顺铂间歇性干预对A549中干细胞及EMT相关基因表达的影响

目的:研究肺癌细胞A549在顺铂(DDP)间歇性干预后肿瘤干细胞(CSC)标志物(CD133)和上皮细胞间质转化(EMT)标志物(E-cadherin、β-catenin、Vimentin和Fibronectin)表达的变化,探讨肺癌耐药和CSC及EMT之间的相关性。方法:应用CCK-8法检测A549细胞对DDP的敏感性,DDP IC50间歇性处理A549细胞,采用Western blot法检测CD133蛋白表达变化,RT-q PCR法测定A549细胞处理前后E-cadherin、β-catenin、Vimentin和Fibronectin mRNA的表达。结果:肺腺癌细胞A549经DDP间歇性干预后,CSC标记物CD133蛋白表达增高,E-cadherin和β-catenin mRNA的相对表达量均显著降低,Vimentin mRNA的相对表达量显著增高。结论:A549细胞经DDP间歇性干预后有CSC标志物的表达,并表现出EMT的特性。     

ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

H2AX磷酸化抑制肺癌细胞发生上皮-间质转化的作用机制

背景与目的：上皮-间质转化（epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）是肿瘤细胞发生转移的关键生物学过程,阻碍EMT将抑制肿瘤转移,因此阐明EMT的分子机制具有重要意义。抑癌蛋白H2AX调控肿瘤细胞凋亡相关基因表达,进而产生抗肿瘤作用。揭示H2AX与EMT的关系,探讨H2AX调控肺癌细胞EMT可能的作用机制。方法：利用5%胎牛血清诱导肺癌A549稳定株细胞（包括H2AX基因沉默、H2AX过表达和H2AX磷酸化位点突变）产生EMT。采用蛋白质印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测肿瘤细胞EMT标志性分子E-cadherin和vimentin的表达、以及其他EMT相关蛋白血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2）等分子的表达。采用transwell实验分析肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力。结果：基因沉默肺癌A549细胞H2AX导致E-cadherin蛋白和mRNA水平下调以及vimentin蛋白和mRNA水平的上调,并增强A549细胞的迁移和侵袭能力。肺癌A549细胞过表达H2AX则上调E-cadherin蛋白和mRNA、下调vimentin蛋白和mRNA,抑制A549细胞的迁移和侵袭;H2AX磷酸化位点突变则部分消除H2AX对E-cadherin上调和vimentin的下调作用以及H2AX对A549细胞EMT的抑制作用;肺癌A549细胞中H2AX基因沉默则刺激VEGFR-2表达,过表达H2AX则抑制VEGFR-2表达;H2AX磷酸化位点突变则消除H2AX对VEGFR-2表达的抑制作用;基因沉默A549细胞中VEGFR-2则抑制EMT作用;H2AX基因沉默刺激肺癌A549细胞EMT相关因子Slug和β-catenin的表达,过表达H2AX抑制Slug和β-catenin表达;H2AX磷酸化位点突变后则消除H2AX对Slug和β-catenin表达的抑制作用。结论：γH2AX通过下调VEGFR-2以及Slug和β-catenin表达进而抑制肺癌A549的EMT过程。     

miR-573调控神经导向因子4促进肺癌细胞上皮间质转化

目的:探讨miR-573通过调控神经导向因子4（NTN4）对肺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人肺癌组织和细胞系中miR-573和NTN4 mRNA水平。采用Lipofectamine 2000转染试剂对肺癌A549细胞进行转染并分组为Control组（不转染）、NC inhibitor组（转染NC inhibitor）、miR-573 inhibitor组（转染miR-573 inhibitor）、miR-573 inhibitor+si-NC组（转染miR-573 inhibitor和si-NC）和miR-573 inhibitor+si-NTN4组（转染miR-573 inhibitor和si-NTN4）。qRT-PCR检测miR-573表达水平；划痕法检测迁移能力；Transwell法检测侵袭、迁移能力；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测NTN4及E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达水平；双荧光素酶实验验证miR-573和NTN4的靶向关系。结果:肺癌组织和细胞系中miR-573表达明显升高，NTN4 mRNA表达明显降低（P<0.05），选择miR-573表达最高的A549细胞进行转染实验。与Control组或NC inhibitor组相比，miR-573 inhibitor组A549细胞中miR-573相对表达量、N-cadherin和Vimentin蛋白水平明显下降，划痕愈合率明显降低，迁移、侵袭细胞数明显减少，E-cadherin蛋白水平显著上升（P<0.05）。miR-573负向调控NTN4表达（P<0.05）。转染si-NTN4可逆转miR-573 inhibitor对A549细胞迁移、侵袭、EMT的抑制作用（P<0.05）。结论:miR-573靶向负调控NTN4表达，促进肺癌细胞的迁移、侵袭和EMT。     

姜黄素通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制TGF-β1诱导的肺癌细胞上皮间质转化

摘 要：［目的］ 探讨姜黄素对TGF-β诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化、侵袭转移的影响及其可能的机制。［方法］ 通过转化生长因子TGF-β1诱导肺癌细胞株A549发生上皮间质转化;利用不同浓度姜黄素干预由TGF-β1诱导的肺癌 A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞划痕实验、Transwell 侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,Western blot法检测上皮表型标记蛋白E-cadherin和间质表型标记蛋白N-cadherin、Vimentin的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路中AKT、mTOR磷酸化的情况,并利用PI3K抑制剂LY290004、mTOR抑制剂Rapamycin通过上述方法对姜黄素的作用进行印证。［结果］ 与对照组相比,姜黄素显著增加A549细胞E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin蛋白及TGF-β1刺激p-AKT和p-mTOR的表达,且呈明显的剂量—时间依赖关系;同时抑制TGF-β诱导的侵袭迁移。［结论］ 姜黄素可通过PI3K/AKT/mTOR通路明显抑制TGF-β1诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化,降低其侵袭迁移能力。     

THBS2在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:研究血小板反应蛋白2（thrombospondin 2,THBS2）在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞H1299和A549迁移能力、侵袭能力、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并探究分子机制。方法:运用TIMER和GEPIA数据库分析THBS2 mRNA在泛肿瘤和肺腺癌组织中的表达,利用UALCAN数据库分析THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中的表达差异,通过HPA数据库检测THBS2蛋白在肺腺癌组织中的表达情况。通过免疫印迹实验（Western blot）检测THBS2在人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）和肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达情况。应用质粒转染技术在肺腺癌细胞H1299和A549中分别过表达和敲低THBS2。细胞划痕实验和侵袭实验（Transwell）检测细胞迁移和侵袭能力。Western blot验证THBS2过表达和敲低效率,同时检测EMT相关蛋白和MMP2的表达水平。结果:TIMER数据库与GEPIA数据库检索结果显示THBS2 mRNA在肺腺癌组织中高表达（P＜0.001）。UALCAN数据库分析证明,与正常肺组织相比,THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中均显著表达（P＜0.001）。HPA数据库结果显示,THBS2蛋白在肺腺癌组织中呈现中高等强度表达。细胞划痕实验、Transwell实验和Western blot结果表明,THBS2在人正常支气管上皮细胞和肺腺癌细胞中的表达有显著差异（P＜0.01）;过表达THBS2可增加肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平减少,而N-cadherin和Vimentin表达水平增加（P＜0.01）;相反的,敲低THBS2可抑制肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平增加,而N-cadherin和Vimentin表达水平减少（P＜0.01）。结论:THBS2在肺腺癌组织中高表达;THBS2在肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达均显著高于人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）;THBS2在肺腺癌细胞H1299和A549中的过表达和敲低影响迁移、侵袭和EMT的过程,可作为肺腺癌治疗的新型潜在靶点。     

Gli-1信号通路对TGF-β1诱导的人胃癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的:探讨核转录因子神经胶质瘤关联癌基因同源物1（glioma associated oncogene homolog 1,Gli-1）对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用机制。方法:体外采用10 ng/ml TGF-β1对胃癌SGC-7901细胞进行处理,使用倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR和Western blot检测EMT上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力变化,检测TGF-β1 对SGC-7901细胞发生EMT 的影响;同时采用RT-PCR和Western blot检测Gli-1的mRNA和蛋白表达水平。随后进一步采用Gli-1基因特异性阻断剂GANT 61阻断Gli-1表达,并使用TGF-β1（10 ng/ml）对SGC-7901细胞进行处理,RT-PCR 和Western blot检测Gli-1、E-cadherin和Vimentin mRNA 及其蛋白表达水平的改变,并使用Transwell细胞侵袭实验检测阻断Gli-1对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。结果:TGF-β1可以诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化并促进细胞侵袭。TGF-β1可以在mRNA和蛋白水平下调上皮表型蛋白E-cadherin的表达、提高Gli-1和间质表型蛋白Vimentin的表达。TGF-β1可以明显提高SGC-7901细胞侵袭,而阻断Gli-1后可以抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化和细胞侵袭。结论:胃癌SGC-7901细胞中Gli-1 可能参与TGF-β1 介导的EMT 的发生,Gli-1 可能作为胃癌基因治疗中的有效靶点发挥作用。     

山萘酚通过下调ERRα 抑制非小细胞肺癌A549 细胞的侵袭和迁移

目的:探讨山奈酚（kaempferol）对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC）A549 细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法：A549 细胞培养完成后,CCK-8 法检测不同浓度山奈酚对A549 细胞增殖的影响,Transwell 和划痕实验检测A549 细胞侵袭和迁移能力,Western blotting 检测EMT相关蛋白的表达,qRT-PCR和Western blotting 检测山奈酚对雌激素相关受体α（estrogen related receptor alpha, ERRα）mRNA和蛋白表达的影响。构建ERRα 过表达载体pLV-ERRα 转染A549 细胞后,Transwell实验、划痕愈合实验和Western blotting 检测A549 细胞侵袭、迁移和EMT相关蛋白的表达情况。结果：山奈酚浓度依赖性抑制A549 细胞增殖,选择5、10 和20 μmol/L山奈酚进行后续实验。经山奈酚处理后,A549 细胞侵袭细胞数目显著减少、划痕愈合率显著降低、N-cadherin 和Snail-2 的表达显著下调,E-cadherin 的表达显著上调,ERRa mRNA 和蛋白水平显著降低（均P<0.01）。转染pLV-ERRα 后,过表达ERRα 的A549 细胞的侵袭细胞数、划痕愈合率均显著增加,细胞中N-cadherin、Snail-2 表达上调,而E-cadherin 的表达下调（均P<0.05 或P<0.01）;该细胞再经山奈酚处理后,上述各指标均发生逆转变化（均P<0.05 或P<0.01）。结论：山奈酚通过抑制ERRα 降低NSCLC A549细胞侵袭和迁移能力,并抑制其EMT,为肺癌的临床治疗提供了实验依据。     

IFN-γ通过诱导上皮间质转化增强人乳头状甲状腺癌细胞株的侵袭转移能力

目的:观察IFN-γ对人乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1侵袭和转移能力的影响,并探讨上皮间质转化过程（EMT）在其中的作用。方法:采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测IFN-γ对TPC-1侵袭转移能力的影响;实时定量PCR和Western检测EMT标志物E-cadherin,N-cadherin,Vimentin的mRNA水平及蛋白水平变化;免疫荧光检测上述标志物的定位表达。结果:划痕愈合实验和Transwell侵袭实验结果显示:IFN-γ增强了TPC-1的侵袭转移能力（P＜0.05）,实时定量PCR结果显示EMT的上皮标志物E-cadherin的mRNA表达水平明显下降,间质标志物Vimentin的mRNA表达上调,而N-cadherin的mRNA未见明显变化。Western结果显示E-cadherin在IFN-γ作用下表达下调;N-cadherin与Vimenin表达上升;免疫荧光结果与Western结果一致。结论:INF-γ可以通过诱导EMT,促进TPC-1侵袭转移,提示炎性介质IFN-γ可能参与人乳头状甲状腺癌的侵袭转移。     

MicroRNA-29a靶向抑制PTEN基因诱导非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的机制研究

目的:探讨microRNA-29a（miR-29a）及其靶蛋白PTEN在TGF-β1诱导非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用机制。方法:选择A549细胞经终浓度为10 ng/ml TGF-β1诱导48 h后,分为Blank组（不转染任何序列）、阴性对照（negative control,NC）组（转染阴性对照序列）、IN组（转染miR-29a inhibitors）、siRNA组（转染PTEN-siRNA）和IN+siRNA组（共转染miR-29a inhibitors和PTEN-siRNA）。普通显微镜观察各组细胞形态学变化;免疫荧光检测各组细胞中E-cadherin表达水平;qRT-PCR法检测EMT相关因子及PTEN mRNA表达水平;Western blotting法检测转染后EMT相关因子、PTEN、Akt和p-Akt蛋白的表达;划痕实验检测各组细胞迁移能力。构建裸鼠移植瘤模型,观察肿瘤生长,免疫组化检测裸鼠肿瘤组织中PTEN及EMT相关因子蛋白表达水平。结果:A549细胞转染miR-29a inhibitors后TGF-β1诱导细胞的上皮间质转化显著受到抑制,N-cadherin、Vimentin及Slug的mRNA和蛋白表达水平在IN组中显著低于Blank组和NC组,但在siRNA组和IN+siRNA组中显著上调（均P<0.05）。与Blank组和NC组相比,IN组PTEN mRNA和蛋白表达水平明显升高,且p-Akt的表达显著降低,细胞迁移率显著下降,而siRNA组和IN+siRNA组PTEN mRNA和蛋白表达明显降低,p-Akt的表达显著上升,细胞迁移率显著升高（均P<0.05）。裸鼠移植瘤实验结果显示与Blank组和NC组相比,IN组肿瘤生长较慢,重量降低,E-cadherin和PTEN蛋白表达显著升高,N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Slug蛋白表达显著降低（均P<0.05）。结论:TGF-β1能诱导NSCLC细胞发生EMT,且能上调miR-29a并抑制PTEN的表达水平;抑制miR-29a的表达水平可能通过上调靶基因PTEN,促进Akt磷酸化,抑制EMT的发生。     

LSD1抑制剂抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine-specific demethylase 1,LSD1）抑制剂对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组和LSD1抑制剂组,在细胞进入对数生长期时,向实验组细胞中分别加入不同浓度的LSD1抑制剂,培养24 h。CCK-8法用于细胞增殖检测,划痕实验用于细胞迁移检测,Transwell小室法用于细胞侵袭检测,裂解细胞提取总蛋白后通过蛋白质免疫印迹技术（Western blot,WB）检测A549细胞中上皮细胞标志物E型钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物N型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:与对照组相比,LSD1抑制剂组细胞增殖率、穿膜细胞数和划痕愈合率显著降低（P＜0.05）;LSD1抑制剂组相较于对照组,E-cadherin表达量升高,N-cadherin和Vimentin的表达量均降低（P＜0.05）。结论:LSD1抑制剂可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化。     

STC1诱导上皮-间质转化促进肺癌细胞的侵袭和迁移

背景与目的：斯钙素1（stanniocalcin 1，STC1）与癌症的发展和不良预后相关，但STC1对肺癌细胞转移的影响及其作用机制目前还未完全阐明。探讨STC1对肺癌细胞侵袭和迁移的影响及其可能的内在分子机制。方法：构建STC1过表达的细胞系HLEC-STC1及对照细胞系HLEC-EV，STC1沉默的细胞系A549-STC1 siRNA及对照细胞系A549-EV；采用Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力；采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）标志物的mRNA和蛋白质水平变化；并使用细胞免疫荧光技术进一步验证细胞EMT标志物的表达和定位；采用Western blot检测EMT相关信号通路蛋白和转录因子的水平。结果：与对照细胞相比，过表达STC1的HLEC-STC1细胞的侵袭和迁移能力增强，STC1沉默的A549-STC1 siRNA细胞的侵袭和迁移能力减弱（P＜0.05）；过表达STC1的HLEC-STC1细胞中上皮标志物上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达下调，间质标志物神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及肿瘤干细胞标志物上皮细胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule，EpCAM）表达上调（P＜0.05）；低表达STC1的A549-STC1 siRNA细胞中E-cadherin的表达上调，N-cadherin、vimentin及EpCAM的表达下调（P＜0.05）；同时，HLEC-STC1细胞中细胞外调节蛋白激酶信号通路（extracellular signal-regulated protein kinase，ERK）及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路激活相关的磷酸化（p）-ERK和β-catenin的水平升高，转录因子E盒结合锌指蛋白1（zinc finger E-box-binding homeobox 1，ZEB1）和锌指转录因子1（Snail1）的表达水平上调，A549-STC1 siRNA细胞中的结果则相反（P＜0.05）。结论：STC1可能通过激活ERK和Wnt/β-catenin信号通路上调转录因子ZEB1和Snail1的表达水平，从而诱导EMT促进肺癌细胞的侵袭和迁移。     

SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路影响结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨SET和MYND域包含蛋白质2（SET and MYND domaincontaining protein 2,SMYD2）调控结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞迁移和侵袭的机制。方法:从徐州医科大学附属医院收集2019年08月至2020年03月的24对结直肠癌及癌旁组织,进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析SMYD2的表达量。构建SMYD2和腺瘤性息肉病蛋白2（adenomatous polyposis coli 2,APC2）的小干扰RNA,使用Transwell和蛋白免疫印迹实验检测转染后结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力。结果:癌组织中SMYD2的mRNA和蛋白表达量显著高于癌旁组织（P＜0.001,P＜0.05）,且结直肠癌细胞系SW480和HCT116中SMYD2的表达量显著高于正常结直肠细胞系FHC（P＜0.001）。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后细胞的迁移和侵袭能力减弱（P＜0.01）,同时E-cadherin的表达量升高（P＜0.001）,而N-cadherin和Vimentin的表达量降低（P＜0.01）。生物信息学分析显示,SMYD2与APC2的表达呈负相关（P＜0.001）,且APC2可以抑制WNT/β-catenin通路。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后APC2的表达量增高（P＜0.001）,而WNT/β-catenin通路中的β-catenin、c-MYC和CyclinD1表达降低（P＜0.01）。敲低APC2可以恢复SMYD2敲低引起的SW480和HCT116细胞的迁移和侵袭降低（P＜0.001）,E-cadherin升高（P＜0.001）和N-cadherin、Vimentin、β-catenin、c-MYC、CyclinD1降低（P＜0.01）。结论:在结直肠癌细胞中,SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路促进结直肠癌细胞的上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,从而影响细胞的迁移和侵袭能力。     

上皮间充质转化对肺鳞状细胞癌侵袭和迁移能力的影响*

目的:研究肺鳞状细胞癌（lung squamous cell carcinoma ,LSCC）上皮间充质转化（epithelial-to-mesenchymal transition ,EMT ）的临床意义,并阐述EMT 对肺鳞癌侵袭转移能力的影响。方法:对79例肺鳞癌组织切片进行E-cadherin 、Vimentin 及TGF-β 1 的免疫组织化学染色,分析其临床意义。将肺鳞癌细胞系SK-MES-1 于含有不同浓度转化生长因子- β 1（transforming growth factor,TGF-β 1）的培养基中,分别诱导培养5、10d 后,利用Western blot、RT-PCR 检测E-cadherin 、Vimentin 的表达变化,以划痕、侵袭实验来判断不同浓度、诱导时间对SK-MES-1 细胞功能的影响。结果:肺鳞癌发生淋巴转移病例中E-cadherin 表达较未发生淋巴转移者低,而Vimentin 表达则高于未发生淋巴转移的病例,差异具有统计学意义（P < 0.05）。 TGF-β 1 阳性表达与淋巴结转移相关,差异具有统计学意义（P < 0.05）。 Western blot和RT-PCR 显示10ng/mL TGF-β 1 诱导培养的SK-MES-1 细胞中,Vi ?mentin 表达增强明显,E-cadherin 表达减弱。细胞划痕和侵袭实验结果表明SK-MES-1 经诱导后,迁移和体外侵袭能力增强。结论:肺鳞癌的淋巴转移与上皮间充质转化有关,TGF-β 1 可诱导肺鳞癌细胞发生EMT ,增强其侵袭和迁移的能力。      

异体血小板输注对人肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制

目的：观察输注的异体血小板对人肺癌细胞A549侵袭、转移的影响，初步探讨其作用机制。方法：选取2017年1月至 2018 年 12 月于河北医科大学第四医院化疗科就诊输注血小板的 89 例晚期肺癌患者，实验分为 Ctrl 组（与培养液共孵育的A549细胞组）、Before组和After组（分别指与输注血小板前和后患者血浆共孵育的A549细胞组）。通过划痕实验和Transwell实验检测与输血小板前后患者血浆共孵育的A549细胞的迁移和侵袭能力，采用Western blotting法检测金属基质蛋白酶（MMPs）及其抑制剂（TIMPs）和上皮-间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Vimentin，以及血管内皮生长因子VEGF及受体2（VEGFR2）的表达水平。结果：After 组的 A549 细胞的划痕愈合率明显高于 Before 组及 Ctrl 组（[ 73.67±2.60）% vs（58.33±2.33）%、（35.33±2.03）%，P<0.01或P<0.05]，Before组与Ctrl组比较也具有显著差异（P<0.05）。细胞迁移实验结果显示，After组的穿膜细胞数明显高于Ctrl组和Before组（[ 69.67±7.84）vs（18±2.08）、（39.33±2.03）个，均P<0.01]。细胞侵袭实验显示，After组的穿膜细胞数明显高于Ctrl组和Before组（[ 59.34±3.46）vs（18.34±1.56）、（37.58±2.79）个，均P<0.01]。A549细胞与输注血小板前、后的血浆共孵育48 h后，MMP9、MMP2的表达均升高（P<0.05）而其抑制剂 TIMP1和TIMP2的水平均下降（P<0.01）；EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin表达升高（P<0.05）而E-cadherin 表达降低（P<0.01）；血管形成相关蛋白VEGF、VEGFR2的表达均升高（P<0.05）。结论：输注异体血小板能促进肺癌A549细胞的侵袭和转移，其作用机制可能与调节EMT、金属基质蛋白酶及血管生长因子相关蛋白的表达有关。     

CK2α通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调控肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移

背景与目的 肺癌已成为全球癌症死亡的首要原因,而侵袭和转移是导致肿瘤死亡的主要原因之一,蛋白激酶CK2是一种高度保守信使非依赖性丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,其在各种肿瘤中高表达.本研究旨在探讨下调CK2α基因表达对肺腺癌A549细胞侵袭迁移的影响以及可能的机制.方法 构建pSilencerTM4.1-shCK2α-eGFP慢病毒表达载体,建立稳定干扰CK2α表达的A549细胞株.利用Transwell和Boyden小室实验检测干扰CK2α表达前后A549细胞的侵袭及迁移的能力.Western blot检测PI3K/Akt信号通路和上皮-间充质转化(mesenchymal-to-epithelial transition,EMT)相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,干扰CK2α表达后肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移能力明显下降,p-PTEN、Akt、p-Akt473、p-Akt308、p-PDK1、p-c-Raf、p-GSK-3p蛋白明显下调,PTEN蛋白表达水平显著上调.上皮-间充质转化的相关蛋白E-cadherin蛋白表达水平显著上调,而Vi-mentin、p-catenin、Snail蛋白表达水平显著下调,与侵袭转移相关蛋白的MMP2、MMP9表达水平显著下调.结论 CK2α可能通过PI3K/Akt/GSK-3p/Snail信号通路来调控上皮-间充质转化参与肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移.