广东省市售牡蛎中诺如病毒污染调查

目的 调查广东省地区市售牡蛎中诺如病毒污染状况并对阳性株进行鉴定、分型,为控制和预防因食用牡蛎而引起诺如病毒胃肠炎提供基础数据。方法 应用实时荧光定量RT-PCR,对2016年1月 - 2017年12月期间在广东省8个城市收集的290份牡蛎样品进行诺如病毒定性和定量检测,并对不同季节、城市及采样点诺如病毒的污染情况及基因分型情况进行比较。结果 290份牡蛎样品的诺如病毒总检出率为为17.20%(50/290),不同季节的诺如病毒污染率分别为春12.50%、夏6.90%、秋18.30%和冬30.70%;从病毒污染的不同基因型分析,GⅠ诺如病毒检出率为6.20%,GⅡ型诺如病毒检出率为11.00%。结论 广东省市售牡蛎存在诺如病毒污染,且污染具有季节特点,以冬季污染较严重,具有较高引起食源性胃肠炎疾病感染的风险,其基因型以GⅡ型为主。     

2014-2015年昆明市175件市售海产品中诺如病毒污染状况检测

目的 调查昆明市售海产品中诺如病毒的污染状况,为市民消费海产品提供建议,为昆明市售海产品食用安全性提供依据。方法 2014年7月至2015年7月,采集市售海产品175件,应用real-time RT-PCR法分别检测诺如病毒的ＧⅠ和ＧⅡ两个亚型,并对不同类型、不同季节、不同产地市售海产品中诺如病毒的污染情况进行比较。结果 175份市售海产品中诺如病毒总检出率为1.14%（2/175）,从基因分型看,2份阳性样品均为GⅡ型。结论 2014年-2015年昆明市售海产品中检出GⅡ型诺如病毒,存在通过食用海产品感染的风险。     

秦皇岛市海产品贝类中诺如病毒监测分析

目的了解秦皇岛市海产品中血蚶、牡蛎、海虹受诺如病毒污染情况,检测3种贝类带毒率,对检测出的诺如病毒进行GⅠ和GⅡ分型。建立Mengo病毒作为阳性质控检测病毒回收率方法。方法蛋白酶水解法富集病毒,全自动核酸提取仪提取病毒RNA,实时荧光定量PCR方法对诺如病毒进行检测和分型,用Mengo病毒做标准曲线,检测诺如病毒回收率。结果 Mengo病毒回收率均1%符合富集要求,检测牡蛎、海虹、血蚶各20份,检出诺如病毒阳性样本11份,其中GⅠ型1株,GⅡ型10株,总检出率为18.33%。牡蛎、血蚶均检出GⅡ型毒株,检出率分别为30.00%、5.00%,海虹检出GⅠ型和GⅡ型毒株,检出率分别为5.00%和15.00%。结论 3种贝类产品均受到诺如病毒不同程度的污染,GⅡ毒株含量较多,牡蚶和海虹受到污染较为严重。     

应用2种RT-PCR方法检测和分析北京市市场销售牡蛎中诺如病毒基因特征

目的:应用实时荧光RT-PCR和半巢式RT-PCR方法检测和分析牡蛎中诺如病毒的基因特征。方法:应用实时荧光RT-PCR和半巢式RT-PCR方法,对2014年11月至2015年10月北京市采集的新鲜市售牡蛎进行诺如病毒GⅠ/GⅡ组并联试验检测,分析检出率,应用符合率和一致性检验（Kappa值）对半巢式RT-PCR方法进...     

2011-2017年广东省牡蛎中诺如病毒污染状况分析

目的 分析2011—2017年广东省牡蛎中诺如病毒的污染情况,为开展牡蛎中诺如病毒污染状况的风险评估以及采取有效措施减轻污染程度提供科学依据。方法 2011—2017年选取广东省11个牡蛎消费量较大的地级市进行样品采集,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分别进行诺如病毒GI型和GII型检测。结果 共采集牡蛎样品1 298份,检出诺如病毒阳性217份,总阳性检出率为16.72%;其中GII型检出率（14.56% ）高于GI型（7.78%）,差异有统计学意义（P<0.01）。不同季节检出率差异有统计学意义（P<0.01）,以冬季检出率最高（43.40%）。产地为国外的牡蛎检出率（6.72%）低于国内（13.31%）,差异有统计学意义（P<0.01）。流通环节的检出率（18.21%）高于餐饮环节（13.53%）,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 广东省流通和餐饮环节中的牡蛎均存在诺如病毒污染,以GII型为主,冬季检出率较高。     

贝类中诺如病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的建立实时荧光定量PCR法检测GⅠ、GⅡ型诺如病毒的方法。对东海区域市场内零售贝类海产品中诺如病毒携带情况进行监测,为海产品食品安全和风险预警提供科学依据。方法采集浙江沿海地区市场上常见贝类,利用实时荧光定量PCR检测技术对贝类进行检测。结果 2 955份样品中有63份样品携带诺如病毒,其中杂色蛤、太平洋牡蛎、僧帽牡蛎、毛蚶中均检出GⅡ型诺如病毒。贝类样品中太平洋牡蛎的检出率最高,为15.64%。贝类中诺如病毒在冬季(11月-次年2月)的检出率明显高于夏季(6月-9月),其季节分布差异有统计学意义(χ~2=31.3,P0.05)。结论东海区域贝类中,特别是生食或半熟食贝类中诺如病毒的携带水平较高、分布较广,应持续做好贝类中诺如病毒携带监测,同时做好风险预警。     

杭州地区2014-2015年急性胃肠炎患者感染诺如病毒的流行病学特征分析

目的 了解2014-2015年杭州地区急性胃肠炎患者中诺如病毒的流行病学特征。方法 收集1 109份急性胃肠炎患者的临床流行病学资料和粪便样本,采用一步法双重荧光RT-PCR对样本中诺如病毒(GⅠ、GⅡ型)进行初筛,然后随机选择诺如病毒阳性的样本核酸进行多重RT-PCR扩增,对产物进行测序分析。结果 1 109份的粪便样本中,诺如病毒检出率为26.87%(298/1 109),以GⅡ亚型为主,占25.52%(283/1 109),GⅠ亚型占1.35%(15/1 109);不同性别人群诺如病毒检出率差异无统计学意义(P>0.05);不同年龄组人群中诺如病毒检出率分别为16.94%(<5岁)、19.45%(5~18岁)和32.26%(≥18岁);全年均可检出诺如病毒感染,高发季节为12月至次年3月,阳性率为29.67%~37.08%。序列分析显示,GⅡ基因亚型中以GⅡ-4/Sydney株为主(46.43%,13/28),其次为GⅡ-4/2006b株;GⅠ基因亚型中以GⅠ-1亚型为主(55.56%,5/9)。结论 诺如病毒是导致2014-2015年杭州地区急性胃肠炎的主要病原之一,GⅡ基因亚型特别是GⅡ-4/Sydney变异株和GⅡ-4/2006b变异株是该地区流行的优势毒株。     

双重实时荧光定量PCR法检测腹泻患者粪便中诺如病毒(GⅠ+GⅡ)的研究

目的建立同时检测GⅠ和GⅡ型诺如病毒的双重实时荧光定量PCR方法,并在临床检验中得到应用。方法本研究采用了双重实时荧光定量PCR法,对诺如病毒GⅠ型病毒的特异性Taqman探针的5’端标记了FAM和对诺如病毒GⅡ型病毒的特异性Taqman探针的5’端标记了JOE,从而实现了在同一反应管中对诺如病毒同时进行检测和分型。2015年采集两所哨点医院符合要求的门诊腹泻患者的380份粪便标本运用此方法进行了检测和分型。结果诺如病毒GⅠ型和诺如病毒GⅡ型分别在FAM检测通道和JOE检测通道出现相应的荧光扩增曲线;380例符合定义的临床标本中诺如病毒GⅠ型的检出率为3.68%,诺如病毒GⅡ型的检出率为14.74%,诺如病毒GⅠ型和诺如病毒GⅡ型混合感染的检出率为1.58%,全年诺如病毒的总检出率为20.00%。结论双重实时荧光定量PCR法具有重复性好、特异性强、时效性好和简单易操作的特点,具有极大的应用和推广价值。     

2014-2016年连云港市腹泻人群中诺如病毒流行特征分析

目的 了解2014-2016年连云港诺如病毒在腹泻人群中的感染流行状况,为诺如病毒预防控制提供参考依据。方法 收集2014.1-2016.12连云港地区腹泻粪便样品1 565份,采用实时荧光PCR进行诺如病毒Ⅰ型和Ⅱ型检测,并分析流行状况。结果 2014-2016年,连云港市腹泻人群中诺如病毒总阳性率为8.24%(129/1 565),诺如病毒Ⅰ型(GI)和Ⅱ型(GII)均存在,GI型占6.98%(9/129);GII型占93.02%(120/129)。以GII型为主。各年度、性别、地区腹泻患者中阳性率无差异,0~5岁组、5~65岁组和65~组阳性率有差异;诺如病毒GII型在散居儿童、托幼儿童和学生腹泻人群阳性率9.25%(88/951)高于其他腹泻人群阳性率5.21%(32/614);2014-2016年诺如病毒阳性率依次为6.99%(43/615)、10.06%(49/487)和7.99%(37/463),2014年5月、2015年11月和2016年5月的阳性率高于平均水平。结论 诺如病毒在连云港地区感染稳定存在,有爆发感染的潜在风险,应加强预防控制工作。     

单管多重荧光定量RT-PCR方法鉴别A组轮状病毒及诺如病毒GⅠ型和GⅡ型

目的建立能同时检测A组轮状病毒、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型的多重荧光定量RT-PCR方法。方法分别选用轮状病毒NSP3基因、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型orf1与orf2基因中的64 bp、90 bp和185 bp片段作为荧光定量PCR检测的靶标,设计引物和Taq Man探针,构建标准品,绘制标准曲线,评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度,并对138份粪便标本进行检测及测序验证。结果 3种病毒对应的标准曲线分别为:轮状病毒:y=-3.9lgx+41.204;诺如病毒GⅠ型:y=-3.06lgx+40.716;诺如病毒GⅡ型:y=-3.29lgx+41.538,质粒标准曲线的方差系数为0.997,灵敏度达到每个反应102copy/μl,特异度强。138份样本中检出A组轮状病毒、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型的检出率分别为32.6%、5.8%和26.1%,与基因测序比对结果相符。结论构建可用于A组轮状病毒及诺如病毒GⅠ型和GⅡ型的多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏,可用于临床病原诊断和流行病学调查。     

成都地区腹泻病例人杯状病毒感染状况研究

目的 了解成都地区2010年7～12月之间人杯状病毒感染性腹泻的情况.方法 采集成都市2家哨点医院2010年7～12月之间腹泻病人的大便标本501份,采用RT-PCR方法,对501份大便标本同时进行诺如病毒、札如病毒核酸检测.结果 501份标本中检出阳性122份,核酸阳性率为24.35％ (122/501),其中诺如病毒GⅠ型1份,占阳性标本的0.82％ (1/122);诺如病毒GⅡ型100份,占阳性标本的81.97％ (100/122);札如病毒18份,占阳性标本的14.75％(18/122);诺如病毒GⅡ型和札如病毒共同感染3份,占阳性标本的2.46％ (3/122).5岁以下儿童患者标本病毒核酸阳性检出率为24.3％ (109/449),其中诺如病毒GⅡ型的检出率最高;5～18岁患者标本病毒核酸阳性检出率为14.29％(1/7),标本检验结果为诺如病毒GⅡ型;18岁以上患者标本阳性检出率为26.67％ (12/45),其中诺如病毒GⅡ型检出率最高.9、10、11 3个月病毒核酸检出率较高,其中9月份病毒核酸检出率最高为36.51％ (23/63).结论 成都地区人杯状病毒感染性腹泻的病原体以诺如病毒GⅡ型为主,主要在秋冬季节高发,且婴幼儿和成人同样容易感染.     

无锡地区2013年腹泻人群诺如病毒分子流行病学特征分析

目的了解无锡市诺如病毒流行特征及主要流行株的基因型。方法采集2013年无锡市哨点医院监测的409份急性腹泻者的粪便标本和9起诺如病毒暴发疫情的病例标本,采用实时荧光定量PCR检测诺如病毒GⅠ和GⅡ基因,对GⅡ基因阳性标本进一步进行扩增及测序分型。结果哨点监测病例诺如病毒阳性率为9.78%(40/409)。所测36株诺如病毒共有5种基因型,依次为GⅡ.Pe/GⅡ.4型28株(77.78%)、GⅡ.P12/GⅡ.3型4株(11.11%)、GⅡ.P16/GⅡ.13型2株(5.56%)、GⅡ.P7/GⅡ.6和GⅡ.16各1株(2.78%)。2013年暴发疫情病例所测35株诺如病毒共4种基因型,依次为28株GⅡ.Pe/GⅡ.4型(80.0%)、4株GⅡ.7(11.43%)、3株GⅡ.12/GⅡ.3(8.57%)。结论诺如病毒是无锡地区非细菌性腹泻最常见的病原体,无锡地区诺如病毒流行株具有多种基因型,存在不同基因型间重组株。GⅡ.Pe/GⅡ.4型(Sydney_2012)为2013年无锡地区绝对优势流行株。     

2012-2019年北京市昌平区散发腹泻病例四种病毒监测结果分析

目的对北京市昌平区2012-2019年散发腹泻病例4种病毒监测结果进行分析,了解其流行特征。方法采集此期间辖区2家哨点医院肠道门诊散发腹泻病例便样本960份,提取核酸后用实时荧光RT-PCR方法检测A组轮状病毒、GⅠ/GⅡ组诺如病毒、星状病毒和肠道腺病毒,用描述性流行病学方法从时间、性别和年龄分布分析其流行特征。结果 960份便样本的病毒总检出率为32.29%(310/960),GⅠ/GⅡ组诺如病毒、A组轮状病毒、星状病毒和肠道腺病毒检出率分别为18.96%(182/960)、10.63%(102/960)、1.98%(19/960)和0.73%(7/960);在不同年份、性别和年龄组中,均为GⅠ/GⅡ组诺如病毒检出率最高,A组轮状病毒次之;GⅠ/GⅡ组诺如病毒春季检出率最高(28.33%,68/240),冬季次之(22.50%,54/240);A组轮状病毒冬季检出率最高(25.42%,61/240),春季次之(9.58%,23/240)。结论 GⅠ/GⅡ组诺如病毒和A组轮状病毒是北京市昌平区冬春季散发腹泻病例的主要病原。     

丽水市食源性腹泻患者诺如病毒感染检测分析

目的探讨丽水市食源性腹泻患者中诺如病毒的流行情况、分布特征及基因型。方法采用实时逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)法对丽水市2014年7月-2015年6月共计417例食源性腹泻患者的粪便进行检测。结果诺如病毒RNA阳性61例,检出率为14.63%(61/417),其中GⅠ型2例,占3.28%(2/61),GⅡ型59例,占96.72%(59/61)。丽水市诺如病毒主要在秋、冬季高发,阳性患者主要分布在5岁~组、25岁~组。结论诺如病毒是丽水市食源性腹泻的重要病原体,以GⅡ型为主,流行具有季节性,5岁~45岁有较高的阳性分布。     

天津市病毒性腹泻婴幼儿诺如病毒感染调查

为调查天津市秋冬季婴幼儿腹泻患儿中诺如病毒(Norovirus,No Vs)的感染情况,收集2009年10—12月天津市儿童医院住院部的319例疑似病毒性腹泻婴幼儿的粪便标本,采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测Nov的衣壳蛋白基因后,将部分阳性PCR产物测序,通过Genbank的Blast比对和系统发育树分析,推断各毒株型别。结果显示,在319件标本中,Nov的PCR阳性标本60件(GⅡ型59件,GⅠ型1例),检出率为18.81%。将24件PCR阳性产物测序和分析,1株为No V GⅠ型;23株为Nov GⅡ型,且GⅡ-4/2006b有15株,GⅡ-3有2株。感染Nov的患儿多为2岁以下且无性别差异。提示Nov是天津市秋冬季婴幼儿病毒性腹泻的重要病原体,且2009年仍以GⅡ-4/2006b型毒株流行为主。     

广州市市售牡蛎诺如病毒污染情况分析

目的了解广州市市售牡蛎中诺如病毒(Norovirus)的污染状况和污染浓度,为预防食源性疾病和诺如病毒风险监测和安全评估提供基础数据。方法用实时荧光定量PCR方法进行诺如病毒核酸检测,并对阳性样品进行诺如病毒定量分析。结果242份样品中检出诺如病毒阳性样品42份,阳性率为17.36%,检出GI阳性的样品3份,检出GII阳性的样品42份。诺如病毒污染牡蛎的时间以冬春季为主,1月份出现高峰,阳性率为72.73%(16/22)。批发市场样品阳性率为17.20%(27/157),农贸市场样品阳性率为17.65%(15/85)。42份阳性样品诺如病毒的污染浓度为3.13×10^(2)~2.17×10^(5)copies/g(消化腺)。结论广州市市售牡蛎中诺如病毒的阳性率及病毒浓度比较高,必须加强监测及监管,宣传正确烹饪方法,避免引起诺如病毒食源性疾病及疫情暴发。     

湖州市散发急性胃肠炎病例诺如病毒检测结果分析

目的分析湖州市散发急性胃肠炎病例诺如病毒感染的分子流行病学特征。方法选取2014年7月—2015年6月湖州市某哨点医院873例散发急性胃肠炎病例为研究对象,采用实时荧光定量RT-PCR方法对病例粪便标本进行诺如病毒核酸检测,选取部分阳性标本进行核苷酸序列测定,确定诺如病毒基因型并作流行病学分析。结果 873份腹泻粪便标本,检出诺如病毒核酸阳性256份,阳性率为29.32%;其中GⅠ型2份,GⅡ型254份。选取核酸浓度较高的169份PCR扩增阳性产物进行序列分析,结果显示:2株GⅠ型诺如病毒分属于GⅠ.7和GⅠ.Pb/GⅠ.6基因型;167株GⅡ型诺如病毒共存在10种基因亚型,以GⅡ.P17/GⅡ.17(65.27%)和GⅡ.Pe/GⅡ.4(28.74%)基因型为主,其他基因型有GⅡ.21、GⅡ.3、GⅡ.2、GⅡ.6、GⅡ.7、GⅡ.13、GⅡ.P7/GⅡ.6和GⅡ.P12/GⅡ.4,重组株出现频率高。诺如病毒感染的发病高峰为10月至次年3月。结论诺如病毒是湖州市散发急性胃肠炎病例的主要病原菌之一,其中GⅡ.P17/GⅡ.17型是流行的优势株。     

山东省济宁市病毒性腹泻样本诺如病毒分子流行病学与基因特征分析

目的 了解山东省济宁市诺如病毒的分子流行病学特征及诺如病毒的优势基因型,为诺如病毒感染防控提供科学依据。方法 按照《山东省病毒性腹泻监测方案》,2018年1月-2020年12月从山东省济宁市每县(市、区)每月采集3～5份病毒性腹泻标本,进行流行病学调查,采用Real time RT-PCR方法检测诺如病毒GI/GⅡ组,对阳性样本进行基因型别鉴定。结果 共采集粪便标本1 230份,诺如病毒阳性165份(其中GⅠ8份、GⅡ157份),检出率为13.41%(165/1 230)。每年除2月份外,其他月份均检出诺如病毒,以6月、7月检出率高。基因型分别为GⅡ.4型25份,占32.05%;GⅡ.2型18份,占23.08%;GⅡ.6型14份,占17.95%;GⅡ.3型13份,占16.67%。3年间优势毒株不同,2018年为GⅡ.3型9份,占69.23%;2019年为GⅡ.2型14份,占43.75%;2020年为GⅡ.4型17份,占53.13%。结论 山东省济宁市诺如病毒感染6月和7月流行强度较强,以GⅡ组为主,基因型存在多样性,处于动态变化中,以GⅡ.2[P16]型和GⅡ.4[P31]型为主要型别...     

2015-2016年福建省市售牡蛎贻贝中诺如病毒污染情况

目的了解福建省市售牡蛎贻贝中诺如病毒污染情况,为食品中诺如病毒风险评估提供数据支持。方法分离牡蛎贻贝消化腺,研磨至匀质,加磷酸盐缓冲液及蛋白酶K进行前处理。提取病毒核酸并采用实时荧光定量PCR进行检测,对阳性样本进一步定量分析。结果 2015—2016年采集市售牡蛎及贻贝240份,检出诺如病毒阳性26份,阳性率为10.83%,病毒含量在3.20×103～7.90×10~5 copies/g(消化腺)。GI型阳性16份,GII型阳性22份;GI和GII型皆为阳性8份。结论福建省市售牡蛎贻贝中存在诺如病毒污染现象,需加强监测,开展相关风险评估,以降低诺如病毒引起的食源性疾病负担。     

一起诺如病毒所致急性胃肠炎的病原学调查

目的确定天津市一起水源性急性胃肠炎暴发的致病原。方法采集病例粪便标本,饮用深井水标本,采用荧光定量(Real-time PCR)检测病毒核酸,包括轮状病毒、杯状病毒、星状病毒和肠道腺病毒,阳性标本进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增及测序分析。对粪便标本进行常见肠道致病菌的检测。结果采集粪便标本33份,检出诺如病毒GⅠ型阳性5份(15.2%),诺如病毒GⅡ型阳性12份(36.4%),诺如病毒GⅠ型、GⅡ型均阳性3份(9.1%)。经测序分析1株GⅠ型为GⅠ/14基因型;4株GⅡ型中,2株为GⅡ/8型,1株为GⅡ/6型,1株为GⅡ/2基因型。轮状病毒(A,B,C组)、札如病毒、星状病毒、肠道腺病毒和肠道致病菌检测均为阴性。3份饮水标本中轮状病毒(A,B,C组)、诺如病毒(GⅠ型,GⅡ型)、札如病毒、星状病毒、肠道腺病毒检测均为阴性,常见肠道致病菌检测结果均为阴性。结论本次水源性急性胃肠炎暴发系由诺如病毒GⅠ型/Ⅱ型混合感染引起。