一种用于HCV核心蛋白体外表达研究的CHO细胞模型的建立

目的:建立丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心(core,C)蛋白体外表达的非肝细胞模型.方法:核酸酶切法鉴定含有HCV1b基因型C蛋白编码基因的重组质粒pCMH6K的稳定性,将pCMH6K瞬时及稳定转染于中华仓鼠卵巢(China hamster ovary,CHO)细胞并连续传代110 d,...     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子编码基因对乙型脑炎DNA疫苗细胞免疫增强效应的影响

目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)编码基因对乙型脑炎(JE)DNA疫苗细胞免疫应答的影响.方法 套式RT-PCR法获取BALB/c小鼠GM-CSF编码基因,构建含乙型脑炎病毒(JEV)前膜(prM)-包膜(E)蛋白与GM-CSF编码基因以及单纯GM-CSF编码基因的重组质粒,分别命名为pJME/GM-CSF和pGM-CSF.脂质体法转染上述质粒入中华仓鼠卵巢细胞(CHO),免疫荧光法检测编码蛋白的表达与分布.流式细胞仪检测经不同组合的免疫原免疫后小鼠脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子(IFN-γ、IL-4)变化,LDH法测定CTL活性.数据行单因素方差分析及最小显著差数法比较.结果 重组质粒pJME/GM-CSF与pGM-CSF经鉴定构建正确,所编码的蛋白主要分布于胞质,少量分布于胞膜.pJME/GM-CSF组CD4+T淋巴细胞比例为(33.90±0.79)%,明显高于其他组(t值分别为9.818、6.804、6.594、10.061、9.380和17.675,均P<0.05).pJME+pGM-CSF同时注射组及pGM-CSF注射3 d后接种pJME组CD4+T淋巴细胞比例分别为(29.83±0.61)%、(29.70±0.51)%,高于pJME注射3 d后接种pGM-CSF组的(27.69±0.50)%(t=3.466、t=3.255,P<0.05).pJME/GM-CSF组与pJME+pGM-CSF同时注射组CD8+T淋巴细胞比例较空载体(pcDNA3.1+)组及JE灭活疫苗组升高(t值分别为3.811、2.627、10.537和3.811,均P<0.05).pJME/GM-CSF组CTL活性为(51.48±0.10)%,明显高于其他组(t值分别为22.868、13.823、5.377、32.287、34.632和53.795,均P<0.05).pJME/GM-CSF组、pJME+pGM-CSF同时注射组及pGM-CSF注射3 d后接种pJME组IFN-γ/IL-4比值分别为19.13±1.36、12.32±0.82、7.05±0.43,明显高于其他组(P<0.05).结论 GM-CSF编码基因可增强JE DNA疫苗的细胞免疫应答效应.     

HCV C-Fc融合基因修饰的树突状细胞疫苗抗HCV功能研究

目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)C Fc基因修饰的树突状细胞 (DCs)能否诱导抗HCV细胞和体液免疫反应。方法　将pcDNA3 HCV Fc质粒用电穿孔法转染经过白介素 4 (IL 4 ) ,粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)刺激增殖的小鼠DCs前体细胞 ,观察HCV、Fc抗原表达 ;将制备的 5×10 5/ 10 0 μlDC疫苗皮下免疫Balb/c小鼠 ,两周后检测特异性抗体、脾脏CD4 、CD8 细胞增殖作用以及诱导的细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)反应。结果　HCVC Fc基因电穿孔法转染细胞在上述细胞因子作用下发育成能有效表达HCVC Fc并具有典型形态学与表型特征的DCs。免疫小鼠后 ,HCVC Fc基因转染DCs能诱导产生抗HCV特异性抗体和较强的CTL反应。结论　HCVC Fc基因修饰的DCs能增强对HCV特异性CTL效应的诱导能力 ,提示它在抗病毒疫苗发展中的潜力     

丙型肝炎病毒包膜基因对核心基因DNA疫苗免疫应答强度的影响

目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)包膜基因E1E2对核心基因C DNA疫苗诱生的免疫应答作用。方法 将包含HCV C或CE1E2基因片段插入真核表达载体pcDNA3中,构建重组质粒pHCV-C或pHCV-CE1E2,分别免疫Balb/c小鼠,每间隔2wk加强免疫1次,同时剪尾取血。ELISA法检测免疫小鼠血清中HCV C特异性抗体的水平。以pHCV-C转染并表达HCcAg的BLAB/c小鼠骨髓瘤Sp4/0细胞为靶细胞,采用~(51)Cr释放试验检测特异性CTL的杀伤作用。结果 两个实验组20只小鼠均产生抗HCV C特异性抗体,当效/靶细胞比例为100:1时,CTL的杀伤率均明显高于对照组(p<0.01);而pHCV-CE1E2与pHCV-C组之间,无论是抗HCV C抗体的滴度还是CTL的杀伤率均无显著性差异(p>0.05)。结论 E1E2基因的加入,并没有增加HCV C基因DNA疫苗诱导的抗HCcAg特异性抗体的滴度和CTL的杀伤作用。     

乙型脑炎病毒非结构4A蛋白编码基因重组子的构建及表达

目的构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)非结构4A(NS4A)蛋白编码基因重组子并鉴定。方法以JEV SA14-14-2株Total RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增JEV NS4A蛋白编码基因,克隆至pMD19-T Simple载体并测序。为便于分析JEV NS4A蛋白编码基因重组子在哺乳动物细胞中的表达,在JEV NS4A蛋白编码基因5’端附加FLAG序列,亚克隆至pcDNA3.1(+)载体中,构建重组子pJNS4A并作酶切及DNA测序分析;采用脂质体法将pJNS4A转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞,采用免疫荧光法检测转染的CHO细胞中JEV NS4A蛋白分布与表达。结果重组质粒pJNS4A经BamHⅠ/EcoRⅠ酶切释出的插入子在830bp左右,与JEV NS4A蛋白编码基因和FLAG基因序列之和(834bp)相一致。JEV NS4A蛋白编码基因重组质粒转染的CHO细胞可见绿色荧光标记,主要分布在胞膜。结论 pJNS4A构建成功,转染的CHO细胞可稳定表达JEV NS4A蛋白。     

腺病毒介导的白细胞介素-12表达对丙型肝炎病毒包膜2基因免疫的调节

目的 观察腺病毒介导表达白细胞介素-12(IL-12)对调节丙型肝炎病毒(HCV)包膜基因2(E2)诱导免疫应答的影响。方法 以NIH 3T3细胞表达HCVE2糖蛋白，纯化后用于酶免疫分析法检测抗E2抗体；以表达HCVE2糖蛋白的SP2／0细胞^3Cr释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答；以293细胞繁殖表达重组IL-12亚单位p35和p40的腺病毒ADIL12。6～8周龄BALB／C鼠右后肢股四头肌注射表达HCVE2的质粒，同时经腹腔注射ADIL12。分别于2、3、4周尾静脉采血检测抗E2抗体，4周处死动物分离脾细胞检测CTL应答。结果 表达HCVE2的基因免疫可有效诱导特异性抗E2体液免疫应答。腹腔注射后，外源性IL-12微量表达。微量表达的外源性白细胞介素-12不影响特异性抗E2体液免疫应答。同时，显著增强特异性CTL应答的作用。结论 腺病毒微量表达的IL12对HCV E2基因免疫诱导的特异性CTL应答具有调节作用。     

HBV和HCV核酸疫苗的临床应用前景

核酸疫苗是指将含有编码抗原蛋白的DNA序列及必要的表达调控元件的重组质粒DNA直接导入机体组织，通过宿主细胞的转译系统表达目的抗原，诱导机体发生免疫应答的一种新型疫苗。近年来核酸疫苗的研究发展迅速，在乙型肝炎和丙型肝炎防治方面也取得了令人瞩目的成绩。1. HBV、HCV核酸疫苗的目的基因和载体：HBV有多种抗原蛋白编码基因。包括编码包膜蛋白的S基因、preS1基因、preS2基因，编码HBcAg和HBeAg的Ｃ基因等。包膜蛋白能诱导保护性抗体；HBcAg是CTL的靶抗原，其诱发的CTL应答有利于清除HBV，而HBeAg诱导抗HBe产生并减…     

丙型肝炎病毒重组蛋白的免疫保护性

目的 研究两种HCV重组蛋白联合免疫小鼠所诱导的免疫应答及免疫保护作用.方法 用两种重组蛋白HCV-T和HCV-第一高变区多片段重组融合蛋白(F4HVR1)分别与联合免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,用ELISA方法测定血清特异性抗体;末次免疫后14 d处死5只小鼠,分离小鼠脾细胞.体外检测IFN-γ、IL-4和行CTL杀伤实验;剩余的小鼠背部皮下注射1.0×106个SP2/O-NS3细胞,观察其保护作用.组间均数差异采用LSD-t检验.结果 与PBS组相比,用HCV-T和HCV-F4HVR1联合免疫诱导了针对HCV-F4HVR1的特异性的IgG(t=3.815,3.762,P＜0.05)、高水平的HCV-NS3特异性的CTL效应(t=3.971,P＜0.05)和高水平的IL-4(t=3.813,3.426,3.671,P＜0.05)和IFN-γ(t=3.512,3.417,P＜0.05)的分泌.结论 用HCV-T和HCV-F4HVR1联合免疫小鼠可诱导出高水平的特异性体液免疫和细胞免疫,能有效地预防SP2/O-NS3细胞的攻击.     

以乙型肝炎病毒核心区为载体的"a"决定簇基因免疫效果评价

目的 评价以乙型肝炎病毒核心区为载体的HBsAg"a"决定簇编码基因的基因免疫效果.方法 分别使用将编码截短型乙肝病毒核心抗原的主要免疫显性区替换为表面抗原"a"决定簇嵌合基因的真核表达质粒;编码表面抗原"a"决定簇部分的质粒和空载体为免疫原,免疫4～6周龄的BALB/c小鼠,定期采血检测体液免疫应答情况并取免疫后小鼠脾细胞进行淋巴细胞增殖试验.结果 嵌合质粒免疫组针对HBsAg的体液应答水平低于非嵌合质粒免疫组,且未引起较强的HBcAb体液免疫应答,但获得了较强的HBcAg和HBsAg特异性的细胞应答.结论 该嵌合质粒作为基因疫苗可以引起较强的HBcAg和HBsAg特异性的细胞应答并诱导小鼠产生HBsAb.HBcAg在一定程度上可以增强对插入抗原的免疫应答,是一种有效的病毒样颗粒载体;该嵌合基因有望成为一种新的慢性HBV感染的治疗性基因疫苗.     

人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒E1结合蛋白基因的筛选

目的 应用酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E1相互作用的结合蛋白的编码基因.方法 扩增人胰腺细胞cDNA文库并经纯化鉴定后,将文库质粒转化酵母菌株Y187.诱饵质粒pGBKT7-E1转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序.测序结果进行序列比对.结果筛选出16种与HCV E1蛋白相结合的蛋白基因.结论在筛选出的与HCV E1蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分可能与糖、脂类代谢密切相关.     

人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒NS4B结合蛋白基因的筛选

目的应用酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白NS4B相互作用的结合蛋白的编码基因。方法扩增人胰腺细胞cDNA文库进行纯化鉴定,并将文库质粒转化酵母菌株Y187。诱饵质粒pGBKT7-NS4B转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基（SD/-Trp）上筛选阳性菌落。应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在四缺培养基（SD/-Trp/-Leu/-H is/-Ade）和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序。测序结果进行序列比对。结果成功构建人胰腺cDNA文库以及pGBKT7-HCV NS4B重组质粒,筛选出7种与HCV NS4B蛋白相结合的蛋白基因。结论筛选出的与HCV NS4B蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关。     

多发性骨髓瘤MUC1-2VNTR基因疫苗诱导小鼠免疫应答的实验研究

目的观察黏蛋白1两串联重复区（MUC1-2VNTR）基因疫苗诱导BALB／c小鼠体液及细胞免疫应答的效果。方法将含MUC12VNTR的重组质粒peDNA3．1-2VNTR／myc-hisB免疫小鼠,免疫后采用ELISA动态检测血清中抗VNTR特异性抗体的水平,乳酸脱氢酶法检测细胞毒性T细胞（CTL）反应活性,MTS法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果重组质粒免疫组小鼠血清中检出了MUC1-2VNTR抗原特异性抗体。用重组质粒免疫BALB／c小鼠后,在效靶比为80：1时可显著地诱导特异性CTL应答。在MUC1-2VNTR抗原肽的刺激下,免疫小鼠脾淋巴细胞得到增殖;与空质粒对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论MUC1-2VNTR基因疫苗可诱导小鼠产生特异性细胞及体液免疫应答,对多发性骨髓瘤的疫苗治疗有重要意义。     

乙型及丙型肝炎DNA疫苗联合重复接种小鼠的免疫应答

目的 :观察由编码 HBs Ag与 HCV- CE2 抗原的两种重组真核细胞表达质粒制备的 DNA疫苗重复联合接种 BAL B/c小鼠后 ,其诱生的特异性免疫应答反应。方法 :应用上述两种 NDA疫苗重复联合免疫小鼠 ,动态观察血中特异性抗体水平、特异性细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL )体外杀伤活性 ,并进行 CTL杀伤活性活体诱生实验。结果 :两种 DNA疫苗联合重复免疫小鼠 ,能够诱生机体特异性体液免疫及细胞免疫完全应答。其小鼠荷瘤表达目的抗原的靶细胞后 ,生存率明显高于未免疫鼠 (P <0 .0 5 )。结论 :乙型及丙型肝炎联合 DNA疫苗的重复接种 ,可有效地诱生小鼠机体特异性免疫应答反应。 DNA疫苗诱生的 CTL应答可与体液免疫应答分离存在 ,可能是 DNA疫苗免疫保护的更重要方面。     

乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因共表达对血管内皮细胞生长因子的影响

目的建立乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因（HBV X—HCV C）共表达HepG2细胞模型，并探讨其对血管内皮细胞生长因子表达的影响。方法双酶切质粒pXT1—X，得到完整的HBV X基因片段后，将其插入到质粒PBK—CMV和PBK—HCV C的相应酶切位点，得到重组质粒PBK—X和PBK—X—C；再将质粒PBK—CMV、PBK—X、PBK—HCV C和PBK—X—C分别导入肝癌细胞株HepG2中，G418筛选，逆转录聚合酶链反应、Western blot鉴定HBV X和HCV C蛋白表达，免疫组织化学、Western blot检测血管内皮细胞生长因子蛋白质表达。结果质粒PBK—CMV、PBK—X、PBK—HCV C和PBK—X—C在HepG2细胞中有稳定表达。共表达HBV X—HCV C蛋白的细胞血管内皮细胞生长因子蛋白质表达较转染空载体的细胞及单独表达HBV X、HCV C蛋白的细胞明显升高。结论HBV X—HCV C共表达能显著上调血管内皮细胞生长因子蛋白质表达，提示HBV、HCV可能具有协同致癌作用。     

呼吸道合胞病毒M2:81-95与热休克蛋白70L1融合蛋白的制备及其免疫原性

目的 构建呼吸道合胞病毒(RSV)CTL表位M2:81-95与热休克蛋白(HSP)70L1融合蛋白的重组质粒,原核表达后初步研究其免疫原性.方法 从SMMC7721细胞中克隆HSP70L1基因.PCR扩增M2:81-95基因片段,鉴定后构建质粒pET-HSP70L1-M2:81-95(pET-HSP70L1-M2).经PCR和酶切鉴定,转化E.coli BL21(DE3).用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达HSP70L1-M2:81-95(HSP70L1-M2),Ni-螫合亲合层析纯化,梯度透析复性.用该蛋白免疫10只BAlB/c小鼠,ELISA榆测IgG抗体及其亚型.噻唑蓝(MTT)法榆测CTL杀伤活性.结果 成功构建重组质粒pET-HSP70L1-M2,并在E.coli中表达重组蛋白HSP70L1-M2,该蛋白诱导RSV及表位特异性的CTL活性,还诱导蛋白抗原特异性的IgG,为4.87±0.35、IgGl为5.53±0.28、IgG2a为4.40±0.21.且IgG1/IgG2a(1.26)的比例平衡,与PBS对照组的IgG,为0.33±0.17、IgG1为0.51±0.21、IgG2a为0比较,差异有统计学意义(t=3.512,3.681,5.856;P<0.05).结论 成功构建原核表达质粒pET-HSP70L1-M2,斤表达纯化获得重组蛋白,免疫小鼠后诱导RSV及表位特异性的CTL活性和辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2混合型应答.     

表达丙型肝炎病毒非结构蛋白3的重组腺病毒免疫小鼠的研究

目的构建表达HCV非结构蛋白3（NS3）的重组腺病毒RAd／NS3，探讨其免疫小鼠后诱导机体产生特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增编码NS3蛋白（329～935位氨基酸）的基因片段，定向克隆至重组腺病毒AdEasy-1系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV上，与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化BJ5183菌，利用细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒，转染293细胞，以包装、扩增重组腺病毒。将重组腺病毒以1×10^8 pfu剂量经皮下注射免疫BALB／c小鼠，并以100μg重组质粒pRC／NS3经肌内注射途径免疫小鼠为对照。ELISA法检测免疫小鼠血清抗体水平，^51 Cr释放法检测免疫小鼠细胞毒性T淋巴细胞体外杀伤功能。结果重组腺病毒经皮下免疫小鼠后可刺激机体产生较强的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答，且免疫效果强于重组质粒pRC／NS3组，初次免疫后2周，前者20只小鼠抗-HCV全部阳转，而后者10只小鼠仅3只阳转，未观察到明显的不良反应。结论表达HCV NS3抗原的重组腺病毒载体疫苗能够诱导机体产生有效的体液和细胞免疫应答。     

丙型肝炎病毒核心区蛋白对 HepG2细胞周期、细胞凋亡和细胞端粒酶活性的影响

目的　研究丙型肝炎病毒核心区 (HCV C)蛋白对肝癌细胞HepG2细胞周期、细胞凋亡和细胞端粒酶活性的影响。方法　首先运用基因重组技术构建含有HCV C基因的真核表达质粒pcDNA3.1( ) ,然后利用脂质体介导将重组真核表达质粒转染HepG2 ,经G4 18筛选获得稳定转染HepG2细胞 (HCV C转染HepG2细胞 ) ,经逆转录 聚合酶链反应技术 (RT PCR)和间接免疫荧光法证实其中有HCV C蛋白表达。然后进行如下实验 :( 1)利用四甲基偶氮唑蓝比色 (MTT)法检测HCV C转染HepG2细胞、空白质粒转染HepG2细胞和未转染HepG2细胞的生长增殖率 ;经流式细胞术(FACS)检测 3组细胞的细胞周期 ;( 2 )经流式细胞术检测细胞凋亡率 ;( 3)经端粒重复扩增 酶联免疫吸附试验 (TRAP ELISA)法检测上述 3组细胞端粒酶活性表达情况。结果　 ( 1)HCV C转染HepG2细胞增殖率显著高于空白质粒转染HepG2和未转染HepG2细胞增殖率 ;HCV C转染HepG2细胞S期所占百分率高于未转染HepG2细胞S期所占百分率 ;( 2 )HCV C转染HepG2细胞凋亡率显著低于无HCV C转染细胞凋亡率 ;( 3)上述 3组细胞端粒酶活性之间差异无显著性。结论　 ( 1)HCV C蛋白具有抑制细胞凋亡的作用 ;( 2 )HCV C蛋白促进HepG2从G0 /1期进入S期 ,从而可能促进细胞生长增殖 ,抑制细胞凋亡 ;( 3)HCV     

B和C基因型HBV核心蛋白促细胞凋亡的比较

目的:比较B,C两种基因型HBV核心蛋白在促进肝细胞凋亡方面的差异,以期初步阐述HBV基因型与临床关系的发病机制.方法:用PCR扩增4份(B和C基因型各2份)HBV-C区DNA片段,通过基因重组、分子克隆和亚克隆等方法,合成4份不同基因型和临床表型的重组真核表达质粒.鉴定后,将他们分别转染至肝癌细胞系HepG2中,采用MTT法和流式细胞仪测定转染细胞的细胞增殖率和细胞凋亡率等指标.结果:4份重组真核表达质粒均构建成功,转染至HepG2后通过内参照EGFP可鉴定出均有HBV-C蛋白表达.流式细胞仪提示C型/重型HBV转染组的细胞凋亡率显著高于B型/携带HBV转染组(8.8%±2.0%vs6.4%±0.8%,P<0.05).结论:C型HBV核心蛋白较B型HBV更能促进肝细胞凋亡,HBV基因型与临床相关性可能与此有关.     

间日疟原虫MSP1C端基因亚克隆及在肠埃希菌中的融合表达

目的　在大肠埃希菌中融合表达间日疟原虫MSP1C端编码基因 ,以获得能作为检测抗原的重组蛋白GST PvMSP1C。　方法　以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ双酶切质粒pMD/PvMSP1C ,获得间日疟原虫MSP1C端编码基因片段 ,柱纯化后 ,插入表达质粒载体的多克隆位点 ,构建重组体 pGEX 4T 2 /PvMSP1C ,并转化大肠埃希菌BL2 1(DE3 ) ,阳性克隆以限制性酶切分析鉴定后 ,以IPTG进行诱导表达 ,表达产物以SDS PAGE电泳与免疫印迹分析。　结果　双酶切质粒pMD/PvMSP1C ,获得 1119bp的PvMSP1C编码基因片段 ,与预期片段大小相符 ;所构建的 pGEX 4T 2 /PvMSP1C重组体阳性克隆经双酶切鉴定与预期结果一致 ;SDS PAGE电泳显示 ,GST PvMSP1C融合表达蛋白的大小约 63ku ,且能够分别被GST抗体与间日疟患者的血清所识别。　结论　成功亚克隆并构建了间日疟原虫MSP1C端编码基因 pGEX 4T 2 /PvMSP1C表达质粒 ,诱导表达了GST PvMSP1C融合蛋白 ,表达蛋白具有一定免疫活性。     

旋毛虫DNA疫苗在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的　观察编码旋毛虫相对分子质量(Mr)31000抗原的DNA疫苗(重组真核表达质粒pcDNA3 TspE1)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的体外表达 ,并分析其表达产物的抗原性。　方法　通过用阳离子脂质体Lipofectamine2000将重组质粒pcDNA3 TspE1转染CHO细胞,G418筛选阳性克隆,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)、间接荧光抗体试验(IFAT)、十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白质印迹法(Westernblotting)对表达产物进行鉴定。　结果　RT PCR结果显示,pcDNA3 TspE1转染的CHO细胞在876bp处有一条带,而用空质粒pcDNA3转染的CHO细胞未出现条带,表明pcDNA3 TspE1转染细胞中有TspE1基因转录。IFAT结果显示,pcDNA3 TspE1转染的CHO细胞与重组融合蛋白免疫小鼠血清反应呈现亮绿色荧光 ,而pcDNA3转染的CHO细胞及未转染细胞呈现橘黄色。Westernblotting显示在pcDNA3 TspE1转染的CHO细胞培养液中存在有一Mr约31000的蛋白带 ,且该条带能被重组融合蛋白免疫小鼠血清、旋毛虫肌幼虫可溶性抗原免疫兔血清、感染旋毛虫的小鼠及旋毛虫病患者血清识别。　结论　重组质粒pcDNA3 TspE1可转染CHO细胞,旋毛虫TspE1基因可在转染的CHO细胞中表达,表达蛋白能分泌到细胞培养上清中且具有旋毛虫