复方六月青诱导肝星状细胞凋亡的研究

目的:研究复方六月青(CLYQ)对肝星状细胞(HSC)凋亡的影响。方法:采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测CLYQ对细胞的毒性。采用吖啶橙荧光染色和流式细胞术检测CLYQ对HSC凋亡的影响。结果:CLYQ对HSC毒性很低。吖啶橙荧光染色法结果显示,与空白对照组相比较,CLYQ对HSC-T6凋亡细胞比例的影响有统计学差异(P<0.01),其凋亡率细胞比例有明显的剂量依赖性。流式细胞术结果显示,空白对照组凋亡细胞比例为4.82,CLYQ 3.6mg/mL浓度组凋亡细胞比例为10.10,1.8mg/mL浓度组凋亡细胞比例为6.76,0.9mg/mL浓度组凋亡细胞比例为5.18。结论:CLYQ通过诱导HSC细胞凋亡,从而发挥抗肝纤维化作用。     

葫芦茶苷对大鼠肝星状细胞增殖和细胞外基质的影响及机制研究

目的研究葫芦茶苷对大鼠肝星状细胞增殖和细胞外基质分泌的影响,并探讨其可能机制。方法以大鼠肝星状细胞(HSC-T6)为体外细胞模型,采用CCK-8法检测葫芦茶苷对HSC-T6增殖的抑制作用,ELISA法测定细胞上清液中Hyp、HA和TIMP-1的含量,FQ-PCR检测Col I、TGF-β1、α-SMA、PDGF-BB mRNA的表达,Western blot法检测细胞内TGF-β1、α-SMA和PDGF-BB蛋白的表达。结果葫芦茶苷对HSC-T6细胞的增殖有较强的抑制作用。与空白组比较,葫芦茶苷各剂量组能降低细胞上清液中Hyp、HA和TIMP-1的含量,下调细胞内Col I、TGF-β1、α-SMA、PDGF-BB mRNA的表达,而且能降低细胞内TGF-β1、α-SMA和PDGF-BB蛋白的表达。结论葫芦茶苷体外具有抗肝纤维化作用,其机制可能是抑制HSC-T6细胞的增殖,下调TGF-β1、α-SMA和PDGF-BB蛋白的表达,从而减少肝细胞外基质的合成和沉积。     

姜黄素对氧应激致大鼠肝星状细胞增殖 及TGF-β1表达的抑制作用

目的:探讨姜黄素体外对氧化应激致肝星状细胞(HSC-T6)增殖、表达转化生长因子-β1(TGF-β1)的抑制作用。方法:以100μmol.L-1过氧化氢(H2O2)致HSC氧应激,将细胞分成对照组、H2O2组和H2O2+姜素素干预组(终质量浓度分别为25,50,100μmol.L-1)5组,用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测HSC细胞增殖;用流式细胞术检测姜黄素对HSC细胞周期的影响;硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法和消化法分别检测细胞培养液丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和羟脯氨酸(HyP)的含量;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HSC表达TGF-β1的水平。结果:HSC经H2O2诱导后,细胞增殖显著(P<0.01),细胞培养液上清中MDA,Hyp含量明显上升,SOD活力下降(P<0.01);经姜黄素各剂量干预后,MDA,Hyp含量下降,SOD活力升高,以50,100μmol.L-1姜黄素浓度作用明显(P<0.01);H2O2刺激HSC后,TGF-β1 mRNA表达被上调(P<0.001),经姜黄素干预后,TGF-β1 mRNA表达水平下降(P<0.01)。结论:姜黄素可显著抑制氧化应激致HSC的增殖,该作用可能与其抗氧化、抑制TGF-β1的表达有关,表明姜黄素作为抗氧化剂在肝纤维化防治中具有重要价值。     

消痰化瘀抗纤方药物血清对肝星状细胞增殖及胶原降解基因表达的影响

目的:观察消痰化瘀抗纤方(简称抗纤方)药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖,Ⅰ型胶原含量及相关基因表达水平的影响,探讨该方抗肝纤维化的细胞分子学机制。方法:正常大鼠血清和药物血清干预HSC-T6细胞24h,MTT法检测抗纤方药物血清对HSC增殖,ELISA法测定细胞上清液Ⅰ型胶原含量变化,RT-PCR法检测细胞中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的mRNA表达量。结果:抗纤方高(13.5倍)、中(4.5倍)、低(1.5倍)剂量组药物血清能明显抑制HSC增殖(P<0.05),且增殖抑制率与剂量呈正相关;对上清液中Ⅰ型胶原含量影响,随药物剂量增加明显降低(P<0.05);能明显抑制TIMP-1mRNA表达(P<0.05),促进MMP-1mRNA表达(P<0.05)。结论:抗纤方药物血清能抑制HSC增殖,减少Ⅰ型胶原含量,抑制TIMP-1表达,促进MMP-1表达,具有抗肝纤维化作用。     

舒肝颗粒对大鼠肝星状细胞活化增殖的抑制作用

目的:研究中药舒肝颗粒对体外培养活化大鼠肝星状细胞(HSC)活化增殖的影响,探讨舒肝颗粒抗肝纤维化的作用机制。方法:用空白对照及0.01,0.02,0.04 g.L-1的舒肝颗粒分别处理HSC细胞系HSC-T6 24 h后,MTT比色法检测细胞增殖,光镜下观察HSC形态学变化,免疫组化法测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化。结果:舒肝颗粒作用HSC细胞24 h后,0.01,0.02,0.04 g.L-1终浓度肝星状细胞抑制率分别为7.02%,13.33%,20.85%,明显高于空白对照组,且与药物浓度相关。与对照组比较,随着舒肝颗粒药物浓度的增高,HSC的细胞增殖和胞体伸展受到明显抑制;空白对照组,舒肝颗粒0.01,0.02,0.04 g.L-1组α-SMA阳性表达率分别为(62.83±3.42)%,(47.31±2.74)%,(37.79±3.01)%,(25.74±2.83)%,各组与空白对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:舒肝颗粒抑制肝星状细胞活化、增殖并抑制α-SMA表达,可能是其抗纤维化的作用机制。     

青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨青蒿琥酯抗肝纤维化的作用机制。方法:用MTT法观察青蒿琥酯对HSC增殖的影响,用流式细胞仪检测HSC在细胞周期中DNA含量的改变,测定不同浓度青蒿琥酯作用于HSC后上清液中Hpy、LDH的含量。结果:1.5~100μg/m l青蒿琥酯在0~72h范围内对HSC增殖有抑制作用,并有药物浓度时间依赖关系。各青蒿琥酯处理组中G0/G1期细胞比例逐渐增高,与正常组相比由56.2±1.3%升至72.6±2.3%左右;S期比例逐渐降低,由27.1±2.6%降至13.8±4.1%左右,而对G2/M期无影响。青蒿琥酯(12.5μg/m l~100μg/m l)组上清液Hyp值逐渐减小,呈剂量依赖关系,与相应的空白对照组比较有显著性差异;青蒿琥酯组上清液LDH与空白对照组比较无显著性差异。结论:青蒿琥酯能阻止HSC从G0/G1期进入S期,体外能明显抑制HSC的增殖,减少胶原的分泌,且在实验观察剂量范围内对HSC没有细胞毒性。     

川芎嗪对人肝星状细胞凋亡与基质金属蛋白酶抑制因子-1 mRNA表达的影响

目的:观察川芎嗪(TMP)对人肝星状细胞(HSC)凋亡与基质金属蛋白酶抑制因子-1mRNA(TIMP-1 mRNA)表达的影响。方法:采用人肝星状细胞株LX-2作为理想的肝星状细胞研究模型,LX-2细胞经不同剂量TMP(终浓度为50、100、200、400mg/L)作用48h后,应用流式细胞仪Annexin/PI双染方法检测TMP对LX-2细胞凋亡的影响;应用RT-PCR检测TMP对LX-2细胞TIMP-1 mRNA表达的影响。结果:TMP可显著促进LX-2细胞凋亡,细胞早期凋亡率随TMP浓度增加而提高,与空白对照组相比凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.05);同时TMP可显著降低LX-2细胞TIMP-1mRNA的表达,与空白对照组相比差异显著(P<0.01)。结论:促进HSC凋亡,抑制其TIMP-1 mR-NA的表达是TMP抗肝纤维化的部分机制。     

蒿鳖养阴软坚方药物血清对肝星状细胞的作用

目的:探讨蒿鳖养阴软坚方药物血清对肝星状细胞(HSC-T6)的作用。方法:MTT法分析不同剂量的蒿鳖养阴软坚方药物血清对HSC增殖的影响,并测定培养上清中Hyp含量和LDH活力,流式细胞仪检测其对HSC细胞周期的影响。结果:与正常血清组比较,蒿鳖养阴软坚方(0.82 g/kg、2.59 g/kg、8.2 g/kg)药物血清组吸光度(A)值显著降低,抑制率分别为11.26%、30.24%、44.51%;G0/G1期细胞比例增多而S期细胞比例减少;Hyp生成减少,LDH略微升高。结论:蒿鳖养阴软坚方药物血清可能通过阻抑HSC于G0/G1关卡而抑制HSC-T6增殖,同时抑制了胶原蛋白产生,且无细胞毒作用。     

青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的探讨青蒿琥酯抗肝纤维化的作用机制.方法用MTT法观察青蒿琥酯对HSC增殖的影响,用流式细胞仪检测HSC在细胞周期中DNA含量的改变,测定不同浓度青蒿琥酯作用于HSC后上清液中Hpy、LDH的含量.结果1.5～100 μg/ml青蒿琥酯在0～72h范围内对HSC增殖有抑制作用,并有药物浓度时间依赖关系.各青蒿琥酯处理组中G0/G1期细胞比例逐渐增高,与正常组相比由56.2±1.3%升至72.6±2.3%左右;S期比例逐渐降低,由27.1±2.6%降至13.8±4.1%左右,而对G2/M期无影响.青蒿琥酯(12.5 μg/ml～100 μg/ml)组上清液Hyp值逐渐减小,呈剂量依赖关系,与相应的空白对照组比较有显著性差异;青蒿琥酯组上清液LDH与空白对照组比较无显著性差异.结论青蒿琥酯能阻止HSC从G0/G1期进入S期,体外能明显抑制HSC的增殖,减少胶原的分泌,且在实验观察剂量范围内对HSC没有细胞毒性.     

缬草萜内酯对体外诱导肝星状细胞增殖及氧化应激反应的影响

目的探讨缬草萜内酯A、B、C对体外诱导肝星状细胞(HSC)增殖及氧化应激反应的影响。方法 HSC与次氮基三醋酸铁(FeNTA)共同培养产生氧化应激后,四甲基唑蓝(MTT)法检测不同质量浓度(50、100、200、300、400μg/mL)缬草萜内酯对HSC增殖的影响,ELISA法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果缬草萜内酯A、B、C对HSC增殖有不同程度的抑制作用,并且也有抗氧化应激活性(50μg/mL缬草萜内酯A、B除外),同时与模型组比较MDA水平显著降低(P0.05,P0.01),SOD活性显著升高(P0.05,P0.01)。结论缬草萜内酯对肝纤维化形成有一定抑制作用,其机制可能与抑制HSC增殖、抗氧化作用有关。     

红花多糖对肝癌细胞增殖阻滞的机制探讨

目的： 通过研究红花多糖（safflower polysaccharide,SPS）对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,探讨SPS抗肿瘤作用的分子机制。 方法： 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,加入含不同质量浓度SPS（0,0.02,0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28 g·L^-1）的培养液,分别培养24,48 h,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测SPS对细胞增殖的影响;用免疫组化法检测0.16,0.32,0.64 g·L^-1SPS作用肝癌细胞48 h,细胞的细胞周期素B₁（cyclin B₁）蛋白表达;采用实时荧光定量PCR技术（realtime PCR,RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）法检测细胞分裂周期25B（Cdc25B）基因的表达。 结果： 肝癌细胞的生存率随SPS浓度和作用时间的增加而降低,而1.28 g·L^-1SPS组除外。SPS作用48 h后SMMC-7721细胞的cyclin B₁蛋白、Cdc25B蛋白和mRNA表达降低,并具有剂量依赖性。 结论： SPS可能通过抑制细胞周期相关基因的表达,诱导肝癌细胞增殖阻滞,进而起到抗肿瘤作用。     

毛鸡骨草醇提液对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面 抗原及乙型肝炎E抗原的影响

目的:观察毛鸡骨草体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:采用MTT法检测毛鸡骨草对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0),采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定相似文献   

复方六月青对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ型胶原合成的抑制作用

目的:研究复方六月青(CLYQ)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ型胶原(Col I)合成的抑制作用。方法:SD大鼠sc CCl4建立肝纤维化模型,随机分为5组:模型对照组、秋水仙碱组、CLYQ高剂量组、中剂量组、低剂量组,并设正常SD大鼠为空白对照组。模型组和空白对照组ig生理盐水,其他组ig相应的药物,连续4周。采用实时荧光定量PCR法检测各组肝组织Col I mRNA表达情况,采用免疫组织化学法检测各组肝组织Col I蛋白表达情况。结果:与模型对照组比,CLYQ各剂量组大鼠肝组织Col I mRNA的表达均下调(P0.01),且表现一定的剂量依赖性;CLYQ各剂量组大鼠肝组织Col I蛋白阳性表达面积和强度显著减少和减弱(P0.01或P0.05),且呈明显的剂量依赖性。结论:CLYQ可下调肝纤维化大鼠肝组织Col I mRNA表达及其蛋白质合成以抑制细胞外基质的沉积,从而发挥其抗肝纤维化的作用。     

季德胜蛇药抗四氯化碳致小鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的: 观察季德胜蛇药对四氯化碳(CCl₄)致小鼠肝纤维化的拮抗作用,探讨其抗纤维化的作用机制。方法: ICR小鼠48只随机分为正常对照组、模型组、季德胜蛇药(0.25,0.37 汪g·kg^-1)2组。除正常组外各组小鼠均以40%CCl₄ sc共5周。自造模日起,各治疗组小鼠每日分别给予季德胜蛇药ig,正常对照组及模型组小鼠每天灌胃等量容积蒸馏水。5周后,放射免疫法检测小鼠血清透明质酸(HA)和层黏蛋白(LN)水平;Masson三色染色法观察肝组织病变。制备季德胜含药兔血清,不同体积分数的含药血清培养肝星状细胞(HSC),CCK-8法检测HSC的增殖,流式细胞仪检测HSC凋亡。结果: 季德胜蛇药0.25,0.37 g·kg^-1组小鼠肝组织纤维化程度及计分均较模型组明显减轻(P<0.05);季德胜蛇药0.25 g·kg^-1组血清HA,LN水平均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),且0.37 g·kg^-1组均低于0.25 g·kg^-1组(P<0.01);与对照组比较,以10%和12.5%季德胜蛇药含药血清培养的HSC细胞的增殖率明显降低(P<0.05,P<0.01),而细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论: 季德胜蛇药能抑制HSC的增殖和促进HSC凋亡,具有一定的抗肝纤维化作用。     

中国圆田螺多糖体外抗乙肝病毒的实验研究

目的:探讨中国圆田螺多糖(PCC)体外抗乙肝病毒的生物学活性.方法:以HepG2 2.2.15细胞系为体外实验模型.MTT法检测细胞毒性,将不同安全浓度的PCC及阳性对照药物3TC作用于此细胞系,实验同时设不加药物的细胞对照,第9天收集细胞培养上清液.采用ELISA法测定各组细胞培养上清液中HBsAg,HBeAg水平,荧光探针定量PCR检测HBV-DNA含量.结果:PCC在HepG2 2.2.15细胞培养中的TCo为1g·L-1,TC50 ＞10 g·L-1,对细胞毒性较小.PCC对HepG2 2.2.15细胞HBsAg,HBeAg分泌的IC50分别为0.501,0.401 g·L-1,SI分别为＞19.96和＞24.94.PCC可以有效抑制HBsAg,HBeAg的分泌,且PCC对HBeAg的抑制效果优于HBsAg.PCC在0.1,1g·L-1(P＜0.05)对HepG2 2.2.15细胞中的HBV-DNA有明显的抑制作用.结论:中国圆田螺多糖具有一定的体外抗HBV活性,且毒性较小,具有良好的应用前景.     

穿心莲内酯磺化物体外抗腺病毒药效学研究

目的:研究穿心莲内酯磺化物(ADS)体外抗腺病毒-3(AdV3)活性及细胞毒性。方法:采用细胞病变法(CPE)、四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测ADS的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50),以AdV3100倍半数组织细胞感染量(100TCID50)攻击体外培养的人喉癌上皮细胞(Hep-2)造成AdV3感染模型,以利巴韦林注射液为对照药,以最小有效浓度(MEC)、半数有效浓度(EC50)及治疗指数(TI)为指标,测定了ADS在6.10,12.21,24.41,48.23,97.66,195.31,390.63,871.25 mg.L-1的体外抑制腺病毒活性。结果:ADS、利巴韦林注射液TC0分别为781.25,6.25 mg.L-1;MEC分别为97.66,0.390 6 mg.L-1;TI分别为8,16。结论:ADS97.66～781.25 mg.L-1可有效抑制细胞内AdV3体外增殖,并呈明显的量效关系。     

荷叶铁线蕨水提液对人胚肝细胞增殖和功能的影响

目的:研究荷叶铁线蕨对人胚肝细胞增殖和功能的影响。方法:人胚肝细胞L-O2 96孔板104/孔培养,经质量浓度为1 g.mL-1荷叶铁线蕨水提液梯度稀释后处理24 h,采用MTT法检测细胞增殖情况;溴甲酚绿比色法检测白蛋白分泌水平;酶标仪法测定乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果:荷叶铁线蕨水提液可以促进人胚肝细胞增殖,且具有剂量依赖性;在药物质量浓度为100 g.L-1时细胞白蛋白分泌量达到最高2.14 g.L-1,并显著降低了LDH的活力(P<0.05)。结论:荷叶铁线蕨水提液可以促进人胚肝细胞增殖,增强细胞保肝降酶作用。     

加味四逆散药物血清对HSC-T6增殖的影响

目的: 观察加味四逆散含药血清对瘦素刺激肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法: SD大鼠30只,随机分为3组:正常血清组、秋水仙碱对照组、加味四逆散组(37.5 g ·kg^-1),每组均10只,将正常血清组大鼠每只按10 mL ·kg^-1给予生理盐水ig,1次/日;秋水仙碱对照组大鼠每只按0.2 mg ·kg^-1给予秋水仙碱ig,1次/日;加味四逆散组给予加味四逆散药液10 mL ·kg^-1ig,1次/日。以上各组均连续ig 7 d,制备各药物含药血清,并将药物血清用培养基配制成5%,10%,20%,40% 4个浓度;培养肝星状细胞,取对数生长期细胞,使用噻唑蓝(MTT)比色法检测药物血清对100 mg ·L^-1的瘦素刺激肝星状细胞-T6(HSC-T6)增殖的影响。结果: 加味四逆散药物血清对瘦素刺激的肝星状细胞增殖有抑制作用(P<0.05或P<0.01), 在5%~40%的血清浓度范围内,抑制作用呈剂量依赖性关系;秋水仙碱对照组亦能抑制HSC-T6细胞的增殖(P<0.05),但在10%~40%的血清浓度范围内加味四逆散组对HSC-T6增殖的抑制率显著高于秋水仙碱对照组(P<0.05)。结论: 加味四逆散药物血清具有抑制瘦素刺激HSC-T6增殖的作用。     

Potential therapeutic effects of a traditional Chinese formulation, BJ-JN, on liver fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats

Aim of the study

to evaluate the anti-fibrotic effects of BJ-JN (a traditional Chinese formulation) in CCl₄-induced liver fibrosis in rats.

Materials and methods

BJ-JN (0.5, 1.0, 2.0 g/kg) was administrated via gavage once a day starting from the fifth weeks after the CCl₄ treatment for subsequent 9 weeks. Evaluated with liver and spleen index, serum levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), hyaluronic acid (HA), nitric oxide (NO), hepatic malondialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) activity, as well as with histopathologic changes of liver. The proliferation and collagen synthesis of primary hepatic stellate cells (HSCs) from normal, model and BJ-JN (2.0 g/kg) treatment rats were examined with ³H-TdR and ³H-Pro uptake assay, respectively.

Results

BJ-JN (0.5, 1.0, 2.0 g/kg) effectively reduced the elevated levels of liver and spleen index, serum ALT, AST, NO, HA, and hepatic MDA contents, enhance the reduced hepatic SOD activity in CCl₄-treated rats. The histopathological analysis suggested that BJ-JN obviously alleviated the degree of liver fibrosis induced by CCl₄. The proliferation and collagen synthesis of HSC isolated from BJ-JN (2.0 g/kg) treatment rats were remarkably inhibited.

Conclusions

Those results suggest BJ-JN has a protective and therapeutic effect on liver fibrosis induced by CCl₄, which might be associated with its anti-oxidative activity, inhibitory activity on HSC proliferation and collagen synthesis.