人参皂苷Rh2联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2联合顺铂对于人卵巢癌细胞株SKOV-3的影响。方法:采用MTT比色法检测人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3细胞株增殖的影响,利用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况,并计算细胞平均凋亡率,利用Western-blot技术观察SKOV-3细胞内HER-2蛋白的表达。结果:①Rh2与DDP联合应用分别作用于SKOV-3卵巢癌细胞株,单独应用DDP 350μmol/L和600μmol/L IC50降为DDP 250μmol/L和300μmol/L。②流式细胞术检测显示,DDP+Rh2组凋亡率在SKOV-3细胞系中为32.2%,SKOV-3细胞被阻止于G1期,在SKOV-3 DDP细胞中为12.5%,均显著高于仅应用DDP组细胞(P<0.05),SKOV-3 DDP细胞亦被阻止于G1期。③Western blotting结果显示,SKOV-3细胞中DDP+Rh2组HER-2蛋白表达较对照组、DDP组、Rh2组显著降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3卵巢癌细胞株有促凋亡作用,并改善卵巢癌细胞株SKOV-3 DDP对DDP的敏感性。     

地塞米松对顺铂诱导卵巢癌细胞株凋亡的拮抗作用

目的:探讨地塞米松(DEX)对顺铂(DDP)诱导卵巢癌细胞株凋亡的影响。方法:应用MTT比色法检测细胞活性,利用免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-xl和caspase3的表达。结果:0.001~1μM浓度范围内的地塞米松对顺铂诱导人卵巢癌细胞株HO-8910的凋亡有抑制作用(P<0.05),提高DDP浓度能拮抗该效应;并能上调抗凋亡蛋白bcl-xl的表达,降低caspase3的表达活性(P<0.05)。结论:顺铂治疗卵巢癌前用地塞米松进行预处理后可拮抗顺铂的抗肿瘤作用,bcl-xl抗凋亡通路参与该作用。     

体外培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP并探讨卵巢癌顺铂耐药机制

目的:通过对人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP体外培养,探讨卵巢癌顺铂耐药机制。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪测定SKOV-3、SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数及细胞周期变化,并分析细胞内Bcl-2蛋白及细胞膜上Fas、Fas-L表达情况。结果:相对于SKOV-3细胞;SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数约为4倍,其细胞周期主要分布于G0/G1期、S期,细胞内Bcl-2蛋白表达及细胞膜Fas、Fas-L水平明显升高。结论:细胞主要分布于潜伏期、细胞内凋亡抑制蛋白Bcl-2水平升高及细胞膜Fas、Fas-L表达增加,可能是卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP顺铂耐药的部分机理。     

DIM联合顺铂诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡机制的研究

目的:探讨顺铂(cis-diamminedichlorop latinum DDP)和3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)联合应用诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡的机制。方法:采用免疫组化技术观察细胞内caspase3蛋白的表达,利用RT-PCR和western blot检测bcl-2、caspase3和caspase9基因和蛋白表达变化。结果:细胞培养及免疫化学染色可见各给药组与对照组比较均有不同程度抑SK-OV-3细胞增殖并诱导其凋亡作用;RT-PCR结果显示各给药组均能使caspase3和caspase9基因表达上调,bcl-2表达下调;westernblot结果表明各给药组与对照组相比caspase3和caspase9蛋白表达上调,bcl-2表达下调,且0.4mg.L-1DDP+60μmol.L-1DIM联合应用与10倍剂量DDP(4mg/L-1)单独应用效果相同。结论:DIM与DDP均可抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡;其细胞凋亡机制可能与上调caspase3、caspase9基因表达,下调bcl-2表达有关;DIM与DDP联合抗瘤具有明显的减毒增效作用。     

塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响

目的探讨塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度(0、0. 625、12. 5、25、50及100μmol/L)塞来昔布对COC1/DDP细胞生长的影响,计算出24、48及72h的IC50。将对数生长期的COC1/DDP细胞随机分为对照组(未做处理)、顺铂组(给予2μg/ml顺铂)、塞来昔布组(给予25μg/ml塞来昔布)及联合组(给予25μg/ml塞来昔布+2μg/ml顺铂)。MTT法检测各组细胞的生长情况,FCM检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测各组细胞中增殖细胞核抗原(Ki67)、细胞周期素D1 (Cyclin D1)、生存素(Survivin)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达。结果塞来昔布能够呈时间-浓度依赖性抑制COC1/DDP细胞生长,其在24、48和72 h的IC50分别为47. 05、25. 86和16. 11μmol/L。与对照组相比,顺铂组、塞来昔布组和联合组中COC1/DDP细胞的OD值以及Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低,凋亡率均显著升高;但顺铂对COC1/DDP细胞的作用较弱,塞来昔布对COC1/DDP细胞的作用较强,联合用药能够增强两者对COC1/DDP细胞的作用且高于两者之和。结论塞来昔布联合顺铂能够协调抑制COC1/DDP细胞生长并诱导细胞凋亡,降低COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性,其分子机制可能与下调Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白表达有关。     

米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡的影响

目的:探讨米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡率的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株增殖活力的影响,采用流式细胞术观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株凋亡率的影响。结果:对照组和顺铂组比较,米非司酮加顺铂组细胞增殖活力OD值明显下降,细胞凋亡率明显升高,且随着米非司酮浓度的升高变化愈加显著(P<0.05和P<0.01)。结论:米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞增殖活力均具有显著抑制作用,米非司酮可提高顺铂化疗的敏感性,其增敏作用与促进细胞凋亡有关,且与米非司酮的浓度呈剂量依赖关系。     

盐酸小檗碱及其联合应用顺铂诱导宫颈癌细胞株凋亡研究

目的:研究不同浓度盐酸小檗碱(Ber)单用及联合应用顺铂(DDP)对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,并探讨其抗癌机制。方法:将不同浓度的盐酸Ber、DDP分别或联合作用于宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法检测细胞体外增殖的抑制作用;原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡率;免疫组化SABC法检测Hela细胞中NF-κBp65的表达。结果:MTT比色法表明盐酸Ber能抑制宫颈癌Hela细胞的体外增殖,并具有剂量、时间的依赖性(P<0.05);TUNEL法可检测到凋亡细胞,其凋亡率显示盐酸Ber诱导宫颈癌Hela细胞凋亡表现出剂量和时间的依赖性(P<0.05);免疫组化SABC法结果显示,盐酸Ber能引起细胞内NF-κBp65表达下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);盐酸Ber与DDP联合用药表现出明显的协同作用,且高剂量的盐酸Ber可增加DDP的疗效。结论:盐酸Ber对宫颈癌Hela细胞体外增殖具有明显的抑制作用,且能增强DDP对宫颈癌Hela细胞的抑制作用,并增加其诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡,其作用机制可能与降低NF-κBp65的表达有关。     

丙戊酸钠联合顺铂对HO-8910细胞增殖的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)联合顺铂(DDP)对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910细胞增殖抑制和凋亡作用及机制。方法:3 mM浓度的VPA、1μg/m l的DDP及VPA联合DDP分别处理人卵巢癌细胞株HO-8910不同时间(24、48、72 h)后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;RT-PCR检测p53基因mRNA水平表达变化;W estern b lot法检测p53及Stat3蛋白表达变化。结果:VPA对卵巢癌HO-8910细胞株有生长抑制作用,且VPA联合DDP优于单独用药(P<0.05);Hochest 33258荧光染色结果显示,用药后细胞呈现明显的核碎裂、核固缩等典型凋亡改变,VPA联合DDP组细胞凋亡改变较单独用药组明显(P<0.05);RT-PCR检测显示VPA单独用药及联合DDP用药均能提高p53基因的mRNA表达水平;W estern b lot结果显示VPA联合DDP显著增强卵巢癌HO-8910细胞中p53蛋白表达,降低Stat3蛋白的表达,联合用药组效果更明显。结论:VPA单独用药在体外可有效杀伤卵巢癌HO-8910细胞株,与DDP联合应用具有明显的协同作用,推测其可能的作用机制是诱导p53表达水平上调及Stat3表达水平下调。     

紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用

目的:探讨紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用。方法:取对数生长期SK-OV3/DDP细胞进行实验。实验分为顺铂组、紫杉醇组、联合组和空白对照组。顺铂组细胞给予顺铂15μg/ml;紫杉醇组细胞给予紫杉醇3.13μg/ml;联合组细胞给予顺铂15μg/ml+紫杉醇3.13μg/ml;空白对照组细胞不给予任何药品。所有细胞均培养48 h后进行实验。采用MTT法检测细胞的生长抑制率。采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:顺铂组细胞生长抑制率与空白对照组无明显增加(P<0.05),证实SKOV3/DDP对顺铂的耐药,紫杉醇组和联合组细胞生长抑制率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞生长抑制率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。顺铂组与空白对照组细胞多被阻滞于G1和S期,紫杉醇及联合组细胞多被阻滞于G2/M期,联合组作用较紫杉醇组更加明显(P﹤0.05)。顺铂组细胞凋亡率与空白对照组无明显差异(P>0.05),紫杉醇组和联合组细胞凋亡率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞凋亡率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。结论:紫杉醇联合顺铂可明显逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

内皮抑素质粒联合顺铂对上皮性卵巢癌细胞株A2780增殖和凋亡的影响

目的:探讨内皮抑素质粒联合顺铂对上皮性卵巢癌细胞株A2780增殖和凋亡的影响。方法:通过瞬时转染内皮抑素质粒到卵巢癌细胞A2780后,采用MTT法和流式细胞术检测内皮抑素以及内皮抑素和顺铂联合应用对细胞增殖和凋亡的影响。结果:MTT法检测发现转染内皮抑素质粒后,A2780细胞的增殖明显减慢,顺铂对其生长抑制作用明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测发现与空白组相比,转染内皮抑素质粒后A2780细胞的G0/G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,细胞的凋亡率由(1.59±0.86)%增加到(8.66±1.27)%;内皮抑素质粒联合顺铂治疗后,上述差异更加显著(P<0.01)。结论:内皮抑素联合顺铂可通过抑制A2780细胞的生长和增加其凋亡而产生协同抗瘤作用。     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

TRAIL联合紫杉醇对卵巢癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨TRAIL联合紫杉醇对卵巢癌3AO细胞株凋亡的影响,以进一步研究其诱导细胞凋亡的原理。方法:应用MTT法检测TRAIL和紫杉醇作用组的抑制率,并以流式细胞仪检测各组凋亡率。结果:亚毒剂量的TRAIL、紫杉醇及联合作用组致卵巢癌3AO细胞凋亡率分别为17.6%、16.1%、64.3%。单独应用组与联合应用组之间存在显著性差异(P<0.01)。结论:TRAIL在诱导卵巢癌细胞凋亡的同时,也显著提高了其对紫杉醇(taxol)的化疗敏感性。     

甲羟孕酮对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的:应用甲羟孕酮(Medroxyprogesterone Acetate,MPA)体外逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐顺铂(cisplatin,DDP)效应,并对其作用机制进行初步探讨。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MPA对SKOV3/DDP的细胞毒作用,确定MPA对此细胞株的非细胞毒性剂量作为逆转剂量,同法测定非细胞毒性剂量MPA联合DDP作用后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,采用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况。结果:单用MPA浓度大于7.50 g/L时对SKOV3/DDP细胞有不同程度的抑制作用,且呈剂量依赖性。MPA浓度小于15.85 g/L时,其对细胞生长无明显抑制作用(细胞存活率均>90%),因此选用15.00 g/L作为逆转剂量。DDP联合15.00 g/L的MPA作用24、48、72 h后,顺铂的IC50分别下降至(57.72±0.48)g/L、(13.39±0.21)g/L、(7.93±0.18)g/L,逆转倍数分别为1.22,1.90,2.44倍。DDP与MPA联合作用于SKOV3/DDP细胞,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞比例下降,并可以增加耐药细胞的凋亡率。结论:MPA可以逆转DDP引发的卵巢癌耐药,其可能的逆转耐药机制为促进细胞的凋亡,阻滞细胞周期进程。     

卵巢癌相关成纤维细胞对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

目的:采用Transwell体外共培养体系,研究直接分离自卵巢癌的癌相关成纤维细胞CAFs对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,探讨CAFs在上皮性卵巢癌进展中的作用。方法:采用0.4μm孔径的Tranwell小室进行CAFs或者NFs与卵巢癌细胞CAOV3体外共培养,用RT-PCR的方法检测共培养之后的卵巢癌细胞CAOV3中增殖细胞核抗原(PC-NA)表达的改变,以了解卵巢癌细胞增殖的变化。②用流式细胞仪检测共培养之后CAOV3细胞的细胞周期和Annexin-V/PI检测CAOV3细胞的凋亡情况。③用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CA-OV3细胞迁移特性的影响。④以Matrigel模拟重建基底膜,用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CAOV3细胞侵袭特性的影响。结果:与CAFs共培养之后卵巢癌细胞CAOV3的PCNA基因表达显著增高,并且随着CAFs细胞量的增加,CAOV3细胞增殖活性显著增强。同时CAFs细胞的PCNA基因表达下降,随着CAOV3细胞数量的增加,PCNA表达明显减少(P=0.011)。②采用流式细胞仪检测细胞周期的方法可以发现,与CAFs共培养之后CA-OV3细胞的凋亡显著减少(P=0.008),而在与NFs共培养之后的CAOV3细胞中未发现这一现象。③同时用Annexin-V/PI的方法,用流式细胞仪进行检测,也可以证实与CAFs共培养之后CAOV3细胞的凋亡显著减少(P=0.011),而与NFs共培养之后,CAOV3的凋亡没有明显变化。④与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用8h后,CAOV3迁移明显增加,但CAFs组的增加有极显著性(P<0.01)。⑤侵袭实验中发现,与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用24h后,CAOV3侵袭明显增强,但CAFs组的增强有极显著性(P<0.01)。结论:CAFs能促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖,减少其凋亡,并且两种成纤维细胞对卵巢癌细胞均有促迁移和侵袭的作用,但是CAFs的作用更加显著。这些发现提示,在CAFs与卵巢癌CAOV3细胞的交互作用中,产生的信号因子能够促进卵巢癌的进展。     

环氧合酶-2抑制剂NS398对人卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖的影响

目的:探讨环氧合酶-2抑制剂NS398对人卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖的影响。方法:采用MTT法观察NS398对CAOV3的增殖抑制情况;流式细胞仪测定NS398对CAOV3细胞周期的影响;放射免疫方法检测NS398作用前后PGE2量的变化。结果:NS398对CAOV3细胞的增殖具有抑制作用,并显示出明显的时间和剂量的依赖性;NS398使CAOV3细胞发生细胞周期的G1期阻滞,并抑制CAOV3细胞分泌PGE2。结论:NS398抑制PGE2的分泌,抑制CAOV3细胞增殖,使细胞增殖停留在G1期。     

薯蓣皂甙元诱导人卵巢癌细胞系HO-8910凋亡及对Survivin基因表达的影响

目的观察薯蓣皂甙元对人卵巢癌细胞系HO-8910凋亡的诱导作用,并探讨其凋亡机制与survivin基因的关系。方法通过MTT法,流式细胞仪等方法研究薯蓣皂甙元对人卵巢癌细胞系HO-8910的诱导凋亡作用,运用RT-PCR分析薯蓣皂甙元对HO-8910细胞survivin表达的影响。结果薯蓣皂甙元在浓度为12.5μg/m l至100μg/m l,作用HO-8910细胞24、48、72 h可以明显抑制HO-8910细胞增殖,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),且呈时间剂量依赖性。在浓度为25μg/m l及50μg/m l时,流式细胞仪可以检测到明显的凋亡峰,且HO-8910细胞表达Survivin基因较用药前明显下降。结论薯蓣皂甙元可以诱导HO-8910细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin表达有关。     

IEX-1基因转染对人卵巢癌细胞增殖活性及顺铂敏感性的影响

目的:探讨即刻早期反应基因-1(immediate early response gene X-1,IEX-1)转染人卵巢癌细胞SKOV3后,对顺铂药物敏感性的影响。方法:提取并鉴定重组质粒pEGFP-N1-IEX-1,采用脂质体介导将重组质粒转染到人卵巢癌细胞SKOV3,RT-PCR检测转染前后IEX-1mRNA和蛋白的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后卵巢癌细胞SKOV3增殖情况以及对顺铂敏感性的变化。结果:成功转染IEX-1基因后可检测到IEX-1mRNA的高表达;转染组细胞的增殖速度增快(P<0.05),但对顺铂的敏感性明显增强(P<0.05)。结论:IEX-1可增强卵巢癌细胞的体外增殖能力,并增强卵巢癌细胞体外对顺铂化疗的敏感性,为肿瘤的有效干预和治疗提供新的靶点。