肺癌高转移和低转移细胞株中差异基因的分析

目的:以人肺癌低转移细胞株SPC-A-1为对照,分析人肺癌高转移细胞株SPC-A-1sci的分子转移机制及其相关的信号通路,寻找肺癌转移的关键基因.方法:应用芯片技术检测人肺癌低转移细胞株SPC-A-1和高转移细胞株SPC-A-1sci的差异基因.采用显著性通路分析和构建信号转导网络等生物信息学分析方法寻找肿瘤转移相关的潜在关键基因和信号通路.结果:与SPC-A-1细胞比较,SPC-A-1sci细胞共有上调表达的差异基因2 892个,下调表达的差异基因3 248个;上调差异基因参与的显著性信号转导通路共有48条,下调差异基因参与的显著性信号转导通路共65条.网络中的关键基因主要是丝裂原活化蛋白激酶1、表皮生长因子受体、AKT1、AKT3、PIK3CD( phosphoinositide-3-kinase,catalytic,delta polypeptide)、PIK 3R1 [phosphoinositide-3-kinase 3,regulatory subunit 1 (alpha)]、PIK 3R3、KRAS和胰岛素样生长因子1受体等.结论:人肺癌高转移细胞株SPC-A-1sci的基因芯片检测和生物信息学分析为肺癌转移的基础研究和临床防治提供了依据.     

高转移性人乳腺癌细胞亚克隆的筛选

目的筛选高转移潜能的人乳腺癌细胞亚克隆,为人类乳腺癌转移相关的体内外研究提供实验对象。方法通过有限稀释法分离和培养人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的单克隆;采用细胞生物学方法体外评价亚克隆的克隆形成、增殖、运动和侵袭能力;将MDA-MB-435S亚克隆细胞通过乳腺脂肪垫接种于免疫双缺陷SCID鼠,验证体外筛选克隆的体内转移能力。定量资料采用独立样本t检验进行统计学分析。结果筛选得到MDA-MB-435S的高转移亚克隆14-E5;14-E5与亲代细胞呈梭形、伪足较长的细胞形态明显不同,体积比亲代细胞小,呈多边形,触角增多;细胞的体外克隆形成能力、运动能力、侵袭能力及体内自发转移能力均较亲代显著增强(P0.050);细胞周期S期和G2/M期比例比亲代减少,增殖能力较亲代降低(t=7.047,P=0.002);细胞异质黏附能力、体内成瘤率与亲代之间的差异无统计学意义(P0.050)。结论筛选并建立了高转移潜能人乳腺癌细胞亚克隆细胞株14-E5,可以用于乳腺癌转移基因筛选、转移机制研究、抗转移药物的研发和评价抗转移实验性治疗疗效。     

高转移性人肺腺癌细胞株SPC-A-1BM的建立及其特性分析

目的:建立高转移性人肺腺癌细胞株SPC-A-1BM及其免疫缺陷小鼠转移动物模型。方法:将人肺腺癌细胞株SPC-A-1经免疫缺陷小鼠血道或肺原位接种后形成转移,在放射性核素示踪下找到骨转移病灶,然后切除病变骨组织进行体外培养获得转移性肺癌细胞,用这些癌细胞重复以上循环10次,获得高转移肺癌细胞。采用荧光定量PCR方法检测亲代细胞和高转移细胞的基因表达。结果:获得以骨转移为主,肺、肾上腺、淋巴结等多脏器转移的人肺腺癌转移细胞株(SPC-A-1BM)及其免疫缺陷小鼠动物模型。定量PCR检测显示SPC-A-1BM的上皮生长因子受体(EGFR/HER)家族、血管内皮生长因子(VEGF)家族和3个抗凋亡蛋白的基因较原代细胞均有不同程度的变化。结论:SPC-A-1BM是以骨转移为主的高转移性人肺腺癌细胞株,该细胞株及其转移动物模型为肺癌转移的生物学研究提供了一个良好的技术平台。     

高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽对肝癌侵袭和转移的影响

目的 研究高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽(AWYPLPP肽)对肝癌侵袭和转移的影响.方法 采用Matrigel侵袭实验、迁移实验、二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)实验以及黏附实验,探讨AWYPLPP肽对高转移潜能人肝癌细胞HCCLM3侵袭表型的影响.裸鼠皮下接种HCCLM3细胞,建立肿瘤肺转移模型,观察AWYPLPP肽对HCCLM3肺转移的影响.结果 侵袭实验结果显示,在AWYPLPP肽浓度为0.1～100 μmol/L时,能显著促进HCCLM3细胞的侵袭能力,呈剂量效应关系.迁移实验、MTT实验和黏附实验表明,AWYPLPP肽对HCCLM3细胞的迁移、增殖和黏附能力无影响.HCCLM3细胞皮下接种30 d后处死裸鼠,AWYPLPP肽组出现明显的肺转移,肺转移率为88.9%(8/9),与PBS组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但对皮下肿瘤的生长无明显影响.结论 AWYPLPP肽能促进高转移潜能人肝癌细胞体外侵袭能力以及肿瘤肺转移;进一步寻找肿瘤细胞表面与AWYPLPP肽结合的受体,可能为深入研究肝癌侵袭转移的机制和设计干预治疗的靶点提供新思路.     

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白（β-catenin）蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）,并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）;尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强（P<0.01, P<0.01）。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。     

下调ZEB-1表达对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:探讨ZEB-1对非小细胞肺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:构建干扰ZEB-1的质粒,转染至A548细胞株,运用体外增殖、迁移、侵袭实验来观察ZEB-1表达下调后对非小细胞肺癌细胞株A549生物学行为的影响。结果:下调ZEB-1的表达可降低A549细胞株的增殖、迁移和侵袭能力。结论:ZEB-1表达水平与非小细胞肺癌侵袭转移的能力显著相关。     

吉非替尼对非小细胞肺癌细胞的体外抑制作用

目的研究体外吉非替尼对非小细胞肺癌细胞株的作用机制。方法观察吉非替尼作用于A549、SPC-A-1、H460、H1229、95D5株人类非小细胞肺癌细胞株,应用活细胞计数试剂盒CCK8测定各组细胞增殖抑制情况;选择A549、SPC-A-1细胞株,PI标记后应用流式细胞术观察细胞凋亡状况,Transweu方法检测细胞侵袭情况;Westernblot检测药物对增殖相关信号通路蛋白表达的变化。结果吉非替尼抑制了各株肺癌细胞的增殖和侵袭（P〈0．05）;吉非替尼组中A549和SPC-A-1细胞的凋亡率分别为（9．6±0．73）％和（14．3±1．12）％,高于对照组的（3．1±0．29）％（t=11．16,P=0．001;t－4．726,P=0．009）;吉非替尼作用于A549细胞72h后,能明显降低p-AKT、P—EGFR、p-MAPK蛋白的表达水平（t=6．656,P=0．003;t=16．441,P=0．0001;t=3．736,P=0．020）。结论吉非替尼能抑制肺癌细胞在体外的增殖、侵袭,可诱导肿瘤细胞的凋亡,其作用可能与下调活化的表皮生长因子受体（EGFR）信号转导通路关键酶的表达有关。     

人大细胞肺癌细胞系NL9980和L9981的建立及其生物学特性研究

目的 探讨从人大细胞肺癌细胞株WCQH-9801分离构建不同转移潜能肺癌细胞株的可能性，并鉴定其生物学和分子生物学差异。方法 应用单个细胞克隆技术分离建立不同肺癌细胞亚系NL9980和L9981；应用Southern blot、RT-PCR、Western blot检测NL9980和L9981细胞株中nm23-H1基因多态性、mRNA和蛋白转录表达水平；应用MTT法、平板法、Boyden小室法、染色体分型法以及动物实验检测NL9980和L9981细胞株的体内体外生物学特征。结果 ①成功分离建立具有不同转移能力的人大细胞肺癌细胞系NL9980和L9981；②L9981细胞系存在nm23-H1等位基因杂合性缺失、mRNA和蛋白表达缺失，而NL9980细胞株：nm23-H1等位基因结构和转录表达均正常；③L9981细胞株的体外增殖能力、克隆形成率和体外侵袭力均显著高于NL9980细胞株；④L9981细胞株在裸鼠体内的成瘤性和肺部转移率均显著高于NL9980；⑤NL9980和L9981染色体众数比较无显著性差异。结论 ①NL9980和L9981细胞株具有不同的生物学和分子生物学特征；②L9981细胞株的高侵袭和高转移潜能可能与nm23-H1等位基因缺失有关。     

nm23-H1对肝癌细胞株SMMC7721转移特性的抑制

[目的]研究转移抑制基因nm23-H1与肝癌细胞转移行为的关系.[方法]体外构建真核细胞表达重组体DNA pcDNA 3.1(-)-nm23-H1;采用Lipofectamine介导将目的基因nm23-H1体外转染肝癌细胞株SMMC7721,通过软琼脂克隆实验、内皮细胞异质粘附实验和Boyden小室侵袭实验对转染细胞的生物学活性进行检测.[结果]粘附实验中,实验组肿瘤细胞株与内皮细胞粘附计数为(50～60)/mm2,少于对照组的(200～300)/mm2,实验组细胞株粘附性降低,t检验P＜0.05;软琼脂克隆实验对照组形成多个细胞克隆(47%～62%),而实验组无克隆形成,克隆能力明显降低;Boyden小室侵袭实验中,每视野穿透Matrigel膜的细胞数分别为1.34～3.26和27.46～32.94,实验组细胞株侵袭能力明显低于对照组细胞株,t检验P＜0.01.[结论]nm23-H1能够降低肿瘤细胞株SMMC7721在体外的转移潜能.     

脾源性酪氨酸激酶Syk的抗肿瘤作用

目的探讨脾源性酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）的体内外抗肿瘤作用。方法经脂质体介导将全长Syk cDNA转入Syk阴性表达的高侵袭性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,应用MTT法、Transwell小室法分别检测SykcDNA体外抗肿瘤细胞增殖及侵袭迁移作用;采用BABL／c（nu／nu）裸鼠皮下移植瘤模型,检测转染及未转染肿瘤细胞的成瘤及肺转移情况。结果转染全长Syk cDNA的MDA—MB-231细胞与转染空载体及未转染MDA—MB-231细胞相比,体外增殖情况未见明显改变,而侵袭及迁移实验中的穿膜细胞数（总迁移细胞数／5HPF）却均明显减少（P〈0．05）;同样,接种不同肿瘤细胞的裸鼠皮下移植瘤成瘤情况未见明显差异,但接种转染组肿瘤细胞的肺转移率却显著低于未转染组及空载体转染组（P〈0．05）。结论Syk通过改变乳腺肿瘤细胞的侵袭迁移能力参与其抗瘤作用。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管贲门癌切除术黏膜层单层吻合法疗效分析

目的探讨食管、胃及空肠黏膜单层吻合法预防吻合口瘘、吻合口狭窄及返流性食管炎的效果.方法 1996年3月～2002年8月手术治疗食管癌235例,贲门癌195例,采用食管-胃及空肠黏膜延长、黏膜单层缝合法.结果术后10 d X线吞钡照片示钡剂通过顺畅,吻合口直径1.5～2 cm.术后随访1年,吞咽顺利,未见吻合口狭窄.结论该术式吻合口径宽,对预防吻合口瘘、狭窄及返流性食管炎效果显著,是食管及胃肠吻合较为理想的方法.     

少见部位骨巨细胞瘤的X线影像分析

目的统计分析一组少见部位骨巨细胞瘤的Ｘ线影像表现,对易与之混淆的４种骨病提出鉴别诊断,以加深认识。方法搜集经手术、病理证实的少见部位骨巨细胞瘤４８例Ｘ线平片、ＣＴ和动脉造影片资料进行回顾性分析。结果表现为囊状膨胀性骨质破坏３０例,且内多有肥皂泡沫状表现;溶骨性骨质破坏１０例;骨外有软组织肿块,骨塌陷变扁伴局部膨出４例;侵犯邻骨４例;骨质增生硬化３例;异常血管及“肿瘤染色”３例。结论Ｘ线平片对少见部位骨巨细胞瘤诊断具有重要价值,ＣＴ优于平片,动脉造影有助于诊断与制定治疗方案。     

12例子宫颈残端癌治疗分析

目的：探讨子宫颈残喘癌的预防和治疗。方法：1986年5月到1992年7月，我院共收治经病理证实的子宫颈残端癌12例。所有病人均在外院接受过子宫次全切除术。Ⅰ期2例，Ⅱ期4例，Ⅲ期6例。根据期别、组织学类型、解剖特点，治疗采用单纯手术，手术加放疗；单纯放疗、体外加后装腔内放疗；放疗加化疗。结果：全组7例存活，存活率58.3％，5例死亡中4例死于肿瘤，1例第8年死于其它疾病。结论：子宫颈残端癌预防的关键在于子宫次全切除前宫颈细胞学或病理证实无病变，术后严密随诊。治疗方法主要是放射治疗，部分全盆大野，盆腔四野加个体化后装腔内治疗。