新疆阿魏菇提取物对不同肿瘤细胞p53、fas基因表达的调节

目的 从细胞凋亡角度探讨新疆阿魏菇提取物抗肿瘤机制。方法 采用肿瘤细胞体外培养技术及RT—PCR技术，观察阿魏菇不同剂量的水提物及醇提物对体外培养的四种肿瘤细胞p53及fas基因表达的影响。结果 以β—actin的表达及表达量作为内对照，四种类型肿瘤细胞均出现不同程度的p53基因、fas基因表达水平的上调。结论 受试物可能通过诱导促进肿瘤细胞凋亡基因(p53基因、fas基因)的转录及表达，从而发挥抗肿瘤作用。     

阿魏蘑菇提取物对肿瘤细胞p53表达的影响

目的 探讨新疆阿魏蘑菇提取物对体外培养的肿瘤细胞p53蛋白表达的影响，从细胞凋亡角度研究其抗肿瘤机制。方法 采用肿瘤细胞体外培养技术及流式细胞技术，观察阿魏蘑菇不同剂量的水提物及醇提物对体外培养的4种肿瘤细胞p53蛋白表达的影响。结果 MTT实验结果显示，受试物对4种类型肿瘤细胞均具有较强的杀伤作用，尤其以0．1g／m1剂量组为明显；HT实验结果表明，经受试物处理后，4种类型肿瘤细胞均观察到细胞核固缩，DNA浓缩并向核膜靠拢形成浓染致密颗粒，并有典型凋亡小体出现。提示，受试物可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用；流式细胞仪检测结果显示，受试物处理后，4种类型肿瘤细胞p53蛋白表达水平均有不同程度的上调，尤其以醇提物作用24h后对Q3细胞p53蛋白表达水平的影响最为明显。结论 阿魏蘑菇提取物中的各组分可协同作用诱导肿瘤细胞促凋亡基因的表达，从而达到抗肿瘤的目的，有关阿魏蘑菇通过何种途径提高p53蛋白表达水平尚待深入探讨。     

“卡宁”抗骨肿瘤的机理初探

目的体外观察抗癌中药“卡宁”对人成骨肉瘤细胞株MG-63的凋亡诱导基因fas影响,探讨其抗肿瘤治疗的作用机制。方法采用MTT比色法观察含药血清对体外培养的人骨肿瘤细胞株的抑制能力,PCR检测对凋亡诱导基因fas的影响。结果体外实验显示中药组fas的活性明显高于对照组(p=0.038),MTT结果显示细胞生长抑制率与含药血清作用时间及浓度呈正相关,p<0.05,在15%含药血清72h时作用最强。体外实验表明,“卡宁”对MG-63细胞的fas活性有促进作用。结论对肿瘤细胞fas的促进可能是抗癌中药“卡宁”诱导肿瘤细胞凋亡作用机制的一部分。     

鼠妇水提物和醇提物的体外抗肿瘤活性研究

目的:研究鼠妇不同提取物的体外抗肿瘤活性。方法:将鼠妇药材分别进行水提,醇提,通过体外培养人胃癌细胞株BGC823,人白血病细胞株K562,人食道癌细胞株TE13,用MTT法测定鼠妇醇提物和水提物对体外肿瘤细胞的生长抑制作用。结果:鼠妇水提物和醇提物均能明显抑制肿瘤细胞的生长(P<0.05),与水提物相比,醇提物显著抑制肿瘤细胞生长(P<0.05)。结论:鼠妇醇提物具有更显著的抗肿瘤作用。     

新疆阿魏蘑菇提取物抗肿瘤实验研究

目的 :　探讨新疆阿魏蘑菇提取物对体外培养的肿瘤细胞生长的抑制作用及其有效成分。方法 :　采用肿瘤细胞体外培养技术 ,观察阿魏蘑菇不同剂量的水提物和醇提物 ( 1 0 -1、1 0 -2 、1 0 -3 、1 0 -4、1 0 -5、1 0 -6kg/L)对体外培养的人肝癌细胞株 ( Q3 )、人胃癌细胞株 ( MGC- 80 3)、人宫颈癌细胞株 ( Hela)、小鼠肺腺瘤细胞株 ( SPC- A- 1 )细胞存活及蛋白合成的影响。以大鼠肝细胞( BRL)为正常对照细胞株 ,同时设立空白对照、阴性对照及溶剂对照。受试物与细胞共培养 2 4 h,观察细胞存活量及活细胞蛋白含量的变化 ;采用系统定性测试方法 ,对阿魏蘑菇中可能存在的抗肿瘤有效成分进行测定。结果 :　阿魏蘑菇水提物、醇提物 1 0 -1kg/L剂量对各类型肿瘤细胞的生长及蛋白合成均有明显抑制作用 ;醇提物不同剂量组对肿瘤细胞生长及蛋白合成可产生不同程度的影响 ,对正常肝细胞的存活量无影响 ,且可促进肝细胞的蛋白合成。阿魏蘑菇中可能有糖类、皂甙、蛋白质、多肽、氨基酸、有机酸、生物碱、挥发油、三萜或甾醇、带双键的萜类等有效成分。结论 :　阿魏蘑菇提取物的抗肿瘤作用可能与其抑制肿瘤细胞生长及蛋白合成有关 ,阿魏蘑菇中确切的功效成分及其与抗肿瘤作用之间的关系有待进一步探讨。     

丙戊酸钠联合顺铂对HO-8910细胞增殖的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)联合顺铂(DDP)对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910细胞增殖抑制和凋亡作用及机制。方法:3 mM浓度的VPA、1μg/m l的DDP及VPA联合DDP分别处理人卵巢癌细胞株HO-8910不同时间(24、48、72 h)后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;RT-PCR检测p53基因mRNA水平表达变化;W estern b lot法检测p53及Stat3蛋白表达变化。结果:VPA对卵巢癌HO-8910细胞株有生长抑制作用,且VPA联合DDP优于单独用药(P<0.05);Hochest 33258荧光染色结果显示,用药后细胞呈现明显的核碎裂、核固缩等典型凋亡改变,VPA联合DDP组细胞凋亡改变较单独用药组明显(P<0.05);RT-PCR检测显示VPA单独用药及联合DDP用药均能提高p53基因的mRNA表达水平;W estern b lot结果显示VPA联合DDP显著增强卵巢癌HO-8910细胞中p53蛋白表达,降低Stat3蛋白的表达,联合用药组效果更明显。结论:VPA单独用药在体外可有效杀伤卵巢癌HO-8910细胞株,与DDP联合应用具有明显的协同作用,推测其可能的作用机制是诱导p53表达水平上调及Stat3表达水平下调。     

紫外线照射表皮细胞后凋亡机制的研究进展

紫外线照射皮肤表皮细胞后可引起细胞凋亡，本文综述报道此条件下细胞凋亡过程和凋亡机制相关的因子（fas／fas—L、p53／p21、TNF-α、galectin-7、bcl-2、bcl—X1、p38 MAPK、E2F1）在凋亡中的作用及它们之间的相互作用，它们部分参与诱导表皮细胞凋亡的某些环节，部分则具有相反的作用。     

杏多糖与阿魏菇醇提物对食管癌细胞凋亡及其调控影响的体外实验研究

目的观察杏多糖与阿魏蘑菇醇提物对食管癌细胞Eca9706的凋亡作用及其作用机制。方法采用体外细胞培养,以免疫细胞化学和分子生物学技术观察10^-1g/ml杏多糖与阿魏蘑菇醇提物对食管癌细胞细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。结果免疫细胞化学结果显示,食管癌细胞经两种受试物处理24h后,Bax的表达较处理前有所增加;Bcl-2表达未见下降,反而有增高的趋势。经HE染色,在光学显微镜下可见,经10^-1g/ml的杏多糖与阿魏蘑菇醇提物干预后的食管癌细胞出现了凋亡细胞的形态学特征;TUNEL测试结果显示食管癌细胞核的DNA断裂片段较处理前增多;琼脂凝胶电泳显示一片模糊的弥散带。结论10^-1g/ml的杏多糖与阿魏蘑菇醇提物可促进食管癌细胞抑癌基因Bax的表达,并促进细胞的凋亡。     

核因子-κB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NFκ-B、p53、Bcl-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理。结果PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性。差异有显著性(P<0.05)。RT-PCR结果显示NFκ-B p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性。Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NFκ-B及p53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关。     

低氧条件下γ射线对Hep-2细胞p53表达的影响

目的 模拟在体肿瘤细胞微环境,体外建立不同氧供状态下的细胞模型,探讨乏氧再氧合条件下60 Coγ,射线照射对人喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响.方法 将体外培养的人喉鳞癌细胞分为3组:A组(常氧组)、B组(低氧组)、C组(低氧再氧合组).流式细胞仪检测HIF-1α、p53蛋白表达及细胞凋亡;细胞爬片免疫组化检测各组细胞HIF-1α、p53蛋白表达;RT-PCR检测各组细胞HIF-1amRNA.结果 低氧能明显增加Hep-2细胞HIF-1α蛋白及其mRNA表达,同时p53蛋白表达相应上调.再氧合之后HIF-1α蛋白及其mRNA表达均呈现下调趋势,p53蛋白表达下调.同低氧(B组)相比再氧合之后(C组)Hep-2细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论 低氧降低60Coγ射线照射对Hep-2细胞的诱凋亡作用,再氧合之后其诱凋亡作用明显提高.但在Hep-2细胞凋亡率明显升高的同时却并未出现p53蛋白表达的增强,提示低氧再氧合之后60Coγ射线诱导Hep-2细胞凋亡作用可能是通过p53以外的其它促凋亡途径实现的.     

黄芩提取物联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3凋亡的研究

目的:探讨黄芩提取物(Scutellaria Baicalensis)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对卵巢癌细胞系SKOV-3增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法检测S.Baicalensis与DDP联合应用对SKOV-3细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡并计算细胞平均凋亡率,Westernblot技术观察细胞内p53、ERK1/2、p-STAT3的表达。结果:300μg/mlS.Baicalensis联合5μg/ml DDP给药:①48h后可使肿瘤细胞抑制率由单独应用DDP的15.8%提高到37.3%;②吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与10μg/ml DDP组相当;③流式细胞检测结果显示,可使细胞凋亡率从15.1%提高到42.2%(P<0.05);④westernblot结果显示,p53、ERK1/2、p-STAT3表达较5μg/ml DDP组单独给药组降低(P<0.05)。结论:S.Baicalensis与DDP联合应用增强对卵巢癌细胞株SKOV-3的致凋亡效应,联合应用可达到减毒增效的效果。     

褐藻糖胶对人白血病细胞株K562凋亡的影响

目的探讨海带提取物褐藻糖胶对体外培养的人髓系白血病细胞株K562生长的影响．从细胞凋亡角度研究其抗肿瘤机制。方法采用肿瘤细胞体外培养、单细胞凝胶电泳、凋亡细胞DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞技术．观察不同剂量褐藻糖胶对体外培养的白血病细胞株K562细胞的影响。结果噻唑蓝（MTT）实验结果显示，褐藻糖胶对K562细胞均具有较强的杀伤作用，尤其以1g／L剂量组为明显。单细胞凝胶电泳实验结果表明，褐藻糖胶对肿瘤细胞DNA有明显损伤作用．尤其以1g／L剂量组的影响最为明显。DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测结果显示．经褐藻糖胶处理后，肿瘤细胞洲亡率上升，其中1g／L剂量组较为明显。提示褐藻糖胶可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。结论褐藻糖胶可通过诱导肿瘤细胞凋亡，从而达到抗肿瘤的目的。     

Diallyl disulfide (DADS) induces the antitumorigenic NSAID-activated gene (NAG-1) by a p53-dependent mechanism in human colorectal HCT 116 cells

Garlic is appealing as an anti-carcinogenic agent due to its ability to induce apoptosis in vitro and inhibit the formation and growth of tumors in animals in vivo. Diallyl disulfide (DADS) is a constituent of garlic that suppresses neoplastic cell growth and induces apoptosis. We examined the effects of DADS on various cancer cell lines to better understand its effect on apoptosis and apoptosis-related genes. The nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID)-activated gene (NAG-1) has proapoptotic and antitumorigenic activities and is upregulated by anticancer agents such as NSAIDs. In this study, human colorectal HCT-116 (wild-type p53), HCT-15 (p53 mutant) and human prostate PC-3 (p53 mutant) cells were exposed to DADS. DADS inhibited cell proliferation in all cell lines albeit to a lesser extent in HCT-15 and PC-3 cells at 11.5 and 23 micromol/L. In HCT-116 cells, DADS induced p53 and NAG-1 in a dose-dependent manner and the induction of p53 preceded that of NAG-1. In HCT-116 cells, NAG-1 protein expression was increased 2.4-fold +/- 0.6 at 4.6 micromol/L and 6.1-fold +/- 1.7 at 23 micromol/L DADS, whereas p53 was induced 1.5-fold +/- 0.1 and 2.3-fold +/- 0.4. DADS did not induce NAG-1 or p53 in p53 mutant cell lines; however, NAG-1 expression was induced by sulindac sulfide. HCT-116 cells treated with 4.6 and 23 micromol/L DADS resulted in a 1.9- and 2.9-fold increase in apoptosis, respectively. In contrast, 23 micromol/L DADS induced apoptosis only 1.8-fold in HCT-15 cells and not at all in PC-3 cells. Thus, DADS-induced apoptosis and NAG-1 protein expression appear to occur via p53.     

过氧化氢处理K562细胞中JWA基因的表达及其与DNA损伤和凋亡的关系

目的研究过氧化氢(H2O2)诱导K562细胞氧化应激过程中,JWA蛋白、热休克蛋白(hsp70和hsp27)和p53蛋白的表达特点,探讨JWA参与细胞应答氧化应激的作用和可能机制。方法用0．01、0．1、1mmol／L的H2O2处理K562细胞10、30、60、180min建立氧化损伤模型;用0．1mmol／L H2O2处理不同时间(6～48h)和不同浓度(0．5～1000μmol／L)的H2O2处理48h分别诱导K562细胞凋亡,然后用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA损伤和凋亡,用免疫印迹方法检测热休克蛋白(hsp70和hsp27)、p53以及JWA的蛋白表达水平。结果在DNA损伤模型中,H2O2活跃地调节JWA的表达,JWA对氧化应激的应答比热休克蛋白更快速,JWA和hsp70的表达规律相似;在低剂量H2O2(0．01mmol／L)处理时,JWA和热休克蛋白的表达均显著增高;在细胞凋亡模型中,JWA、hsp70、hsp27和p53的表达均显著增高,其中,JWA、hsp70和p53三者的表达规律相似。结论JWA是一个有效的环境应答基因并活跃地参与细胞应答氧化应激所致的DNA损伤和细胞凋亡的信号通路,其介导的信号通路可能与hsp70和p53有关。     

Combination of radiotherapy and adenovirus-mediated p53 gene therapy for MDM2-overexpressing hepatocellular carcinoma

The p53 gene plays a determinant role in radiation-induced cell death and its protein product is negatively regulated by MDM2. We investigated whether adenovirus-mediated modified p53 gene transfer, which blocks p53-MDM2 binding, is effective for radiation-induced cell death in hepatocellular carcinoma (HCC) at different MDM2 cellular levels. Human hepatocellular carcinoma cell lines expressing MDM2 at low levels (Huh7) and high levels (SK-Hep1) were used. Ad-p53 and Ad-p53vp are replication-deficient adenoviral vectors containing human wild-type or modified p53, respectively. The anti-tumor effect was highest for Ad-p53 + radiotherapy (RT) in the low-level MDM2 cells, whereas this effect was highest for Ad-p53vp + RT in the MDM2-overexpressing cells. In Huh-7 cells, Ad-p53 + RT decreased cell viability (32%) in vitro and inhibited tumor growth (enhancement factor, 1.86) in vivo. Additionally, p21 expression and apoptosis were increased. In contrast, in SK-Hep1 cells, Ad-p53vp + RT showed decreased cell viability (51%) in vitro and inhibition of tumor growth (enhancement factor, 3.07) in vivo. Caspase-3 expression and apoptosis were also increased. Adenovirus-expressing modified p53, which blocks p53-MDM2 binding, was effective in killing tumor cells overexpressing MDM2. Furthermore, the combination strategy for disruption of the p53-MDM2 interaction with RT demonstrated enhanced anti-tumor effects both in vitro and in vivo.     

Anticancer Properties of Ganoderma Lucidum Methanol Extracts In Vitro and In Vivo

Anticancer activities of various extracts of the medicinal mushroom, Ganoderma lucidum, have been widely demonstrated and are mainly associated with the presence of different bioactive polysaccharides and triterpenoids. We have evaluated and compared in vitro and in vivo the antitumor effects of two preparations from Ganoderma lucidum: a methanol extract containing total terpenoids (GLme) and a purified methanol extract containing mainly acidic terpenoids (GLpme). Both extracts inhibited tumor growth of B16 mouse melanoma cells inoculated subcutaneously into syngeneic C57BL/6 mice and reduced viability of B16 cells in vitro, whereby GLme exhibited stronger effect. Furthermore, anticancer activity of GLme was demonstrated for the first time against two other rodent tumor cell lines, L929-mouse fibrosarcoma and C6-rat astrocytoma. The mechanism of antitumor activity of GLme comprised inhibition of cell proliferation and induction of caspase-dependent apoptotic cell death mediated by upregulated p53 and inhibited Bcl-2 expression. Moreover, the antitumor effect of the GLme was associated with intensified production of reactive oxygen species, whereas their neutralization by the antioxidant, N-acetyl cysteine, resulted in partial recovery of cell viability. Thus, our results suggest that GLme might be a good candidate for treatment of diverse forms of cancers.