基于pGL-4载体的雌激素受体报告基因实验系统的建立与验证

目的建立和评价一种新的基于pGL-4载体的雌激素受体报告基因实验系统。方法通过瞬时共转染将雌激素受体表达载体、报告基因载体和内参载体转入LLC-MK2细胞,用特定浓度受试物进行染毒并观察其反应。结果 (1)细胞毒性试验显示,除双酚A和壬基酚在100μmol/L时有细胞毒性外,其余受试物在设定浓度未见细胞毒性。(2)雌激素受体α报告基因实验系统最低检测限为1.9×10~(-11)mol/L,雌二醇和己烯雌酚在10~(-8)mol/L分别产生30.7倍和24.1倍对照组的荧光素酶表达,双酚A、壬基酚和染料木黄酮均能诱导该系统荧光素酶的表达,他莫昔芬和染料木黄酮能抑制雌二醇诱导的荧光素酶表达。(3)雌激素受体β报告基因实验系统中,雌二醇和己烯雌酚分别产生对照组14.4倍和5.6倍荧光素酶表达。结论基于pGL-4载体建立的雌激素受体报告基因实验系统有着良好的重复性、灵敏度和特异度,且能检测不同雌激素受体亚型的激动剂和拮抗剂,是一种新的用于内分泌干扰物大通量筛选的报告基因实验系统。     

环境雌激素重组酵母测评系统的建立

目的：通过检测重组酵母中报告基因的表达产物来反映环境雌激素通过雌激素受体介导而产生的拟雌激素作用。方法：用乙酸锂法将本实验室已构建成功的全长人雌激素受体酶母表达载体pGAD-hER和雌激素效应元件（ERE）调控的酵母报告载体pLacZi-2ERE导入酵母细胞中，得到重组酵母YM－ADER－ERE。结果：与对照DMSO相比，加入17β－雌二醇（E2）后YM－ADER－ERE中报告基因lacZ的表达产物β－半乳糖苷酶活性显著升高。用终浓度为10^-15-10^-7mol/L的E2进行实验，E2在YM－ADER－ERE中最大效应EAmax为94．31U，EC50为0.34nmol/L.结论：重组酵 报告基因的表达是雌激素配体依赖的，符合环境雌激素测评系统的设计思想和要求，不表明重组酵母测评系统是成功的。     

引起青蛙畸形的环境内分泌干扰物的初步研究

目的探索研究T市郊区一水沟和CH市一贮水池引起青蛙畸形的环境内分泌干扰物。方法采集出现过大量畸形青蛙的水样 ,经H103树脂浓集 ,浓集水样在经进一步浓缩净化 ,经过衍生化反应 ,反应产物直接用GC/MS测定内分泌干扰物。水样浓集物用环境雌激素酵母测评系统测定其雌激素活性。结果在畸形青蛙的水样浓集物中检出了内分泌干扰物双酚A(5.6×10 -3～1.52μg/L)和壬基酚(0.46～0.58μg/L)。用环境雌激素酵母测评系统检测水样浓集物中雌激素活性为阳性或可疑阳性,其结果与GC/MS测定结果是一致的。结论T市郊区的水沟里和CH市贮水池中出现大量畸形青蛙 ,从环境现场调查和水质化学分析结果看,青蛙畸形可能与环境内分泌干扰物有关     

水中雌激素类内分泌干扰物检测技术研究进展

雌激素类内分泌干扰物可通过食物链放大作用在生物和人体内富集,从而干扰生物体内雌激素的正常分泌,使生物体的生殖功能或免疫功能出现异常,因此雌激素类内分泌干扰物的研究已逐渐成为国际上环境和健康领域的研究热点。本文对近年来国内外水体中雌激素类环境内分泌干扰物的检测分析研究进行了综述,介绍了水样的前处理技术以及雌激素类分泌干扰物的仪器分析和生物学分析方法。     

五氯酚的内分泌干扰作用研究进展

五氯酚钠是我国血吸虫流行地区常用的杀灭血吸虫中间宿主钉螺的药物，大量的喷洒污染了土壤，水源以及动植物，并可通过食物链进入人体。近年来有关五氯酚及其钠盐的内分泌干扰作用的研究逐渐增多，整体动物试验研究表明五氯酚可以干扰机体甲状腺素的正常功能，但对雌激素和睾酮功能的影响并不明显，受体结合试验表明五氯酚能抑制酵母人孕酮受体活性，抑制性激素和性激素受体的结合，流行病学资料也提示五氯酚可能干扰妇女正常的内分泌功能，从而影响子女的生长发育，这些研究表明五氯酚对人体正常的内分泌功能有着一定的影响，但要了解五氯酚内分泌干扰作用的确切机制，确证其为一种内分泌干扰物尚需要更多的研究证据。     

雌激素受体在促进生殖系统癌细胞增殖和转化中的作用

环境内分泌干扰物是一类广泛存在于环境中、进入机体后模拟激素作用干扰内分泌系统导致疾病的外源性物质。近年来,生殖系统雌激素依赖性疾病发病率逐年增加,如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等。研究表明,环境内分泌干扰物暴露可以增加生殖系统癌症的发生率。本文对多种环境内分泌干扰物[壬基酚（nonylphenol,NP）、辛基酚（octylphenol,OP）、双酚A（bisphenol,BPA）等]通过雌激素受体影响类固醇激素的合成、氧化损伤、影响细胞信号传导等途径刺激肿瘤生长,以及诱导/抑制肿瘤细胞上皮-间充质转化的情况进行了综述。     

环境雌激素和癌症

近年来科学家们将环境中能对机体健康产生不利影响或使其后代内分泌功能发生改变的外源性化学物质称为“环境内分泌干扰物 (environmental endocrinedisruptors,EEDs)”,即这些环境外来化学物质可通过影响体内天然激素的产生、合成、释放、转运、代谢和 /或清除 ,与相应的受体结合并随之在细胞内产生效应 ,干扰血液中激素正常水平的维持 ,模拟或干扰天然激素的生理、生化作用。在“环境内分泌干扰物”中有一类化学物质具有激活或抑制正常内分泌功能 ,或具有雌激素样活性 ,或具有阻断雄激素效应 ,从而破坏其维持机体稳定性和调控作用的物质…     

环境内分泌干扰物与乳腺癌的关系

环境内分泌干扰物广泛存在于食品包装材料、化妆品等及环境介质中。该文对3种常见环境内分泌干扰物(双酚A、邻苯二甲酸酯、多氯联苯)与乳腺癌关系的相关研究进行综述,包括其在环境中的分布、摄入途径、暴露剂量、在人体内的分布、对乳腺癌发生发展影响的流行病学研究,并列举诱发乳腺癌的相关机制,如基因和表观遗传层面的调节机制、通过雌激素受体(ER)介导的拟雌激素效应、诱导产生活性氧、诱导非ER介导的信号通路激活以及微环境调节等,并对未来相关毒理学和分子机制研究及流行病学研究方向进行展望。     

环境内分泌干扰物高通量筛选方法

环境内分泌干扰物对野生动物和人类存在着潜在的危害。由于需要对环境中存在的大量化学物进行内分泌干扰活性评价 ,环境内分泌干扰物高通量筛选方法受到研究者们的关注。目前在环境内分泌干扰物研究领域的高通量筛选试验主要包括报告基因试验、DNA阵列试验、阵列玻片试验和非放射性内分泌干扰物结合试验等 ,本文主要对这些试验作一简要综述。     

040 环境内分泌干扰物高通量筛选方法

环境内分泌干扰物对野生动物和人类存在着潜在的危害.由于需要对环境中存在的大量化学物进行内分泌干扰活性评价,环境内分泌干扰物高通量筛选方法受到研究者们的关注.目前在环境内分泌干扰物研究领域的高通量筛选试验主要包括报告基因试验、DNA阵列试验、阵列玻片试验和非放射性内分泌干扰物结合试验等,本文主要对这些试验作一简要综述.     

改良的环境化学物雌激素干扰活性检测方法的建立和应用

目的建立雌激素受体(ER)介导的荧光素酶(Luc)报告基因试验方法,为化学物拟(抗)雌激素活性的检测提供研究工具。方法将受雌激素反应元件调控的荧光素酶报告基因质粒pERE-aug-Luc和表达ER的质粒rERα/pCI转染Vero细胞,建立ER报告基因试验。以雌激素(E2)为阳性对照检测该方法的筛选效率。Vero转染后用受试化学物染毒,根据Luc表达的变化,判断化学物的雌激素干扰活性。结果雌激素对转染两种质粒的Vero的诱导作用表现为:10-7 mg/L的雌激素显著诱导Luc的表达,最大诱导倍数为100.959倍,半数效应浓度EC50为3.57×10-6 mg/L。化学物BPA可诱导Luc的表达,其中在0.01mg/L时即可显著性的诱导Luc表达,未发现BPA具有雌激素拮抗作用。结论本研究建立的ER报告基因试验具有较高的灵敏度和特异性,化学物BPA具有拟激素活性。     

快速筛选雌激素类环境激素的方法探讨

目的 开发快速筛选环境激素的检测方法。方法 将构建的表达人α雌激素受体的载体pcDNA3.1-ER和含雌激素受体反应元件的荧光素酶报告基因载体pGL3-tk-ERE共转染到HeLa细胞中，以雌二醇或被检样品双酚A诱导雌激素受体表达后检测荧光素酶活性。结果 报告基因载体中的荧光素酶的表达受雌激素受体反应元件的调控，且在一定浓度范围内荧光素酶的活性与雌二醇的加入量成线性关系；疑为有雌激素样作用的双酚A也显著诱导荧光素酶基因的表达。结论 本方法经济、简便、快速，有望用于快速筛选疑有雌激素样作用的化学物质。     

环境内分泌干扰物-双酚A与女性生殖健康关系的研究进展

双酚-A(BPA)等环境内分泌干扰物是一类普遍存在于日常生活中的外源性化学物质,可以结合人体内不同的激素受体,通过多种机制干扰内源激素的功能,导致诸多疾病发生。本文就非持久性环境内分泌干扰物-BPA对女性生殖系统的作用及生殖健康的影响进行了分析和总结,并提出了对今后研究的启示。     

经济合作与发展组织新颁布的内分泌干扰物筛选试验方法简介

<正>经济合作与发展组织(organization for economic cooperation and development,OECD)从1998年开始修订和制定了一些筛选潜在内分泌干扰物的试验方法,并于2009年颁布了最新一批的内分泌干扰物筛选试验方法,内分泌干扰物的测试方法主要有几个水平,包括整体动物、组织器官、细胞、基因等。本文主要介绍大鼠(抗)雄性性征Hershberger短期生物筛选试验和稳定转染的人雌激素受体α转录活性试验,分别采用整体动物和细胞进行体内和体外检测化学物质的类激素作用,为判定该化学物质是否属于内分泌干扰物提供一定依据。     

典型内分泌干扰物的雌激素效应测定

目的建立一种测定典型内分泌干扰物(EDCs)的雌激素效应定量分析方法。方法应用重组人雌激素受体(h-ER)基因酵母菌评价方法,结合手持式光电比色计现场检测技术,对水环境中几种典型EDCs物质的雌激素活性进行筛检。结果应用改进的测定方法检测了五氯酚、三氯酚、氯丹、硫丹、狄氏剂等农药类EDCs物质的雌激素活性,结果表明该测定方法具有操作简单,实验周期短,费用经济,且能实现定量检测〔如0.5μg/LTCP的雌激素活性相当于(1.50±0.37)×10-10mol/L的雌二醇的活性〕。结论改进后的重组人雌激素受体(h-ER)基因酵母菌评价方法,结果准确,操作方便,实现定量,值得推广应用。     

职业性内分泌干扰物对职业人群的生殖危害

环境中持续存在的可干扰野生动物和人类内分泌系统结构和功能 ,并产生不良效应的化学物 ,称为内分泌干扰物 (ｅｎｄｏｃｒｉｎｅｄｉｓｒｕｐｔｏｒｓ ,ＥＤｓ)。环境雌激素 (ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｅｓｔｒｏｇｅｎｔｓ)是具有雌激素样活性 ,可模拟内源性雌激素的生理作用 ,或具有拮抗雄激素效应的一类外源性化学物质。环境雌激素是内分泌干扰物中的一大类 ,它们可对机体产生不良影响 ,干扰内分泌系统 ,影响生殖和发育 ,影响神经系统 ,破坏免疫系统功能以及诱导肿瘤发生。近年来 ,不断报道野生动物和人类生殖发育异常现象 ,学者们推测…     

环境内分泌干扰物的雌激素受体毒性研究进展

环境内分泌干扰物(environmental endocrine disruptors。EEDs)对机体的影响可由于内源性激素的分泌改变。也可继发于受体作用机制的改变，或者是来源于相应器官的损害等。以下主要介绍EEDs对机体的影响是继发于受体作用机制的改变。己知的EEDs所影响的受体较多。但目前研究比较多的还是集中于雌激素受体(estrogen receptor，ER)。本文就EEDs与ER作用的相关蛋白、作用机制。受体毒性研究方法等进行论述。     

应用酵母雌激素试验评价环境样品的雌激素受体活性作用

由于雌激素类物质化学结构的多变性，只有通过生物试验提供的相关活性测定，才能对环境样品的雌激素类作用做出适当定性分析。为此，作者建立了一种快速、通用的酵母报告基因雌激素试验（ＹＥＳ）。该法可用于任何可溶于二甲亚砜的样品，２ｈ完成测定。迄今我们采用了酵母菌株Ⅰ（而非传统的菌株Ⅱ／Ⅲ），该菌株既不表达完整的雌激素受体（ＥＲ），也不携带与雌激素对应的ＤＮＡ片段所操纵的报告基因。菌株Ⅰ表达的是由人类ＥＲ的激素结合区与ＧＡＬ４－ＤＮＡ结合区熔合的一种蛋白，当结合同族化合物时，该蛋白能激活β－半乳糖苷酶。对于…     

环境内分泌干扰化学物的甄别方法和评价体系

环境内分泌干扰化学物 (environmentalendocrinedisruptingchemicals ,EEDCs)对人类和野生动物健康的危害已是不争的事实。从预防医学的观点出发 ,对环境中各种化学物的内分泌干扰活性进行甄别 (screeningandtesting) ,以确定该化学物(或混合物 )是否具有干扰生物机体内分泌活性的作用 ,即是否属于内分泌干扰物 ?这对于制定保护生态环境和人类健康的预防措施和决策具有重要意义。在环境内分泌干扰物的甄别方法研究中 ,目前尤其应注意的是 :(1)随着研究的不断深入和扩大 ,EEDCs的作用已不仅仅局限于由激素受体介导的对激素功能的激活或阻…     

环境内分泌干扰物与代谢综合征关系研究进展

越来越多的实验和流行病证据表明多种环境内分泌干扰物(endocrine disrupting chemicals,EDCs)对代谢综合征的发生起作用.目前的研究认为其暴露与2型糖尿病(T2D),高血压,肥胖,多囊卵巢综合症发生有关,大多数ECDs有拟雌激素样作用而干扰内分泌系统,而且对人体发育,生殖,神经,心血管,代谢 免疫产生有害作用.日常生活中人们主要通过摄食,呼吸,皮肤吸收暴露环境内分泌干扰物,环境内分泌干扰物主要包括双酚A ,壬基酚,邻苯二甲酸,二噁英以及类似物,多氯联苯.本文的重点讨论其代表物其对肥胖,2型糖尿病,多囊卵巢综合征(PCOS)发病的作用,依据近几年国内外的文献对这一领域的研究成果进行综述.