抗纤软肝颗粒对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒(KXRG)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响。方法:传代培养的HSC-T6(肝星状细胞系)与KXRG(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml)及其药物血清(5%、10%、20%)共同培养72小时后,应用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪测定HSC细胞周期各时相的DNA含量。结果:KXRG及药物血清均能显著抑制HSC的增殖,使细胞周期阻滞于S期,且2.5mg/ml药物和10%药物血清作用最强(P0.01)。结论:KXRG通过抑制HSC的活化,阻滞其细胞周期的正常进行,进而抑制HSC增殖,从而起到抗肝纤维化的作用。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞凋亡的影响

探讨抗纤软肝颗粒对肝星状细胞(HSC)凋亡的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测Bcl-2/Bax.结果:TUNEL法及流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物及含药血清均可诱导HSC凋亡(P＜0.05);并能下调凋亡抑制分子Bcl-2,上调促凋亡分子Bax(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒可下调Bcl-2/Bax比率,以增加细胞对凋亡的敏感性,从而促进HSC凋亡.     

抗纤软肝颗粒对PDGF诱导下HSC细胞周期及胞内Ca2+浓度的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞周期及胞内Ca~(2 )浓度的影响。方法:采用完全无血清培养,用流式细胞术分析抗纤软肝颗粒对PDGF诱导的HSC增殖的影响,应用Ca~(2 )荧光指示剂Fura-2/Am在荧光分光光度计上测定细胞内Ca~(2 )浓度。结果:与对照组相比,抗纤软肝颗粒处理组可显著地抑制PDGF诱导的HSC增殖及细胞内Ca~(2 )浓度的升高,尤以抗纤软肝颗粒5mg/ml组作用明显。结论:抗纤软肝颗粒能拮抗PDGF诱导的细胞内Ca~(2 )浓度的升高。     

抗纤软肝颗粒对血小板源生长因子诱导的肝星状细胞增殖的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对血小板源生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞(HSC)增殖的影响.方法:采用无血清培养,不同浓度的KXR温育HSC 24 h后,PDGF-BB(10 ng/ml)刺激24 h,再加入上述浓度的KXR 3 h后,又加入PDGF-BB(10 ng/ml)作用5 min,然后收集细胞.采用细胞计数法及流式细胞仪测定细胞增殖及细胞周期.结果:无血清培养显示该方对于PDGF诱导的细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.01).流式细胞术分析提示KXR能抑制PDGF诱导的HSC DNA合成期及合成后期和分裂期DNA百分含量,阻断细胞由静止期/DNA合成前期向DNA合成期转化,呈剂量依赖性(5 mg/ml组作用最显著,P<0.01).结论:KXR能抑制PDGF诱导的HSC增殖.     

抗纤软肝颗粒对大鼠肝星状细胞核仁非组蛋白B23和C23的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXRG)对大鼠肝星状细胞(HSC)核仁非组蛋白B23、C23的影响。方法:采用活化的肝星状细胞系(HSC-T6)培养传代,分别加入不同剂量的KXRG(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml)及其大鼠含药血清(5%、10%、20%)进行培养,并设空白血清对照组。提取细胞核蛋白,采用免疫蛋白印迹法(West-ern-Blot)观察用药后HSC核仁非组蛋白B23、C23活性水平的变化。结果:KXRG可降低HSC核仁中B23、C23蛋白活性的表达,且2.5mg/ml药物组和10%含药血清组降低最明显。结论:KXRG可降低HSC核仁中B23、C23蛋白活性的表达,这可能是其抗肝纤维化的机制之一。     

软肝煎药物血清对肝星状细胞/T6增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的 :探讨软肝煎药物血清对肝星状细胞 (HSC) / T6的增殖、 型胶原合成的影响。方法 :实验分为大鼠血清组和药物血清两组 ,各组再分为 5 %、10 %及 2 0 % 3个浓度组 ,每组 4只大鼠。用 MTT比色法和 Alarmablue测定法评价软肝煎药物血清对 HSC/ T6的增殖抑制作用 ;用 Western blotting法和 EL ISA法评价软肝煎药物血清对 HSC/ T6合成 型胶原量的影响。结果 :在 MTT测定法中 ,与大鼠血清组相比 ,药物血清组的 5 %、10 %浓度差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,2 0 %浓度差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。在 Alarma blue测定法中 ,2 4 h时与大鼠血清相比 ,药物血清组的 2 0 %浓度差异有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;30 h时与大鼠血清相比 ,药物血清组的2 0 %浓度差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。 EL ISA法测定的细胞上清 型胶原含量 ,药物血清组与大鼠血清组相比差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,Western blottin法测定细胞内合成 型胶原的量 ,可知药物血清组 型胶原的含量明显少于大鼠血清组。结论 :软肝煎不仅能抑制 HSC的增殖 ,而且能抑制 HSC合成 型胶原的量 ,从而提示软肝煎有很好的抗肝纤维化作用。     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的影响

目的 :观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化时肝组织 型胶原 ( - C)、层粘蛋白 (L N)以及肝窦毛细血管化的影响。方法 :大鼠皮下注射 2 5 0 m l/ L CCl4 制备肝纤维化模型 ,并同时给于秋水仙碱、抗纤软肝颗粒小和大剂量治疗 ,用光镜和电镜观察肝组织病理变化 ,免疫组织化学法检测肝组织 - C、L N。结果 :抗纤软肝颗粒能有效抑制 - C、L N的生成和沉积 (P <0 .0 1) ,改善肝纤维化大鼠肝组织病理变化 (P <0 .0 1) ,减轻肝窦毛细血管化程度。结论 :抗纤软肝颗粒能抑制肝窦毛细血管化的形成 ,产生抗肝纤维化的作用。     

牛磺酸对离体肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的　观察牛磺酸对肝星状细胞增殖及凋亡的影响 ,并探讨其作用的可能机制。方法　用噻唑蓝 (MTT)法检测细胞增殖 ,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡 ,丫啶噔活体染色观察细胞凋亡形态 ,免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测c jun、c fos表达。 结果　在 5～ 5 0mmol/L浓度范围内 ,牛磺酸能剂量依赖性地抑制肝星状细胞增殖 ,可使G0 /G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,并能明显抑制c jun、c fos的表达 (P <0 .0 1)。此外 ,牛磺酸尚可抑制血小板源生长因子BB对肝星状细胞的促增殖作用 ,而牛磺酸对肝星状细胞凋亡无诱导作用。结论　牛磺酸可显著抑制肝星状细胞增殖 ,使肝星状细胞阻滞于G0 ～G1期 ;牛磺酸对肝星状细胞增殖的抑制作用与其抑制c jun、c fos的表达有关 ;牛磺酸不能诱导肝星状细胞凋亡。     

黄芪注射液对大鼠肝星状细胞作用的研究

目的探讨黄芪注射液抗肝纤维化的作用及其机制.方法肝星状细胞的分离采用胶原酶循环灌流法.黄芪注射液(0mg/ml、25mg/ml、50 mg/ml、100 mg/ml、200 ml、400 mg/ml)作用不同时间(24 h、48 h、72h)后,采用MTF法OD值检测细胞活化增殖情况.黄芪注射液(200 mg/ml)作用24h和48 h后,流式细胞术检测细胞增殖周期.采用溴乙锭/吖啶橙荧光染色法结合显微镜下形态学观察及流式细胞术检测黄芪注射液对活化的肝星状细胞凋亡的影响.结果黄芪注射液各浓度组(除25 mg/ml作用24 h组外)OD值较对照组明显降低(P＜0.05);黄芪注射液200 mg/ml组作用24和48 h流式细胞术检测出G2-M期的细胞数均明显高于正常对照组(P＜0.01);黄芪注射液各浓度组荧光染色法和流式细胞术均未检测到肝星状细胞凋亡.结论黄芪注射液主要是通过抑制肝星状细胞增殖的G2-M期而产生抗肝纤维化作用的.     

抗纤复方Ⅰ号对乙醛刺激的肝星状细胞增殖、胶原合成的干预

观察了中药抗纤复方I号(KX I)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、胶原合成的影响,以期阐述KX I抗酒精性肝纤维化的部分作用机制。 一、材料与方法 1.药物与药物血清的制备:KXI(主要由丹参、黄芪、红花等十味药物组成)浓缩口服制剂,每ml含生药2.7 g。按11 ml/kg给Wistar大鼠灌服中药制剂,每天1次,持续给药1     

甘油三酯和极低密度脂蛋白对肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨甘油三酯和极低密度脂蛋白对大鼠肝星状细胞增殖的影响。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,并以MTT比色法观察甘油三酯和极低密度脂蛋白对肝星状细胞增殖效应。结果:甘油三酯和极低密度脂蛋白可影响肝星状细胞的增殖,甘油三酯和极低密度脂蛋白浓度分别在12.5μg/ml和25～100μg/ml时对肝星状细胞增殖有促进作用(P<0.05或P<0.01)。结论:体外细胞培养表明,甘油三酯和极低密度脂蛋白可促进肝星状细胞增殖,其与脂肪肝纤维化的发生可能有关。     

应用Alarma blue测定法评价软肝煎药物血清对HSC/T6增殖的影响

目的：应用Alarma blue测定法评价中药复方软肝煎对HSC／T6增殖的影响，方法：实验分为小牛血清，大鼠血清及药物血清3组，各组再分为5％，10％及20％3个浓度组，每组4只大鼠，利用中药血清药理学，通过MTT法和Alarma blue测定法测定软肝煎药物血清影响HSC／T6增殖的情况。结果：在MTT测定法中，与小牛血清组相比，大鼠血清组的5％浓度差异有显著性意义（P＜0．05），10％，20％浓度差异有非常显著性意义（P＜0．01），药物血清组各浓度差异均有非常显著性意义（P＜0．01），与大鼠血清组相比，药物血清组的5％，10％浓度差异有显著性意义（P＜0．05），20％浓度差异有非常显著性意义（P＜0．01），在Alarma blue测定法中，24h时，与小牛血清组比较，大鼠血清组与药物血清组的10％浓度差异均有非常显著性意义（P＜0．01），与大鼠血清组相比，药物血清组的10％浓度差异有显著性意义（P＜0．05，）30h时，与小牛血清组比较，大鼠血清组的10％浓度及药物血清组的10％学差异均有显著性意义（P＜0．05，P＜0．01），与大鼠血清组相比，药物血清组的10％浓度差异有非常显著性意义（P＜0．01），结论：软肝煎能抑制HSC／T6的增殖，具有抗肝纤维化作用；Alarma blue测定法是一种可靠的方法，不同动物种属的血清对肝星状细胞增殖影响不同，在培养系中使用单一的血清为好。     

氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:研究氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机理。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,并以MTT比色法观察氧化苦参碱对肝星状细胞增殖的效应。结果:氧化苦参碱可影响肝星状细胞的增殖,氧化苦参碱浓度在0.5～16μg/ml时对肝星状细胞增殖有抑制作用(P<0.01)。结论:氧化苦参碱可抑制肝星状细胞增殖,有抗肝纤维化的作用。     

Study on the role of free fatty acids in proliferation of rat hepatic stellate cells (II)

AIM:To study the role of free fatty acids (arachidonic acid and linoleic acid) in proliferation of rat hepatic stellate cells (HSC).METHODS:HSC were isolated and cultured from liver of Wistar rats by in situ perfusion with pronase and collagenase, and density gradient centrifugation with Nycodenz.MTT colorimetric assay was detected for HSC proliferation.RESULTS:Arachidonic acid and linoleic acid had an effect on proliferation of HSC. 25mg/L of arachidonic acid promoted HSC proliferation (P < 0.01), but 50 and 100mg/L had an inhibitory effect on HSC (P < 0.01),and showed cytotoxity on HSC under inverted microscope; 6.25, 12.5, 25ug/ml of linoleic acid had no effect on HSC proliferation (P > 0.05), but with concentration increasing, 50 and 100mg/L of linoleic acid might promote HSC proliferation (P < 0.05 or 0.01 ).CONCLUSION:Arachidonic acid and linoleic acid may promote HSC proliferation, but increased concentration can have cytotoxity on HSC. Arachidonic acid and linoleic acid might be associated with fatty liver and hepatic fibrogenesis by lipid peroxidation.     

蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞cyclin D1蛋白表达的影响

目的：研究蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞（HSC）细胞周期调控蛋白cyclin D1表达的影响。方法：传代培养的HSC-T6与蕲艾提取液药物血清共同培养24小时后,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blot）分别检测细胞周期蛋白cyclin D1 mRNA及其蛋白表达。结果：不同浓度（5%、10%、20%）蕲艾提取液药物血清与空白对照组及血清对照各组比较,可明显抑制cyclin D1 mRNA及其蛋白表达（P〈0.01）。结论：蕲艾提取液药物血清通过抑制HSC cyclin D1 mRNA及其蛋白的表达,发挥对HSC细胞周期的调控,这可能是该药抗纤维化的机制之一。     

氧化苦参碱对肝星状细胞增殖抑制和促凋亡作用的影响

[目的]研究氧化苦参碱对体外乙醛造模后的肝星状细胞（HSC）增殖抑制及促凋亡作用的影响,探讨该药抗酒精性肝纤维化的作用机制。[方法]选取乙醛造模后HSC-T6为体外模型,以四甲基固氮唑盐（MTT）法分别检测800、400、200、100ug／ml浓度氧化苦参碱药物血清对HSC-T6作用48h后的抑制情况,找出最佳含药浓度;根据以上结果,以流式细胞仪检测HSC-T6的促凋亡作用。[结果]800ug/ml氧化苦参碱对HSC-T6细胞生长的抑制率最高,达到51．31％,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。碘化丙啶染色流式细胞分析：800ug／ml药物血清作用HSC-T6,其在G0／G1、apop期细胞比例较模型组明显上升,S期细胞明显下降。[结论]氧化苦参碱可明显抑制HSC-T6增殖和诱导其调亡。     

脂质刺激的Kupffer细胞对肝星状细胞增殖的影响

目的 探讨甘油三酯和极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及其刺激的Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞对大鼠肝星状细胞（ＨＳＣ）增殖的影响。方法 用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分离大鼠ＨＳＣ和Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞,制备甘油三酯和ＶＬＤＬ刺激的Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞培养的上清液（ＫＤＣＭ）,并以ＭＴＴ法观察甘油三酯和ＶＬＤＬ及ＫＣＣＭ对ＨＳＣ增殖效应。结果 甘油三酯和ＶＬＤＬ浓度分别在１２．５ｍｇ／Ｌ和２     

氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的探讨氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖的影响及其抗肝纤维化的机理.方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流消化正常大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞,以MTT比色法观察氧化苦参碱对肝星状细胞毒性作用,3H-TdR法观察氧化苦参碱对肝星状细胞增殖的效应.结果氧化苦参碱浓度＞10-5mol/1时对肝星状细胞增殖有抑制作用(P＜0.05).结论氧化苦参碱可抑制肝星状细胞的增殖,有抗肝纤维化的作用.