Pseudomonas sp.W2生长及对双酚A降解条件的研究

目的研究双酚A（BPA）降解菌（Pseudomonas sp.W2）的生长及对BPA的降解条件,为今后环境中BPA污染的实际治理提供实验依据。方法分别采用紫外扫描光谱分析和紫外光谱分析对Pseudomonas sp.W2菌株和BPA进行定量。分别绘制Pseudomonas sp.W2菌株的生长曲线及对BPA的降解曲线,并对其在不同的碳源、氮源、pH值、温度、通气情况下的生长情况及对BPA的降解情况进行分析。结果在一定条件下（25-35℃,pH值为6-8,250ml摇瓶中的培养基F装液量为50-100ml,有一定的碳源、氮源）,Pseudomonas sp.W2的生长及对BPA降解作用较好。结论Pseudomonas sp.W2菌株的生长及对BPA的降解的条件较宽,这对其在实际中的应用具有一定意义。     

环境雌激素基因重组酵母测评系统的应用

检测和评价环境雌激素及其它内分泌干扰物，是进行内分泌干扰物研究首先要解决的关键问题之一。根据天然雌激素的主要分子作用机制，在酵母中表达有活性的人雌激素受体(hER)蛋白，同时将报告基因置于雌激素效应元件(ERE)控制之下并导入酵母细胞中，通过检测报告基因的表达产物来反映环境雌激素通过雌激素受体介导而产生的拟雌激素作用。我所何世华博士用分子生物学方法基因重组出了用于检测雌激素类物质的酵母菌，并建立了环境雌激素酵母测评系统。现用该评价系统对不同样品进行检测，结果如下。     

水体中环境雌激素的检测及去除

20世纪 90年代以来 ,环境内分泌干扰物日益引起了社会各界的极大关注。环境内分泌干扰物是指可以干扰人或动物正常的内分泌功能 ,造成人或动物性别的改变或发育畸形的一大类物质。环境雌激素是环境内分泌干扰物中最大 ,也是最重要的一类物质〔1,2〕。对环境雌激素的研究已经成为人类探索生殖障碍、发育异常、癌症等原因的热点之一。它们的污染被认为与近年来隐睾症、尿道下裂、子宫内膜异位、阴阳人、发育不全、精子数目减少及活性下降等发病率的升高有关〔1～ 3〕。在自然界 ,环境雌激素的污染被认为是动物生殖功能异常 ,雌雄同体率升高 ,…     

地表水和自来水中环境雌激素活性物质的检测

目的了解我国地表水和自来水的环境雌激素污染情况。方法应用本实验室构建的基因重组酵母检测系统,对用H103大孔吸附树脂吸附的水样富集物进行环境雌激素活性检测。结果本次所检测的50％的地表水样和25％的自来水样检出环境雌激素活性物质,一些水源水活性较高,其水样富集物有显著的剂量-效应关系,仅100ml水样富集物即呈现阳性反应。结论我国的一些地表水中已受到环境雌激素类物质的污染,而现行的城市自来水处理系统不能有效地去除水源水中环境雌激素活性物质,致使城市自来水中也含有环境雌激素活性物质。     

雌激素效应元件调控的酵母报告载体的构建

目的：为建立环境雌激素基因重组酵母测评系统，构建雌激素效应元件（estrogen responseelements，ERE）调控的酵母报告载体。方法：人工合成ERE寡核苷酸片段，先与经SalI酶切和CIAP去磷酸化处理的pLacZi连接成pLacZi-1ERE，再与经XhoI酶切和CIAP去磷酸化处理的pLacZi-1ERE连接，得到pLacZi-2ERE。结果：序列分析结果表明，构建成功2个串联拷贝ERE调控的酵母报告载体。结论：该文构建成功ERE调控的酵母报告载体，为进一步建立环境雌激素基因重组酵母测评系统奠定了基础。     

环境雌激素重组酵母测评系统的建立

目的：通过检测重组酵母中报告基因的表达产物来反映环境雌激素通过雌激素受体介导而产生的拟雌激素作用。方法：用乙酸锂法将本实验室已构建成功的全长人雌激素受体酶母表达载体pGAD-hER和雌激素效应元件（ERE）调控的酵母报告载体pLacZi-2ERE导入酵母细胞中，得到重组酵母YM－ADER－ERE。结果：与对照DMSO相比，加入17β－雌二醇（E2）后YM－ADER－ERE中报告基因lacZ的表达产物β－半乳糖苷酶活性显著升高。用终浓度为10^-15-10^-7mol/L的E2进行实验，E2在YM－ADER－ERE中最大效应EAmax为94．31U，EC50为0.34nmol/L.结论：重组酵 报告基因的表达是雌激素配体依赖的，符合环境雌激素测评系统的设计思想和要求，不表明重组酵母测评系统是成功的。     

引起青蛙畸形的环境内分泌干扰物的初步研究

目的探索研究T市郊区一水沟和CH市一贮水池引起青蛙畸形的环境内分泌干扰物。方法采集出现过大量畸形青蛙的水样 ,经H103树脂浓集 ,浓集水样在经进一步浓缩净化 ,经过衍生化反应 ,反应产物直接用GC/MS测定内分泌干扰物。水样浓集物用环境雌激素酵母测评系统测定其雌激素活性。结果在畸形青蛙的水样浓集物中检出了内分泌干扰物双酚A(5.6×10 -3～1.52μg/L)和壬基酚(0.46～0.58μg/L)。用环境雌激素酵母测评系统检测水样浓集物中雌激素活性为阳性或可疑阳性,其结果与GC/MS测定结果是一致的。结论T市郊区的水沟里和CH市贮水池中出现大量畸形青蛙 ,从环境现场调查和水质化学分析结果看,青蛙畸形可能与环境内分泌干扰物有关     

环境中双酚A的污染及降解去除的研究进展

近10年来随着科学与社会的发展，环境雌激素污染日益引起人们的关注。双酚A是环境雌激素的一种，用途广泛，但具有多方面的毒性。对其毒理、污染及降解去除的研究已经成为国际上的研究热点。该文拟对上述几方面的研究进展情况作一简要介绍。     

全长人雌激素受体cDNA的克隆及酵母表达载体的构建

目的 建立环境雌激素基因重组酵母测评系统,将全长人雌激素受体cDNA在酵母中克隆并表达。方法 用EcoRI和SacI从pSG5/HEG0质粒上切下hER cDNA,定向插入pUC18克隆载体中,构建成重组质粒pUC－hER;再用EcoRI和BamHI切下hER cDNA,将其连接到pGAD424酵母表达载体上。结果 构建成功重组酵母表达载体pGAD-hER ,序列分析表明插入处接头和读框完全正确。结论 本文构建成功全长人雌激素受体cDNA的酵母表达载体pGAD-hER,为进一步建立环境雌激素基因重组酵母测评系统奠定了基础。