弓形虫STAg不同途径免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答动态变化

目的动态观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻和皮下免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答。方法6周龄BALB/c小鼠90只随机分为3组,分别以20μg STAg滴鼻或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不做处理。末次免疫后1、2、3、4和5周,每组随机处死6只小鼠。ELISA法测定小肠冲洗液sI-gA和血清IgG,分离并计数小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)和脾淋巴细胞。结果对照组小鼠小肠冲洗液sIgA水平和IEL数及血清IgG水平和脾淋巴细胞数均维持在较低水平。滴鼻免疫组小鼠小肠冲洗液sIgA水平升高,与对照组比较差异有统计学意义(FsIgA=10.074,FIEL=14.747,P0.01),其中第5周sIgA水平、第2~5周IEL数量与皮下免疫组比较差异有统计学意义(FsIgA=7.862,FIEL=9.807,P0.05)。皮下免疫组小鼠血清IgG水平和脾淋巴细胞数均升高,与对照组比较差异有统计学意义(FIgG=8.207,F脾细胞=11.209,P0.05),第5周脾淋巴细胞数与滴鼻组比较差异有统计学意义(F=6.826,P0.05)。结论20μg STAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答水平优于同剂量的皮下免疫,同时也诱导了较高水平的系统免疫应答。皮下免疫可诱导较高水平的系统免疫应答,但其诱导的黏膜免疫应答较弱。     

构建基于生理学特点的多元化PBL教学模式

基于生理学课程特点,构建包括病例模式、核心问题模式、情景故事模式等的多方位PBL教学模式,涉及到教学载体构建、教材资料编写、课堂教学程序和效果评价体系等环节。     

东亚钳蝎毒诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 研究东亚钳蝎毒（BMK）在体外诱导白血病细胞株K562凋亡的作用。方法 流式细胞仪检测细胞凋亡率，应用RT．PCR检测野生型p53基因的表达。结果 经BMK作用于细胞后，细胞的总凋亡率均有升高；RT—PCR检测提示经BMK作用后的K562细胞p53基因的表达上调。结论 BMK能诱导K562细胞凋亡，可能促进P53基因表达上调是其机制之一。     

氯离子通道CIC家族的结构特点与功能研究

氯离子作为机体内含量最多的阴离子，通过跨膜转运和阴离子通道参与各种生物功能。氯离子通道通过多种细胞存在的跨膜浓度梯度，使氯离子参与细胞的体积调节、pH及静息电位和兴奋的调节、细胞分泌和激素作用等各种生理过程。     

氯离子通道ClC家族的结构特点与功能研究

氯离子作为机体内含量最多的阴离子,通过跨膜转运和阴离子通道参与各种生物功能.氯离子通道通过多种细胞存在的跨膜浓度梯度,使氯离子参与细胞的体积调节、pH及静息电位和兴奋的调节、细胞分泌和激素作用等各种生理过程[1].     

刚地弓形虫活化蛋白激酶C受体1基因的克隆和原核表达及纯化和抗原性分析

目的 克隆刚地弓形虫活化蛋白激酶C受体1(TgRACK1)基因,原核表达、纯化TgRACK1,并分析其抗原性.方法 制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgRACK1基因全长编码序列(GenBank登录号:AY547291)的开放阅读框设计引物并进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pGEX-6p-1载体,重组质粒转化大肠埃希菌DH5α,阳性菌落经菌液PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定.将重组质粒pGEX-6p-1-TgRACK1转化至大肠埃希菌BL21(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物;分别以抗GST标签抗体和兔抗弓形虫血清为一抗,免疫印迹(Western blotting)分析鉴定重组蛋白及其抗原性.重组融合蛋白经GST琼脂糖凝胶亲和纯化,纯化蛋白经SDS-PAGE分离,考马斯亮蓝染色结合凝胶成像系统分析其纯度.结果 RT-PCR扩增产物约为970 bp,重组质粒pGEX-6p-1-TgRACK1构建成功.经IPTG诱导获得相对分子质量约63 kDa的可溶性重组蛋白.诱导表达的蛋白质为带GST标签的重组融合蛋白,且能被兔抗弓形虫血清识别.亲和纯化后获得纯度大于95％的重组TgRACK1蛋白质.结论 克隆得到弓形虫活化蛋白激酶C受体1基因,原核表达并纯化出该基因编码的蛋白质,且该重组蛋白具有抗原性.     

慢性间断性酒精暴露大鼠海马组织MMP-9的表达及神经元突触超微结构改变

目的探讨慢性间断性酒精暴露(CIE)大鼠海马组织中MMP-9的表达水平及海马区突触超微结构的改变。方法将42只6周龄雄性SD大鼠随机分为染毒组和对照组,每组21只。染毒组大鼠间断性灌胃给予酒精4 g/(kg·d),灌胃2 d,戒断2 d,直至第28天。对照组大鼠给予等热量麦芽糖7 g/(kg·d)。实验期间测量大鼠体重、顶空气相色谱法测定血清酒精浓度。第0、26和28天时,每组随机处死7只大鼠,取海马组织,实时荧光定量PCR、免疫蛋白印迹法检测海马组织MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平,透射电镜观察海马区突触超微结构并定量分析突触结构参数。结果染毒组大鼠血清酒精浓度达到810 mg/L,对照组血清未检出。暴露第26和28天时,与对照组相比,染毒组海马中MMP-9 m RNA的表达水平明显升高(P0.05)。染毒组海马中MMP-9蛋白的表达量显著高于对照组(P0.05),active MMP-9的表达量在第26和第28天时分别升高2.46倍和2.16倍,pro MMP-9蛋白表达量第26和第28天时分别升高1.65倍和1.49倍,总体(total)-MMP-9蛋白表达量在第26和第28天时较对照组分别升高2.07倍和1.82倍。透射电镜结果显示,与对照组相比,染毒组海马突触后膜致密物厚度、突触界面曲率明显增加(P0.05),突触间隙略增大,但差异无统计学意义。结论慢性间断性酒精暴露可能通过改变突触超微结构从而导致大鼠海马区MMP-9表达升高。本研究为探索MMP-9在酒精依赖过程中的作用提供了新的实验依据。     

缺失第8外显子的SIRT1剪接体和SIRT1全长在293T细胞氧化损伤中的不同作用

目的 探讨缺失第8外显子的沉默信息调节因子1（SIRT1）剪接变异体(SIRT1-ΔExon8) 和SIRT1全长(SIRT1-FL)在氧化应激损伤中可能发挥的不同作用。方法 在人胚肾293T细胞分别转染SIRT1-ΔExon8干扰质粒和SIRT1-FL过表达质粒,给予过氧化氢（H2O2）诱导氧化应激损伤模型,应用CCK-8检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定法检测细胞的损伤程度,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内活性氧簇(ROS)水平,Real-time PCR法检测细胞SIRT1-ΔExon8和SIRT1-FL mRNA的水平。结果 H2O2(50~800 μmol/L)可剂量依赖性地诱导细胞氧化应激损伤,包括细胞活力下降,LDH释放增加,细胞凋亡和胞内ROS含量增加,并引起SIRT1-FL mRNA水平降低和SIRT1-ΔExon8 mRNA表达增加;此外,过表达SIRT1-FL或干扰SIRT1-ΔExon8也可以部分抑制H2O2(400 μmol/L)引起的细胞氧化应激损伤。结论 SIRT1-ΔExon8可能促进细胞的氧化应激损伤,而SIRT1-FL则发挥相反的作用。