HBV "a"决定簇突变及其对宫内传播影响的研究

目的探讨孕妇乙型肝炎病毒感染者“a”决定簇突变及其对HBV宫内传播的影响。方法收集2001年11月至2004年7月在太原市传染病医院妇产科住院的HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血,选取其中部分HBV DNA阳性标本进行nPCR产物直接测序,分析HBV“a”决定簇变异情况,比较HBV“a”决定簇突变组孕妇与未突变组孕妇HBV宫内感染率的差别。结果307例血清HB-sAg阳性孕妇中,HBeAg阳性119例,HBV DNA阳性126例。309例新生儿中,HBsAg、HBV DNA任一项阳性者69例,新生儿HBV宫内感染率为22.33%(69/309)。经过测序的49份标本(41份孕妇标本、8份婴儿标本)中,HBV基因型以C型、B型为主,D型只发现1份。49份标本(含1份假阳性)中共有7份标本(6份孕妇标本、1份婴儿标本)(9个位点)发生了HBV“a”决定簇突变,突变检出率为14.58%(7/48);突变组和未突变组的HBV宫内感染率分别为50.00%(3/6)、40.00%(14/35),差异无统计学意义(χc2=0.000 120,P>0.05);发生了HBV宫内感染的母儿之间,HBV序列同源性在98.67%以上,其中1例新生儿所携带HBV的aa145的密码子发生了同义突变(GGA→GGC)。结论对于感染HBV的孕妇而言,无论携带HBV“a”决定簇变异株还是野生株,未发现其新生儿发生HBV宫内感染的可能性有差别;宫内传播过程中存在S基因“a”决定簇变异株。     

乙肝疫苗免疫失败者中乙型肝炎病毒感染及S基因变异研究

目的研究乙肝疫苗免疫失败者中乙型肝炎病毒(HBV)隐匿性感染及编码S基因(surface)变异状况。方法选择乙肝疫苗免疫后抗-HBs阴性的儿童血清标本167份,利用聚合酶链反应(PCR)扩增HBVS基因片段,对PCR阳性产物进行脱氧核糖核酸(DNA)序列测定和基因片段分析。结果在167份标本中,HBV核酸阳性63份,在测序42份标本中11份标本S基因片段出现氨基酸变异,共有5个氨基酸位点发生变异,其中一个在"a"决定簇片段内。结论免疫失败儿童HBV隐匿性感染率较高,HBVS基因存在不同位点的变异。     

乙型肝炎病毒隐匿性感染的分子机制研究

目的从基因变异角度研究HBV隐匿性感染的分子机制。方法不明原因的肝炎患者104例,收集临床资料及血清,套式PCR扩增HBVS、X、C基因,检测隐匿性HBV感染者。HBVS、X区扩增产物测序和变异位点分析,发现可能的和HBV隐匿性感染有关的变异位点,分析HBV基因变异在HBV隐匿性感染中的作用。结果检测出隐匿性HBV感染13例。S基因区未发现有义突变,X基因区及重叠核心启动子区、增强子Ⅱ区发现多位点变异,推测与HBV隐匿性感染有关。结论X基因区及重叠核心启动子区、增强子Ⅱ区多位点变异可能是HBV隐匿性感染的分子基础。     

乙肝疫苗阻断HBV母婴传播免疫失败与母子HBV基因分型及S基因变异的相关性

目的对照研究乙肝疫苗免疫阻断失败的儿童和母亲血清HBV DNA水平、基因型及病毒S基因变异情况,探讨导致乙肝疫苗阻断母婴传播免疫失败的病毒学因素。方法通过实时定量PCR(RQ-PCR)法检测母子血清HBV-DNA含量;PCR法扩增出母子HBV DNA S基因片断,纯化后进行基因测序。结果7对母子共15份血清HBV DNA均为高水平(>1.0×108copy/ml)。其中2对属于基因B型,5对属于C型。母子间基因序列同源性为99%~100%,HBV-S基因核苷酸测序结果与选定的标准株进行比较,存在多个位点的变异,特别是“a”决定簇的变异。核苷酸变异影响病毒氨基酸的表达。结论乙型肝炎疫苗阻断HBV母婴传播失败的原因可能与HBV变异株的感染有关,特别是“a”决定簇的变异,变异株来源于母亲。     

HBsAg与抗-HBs同时阳性者体内S基因序列分析

目的 报告乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）／表面抗体（抗－HBs )同时阳性患血清中S区编码碱基序列及基氨基酸序列的为异特点。方法 以adr亚型的HBV基因序列为依据，设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自2例HBsAg/抗－HBs均阳性的患体内扩增的HBV全S基因片段，克隆入pGEMTasy质粒，DNA测序确定病毒的变异特点。结果 测序结果发现双阳患与HBsAg阳性患血清中的HBV全S基因比较，核苷酸序列有4个核苷酸位点（0．3％）的替换突变，表面抗原氨基酸序列无特异性替换突变，但HBV多聚酶的间隔区氨基酸序列有3个位点的特异性替换突变。结论 HBV长期携带体内有HBV准种共存：HBsAg与抗－HBs同时阳性的原因不能归因于病毒的变异，应归结于患免疫系统的个体化反应。     

无偿献血者隐匿性乙肝感染病毒变异检测分析

目的通过对隐匿性乙肝感染者S区基因变异位点的分析及相关蛋白空间结构的预测,探讨无偿献血者隐匿性乙肝感染的分子生物学机制。方法对80例HBs Ag-/HBV DNA+无偿献血者进行血清学补充试验,并对追踪确认的隐匿性乙肝感染者,应用巢氏PCR技术对S区基因进行扩增和序列测定,并将测得基因片段与NCBI Gen Bank数据库做序列比对分析,明确突变位点,同时进行蛋白模型构建,进行空间结构的分析。结果 HBs Ag-/HBV DNA+无偿献血者血清学检测模式多样,以抗-HBc阳性为主,追踪试验确认4例隐匿性乙肝感染者,有3例巢氏PCR扩增出S区基因序列,2例发生突变,蛋白预测提示氨基酸改变可能影响抗原决定簇空间构象,造成抗体结合位点改变或识别能力减弱。结论隐匿性乙肝感染者S区容易发生变异,尤其是a抗原决定簇氨基酸的改变导致蛋白质空间构象的变化,可能是造成隐匿性乙肝发生的原因之一。     

广东省乙型肝炎病毒S基因变异与乙型肝炎疫苗免疫失败关系探讨

目的研究广东省儿童乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)携带者中HBV S基因变异对乙肝疫苗免疫效果的影响。方法收集乙肝疫苗免疫后HBsAg阳性的儿童血清标本36份,利用聚合酶链反应(PCR)扩增HBV S基因片段,对PCR产物进行脱氧核糖核酸(DNA)序列测定。结果在36份标本中,HBV核酸阳性26份,完成测序23份,11份标本S基因片段出现氨基酸变异,其中4份在“α”决定簇片段内出现了氨基酸变异,2种变异形式未见报道,结论广东省免疫失败儿童存在不同位点的HBV S基因变异,可能是导致部分儿童免疫失败的原因。尚未出现稳定的变异株,对现用乙肝疫苗的免疫效果影响不大。     

“a”决定簇变异对慢性乙型肝炎患者HBsAg与HBsAb表达的影响

目的研究＂a＂决定簇变异对慢性乙型肝炎患者乙型肝炎表面抗原（HBsAg）与表面抗体（HBsAb）表达的影响。方法收集HBsAg阳性持续6个月以上的CHB患者866例，其中789例（91．1％）仅HBsAg阳性，77例（8．9％）患者血清HBsAg与HB-sAb均阳性。从77例血清HBsAg与HBsAb双阳患者中，选择14例血清HBsAg与HBsAb双阳患者为Ⅰ组。789例HBsAg阳性患者中随机选择12例HBsAg单独阳患者为Ⅱ组对照。对HBsAg编码基因进行扩增和克隆，每例样本至少克隆15个后进行测序分析。结果Ⅰ组患者S蛋白氨基酸残基改变数量为Ⅱ组患者的2．7倍[9．52变化量／100残基vs2．43变化量／100残基（9．52％VS2．43％），P〈0．01]，且绝大多数发生在主亲水区（MHR）“a”决定簇。MHR区至少出现2残基改变的在Ⅰ组有10例（71％），Ⅱ组3例（25％）。Ⅰ组患者S蛋白残基改变常见位点为s145、s129、s126、s144和s123。这些S基因位点突变，最终形成病毒的免疫逃逸。结论CHB患者HBsAg和HBsAb共存可能与“a”决定簇变异率升高相关。“a”决定簇变异可能为乙型肝炎病毒免疫逃逸突变的一种选择。HBV免疫逃逸对疫苗接种免疫效应、临床疾病诊断和治疗策略革新等有影响。     

山东省≤15岁人群感染乙型肝炎病毒“a”抗原决定簇变异株的流行病学特征分析

目的了解山东省≤15岁人群感染的乙型肝炎（乙肝）病毒（Hepatitis B Virus,HBV）中,＂a＂抗原决定簇变异株流行强度及分布特征,探讨其流行与乙肝疫苗（Hepatitis B Vaccine,HepB）免疫的关系。方法对2009年国家法定传染病报告系统报告的山东省≤15岁乙肝病例进行个案调查和血标本采集,采用巢式聚合酶链反应方法扩增其血清HBV S基因,测序后与基因数据库中的标准序列进行比对分析。结果山东省2009年共报告≤15岁乙肝326例,对302例（92.64%）进行了个案调查和血标本采集,对其中158份标本进行HBV-脱氧核糖核酸提取,扩增HBV S基因并成功测序137份。14份标本检出＂a＂抗原决定簇变异株,检出率为10.22%;有HepB免疫史和无HepB免疫史者检出率分别为10.66%和6.67%,差异无统计学意义（χ2=0.23,P=0.63）;未发现不同性别、地区、接种HepB种类和母亲乙肝病毒表面抗原携带状态者间检出率的差异有统计学意义（P〉0.05）。14份标本共检出＂a＂抗原决定簇6个氨基酸位点发生9种变异,其中126位点和144位点检出率较高,分别为4.38%（6/137）和2.92%（4/137）,但差异无统计学意义（χ2=7.39,P=0.19）。结论目前山东省≤15岁乙肝病例中,HBV＂a＂抗原决定簇变异株流行率较低,存在多种变异形式,尚未出现强变异株;尚未发现其流行与HepB免疫有关。     

乙型肝炎病毒基因型与HBV宫内传播关系的研究

目的：探讨乙型肝炎病毒基因型与HBV宫内传播之间的关系。方法：采集170例HBsAg阳性孕妇及其172例新生儿外周血，巢式PCR检测血清HBV DNA。PCR-RFLP技术结合PCR产物直接测序鉴定HBV基因型。结果：太原地区HBsAg阳性孕妇及其新生儿携带乙型肝炎病毒有B、C、133种基因型，以C型为优势基因型。HBV C型与B型孕妇HBV宫内感染率分别为56．45％、50．00％（x^2=0．092，P=0，761），两组孕妇的HBV宫内感染率差异无统计学意义。所有发生宫内感染的新生儿HBV基因型均与其母亲一致。结论：孕妇感染HBVC型与B型其新生儿发生HBV宫内感染的几率相当。乙型肝炎病毒宫内传播过程中，HBV基因型可能不发生改变。     

乙型肝炎免疫球蛋白阻断乙肝病毒母婴传播过程中病毒S区基因变异的研究

目的了解乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）在阻断母婴传播过程中S基因变异的特点,比较与未予阻断者的差异,探讨基因变异与宫内传播的关系,协助评价HBIG的治疗安全性.方法将18对乙型肝炎病毒（HBV）携带母亲及其宫内感染新生儿按母亲产前处理分为HBIG组8对,母亲于产前3月起肌肉注射HBIG 200～400IU至分娩前;对照组10对,母亲产前不接受HBIG者.巢式PCR扩增HBV S基因片段并直接测序.以每对病例第一份（母亲孕中期）血清HBV株S基因区氨基酸（或核苷酸）作为标准,对每对病例第二份血清（母亲分娩前）和第三份血清（新生儿）HBV株进行分析.结果HBV S区碱基替代突变率和氨基酸变异数在HBIG组和对照组之间的差异均无统计学意义;18例宫内感染儿17例其病毒株与母亲分娩前的优势株一致,其中4例为S区变异株;18例宫内感染儿病毒株分型B型adw2 12例,C型adrq^＋6例.结论无症状携带HBV孕妇产前使用现有剂量HBIG至临产并未增加HBV S区的变异.HBV S区变异株和未变异株均可经宫内传播,宫内感染发生于孕后期;HBV S区变异并非发生宫内感染的主要原因.     

宫内传播中乙型肝炎病毒前S/S基因序列分析

目的　研究宫内传播中乙型肝炎病毒 (HBV)的前S/S基因结构 ,探讨HBV基因变异与宫内传播的关系。方法　根据新生儿发生HBV宫内感染与否 ,将其HBsAg阳性母亲分为宫内感染组和非宫内感染组 ,经PCR扩增HBV前S/S基因 2 848- 835位核苷酸序列 ,克隆、测序 ,比较 2组基因结构的差异。结果　全部HBV株序列都属于C基因亚型、adr亚型 ,宫内感染组中母婴序列的相似性达 99.2 %～ 1 0 0 .0 %。 2组患者在前S1区、前S2区和S区均有各自的突变位点 ,S区“a”决定簇表位几乎没有突变发生。非宫内感染组中nt2 90 9、nt399、nt2 93和nt483突变出现较多 ,而在宫内感染组尤其是新生儿的序列中出现较少。而且非宫内感染组前S2区 (P <0 .0 5)、S区 (P <0 .0 1 )和前S/S区 (P <0 .0 5)突变率也高于宫内感染组。结论　引起新生儿宫内感染的HBV前S/S基因异质性较低 ,提示前S/S区突变率低的HBV株可能容易引起新生儿的宫内感染     

德阳市乙型肝炎病毒基因型、血清亚型和变异分析

目的了解德阳市乙型肝炎病毒基因型、血清亚型和变异。方法从HBsAg阳性的血清标本提取病毒DNA,S基因全序列多聚酶链反应和测序后,根据进化树和推导氨基酸确定基因型、血清亚型及＂α＂抗原决定簇氨基酸变异。结果 41份标本中,33份标本为B基因型/adw2血清亚型,7份标本为C基因型/adrq＋血清亚型,另1份标本为B基因型/ayw1血清亚型;6份标本＂α＂抗原决定簇内氨基酸发生变异,分别为Thr126Ser,Thr126Ala,Gln129His,Met133Leu和Thr143Met,且变异集中在第1环内氨基酸（6/7,85.7%）。1份标本在114位和115位氨基酸间插入额外1个氨基酸,1份标本的216位氨基酸变异为终止码。结论德阳市HBV以B基因型/adw2为主,自发的＂α＂决定簇氨基酸变异集中在第一环氨基酸。     

HBV感染孕妇血清HBVM与TORCH抗体检测

目的了解ＨＢＶ感染孕妇血清ＨＢＶＭ与ＴＯＲＣＨ抗体阳性率。方法应用ＥＬＩＳＡ法筛查出９３例ＨＢＶ感染孕妇,并用ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。分娩时取脐血测弓形体（Ｔｏｘ）、风疹病毒（ＲＶ）、巨细胞病毒（ＣＭＶ）、单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－Ⅱ）四种病原血清特异性ＩｇＭ和风疹病毒ＩｇＧ抗体。结果９３例ＨＢＶ感染孕妇中ＴＯＲＣＨ总感染率４７．３１％。单项抗体阳性率２５．８１％,７例为２项抗体阳性,２例３项抗体阳性。原发宫内感染以Ｔｏｘ最高（１２．９０％）,ＣＭＶ次之（６．４５％）,随后ＨＳＶ－Ⅱ（５．３８％）,ＲＶ最低（３．２３％）。孕妇ＨＢｓＡｇ阳性组,ＰＣＲＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率７６．９２％,ＴＯＲＣＨ感染率６１．５４％。ＨＢｓＡｇ阴性组,ＰＣＲＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率３８．８９％,ＴＯＲＣＨ感染率３７．０４％。结论脐血ＴＯＲＣＨ感染率与母血ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶ－ＤＮＡ相关（相关系数分别为０．１４、０．２９、０．１５）。乙肝感染孕妇ＴＯＲＣＨ的抗体筛查对优生优育是非常有用的指标。     

母亲外周血单个核细胞HBV感染对围生儿的影响

目的探讨母亲HBV感染的外周血单个核细胞在HBV宫内感染中的作用。方法用套式多聚酶链反应(nPCR)法分别检测41例HBsAg阳性、12例HBsAg阴性而其他标志物阳性和16例乙肝血清标志物全部阴性的孕产妇及其新生儿血清和外周血单个核细胞中的HBVDNA。结果HBsAg阳性产妇外周血单个核细胞中的HBVDNA阳性率为31.7%(13/41);外周血单个核细胞感染率与血清HBeAg和HBVDNA的状态及水平无关(P>0.05);新生儿外周血单个核细胞HBVDNA阳性率在母亲血清和外周血单个核细胞HBVDNA均阳性组显著高于仅血清阳性组;母亲外周血单个核细胞HBVDNA阳性组显著高于阴性组(P<0.05);1例母亲血清HBVDNA阴性而外周血单个核细胞HBVDNA阳性,其新生儿血清中检出HBVDNA。结论母亲HBV感染的外周血单个核细胞有可能作为载体导致HBV宫内感染。     

HBV Pre-S1蛋白与胎儿宫内感染

目的:探讨HBV前S1蛋白与胎儿感染的相关性,为筛查HBsAg阳性孕产妇中可能感染胎儿的高危人群提供参考依据。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心方法、分级定量PCR检测、酶联免疫吸附试验,检测256例HBV携带孕妇及其分娩的256例新生儿静脉血前S1蛋白、HBV DNA及HBV标志物。结果:①256例新生儿中发生HBV感染81例,感染率为31.6%。②前S1蛋白阳性孕产妇所分娩的85例新生儿中,感染率为88.2%(75/85),显著高于前S1蛋白阴性者的3.5%(6/171)(P<0.01)。③在感染的81例新生儿中,有79例其母前S1蛋白阳性(97.5%)(79/81),81例其母HBVDNA阳性,两者差异无统计学意义(P>0.01)。结论:①孕妇单纯HBsAg阳性,其婴儿感染率相对较低,如合并有前S1蛋白阳性或HBV DNA阳性,则胎盘传播率显著上升;②前S1蛋白检测可以代替血HBV DNA检测作为判断胎儿宫内感染的重要依据,可作为筛查HBsAg阳性孕产妇中易发生垂直传播人群的方法。     

HBsAg阳性孕妇血清乙肝病毒含量与HBV宫内感染关系的研究

目的探讨孕妇外周血中HBV含量与HBV宫内感染的关系。方法ELISA法检测孕妇及新生儿外周血HBsAg、HBeAg;FQ-PCR对血清HBVDNA定量检测。结果166例新生儿中有28例发生HBV宫内感染(16.87%);在HBV宫内感染组和非感染组孕妇HBVDNA暴露、各级病毒载量与HBV宫内感染趋势χ2检验差异为有统计学意义;HBVDNA?156copies/ml为HBV宫内感染最佳临界预测值,它的敏感度为81.80%,特异度为72.10%,阳性预测值为37.10%,阴性预测值为95.19%。结论孕妇外周血HBVDNA阳性不仅是HBV宫内感染的危险因素,且随着孕妇血中乙肝病毒含量的增高,其发生HBV宫内感染的危险性呈现增高趋势;孕妇血HBVDNA156copies/ml为HBV宫内感染最佳临界预测值,孕妇血清中HBVDNA水平对于预测新生儿HBV宫内感染较为重要。     

孕妇感染HBV对胎儿的影响及母乳喂养的研究

:[目的 ]　研究孕妇感染HBV其脐血和初乳的感染率和排毒率。 [方法 ]　应用ELISA筛选出 2 13例HBV感染孕妇 ,并用PCR和ELISA法测脐血和初乳HBVDNA和HBVM。 [结果 ]　感染孕妇HBsAg阳性率45 .0 7% ,脐血和初乳感染率以母亲大三阳组最高 ,小三阳组次之 ,单一HBsAg阳性组最低 ;排毒率顺序相同。HB sAg阴性孕妇其脐血和初乳的感染率、排毒率与母亲血中抗体种类和性质有关。 [结论 ]　脐血和初乳HBV感染与孕妇HBV感染程度有关。育龄前青年女性应作乙肝疫苗的免疫接种 ,以减少孕期HBV的感染。产后母乳喂养的选择 ,根据母亲血中HBVM决定     

太原市HBsAg阳性孕妇注射HBIG与HBV宫内感染关系的研究

目的:探讨太原市乙肝病毒不同感染状态的HBsAg阳性孕妇孕晚期注射乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)的参考指标,分析依据参考指标下注射HBIG与HBV宫内感染的关系。方法:以太原市传染病医院产前检查并分娩的HBsAg阳性孕妇为研究对象,收集其分娩前HBIG的注射史、乙肝病毒标志物以及新生儿24 h内的乙肝标志物的资料。分别以HBeAg、HBVDNA两种病毒复制指标为分组指标将278例HBsAg阳性孕妇分组,分析组间HBIG注射的差异,进而分别以HBeAg、HBV DNA为分层因素分析孕晚期注射不同剂量HBIG和新生儿宫内感染的关系。结果:HBsAg阳性孕妇母亲HBV DNA组与HBV DNA阴性组注射HBIG的差异具有统计学意义(x~2=25.639,P=0.000),而孕妇母亲HBeAg阳性组和HBeAg阴性组注射HBIG的差异无统计学意义(x~2=4.627,P=0.099);两个参考指标组内注射HBIG与新生儿宫内感染均无关联。结论:太原市HBsAg阳性孕妇孕晚期以孕妇HBV DNA阳性作为是否注射HBIG的参考指标,孕晚期注射HBIG不能阻断新生儿发生HBV宫内感染。     

HBV宫内传播和HBV前S／S基因突变的关系的初步分析

目的研究宫内传播中乙型肝炎病毒前S／S基因的突变，探讨宫内感染乙型肝炎病毒与HBV基因突变的关系。方法根据随访确定新生儿是否发生宫内感染，将HBsAg阳性母亲分为病例组和对照组，经PCR扩增HBVDNA，基因克隆、测序，分析前S／S基因的突变。结果共得到60株HBV病毒株序列，所有毒株均属于C基因亚型、adr亚型；16个位点的突变在宫内感染组母亲及其新生儿中没有或很少发生，在对照组母亲中发生率较高，其中nt2749、3086、309、676、684、3114、70、161、308、213、373、405位点突变在3组中的发生率差异有统计学意义。结论所有病毒株前S／S基因均存在突变，某些突变位点在非宫内感染组母亲中的发生率较高，HBV宫内感染的发生可能与某些位点基因是否发生突变或其所在的功能区是否发生变化有关。