基因芯片技术在乙型肝炎病毒分型和耐药突变检测中的应用

目的通过基因芯片检测系统，快速检测临床样品中乙型肝炎病毒的基因亚型和耐药突变情况。方法用基因芯片法检测352例临床样品，对慢性乙型肝炎患者感染的HBV亚型及耐药情况进行分析。结果在352例临床病例中，共检出耐药突变病例124例，检出率为35．7％。发现3种基因亚型，其中B型222例，占63．8％；C型115例，占33．0％；D型1例，占0．3％；B、C混合感染9例，占2．6％；型别未分1例，占0．3％。结论PCR与膜芯片杂交技术可检测乙型肝炎病毒基因亚型及耐药突变类型，并具有快速、高通量、敏感的特点，适合各临床医院开展应用。     

SARS患者合并肺纤维化的影像学随访

目的探讨SARS患者并发肺纤维化的程度和发生率.方法对确诊的44例SARS患者进行影像学随访观察,包括摄胸部X线及CT扫描检查.结果44例SARS患者中,24例在住院时期有不同程度的肺部纤维化改变,其中19例重症病例中15例出现肺纤维化,25例普通型中9例并发肺纤维化(P＜0.05).出院时,12例(27%)存在肺纤维化.随访1个月、3个月、6个月及12个月时,分别有5例(11%)、3例(6%)、2例(4%)及2例(4%)两肺见纤维条索状影.结论肺纤维化是SARS患者较常见的并发症,重症较普通型者易发生肺纤维化,而且程度较重,吸收慢.     

基因芯片技术在结核分支杆菌耐药突变基因检测中的应用

目的通过基因芯片检测系统，快速检测临床样品中结核分支杆菌耐药突变情况。方法根据结核分支杆菌标准株H37Rv序列，设计了覆盖rpoB、katG，inhA基因突变区的系列寡核苷酸探针，制作膜芯片，检测临床样品中结核分支杆菌基因突变情况，以此判断耐药结果。结果在305例临床病例中，共检出阳性病例125例，其中阳性敏感病例64例，阳性突变病例61例，阳性率为40．98％，在125例阳性样品中，共发现有8种突变类型，其中10例531L，占7．94％，19例315M，占阳性样品中总数的15．08％。结论PCR与膜芯片杂交技术可临床检测结核分支杆菌对利福平和异烟肼的耐药性，并具有快速、简便、敏感的特点。     

SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株的构建及筛选

目的:构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株,为研究SLC7A11基因的表达沉默对肝癌发生发展的影响奠定基础。方法:针对SLC7A11基因的不同部位合成3个siRNA的寡核苷酸片段,分别将其克隆到真核表达载体p GPU6/GFP/Neo中。利用脂质体转染法分别将质粒导入肝癌LM3细胞,24小时后观察细胞内GFP表达情况,并通过real-time PCR及Western blot的方法比较各组细胞SLC7A11基因mRNA和蛋白的表达水平,然后用G418对转染细胞进行筛选培养。结果:经酶切分析及测序验证,成功构建了靶向沉默SLC7A11基因的真核表达质粒p GPU6-SLC7A11-siRNA;通过real-time PCR及Western blot的方法验证,成功筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株。结论:成功构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株,为进一步研究SLC7A11基因表达沉默对肝癌细胞发生发展的影响奠定了基础。     

miRNA分子在肺结核患者单核细胞中的表达及意义

目的分析肺结核患者(TB)外周血单核细胞中miR-34a-5p和miR-708-5p的表达水平,并探讨其临床诊断价值。方法选取TB患者和健康对照(HD)各25例,应用Taq Man q PCR技术测定两组人群外周血单核细胞中miR-34a-5p和miR-708-5p表达水平,以U6 sn RNA作为内参。应用ROC曲线评价miR-34a-5p和miR-708-5p诊断TB的临床意义。结果 miR-34a-5p在TB患者中的表达水平为(10.08±0.68),显著高于HD的(7.67±0.36),差异有统计学意义(P<0.01);miR-708-5p在TB患者中的表达水平显著高于HD的(13.52±0.98 Vs 7.71±0.57),差异有统计学意义(P<0.01)。ROC曲线分析表明在肺结核诊断中,miR-34a-5p的敏感性、特异性分别为72%、76%;miR-708-5p的敏感性、特异性为76%、76%。结论 miR-34a-5p和miR-708-5p分子在TB患者外周血单核细胞中异常表达,对TB辅助诊断具有一定参考价值。     

深圳市首例H5N1型人禽流感临床报告

目的探索H5N1型人禽流感病例的临床特点及诊治经验。方法一例H5N1型人禽流感患者,采用荧光定量RT-PCR评价抗病毒治疗效果,流式细胞术监测细胞免疫,即时动态的放射学检查、血气分析、生化检查监测病情变化,即时的细菌学检查监测细菌感染情况和抗生素治疗效果。采用抗病毒、禽流感恢复期血浆、机械辅助通气、糖皮质激素、免疫调节、抗生素、对症支持等综合治疗。结果患者以高热、咳嗽、呼吸困难为主要症状,临床诊断为重症病毒性肺炎,合并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和多脏器功能衰竭,并继发严重肺部细菌感染。联合奥司他韦和禽流感患者恢复期血浆治疗,患者体内的病毒在短期内得到有效控制和清除;机械通气、激素及其他对症支持治疗有效控制ARDS和多脏器功能衰竭;多黏菌素治疗有效控制广泛耐药的铜绿假单胞菌感染;免疫调节治疗促进患者免疫功能的恢复。结论H5N1型人禽流感病情重、进展快,严重的ARDS及多器官功能障碍综合征是主要临床特征。早期清除病毒、及时正确的对症辅助支持治疗、选择有效抗生素控制继发细菌感染是治疗成功的关键。激素和免疫调节剂的使用值得进一步探索。恢复期血浆治疗是重症禽流感治疗的有益尝试。     

DC-SIGNR基因绞链区重复序列多态性检测方法的建立与应用

目的建立树突状细胞表面的蛋白质DC-SIGNR基因绞链区重复序列多态性的检测方法，了解宿主因素在抗艾滋病病毒1型（HIV-1）所起的作用。方法设计特定引物，用PCR方法对DC-SIGNR基因绞链区重复序列进行扩增，用凝胶电泳法对其产物进行分析。结果根据DC-SIGNR绞链区重复序列的数量，DC-SIGNR绞链区重复序列具有高度基因多态性，而DC-SIGN则罕见基因多态性。结论所建立的检测DC-SIGNR绞链区重复序列的方法简单，易于掌握。由于DC-SIGNR重复序列数量的改变可能会影响其正常功能，从而影响宿主与HIV-1的结合能力，因此该法为研究宿主因素在抗HIV-1感染中所起作用的一种好方法。     

慢性乙型肝炎患者外周血TH17、中性粒细胞、单核细胞的检测和意义

目的:探讨辅助性T细胞17(Th17)在慢性乙型肝炎(CHB)发生、发展中的作用及其与中性粒细胞,单核细胞的关系.方法:采用流式细胞仪检测55例CHB患者(CHB组)和33例查体健康(对照组)外周血Th17细胞比例;采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;分析Th17细胞比例与血清ALT水平的相关性;采用ABI7500核酸定量检测仪测定乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA);采用SYSMEX全自动血液分析仪XE-500对外周血中的中性粒细胞、单核细胞进行绝对计数检测.结果:CHB组外周血Th17细胞比例、单核细胞绝对计数明显高于对照组(P＜0.01),而中性粒细胞绝对计数却低于健康组.Th17细胞比例与血清ALT水平、中性粒细胞、单核细胞绝对计数呈正相关,单核细胞绝对计数和血清ALT正相关.结论:Th17细胞诱导中性粒细胞的定向分化、迁移、趋化、以及抗微生物肽的释放,促进炎症反.激活的单核细胞促进TH17细胞分化增殖,在炎症条件下TH17细胞分泌的IL-17能有效地促进单核细胞的活化.三种细胞在慢乙肝感染免疫中紧密联系,并且与CHB肝脏损伤程度有关.     

TTV DNA在肝组织中表达研究

目的 探索TTV DNA在肝组织表达特点。方法 选择TTV DNA高保守区设计一对引物，采用PCR扩增法，以地高辛标记TTV ORF1部分基因序列，合成Gla，G2b两种亚型的双链TTV DNA探针。应用巢氏PCR法筛选出TTV DNA阳性的慢性肝炎、肝硬化、原发性肝癌病人的肝组织标本共60份，同时用两种探针进行原位杂交。结果 TTV DNA主要见于肝细胞、肝癌细胞的细胞核内，极少数肝细胞胞浆内TTV DNA呈弱阳性。TTV DNA阳性细胞在慢性肝炎、肝硬化、肝癌组织中均呈散在分布。肝癌组织与癌周组织中TTV DNA阳性细胞密集程度差别不明显。结论 TTV是一种嗜肝病毒，TTV DNA在被感染肝组织及肝癌的细胞核内表达及复制。     

树突状细胞表面特异性非整联蛋白外显子4在中国裔丙型肝炎患者中的遗传多态性

目的探讨树突状细胞表面特异性非整联蛋白（DC—SIGN）及其同源物（DC-SIGNR）外显子4遗传多态性在中国裔丙型肝炎患者中是否存在遗传易感性。方法采用PCR结合DNA测序对300例丙型肝炎患者和520名健康人的DC-SIGN和DC-SIGNR外显子4重复序列多态性进行基因分型和测序分析。结果DC—SIGN外显子4基因型与等位基因频率在丙型肝炎患者和健康人群间差异无统计学意义（P〉0．05）。DC-SIGNR外显子4等位基因的频率差异也无统计学意义（P〉0．05）；但9／5基因型分布频率在丙型肝炎患者和健康人群间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DC-SIGN外显子4遗传多态性与HCV感染易感性无明显相关性；9／5基因型DC-SIGNR外显子4在丙型肝炎患者中的分布频率较高，可能与HCV感染的易感性相关，值得进一步研究。