温州市畜肉中小肠结肠炎耶尔森菌的污染现状与病原特征分析

目的 了解2020年—2021年温州市畜肉中小肠结肠炎耶尔森菌的污染现状及病原特征。方法 对2020年—2021年温州市食品安全风险监测中的畜肉样本进行小肠结肠炎耶尔森菌的分离鉴定、血清分型、生物分型、毒力基因检测、耐药性分析和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 356份样本共检出小肠结肠炎耶尔森菌31株，检出率为8.71%。分离菌株血清型以O:5型为主，生物型以1A型为主。检出1株4/O:3型菌株携带毒力基因ail、ystA、yadA、virF,其余菌型菌株仅携带ystB或不携带任何毒力基因。分离株对头孢西丁、磺胺异恶唑耐药率最高，为32.26%,多重耐药株有4株，占12.90%。31株分离株经PFGE分型，共获得31种带型。结论 小肠结肠炎耶尔森菌是温州市畜肉中的潜在污染源，菌株耐药率处于较低水平但存在多重耐药株，PFGE带型呈多态性分布。     

2011～2012年赤峰市松山区动物中检出41株小肠结肠炎耶尔森菌

目的了解赤峰市松山区境内鼠类,家畜家禽携带小肠结肠炎耶尔森菌情况,为疾病预防控制工作提供科学依据。方法采集鼠类、家畜家禽的粪便、脏器等样品,进行小肠结肠炎耶尔森菌的分离、培养、鉴定和生物血清分型,并用PCR方法进行毒力因子检测。结果 2011～2012年共检验各类样品412份,检出小肠结肠炎耶尔森菌41株,皆来自猪咽拭子。2011年总检出率为16.02%,猪咽拭子的检出率高达28.28%。41株小肠结肠炎耶尔森菌中,携带了ail,ystA,yadA,virF,rfbc基因的3/O：3生物血清型菌株占95.12%;4/O：4生物血清型菌株占2.32%;其他占2.32%。结论赤峰市松山区境内的猪咽部携带小肠结肠炎耶尔森菌,猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者。     

广州地区食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌分布特性的初步研究

目的：了解广州地区食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的分布特性。方法：采用随机抽样方法分别对广州十区两市日常监测的样品,共计207份,参照国标方法进行小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测和鉴定,并对分离菌株的生物分型、血清型分型、毒力基因携带等特征作分析。结果：207份样品中14份检出小肠结肠炎耶尔森氏菌,阳性率为6.22%。分离到O：1,2、O：5、O：8三种血清型的菌株。14株菌株均为非致病的生物1A型,其中8株携带毒力基因ystB,3株携带yadA基因。冬、春季的分离率比夏、秋季的高（χ^2检验,P〈0.005）。结论：本地区食品中存在小肠结肠炎耶尔森氏菌的污染,以非流行株为主。应加强本地区食品加工、流通方面的监督管理,以减少可能引起食源性疾病的因素。     

温州市食源性疾病中小肠结肠炎耶尔森菌的调查分析

目的了解温州地区食源性疾病中小肠结肠炎耶尔森菌的血清型、毒力基因携带和耐药性。方法利用常规细菌分离方法从食源性疾病标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌和进行血清分型,同时进行抗生素敏感试验,并进行5种毒力基因检测。结果2012年从温州地区采集的364份腹泻患者肛拭标本中共分离到2株小肠结肠炎耶尔森菌,全部为O:5血清型。2株全部携带ystB毒力基因,其余毒力基因均为阴性。2株对利福平、氨苄西林、链霉素及多粘菌素B耐药,对阿米卡星、头孢噻吩中介外,其他常用抗生素都敏感。结论温州地区食源性疾病中检出的小肠结肠炎耶尔森菌携带毒力,具有潜在危险,应该引起重点关注。     

2006-2010年高密市小肠结肠炎耶尔森菌调查

目的了解高密市食品中小肠结肠炎耶尔森菌及动物带菌情况。方法 2006-2010年采集家畜家禽粪便、冷冻食品共2 097份,4℃冷增菌后用选择性培养基进行病原菌分离培养并作生化鉴定,将可疑菌株做进一步的血清学鉴定和生物分型及毒力检测。结果 2 097份标本中分离出131株小肠结肠炎耶尔森菌,总的检出率为6.25%,其中O∶3(携带毒力基因ail+、ystA+、rbfc+)和O∶9血清型的检出率分别为0.76%和1.52%。108株仅携带ystB基因(82.44%);26株不携带任何基因(19.85%)。131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在3个生物型,其中生物1A型占74.80%;生物3型占1.52%;生物4型占0.76%。结论本地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌,有感染人和动物及引起食源性型疾病的可能,因此必须加大该菌的监测力度,以预防小肠结肠炎耶尔森菌病的感染流行。     

阴沟肠杆菌菌株中携带小肠结肠炎耶尔森菌毒力岛irp-2基因的检测

目的:了解从云南战区感染性腹泻患者粪便标本中分离的阴沟肠杆菌是否携带小肠结肠炎耶尔森菌H IP(H ighPathogen ic ity Island)毒力岛irp-2基因,并研究菌株的毒力及耐药情况。方法:用PCR扩增法检测毒力岛irp-2基因,小白鼠腹腔注射检测毒力。结果:从1040例腹泻病人粪便分离的25株阴沟肠杆菌中,检测出18株携带小肠结肠炎耶尔森菌H IP毒力岛irp-2基因,毒力试验证实有较强毒力,药敏试验筛选出了敏感、中度敏感及耐药三类药敏谱。结论:云南战区检出的阴沟肠杆菌含有小肠结肠炎耶尔森菌H IP毒力岛irp-2基因且为毒力较强的菌株,对人类的健康具有潜在性的威胁。建立的药敏谱,为军队和地方今后在治疗由此菌引起的感染提供重要参考。     

内蒙古阿鲁科尔沁旗鼠疫疫区小肠结肠炎耶尔森菌调查研究

目的了解赤峰市阿鲁科尔沁旗达乌尔黄鼠鼠疫疫源地内鼠类、家畜家禽携带小肠结肠炎耶尔森菌情况,为疾病防治工作和研究鼠疫疫源地提供科学依据。方法在达乌尔黄鼠鼠疫疫源地内,选择以村庄为中心,向外依次为农田、草原的同心圆样地,分别采集鼠类、家畜家禽粪便、舌根、咽拭子及肠道内容物等样品,进行小肠结肠炎耶尔森菌分离、培养、鉴定、生物血清分型,并用PCR方法进行毒力因子测定。统计学分析采用χ2检验。结果 2009-2012年共检验各类样品3837份,检出小肠结肠炎耶尔森菌17株,总检出率为0.44%。2011年检出的16株小肠结肠炎耶尔森菌中13株源自猪粪,3株来自鼠肠;1株O∶3血清型,生物3型,携带ail、yst A、rfb C毒力基因的致病性菌株检自猪粪。结论阿鲁科尔沁旗绍根地区的猪、鼠体内携带小肠结肠炎耶尔森菌,猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者。进一步调查分析小肠结肠炎耶尔森菌在该地区人和宿主动物间的分布规律十分必要。     

天津蓟县致病性小肠结肠炎耶尔森菌分布调查

目的 了解天津蓟县致病性小肠结肠炎耶尔森菌菌株分布情况.方法 于2006年6月用常规方法从腹泻病患者、家畜的粪便样本中分离小肠结肠炎耶尔森菌,并进行生物化学鉴定、血清分型、相关毒力基因检测以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析.结果 从腹泻病患者和猪粪便中分离到的5株致病性小肠结肠炎耶尔森菌均为O:3血清型.全部携带毒力基因(ail、ystA、radA、virF),其中4株菌经脉冲场凝胶电泳分析属于同一带型(K6GN11C30021).另有1株带型为KGGN11C30026.结论 该县从腹泻病患者与宿主动物中分离到的致病性小肠结肠炎耶尔森菌有4株属于同一个克隆系,初步推断猪为当地小肠结肠炎耶尔森菌感染人群的主要来源.     

云南战区部队首次检出携带耶尔森菌HPI毒力岛基因irp-2的大肠杆菌

目的：了解携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp^-2的大肠杆菌在云南战区部队腹泻患者粪便标本中的存在情况，并对其菌株做毒力试验。方法：用PCR扩增法检测毒力岛基因irp^-2，小白鼠腹腔注射检测毒力。结果：从268份腹泻病人粪便中分离的大肠杆菌菌株中，检测出携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因卸12的18株，检出率为6．72％（18／268）。毒力试验使小白鼠发病并死亡。结论：云南战区存在携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因卸12的大肠杆菌，该菌对部队指战员的健康具有潜在性的威胁。     

丽水市莲都区鼠疫疫源地耶尔森菌的分离及鉴定

目的了解丽水市莲都区鼠疫疫源地鼠类携带耶尔森菌的类型、毒力基因、生物型以及抗生素敏感等情况。方法利用常规耶尔森菌分离方法从635份鼠类肠道内容物中分离耶尔森菌,对检获的小肠结肠炎耶尔森菌、假结核耶尔森菌进行生物分型试验、抗生素敏感试验和毒力基因检测。结果共检获26株耶尔森菌,其中小肠结肠炎耶尔森菌检出率为2.83%(18/635),均为生物1A型非致病性菌株;假结核耶尔森菌检出率为0.31%(2/635),中间型耶尔森菌检出率为0.31%(2/635),弗氏耶尔森菌检出率为0.47%(3/635),克氏耶尔森检出率为0.16%(1/635)。18株小肠结肠炎耶尔森菌中,2株对庆大霉素耐药,4株对复方新诺明耐药。2株假结核耶尔森菌均对庆大霉素耐药,1株同时对头孢曲松和复方新诺明耐药。结论莲都鼠疫监测点鼠类携带耶尔森菌种类多,以小肠结肠炎耶尔森菌为主,对耶尔森菌的监测要进一步加强,以评估鼠疫暴发的危险度。同时,应警惕耶尔森菌引起的肠道传染病。     

腹泻病人标本分离小肠结肠炎耶尔森菌及其病原学研究

目的调查本地腹泻病人中小肠结肠炎耶尔森菌的感染现状,开展小肠结肠炎耶尔森菌的病原学研究,为制定相应的防治对策提供科学依据。方法参照中国CDC编《小肠结肠炎耶尔森菌的分离与鉴定手册》制定的检验程序,开展腹泻病人标本病原检测和微生物学研究。结果 2 193份腹泻病人标本中检出小肠结肠炎耶尔森菌40株。毒力基因检测其中O3型菌株的基因分布为ail+、yst A+、yad A+、vir F+、yst B-;PFGE分子分型显示腹泻病人和宿主动物的O3型菌株相似度为96.0%~100.0%。结论本地腹泻病人标本中检出了小肠结肠炎耶尔森菌,冬春季该菌的阳性检出率显著升高;O3型菌株均携带有上述毒力基因,具有典型的致病性特征;PFGE分子分型检测表明腹泻病人O3型菌株感染与宿主动物之间有密切的内在联系。     

宁夏地区小肠结肠炎耶尔森菌病原特征

目的通过对宁夏地区小肠结肠炎耶尔森菌的宿主分布及毒力基因情况进行分析,能够有效防止该菌蔓延扩散。方法对2012—2017年不同监测样本进行菌株分离培养,并对阳性菌株做血清凝集和毒力基因鉴别。结果 2012—2017年,共采集各类样本8 032份,分离小肠结肠炎耶尔森菌146株,总检出率为1.81%。同时携带ail,ystA,yadA,virF毒力基因的致病性菌株全部来自O:3血清型,均来源于动物样本。结论宁夏地区广泛存在小肠结肠炎耶尔森菌,其中猪的致病性带菌率最高,且具有高度同源性,不存在时间差异。     

小肠结肠炎耶尔森菌在中国家畜家禽间分布的研究

目的为了解中国小肠结肠炎耶尔森菌在不同家畜、家禽中的分布规律,对不同地区家畜、家禽进行带菌状况调查。方法采集中国不同地区家畜、家禽咽拭子,肛拭子和粪便标本进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养,并对分离到的菌株进行血清分型、生物分型及毒力相关基因检测。结果猪中小肠结肠炎耶尔森菌携带率最高为12.91%,其次为犬,携带率为9.80%,两者分离的致病性菌株所占比例分别为73.50%和59.44%。而其他动物中小肠结肠炎耶尔森菌携带率较低,鸡、牛和羊分别为4.50%、2.78%和0.89%,且主要以非致病性菌株为主,分别占100%、94.44%和93.33%。结论首次在中国进行大规模家畜、家禽中小肠结肠炎耶尔森菌分布调查。动物中小肠结肠炎耶尔森菌感染率存在较大物种差异和地域性分布特征,猪、犬是小肠结肠炎耶尔森菌的主要储存宿主和传染源,而牛、羊、鸡、鸭等主要携带非致病性小肠结肠炎耶尔森菌,属于偶然宿主。     

浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌(动物株)分子生物学特征初探

目的：了解浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌的血清型别、毒力基因分布等情况。方法：利用常规细菌分离方法从家禽、家畜和鼠类粪便标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌，并进行毒力基因检测，同时对血清型O：3、O：5和O：8的菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果：2004～2005年，从全省各点采集的动物标本中共分离到22株小肠结肠炎耶尔森菌，分布于11个血清型，并以O：8和O：3为主。PCR检测将分离到的22株小肠结肠炎耶尔森菌毒力携带情况分为4型：Ⅰ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^＋、virF^＋），Ⅱ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^-、virF^-），Ⅲ型（ail^-、ystA^-、ystB^＋、yadA^-、virF^-），Ⅳ型（ail^-、ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-）。脉冲场凝胶电泳分析，O：3型菌株显示有2种带型，O：5型菌株的带型完全相同，O：8型菌株的带型则存在明显差异。结论：浙江省的从动物分离的小肠结肠炎耶尔森菌以非致病性菌株居多，且存在一定的地区差异。猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者，应警惕致病性小肠结肠炎耶尔森菌通过猪感染人和其它动物以及环境的危险。     

徐州市2004年小肠结肠炎耶尔森菌人及动物带菌情况调查报告

目的：调查本地区小肠结肠炎耶尔森菌人群及动物感染情况，毒力基因携带情况，血清型分布情况及生物型别。方法：10月中旬采集牛、羊、猪、狗粪便共358份，4℃冷增菌后用选择性培养基进行病原菌分离培养并做生化实验，可疑菌株做血清学鉴定和生物分型及毒力检测。结果：检出阳性菌株15株（其中2株携带毒力基因），检出率为4．2％（其中猪的检出率5．1％；羊的检出率5．7％；狗的检出率4．3％；牛的检出率0％）。结论：本次调查在羊、猪、狗粪便标本中检出小肠结肠炎耶尔森菌，带毒菌株的血清型为0：3，生物型为1B。检出的其余血清型别菌株均不带毒力质粒。人和牛粪便标本中未检出小肠结肠炎耶尔森菌。     

小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体筛选及其应用

目的利用杂交瘤技术筛选出能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的细胞株,用于该型菌株的鉴定。方法采用ELISA方法筛选克隆株,并用玻片凝集法进行单克隆抗体的特异性鉴定。结果筛选到3株能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体与经鉴定的18株小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型菌株呈阳性反应,而与其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌及常见肠道致病菌无交叉凝集反应;应用于小肠结肠炎耶尔森菌野生株分型鉴定时,能准确鉴定出其中的24株O∶9血清型菌株,与用日本进口分型血清鉴定、PCR毒力基因检测结果相同。结论筛选获得的细胞株产生的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型鉴定,具有很好的型特异性,避免了过去免疫血清制备中繁琐的抗原交叉吸收试验。     

1997-2010年宁夏回族自治区小肠结肠炎耶尔森菌致病性的基因特征

目的 了解宁夏回族自治区小肠结肠炎耶尔森菌主要毒力基因分布情况和致病性小肠结肠炎耶尔森菌分子分型特征。方法 于1997-2010年在宁夏回族自治区共分离得到283株小肠结肠炎耶尔森菌,用PCR法分析其黏附侵袭位点基因(ail)、耐热肠毒素A基因（ystA）、ystB、黏附素基因（yadA）、毒力活化因子基因（virF）;应用限制性内切酶Not Ⅰ酶切致病性小肠结肠炎耶尔森菌染色体DNA进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),利用BioNumerics软件进行聚类分析。结果 209株O∶3、O∶9血清型小肠结肠炎耶尔森菌中ail、ystA、yadA、virF毒力基因阳性,ystB为阴性的占97.6％( 204/209);O∶8血清型和未开展血清分型的菌株5种毒力基因全部阴性;11株O∶5血清型有9株5种毒力基因全部阴性。将致病性菌株进行PFGE分型,根据染色体DNA的Not Ⅰ酶切图谱,将29株O∶3血清型分成12个PFGE带型,包含5株以上的优势PFGE带型有2种。180株O∶9血清型菌株分成13个PFGE带型,包含10株以上的优势PFGE带型有4种,各自是从同一地区猪与家鼠、猪与犬、猪与野兔分离。结论 宁夏地区O∶3、O∶9血清型小肠结肠炎耶尔森菌具有致病性,O∶3逐步成为如今的优势血清型;O∶5、O∶8与血清未分型的菌株无致病性。     

小肠结肠炎耶尔森菌O:9血清型特异性单克隆抗体筛选及其应用

目的利用杂交瘤技术筛选出能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型特异性单克隆抗体的细胞株,用于该型菌株的鉴定.方法采用ELISA方法筛选克隆株,并用玻片凝集法进行单克隆抗体的特异性鉴定.结果筛选到3株能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体与经鉴定的18株小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型菌株呈阳性反应,而与其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌及常见肠道致病菌无交叉凝集反应;应用于小肠结肠炎耶尔森菌野生株分型鉴定时,能准确鉴定出其中的24株O：9血清型菌株,与用日本进口分型血清鉴定、PCR毒力基因检测结果相同.结论筛选获得的细胞株产生的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型鉴定,具有很好的型特异性,避免了过去免疫血清制备中繁琐的抗原交叉吸收试验.     

浙江省义乌市鼠类中耶尔森菌调查与分析

目的 调查浙江省义乌市鼠疫疫源地啮齿动物中致病性耶尔森菌的分布情况,并分析菌株的生物学特征.方法 采集鼠粪便进行耶尔森菌分离,对分离获得的菌株进行生物分型、血清分型和毒力基因鉴定.结果 2005-2013年共检测3623份标本,分离到小肠结肠炎耶尔森菌74株,假结核耶尔森菌11株;耶尔森菌的检出率以春季最高(5.72％).68株小肠结肠炎耶尔森菌有生物1A型(55株)、生物3型(1株)2个型别;血清分型O∶5血清型有8株、O∶8血清型有2株;毒力基因检测有29株菌检出stB基因.结论 义乌市鼠疫疫源地内未检出鼠疫菌,但分离出假结核菌和小肠结肠炎菌;在鼠疫监测同时也对其他两种致病性耶尔森菌开展监测和相关研究,对鼠疫的监测有指导意义.     

缺失耶尔森菌HPI irp6基因EAggEC的构建

目的 构建小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6重组自杀质粒，并应用其构建EAggEC上该基因的缺失株。方法 根据已知小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6基因序列，设计PCR引物，扩增并克隆了irp6结构基因，在体外进行精确突变后，插入氯霉素抗性基因。再将含氯霉素的irp6缺失基因亚克隆入自杀质粒pKNGl0l中，构建成irp6基因重组自杀质粒pKH6，并以肠粘附聚集性大肠杆菌EAggECl7.2为出发菌株，通过体内同源重组，置换其irp6基因。结果 经接合转移和同源重组，利用蔗糖抗性筛选，pKH6上的同源序列有效的置换了EA6gECl7-2的ir6基因。结论 以小肠结肠炎耶尔森菌为靶构建的irp6基因重组自杀质粒成功的缺失了EAggECl7-2的ir6基因，获得了携带耶尔森菌强毒力岛的EAggECl7-2 irp6基因缺失株EAG6，为进一步研究其功能打下了基础。