂房之祛风攻毒作用探析

通过梳理古本草文献中全蝎、蜂房的有关记载和现代临床对该药对的配伍应用,探讨并阐释该药对祛风攻毒增效的作用机制,认为全蝎配蜂房,药力迅捷,内走脏腑,外达肢节,透骨搜风,既可祛风通络止痛,又可攻毒散结消痈.尤其适宜于治疗风湿顽痹、痈疽恶疮、癌肿等.     

丹栀逍遥散及其提取物镇静催眠作用研究

目的探讨丹栀逍遥散原方及提取物镇静催眠作用。方法将小鼠分为14组,正常对照组、原方组及各组分低中高剂量组,通过测定小鼠自主活动次数,采用戊巴比妥钠延长睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量镇静催眠协同作用实验观察丹栀逍遥散原方及各提取物镇静催眠作用。结果丹栀逍遥散原方及提取物均无改变小鼠自主活动的功能,表明均无中枢兴奋性作用;丹栀逍遥散石油醚提取液高、中剂量具有显著延长戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的作用(P<0.01或P<0.05),石油醚提取液高剂量能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠睡眠小鼠个数(P<0.01)。结论丹栀逍遥散石油醚提取部位可能为丹栀逍遥散的中枢抑制作用的有效部位。     

小青龙汤因机证治浅析

小青龙汤为温阳宣肺、蠲痰涤饮之剂,凡见哮喘、咳嗽、痰、饱胀、喘息和四肢水肿等因"外感风寒,内有寒饮"所致者,均可辨证应用小青龙汤。临证应用时注意:①寒邪不必拘泥外感;②"三水"的变化要审清;③但见寒饮,有无表证均可用此方;④注意痰饮在临床上的变化;⑤临床见喘未必治喘,要临证辨别。用此方,要抓住以下临床指征:①面色:"三水"之面色--黧黑之色;②脉象:弦脉或浮紧;③舌象:舌苔多水滑;④痰涎:咳痰较爽,痰涎清稀,泡沫状。以上"但见一证便是,不必悉俱",有效之后,应中病即止。     

高脂血症诊治研究中问题及策略

目的:探讨高脂血症诊临床治疗中有效对策。方法:结合近代高脂血症诊治疗研究现状部分问题,运用中医辨证和辨病论治结合现代药理学研究进展方法,防治高脂血症。结果:中西医结合防治此病有效。结论:中西医结合辨证和辨病结合论治防治此病为有效对策。