9-羧酸蒽对人髓性白血病细胞株HL-60凋亡的研究

目的　研究氯通道抑制剂 9-羧酸蒽 ( 9-AC)对人髓性白血病细胞株HL - 6 0的影响 ,并对相关机制进行探讨。方法　体外培养人白血病细胞株HL - 6 0 ,采用透射电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等观察9-A对HL - 6 0细胞的作用。结果　在 5× 10 -4 mol/L 9-AC作用 48h后 ,细胞发生明显的改变。电镜下细胞形成典型的凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性梯形条带。流式细胞仪分析表明 ,实验组HL - 6 0细胞出现明显的亚二倍体峰 -凋亡峰。结论　 9-AC具有明显的诱导白血病细胞HL - 6 0凋亡的作用。     

酒精对体外培养人红白血病细胞活性影响的研究

目的 了解长期饮酒对人体组织细胞损伤的可能原因。方法 采用不同浓度酒精加入体外培养的人红白血病(K562)细胞中,用荧光显微镜和倒置光显微镜观察细胞形态学变化,用琼脂糖凝胶电泳的方法检测细胞DNA裂解。结果 1％酒精能有效诱导K562细胞凋亡,且随剂量增大凋亡时间缩短。5％酒精作用30h则可引起细胞坏死。结论 长期饮酒者血液中有核细胞数量减少,可能与其促凋亡作用有关。     

硫芥诱导淋巴细胞凋亡与细胞周期的关系

目的 探讨硫芥诱导体外培养大鼠脾脏淋巴细胞凋亡及与细胞周期的关系。方法 体外分离培养大鼠脾脏淋巴细胞。以流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分别检测细胞凋亡，细胞周期，和DNA片段改变。结果 硫芥可诱导淋巴细胞凋亡(P＜0．05)，对细胞周期有明显影响，主要是S期和G2／M期明显降低，引起淋巴细胞生长阻滞在Gl期；流式细胞仪PI染色出现亚二倍体峰(凋亡峰)，其Gl期DNA含量明显增加，S期含量减少；琼脂糖凝胶电泳呈典型的“梯状”带(DNA ladder)。结论 硫芥可抑制体外培养的淋巴细胞由Gl期进入S期，抑制体外培养的淋巴细胞增殖，通过诱导淋巴细胞凋亡实现作用机制。     

1，25-二羟基维生素D3对K562细胞周期及凋亡的影响

目的观察1，25-二羟基维生素D3[1，25（OH）2D3]对白血病细胞株K562细胞周期及细胞凋亡的作用。方法Western印迹检测维生素D受体（VDR）在K562细胞的表达；四噻唑蓝法（MTT）、AO／EB、流式细胞仪分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期。结果（1）K562细胞核阳性表达VDR；（2）0-10^-6mol／L浓度的1，25（OH）2D3呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖，10^-8mol／L 1，25（OH）2D3明显抑制K562细胞增殖，促进凋亡，细胞周期阻滞主要发生在G2期或M早期，凋亡率从4．1％（对照组）增至26．5％（P〈0．01）。结论1，25（OH）2D3可明显抑制K562细胞增殖，促进细胞凋亡。     

阿魏蘑菇提取物对肿瘤细胞p53表达的影响

目的 探讨新疆阿魏蘑菇提取物对体外培养的肿瘤细胞p53蛋白表达的影响，从细胞凋亡角度研究其抗肿瘤机制。方法 采用肿瘤细胞体外培养技术及流式细胞技术，观察阿魏蘑菇不同剂量的水提物及醇提物对体外培养的4种肿瘤细胞p53蛋白表达的影响。结果 MTT实验结果显示，受试物对4种类型肿瘤细胞均具有较强的杀伤作用，尤其以0．1g／m1剂量组为明显；HT实验结果表明，经受试物处理后，4种类型肿瘤细胞均观察到细胞核固缩，DNA浓缩并向核膜靠拢形成浓染致密颗粒，并有典型凋亡小体出现。提示，受试物可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用；流式细胞仪检测结果显示，受试物处理后，4种类型肿瘤细胞p53蛋白表达水平均有不同程度的上调，尤其以醇提物作用24h后对Q3细胞p53蛋白表达水平的影响最为明显。结论 阿魏蘑菇提取物中的各组分可协同作用诱导肿瘤细胞促凋亡基因的表达，从而达到抗肿瘤的目的，有关阿魏蘑菇通过何种途径提高p53蛋白表达水平尚待深入探讨。     

硒化壳聚糖逆转K562/ADM细胞耐药与PI-3K/Akt信号通路的关系

目的研究硒化壳聚糖对体外培养多药耐药白血病细胞株K562/ADM的耐药逆转作用,探讨其与PI-3K/Akt信号通路的关系。方法 K562/ADM细胞培养于含0.6μg/ml阿霉素的培养液中维持其耐药性,应用MTT法检测硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的作用,计算逆转倍数;应用流式细胞法检测细胞凋亡;应用免疫印迹法检测磷酸化Akt(p-Akt)和P糖蛋白(P-gp)表达的改变。结果 K562/ADM细胞对阿霉素(ADM)耐药,硒化壳聚糖可有效抑制K562/ADM细胞增殖,呈一定的剂量和时间效应关系(P0.05,P0.01);硒化壳聚糖能够对K562/ADM细胞耐ADM产生一定的逆转作用,明显增强ADM对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用(P0.05,P0.01),下调p-Akt和P-gp水平(P0.01)。结论硒化壳聚糖对耐药白血病细胞株K562/ADM可产生增殖抑制和多药耐药逆转作用,其部分逆转机制可能是通过诱导细胞凋亡,抑制细胞P-gp表达,阻断细胞PI-3K/Akt信号通路而实现。     

厚朴酚对白血病细胞K562体外作用机制探讨

目的探讨中草药提取物厚朴酚对慢性髓性白血病细胞株K562的体外作用机制。方法选用不同浓度(0、5、10、15、20、25μmol/L)厚朴酚处理K562细胞不同时间(24 h、48 h),用MMT方法测定厚朴酚对K562细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测厚朴酚对K562细胞凋亡的影响。结果厚朴酚对K562有明显的增殖抑制作用,呈明显的时间-剂量依赖关系;其作用24 h、48 h的半数有效抑制率(IC50)分别为9.05、5.62μmol/L(P0.05)。流式细胞术检测结果显示,0、5、10、15μmol/L厚朴酚处理24 h后细胞凋亡率分别为1.35%、16.91%、29.61%、46.26%,呈剂量-时间依赖性(P0.05);同时厚朴酚能够抑制BCL-2的表达、上调Bax、细胞色素C及活化的caspase-3、caspase-9的表达。结论厚朴酚对K562细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用可能是通过caspase依赖的线粒体途径诱导细胞凋亡的。     

β-胡萝卜素对白血病HL-60细胞凋亡及细胞周期分布的影响

目的：　探讨β－胡萝卜素抑制白血病细胞增殖的机制。方法：　体外培养白血病细胞株ＨＬ－６０,培养时添加１０μｍ ｏｌ／Ｌ、５０μｍ ｏｌ／Ｌ、１００μｍ ｏｌ／Ｌβ－胡萝卜素作用２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ 后,用台盼蓝拒染法进行活细胞计数,绘制细胞生长曲线;应用流式细胞术分析细胞周期分布,同时利用流式细胞术结合ＤＮＡ 凝胶电泳检测白血病细胞凋亡。结果：　细胞生长曲线显示１０～１００μｍ ｏｌ／Ｌ的β－胡萝卜素均对白血病细胞株ＨＬ－６０ 有显著性抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示５０μｍ ｏｌ／Ｌ的β－胡萝卜素处理ＨＬ－６０ 细胞２４ｈ 后,出现Ｓ期阻滞,并诱导５．５９％ 的细胞凋亡。ＤＮＡ 凝胶电泳结果同样显示β－胡萝卜素能够诱导白血病ＨＬ－６０ 细胞凋亡。结论：　β－胡萝卜素对于髓系白血病细胞株ＨＬ－６０ 细胞的增殖具有显著性抑制作用,其机制可能是干扰的白血病细胞ＤＮＡ代谢;β－胡萝卜素诱导白血病细胞凋亡也是其抑制白血病的重要途径之一。     

香加皮水提取物诱导人食管癌细胞TE-13凋亡的实验研究

[目的]运用多种技术手段研究香加皮水提取物诱导人食管癌细胞TE-13凋亡.[方法]利用MTT染色在普通光镜下观察细胞凋亡形态学变化并观测药物对肿瘤细胞的抑制率;通过流式细胞仪分析人食管癌TE-13细胞凋亡率、细胞周期变化;DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测肿瘤细胞凋亡的DNA水平变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测细胞内钙离子浓度变化.[结果]经香加皮水提取物处理的人食管癌细胞TE-13出现核固缩、凋亡小体、新月状浓染区等细胞凋亡形态学改变,各剂量药物处理组的肿瘤细胞均表现生长抑制,且具有剂量依赖性,250μg/ml香加皮水提取物处理组的抑制率达91.02%.DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的梯形电泳条带.药物处理组的肿瘤细胞更多地被阻止于G2/M期,各剂量组均出现明显的凋亡变化,最大凋亡率可达20.3%.各剂量药物处理组的肿瘤细胞内的Ca2 浓度明显高于对照组(P<0.01).[结论]香加皮水提取物可明显抑制人食管癌细胞TE-13的生长增殖,诱导细胞凋亡,并能改变该肿瘤细胞周期分布,阻止细胞周期于G2/M期.     

急性淋巴细胞白血病患儿骨髓间充质干细胞对K562细胞株药物耐受性的影响

目的 研究急性淋巴细胞白血病患儿骨髓间充质干细胞（MSCs）对K562细胞药物耐受性的影响,并初步探讨其机制.方法 从白血病患儿骨髓中分离、培养并鉴定MSCs;建立K562细胞株与MSCs共培养的体系,观察MSCs对K562细胞生长的影响;AnnexinV-FITC检测一定浓度的阿霉素（ADM）对K562细胞凋亡的影响;流式细胞仪测定不同培养条件下的K562细胞周期;RT-PCR检测K562细胞的Bcl-2和Bax基因.结果 和单独培养的K562细胞相比,与MSCs黏附共培养的K562细胞生长较为缓慢,未见明显的对数生长期.单独培养组细胞早期凋亡率为（9.19±0.53）%,而黏附培养组为（4.00±0.37）%,差异具有统计学意义（P＜0.05）.黏附共培养组K562细胞,G0-G1期细胞比例为（80.95±3.83）%,显著高于单独培养组（50.2±2.26）%（P＜0.05）;而S期细胞比例为（17.40±1.50）%,显著低于单独培养组（37.03±3.50）%（P＜0.05）.相对于单独悬浮培养的K562细胞,黏附共培养的K562细胞Bcl-2基因相对表达明显增强,Bcl-2/Bax显著增高.结论 白血病患儿MSCs能抑制白血病细胞株K562生长,改变细胞周期而逃避药物的促凋亡作用,K562对阿霉素产生耐药性可能与黏附共培养后Bcl-2基因表达增强有关.     

藏红花素对K562细胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用的研究

目的探讨藏红花素对K562细胞株及裸鼠移植瘤的作用。方法利用MTT法检测不同浓度藏红花素对K562细胞的增殖抑制影响;Annexin V-FITC标记法检测K562细胞凋亡;建立K562细胞Balb/c裸鼠皮下移植瘤模型,荷瘤小鼠随机分成4组,分别用10、50、100 mmol/L浓度的藏红花素和生理盐水对瘤体进行局部注射,每次0.1 ml,隔日1次,连续7次,观察瘤体变化。结果不同浓度藏红花素对K562细胞均有抑制作用,呈明显的剂量依赖性,抑制率分别为21.5%、55.1%、81.6%(P<0.05);浓度为0.003 2 mol/L的藏红花素诱导K562细胞凋亡作用最显著,浓度为6.4 mmol/L的藏红花素使K562细胞呈中毒反应,凋亡作用不明显;藏红花素组瘤体生长较对照组明显受到抑制,不同浓度的藏红花素抑瘤率分别为18.5%、79.2%、91.6%。结论藏红花素具有显著抑制K562细胞增殖及促凋亡的作用,能有效抑制K562细胞Balb/c裸鼠移植瘤的生长。     

Nimesulide诱导胰腺癌细胞凋亡机制的研究

目的：探讨选择性COX-2抑制剂Nimesulide对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响及其可能分子机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察不同浓度Nimesulide对PANC-1细胞增殖的影响;流式细胞术（FACS）及DNA梯状电泳（DNA ladder）检测PANC-1细胞凋亡的改变;Western blotting法检测Nimesulide不同浓度作用下PANC-1细胞COX-2蛋白水平的改变,RT-PCR法检测COX-2 mRNA水平的变化。结果：MTT、流式细胞术及DNA ladder显示Nimesulide呈剂量依赖性地抑制PANC-1细胞的增殖,并诱导其凋亡;Western blotting和RT-PCR法显示随着药物浓度的增加,COX-2蛋白及mRNA表达降低。结论：Nimesulide可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡,从而抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长。     

三氧化二砷联用华蟾素对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究三氧化二砷联用华蟾素对K562细胞增殖和凋亡的影响,为三氧化二砷和华蟾素联合应用于临床提供理论依据.方法 细胞增殖采用细胞生长及活力测定;细胞凋亡采用细胞形态、Annexin-V/PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法 测定.结果 在三氧化二砷和华蟾素作用下K562细胞生长受抑伴随活力下降,1.0 μmol/L As2O3、0.125μg/rnl华蟾素、0.25 μg/ml华蟾素、1.0 μmol/L As2O3＋0.125μg/ml华蟾素、1.0 μmol/L As2O3＋0.25μg/ml华蟾素作用K562细胞24 h和48 h后,增殖抑制率分别为（24±1.3）%、（21±1.5）%、（38±3.1）%、（57±2.7）%、（66±3.3）%及（49±2.9）%、（48±2.7）%、（61±2.1）%、（77±3.8）%、（82±4.2）%,细胞凋亡率分别为（4.8±0.5）%、（5.6±0.7）%、（9.8±0.6）%、（11.9±1.2）%、（15.2±1.5）%及（11.0±0.9）%、（12.9±1.1）%、（18.4±1.5）%、（21.0±2.0）%、（28.0±1.9）%,凋亡细胞百分率呈时间剂量依赖关系;基因组DNA电泳出现＂梯＂状条带.结论 三氧化二砷和华蟾素均有抑制K562细胞增殖和诱导该细胞凋亡的作用,两药联用效果更佳.     

家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽促K562细胞凋亡作用及其机制研究

目的观察家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽对K562细胞核和线粒体膜电位及K562细胞凋亡蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的影响,进而探讨家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽是否可以影响线粒体膜电位及促进K562细胞凋亡。方法首先采用Hoechst33258荧光标记法,将家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞,用荧光显微镜检测K562细胞核荧光强度的变化;其次采用荧光探针罗丹明123标记K562细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察K562细胞中罗丹明123荧光强度,以细胞内荧光强度表示线粒体膜电位大小;最后用caspase-3检测试剂盒和酶标仪测定K562细胞caspase-3的含量。结果采用Hoechst33258荧光标记法,用荧光显微镜观察到家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞后部分细胞核的荧光强度增强,说明其可以引起K562细胞发生凋亡;用罗丹明123标记,激光共聚焦显微镜观察发现,家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用组的K562细胞荧光强度值明显低于对照组(t1=21.30,t2=196.23,P<0.05),说明家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽可以使K562细胞线粒体膜电位降低;峰5、峰8组分作用组caspase-3的含量明显高于对照组(t1=146.92,t2=189.56,P<0.05),说明3龄幼虫抗肿瘤肽可以促进K562细胞发生凋亡。结论家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽峰5、峰8组分对K562细胞核具有损伤作用,可以引起K562细胞发生凋亡,作用机制是通过降低K562细胞线粒体膜电位,激活caspase-3,扰乱其生理功能,促使其凋亡。     

天然食物小根蒜诱导S180细胞凋亡作用的研究

目的探讨天然食物小根蒜体外诱导小鼠S180肿瘤细胞凋亡作用，寻找开发预防和治疗肿瘤的新资源及提取有效成分应用于临床。方法以不同浓度的小根蒜水提取液和小鼠S180肿瘤细胞共同体外培养12和24h，采用流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色法，测定细胞凋亡百分率及对细胞周期的影响。结果小根蒜水提取液可诱导小鼠S180肿瘤细胞凋亡，其凋亡百分率(AP％)随着浓度的增加及作用时间的延长而增加。作用24h，500mg／ml小根蒜AP％为43．28％。对细胞周期的影响，表现在S期、G2／M期细胞百分率下降。结论天然食物小根蒜能诱导小鼠S180肿瘤细胞凋亡，并抑制DNA合成及细胞增殖。     

亚急性甲醛吸入对小鼠肝细胞DNA损伤作用

目的检测亚急性甲醛吸入对小鼠肝细胞的损伤作用,并探讨用归一化处理方法解决单细胞凝胶电泳重复性差的可行性.方法将小鼠分别暴露于不同浓度的气态甲醛（0.5,1.0和3.0 mg/m^3）中染毒14d,每天6 h,用单细胞凝胶电泳技术检测肝细胞DNA的损伤程度.结果0.5和1.0 mg/m^3的甲醛可造成DNA的严重断裂（P＜0.001）,而3.0mg/m^3的甲醛则引起显著的交联作用,归一化的结果与之相符,并表明不同浓度的甲醛导致不同程度和类型的DNA损伤.结论甲醛可造成机体内肝细胞DNA的断裂和交联,该损伤可能是甲醛致癌机制之一;归一化可以弥补单细胞凝胶电泳实验重复性不佳的缺陷.     

新疆阿魏菇粗提物抗肿瘤效应研究

研究新疆阿魏菇粗(水、醇)提物中可能的抗肿瘤有效成分,探讨粗提物抗肿瘤作用的分子生物学机制。方法: 采用天然植物化学分离、分析及鉴定技术,对阿魏菇醇提物进行了有效成分的初步分离、鉴定;运用形态学观察、流式细胞技术及RT-PCR技术,从诱导肿瘤细胞凋亡角度探讨粗提物抗肿瘤机制。结果: 1. 分离所得组分1号、2号及3号结晶可能为同一种物质─山梨醇,4号组分为一氨基酸混合物;2. 分离组分的体外抗肿瘤作用明显低于粗提物;3. 荧光染色实验结果显示,不同剂量的阿魏菇粗提物分别作用12及24 h后,四种类型肿瘤细胞的凋亡细胞百分比均明显高于阴性对照组(P<0.05, P<0.01);4. 流式细胞术及RT-PCR实验结果,(1)阿魏菇醇提物及水提物作用后,Q3、Hela细胞P53蛋白表达水平明显上调,尤以Q3细胞醇提物作用24h最为明显;(2)以-actin的表达及表达量作为内对照,四种类型肿瘤细胞均出现P53蛋白表达水平的提高,p53基因、fas基因mRNA表达水平亦上调(P<0.05, P<0.01)。结论: 阿魏菇粗提物可能通过诱导促进肿瘤细胞凋亡基因(p53基因、fas基因)的转录及表达而发挥抗肿瘤作用,至于p53、fas基因通过何种途径促进肿瘤细胞凋亡,尚待进一步探讨。     

预热诱导K_(562)细胞热应激蛋白70高表达对高温引起细胞凋亡的影响

为初步观察预热诱导的应激蛋白 70 (HSP70 )高表达对高温所致细胞凋亡影响 ,用 40℃预热诱导K5 6 2 细胞产生应激蛋白 70高表达 ,用 RT- PCR半定量法检测细胞应激蛋白表达情况 ,然后分别将预热细胞和对照细胞置于 43℃用高温诱导细胞凋亡 ,用流式细胞仪检测细胞凋亡率 ,判断 HSP70高表达对细胞凋亡的影响。用 RT- PCR检测发现 ,随着细胞预热时间的延长 ,细胞 HSP70合成明显增加 ,到 12 0 min时达到最高 ,高水平可以维持数小时 ;43℃高温处理后 ,未预热组的细胞凋亡率明显高于预热细胞 ;预热时间长的细胞组细胞凋亡率明显低于预热时间短的细胞组。提示 HSP70高表达可以抑制高温所致的 K5 6 2 细胞凋亡。     

二乙基亚硝胺对人胎肝干细胞的毒性效应

目的探讨二乙基亚硝胺(Diethylnirtosamine,DENA)对人胎肝干细胞的毒性效应,为评价其遗传毒性提供理论依据。方法用不同质量浓度DENA(0、450、900、1350、1800、2250μg/ml)处理人胎肝干细胞后,应用MTT法检测DENA对体外培养的人胎肝干细胞增殖的抑制作用及量效关系;通过单细胞凝胶电泳实验检测不同剂量DENA处理后人胎肝干细胞DNA的损伤情况;利用Hoechst 33258染色方法检测DENA诱导后人胎肝干细胞凋亡的情况。结果人胎肝干细胞经900、1350、1800μg/ml的DENA处理48 h后,细胞存活率低于阴性对照组,差异有显著性(P0.01);人胎肝干细胞经DENA处理24 h后,出现染色体固缩、浓染等细胞凋亡表现;单细胞凝胶电泳实验发现,当DENA为900和1350μg/ml时,具有致DNA断裂的作用,尾部DNA含量分别达到(18.44±4.99)%和(17.33±3.29)%,明显高于对照组的(0.015±0.004)%,差异有显著性(P0.01),但在1800和2250μg/ml时,彗星拖尾程度明显降低,差异有显著性(P0.01)。结论 DENA对人胎肝干细胞具有直接毒性效应,引起DNA损伤,具有潜在遗传毒性。