人腹主动脉瘤与正常腹主动脉基因表达谱差异的研究

目的 运用基因芯片研究人腹主动脉瘤与正常腹主动脉的基因表达谱,筛选差异表达基因.方法 选取腹主动脉瘤标本及正常腹主动脉标本各5例.抽提总RNA,转录并以生物素标记后,与芯片杂交,并对结果进行分析.结果 腹主动脉瘤组与正常组织组比较差异表达的基因共1962个,其中上调基因554个,下调基因1408个.功能分析发现与炎症反应、免疫反应及某些化学趋化因子有关的基因在腹主动脉瘤组表达上调.结论 表达谱芯片筛选腹主动脉瘤组与正常腹主动脉组的差异基因,为研究腹主动脉瘤的发病机制提供了新思路.     

人粘连蛋白基因在胰腺癌中的表达

目的：探讨人粘连蛋白（FN）基因在胰腺癌发生和转移中的作用。方法：应用博道4096型cDNA基因芯片和原位杂交技术检测18例胰腺癌标本、8例慢性胰腺炎组织FN基因表达。结果：FN基因在18例胰腺癌基因芯片检测中表达显著增高（Cy5/Cy3＞2．0，P＜0．01），伴有区域淋巴结转移时增高更加明显；在慢性胰腺炎中的表达与正常组织比较差异无显著性（Cy5/Cy3＜2．0，P＞0．05），与原位杂交结果相同。结论：基因芯片技术能够为胰腺癌的相关基因分析提供特异和可靠的数据；人胰腺组织中FN基因表达升高可能与胰腺癌的发生和转移有关。     

全基因组寡核苷酸表达谱筛选哈萨克族食管癌相关靶基因

目的 筛选哈萨克族食管癌与正常食管黏膜的差异表达基因.方法 新鲜标本取自哈萨克族食管鳞癌患者.采用RNA保护技术保护组织标本,分离癌组织、正常食管黏膜组织标本,提取RNA,线性扩增获得足量cRNA,利用基因芯片分别检测癌组织和正常食管黏膜组织基因表达谱,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析.结果 癌组织和正常食管黏膜组织比较差异10倍以上共有170个基因,其中表达上调(信号比的对数值>3)有39个,表达下调(信号比的对数值<-3)有131个.表达异常的基因与细胞周期调节、细胞凋亡、细胞骨架、细胞外基质、细胞内信号传递、蛋白质的翻译合成及免疫功能等相关.结论 利用全基因组寡核苷酸芯片可准确、高效地筛选出哈萨克族食管癌相关的候选靶基因170个,这些基因与哈萨克族食管癌的发生、发展有关.     

皮肤恶性黑色素瘤与良性痣基因表达差异的研究

目的 通过癌症相关基因芯片比较中国人皮肤恶性黑色素瘤与良性痣及正常皮肤间的基因表达谱差异,探讨中国人皮肤恶性黑色素形成相关的差异表达基因.方法 收集我科收治的皮肤恶性黑色素瘤标本及肿瘤旁正常皮肤组织6例、良性痣标本10例.抽提出总RNA用生物素标记后与美国SUPERARRY公司的OHS802癌症相关基因芯片结合,通过计算机扫描,数据分析筛选差异表达基因,并针对差异表达基因采用RT-PCR法验证.结果 经比较440条癌症相关基因中31条基因存在明显表达差异,其中与正常皮肤及良性痣标本相比,恶性黑色素瘤中表达上调的有24条,下调的有7条.结论 基因表达谱芯片技术可以有效地筛选出皮肤恶性黑色素瘤和良性痣及正常皮肤组织的差异表达基因,这些差异表达的基因包括多种癌症相关的基因,其中ITGA3及ILK基因在癌旁正常皮肤、良性痣及恶性黑色素瘤中表达水平依次升高,可应用于对恶性黑色素发病机制的进一步研究.     

微小RNA let-7基因表达在膀胱癌生物学行为中的作用

目的 探讨膀胱癌组织中微小RNA(miRNA)表达在膀胱癌发生发展中的作用. 方法 Trizol法抽提9例膀胱癌患者癌组织及癌旁正常膀胱组织标本总RNA,分离与富集miRNA,随机选取2组miRNA标本与miRNA表达谱芯片杂交,采用LuxScan 3.0和SAM 2.1软件对芯片结果 进行图像数据分析.在差异性表达的miRNA中筛选出感兴趣的let-7基因,采用印迹杂交技术对9组miRNA标本中let-7基因进行验证. 结果 膀胱癌组织和正常膀胱组织标本中差异性表达有显著性意义的miRNA 71个,其中表达上调33个,表达下调38个;差异性表达有极显著性意义的miRNA(上调或下调≥4倍)26个,其中显著上调12个,显著下调14个.let-7基因验证结果 与芯片表达结果 一致,癌组织let-7基因表达吸光度值为479.6±228.2,正常膀胱组织为694.6±152.9,组间差异有统计学意义(P<0.05). 结论 膀胱癌组织和正常膀胱组织中存在差异表达的miRNA,let-7基因在膀胱癌的发生中可能起着抑癌基因的作用.     

单纯性肺泡癌和含有肺泡癌成分的腺癌基因差异比较

目的 比较单纯性肺泡癌(Pure BAC)与含有肺泡癌成分的腺癌(AWBF)的基因表达谱,研究与Pure BAC进展相关的基因.方法 选取Pure BAC标本8例,以8例AWBF作对照.采用Agiilent人4*44K arrays全基因组芯片进行检测,应用DAVID、通路studio 5.0、特征提取软件9.1等软件对基因芯片的结果进行统计学、聚类和差异表达分析.选取两组间差异表达的43个侵袭和转移的基因(P＜0.01),采用Real-time聚合酶链反应(PCR)验证基因芯片结果.应用SPSS统计软件分析.结果 表达谱芯片共得到581个基因的有效数据,筛选出43个侵袭和转移的基因(P＜0.01),差异表达上调基因23个,下调基因20个.实时定量RT-PCR检测结果显示ATF-2基因的相对表达量单纯性BAC组明显高于AWBF组,而CLDN18基因在AWBF组明显增高(P＜0.01),而且CLDN18和AT2在BAC和AWBF中的基因表达差异倍数＞10倍.结论 CLDN18和ATF2在BAC中和AWBF中基因表达有明显差异,两者的异常表达可能与单纯性BAC的进展有关.     

细胞黏附分子与胃癌发生及转移关系的实验研究

目的探讨细胞黏附分子在胃癌发生和转移中的作用.方法运用cDNA基因芯片和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测25例胃癌标本神经细胞黏附分子(NCAM)、细胞间黏附分子(ICAM)、血管细胞黏附分子(VCAM)的表达.结果 NCAM、ICAM及VCAM基因在25例胃癌患者中表达显著增高(Cy5/Cy3＞2.0),胃癌转移组明显高于无转移组(P＜0.05)和正常对照组(P＜0.05),RT-PCR与基因芯片检测结果相同.结论基因芯片能够为胃癌的相关基因分析提供特异和可靠的数据,胃癌的发生和转移可能与胃组织中NCAM、ICAM、VCAM基因表达升高有关.     

尿道下裂患儿包皮组织中E盒结合锌指蛋白1的表达

目的:探讨E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)在尿道下裂患者包皮组织中的表达,分析ZEB1 mRNA和蛋白的表达水平与尿道下裂的关系。方法:实验组和对照组的包皮组织来自于37例尿道下裂修复术患儿和11例包皮环切术包皮过长患儿,37例尿道下裂根据尿道口的位置归类为24例轻中度尿道下裂和13例重度尿道下裂,通过免疫组化和RT-PCR法分别对ZEB1的蛋白和mRNA表达水平进行检测。结果:ZEB1蛋白阳性表达率在轻中度尿道下裂组为75.0%(18/24)、重度尿道下裂组为100%(13/13),明显高于对照组的9.1%(1/11),且两两比较均具有统计学意义(P均<0.05);RT-PCR显示ZEB1 mRNA表达在对照组,轻中度、重度尿道下裂组织中的相对累计光密度值比分别为(0.67±0.21)、(0.81±0.24)、(1.55±0.29),除对照组和轻中度尿道下裂组差异无统计学意义外(P=0.64),对照组和轻中度尿道下裂组分别和重度尿道下裂组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:ZEB1在尿道下裂患儿的包皮组织中的表达明显上调,且与尿道下裂的严重程度相关,提示ZEB1基因表达上调可能导致尿道下裂的形成。     

ATF3在先天性尿道下裂组织中的表达宰

目的 探讨转录激活因子3(ATF3)在尿道下裂组织中的表达及其与尿道下裂程度的关系.方法 收集28例尿道下裂组织.其中轻中度22例,重度6例,相应的正常环切包皮15例,采用免疫组化法检测ATF3的表达,分析蛋白阳性表达率.收集24例尿道下裂组织,其中轻中度8例,重度16例,对照为相应的正常环切包皮19例,采用RT-PCR法检测ATF3 mRNA的表达.结果 ATF3蛋白在尿道下裂组织中表达阳性率为85.7%(24/28),在正常包皮组织中的表达阳性率为13.3%(2/15),ATF3蛋自在尿道下裂组织中的表达阳性率明显高于在正常包皮组织中的表达.重度尿道下裂ATF3蛋白阳性率100%(6/6),高于轻中度尿道下裂中的表达,在轻中度尿道下列中的表达为81.8%(18/22).RT-PCR显示ATF3 mRNA表达在正常包皮组织、轻中度、重度尿道下裂组织中的相对累计光密度值比分别为(0.58±0.21)、(1.81±0.22)和(3.55±0.27),3组中的两两比较差异均有统计学意义.结论 ATF3在尿道下裂组织中的表达明显上调,且与尿道下裂的程度显著相关,提示ATF3可能是尿道下裂发生中的一个候选基因.     

人重度积水肾组织的基因芯片分析及左右不对称发育因子1的表达变化

目的 用基因芯片技术研究人重度积水肾与正常肾组织中表达差异的基因,探讨重度积水后人肾组织发生纤维化病变的分子机制.方法 收集临床重度肾积水新鲜标本12例(积水组)、正常肾组织标本6例(对照组),包括组织切片及核素肾动态显像(SPECT)检测结果.分别提取总RNA并纯化,选择转化生长因子(TGF)-β/骨形成蛋白(BMP)信号通路聚合酶链反应(PCR)芯片,采用比较阈值(AACt)法分析两组基因的表达差异.以免疫组织化学法检测两组标本中左右不对称发育因子(LEFTY)1的表达.结果 与对照组比较.积水组肾组织结构破坏严重,表现为广泛的纤维化样改变.SPECT提示积水组患肾肾小球滤过率(GFR)为(8.7±3.5)ml/min,而对照组GFR为(46.7±6.9)ml/min.PCR芯片筛查提示,积水组表达显著性上调的基因25个,包括BMP3、I型胶原α1链(COI α1)、Nodal、GSC、胰岛素样生长因子(IGF)1等;下调24个,包括LEFTY-1、BMV]、BMP2和骨形成蛋白内皮结合调节因子(BMPER)等.免疫组织化学检查发现,积水组肾组织中LEFTYA的表达明显低于对照组(P＜0.05),约为正常肾组织的(23.37～29.46)%.结论 LEFTY基因和蛋白在重度积水肾组织中的极低表达,提示LEFTY可能具有延缓纤维化形成并促进胶原降解的"双效应"作用,延缓肾积水-肾纤维化改变.     

Up-regulation of estrogen responsive genes in hypospadias: microarray analysis

PURPOSE: An unexplained increase in the incidence of hypospadias has been reported, and yet to our knowledge the molecular events and their regulation leading to hypospadias remain unknown, although environmental compounds capable of endocrine activity are suspected. We screened on a global scale abnormalities in gene expression in human hypospadiac tissue compared to those in nonhypospadiac tissue. Additionally, microarray analysis of tissue from a pair of fraternal twins, including 1 with and 1 without hypospadias, served as a control for genetic variability. We hypothesized that gene expression would differ between hypospadiac vs nonhypospadiac tissue and fraternal twin data would show patterns similar to those of group data on hypospadiac and nonhypospadiac tissue. MATERIALS AND METHODS: Microarray analysis was performed on tissue from patients with and without hypospadias, and from a pair of fraternal twins, including 1 with and 1 without hypospadias. Analysis incorporated the expression of 22,000 genes. RESULTS: We found significant differences in gene expression, specifically with a group of genes, including CYR61, CTGF, ATF3 and GADD45beta, known to be responsive to estrogen or to interact with estrogen receptor. CONCLUSIONS: Our findings provide support for the hypothesis that endocrine active environmental compounds may contribute to the development of hypospadias. Additionally, regulation of these genes may have a role in formation of the urethra.     

基因芯片研究尿道下裂的基因表达差异

目的筛选出与尿道下裂发病相关的基因。方法尿道下裂病人的尿道或包皮组织,年龄配对的包皮过长患儿组织作为对照,提取组织mRNA,合成双股cDNA并纯化,再逆转录成cRNA,生物素标记的cRNA打成碎片后与人类基因芯片进行杂交,计算机工作站自动扫描并记录芯片上的信号强度,转化为EXCEL数据库,总共分析了22000个基因的表达差异。结果发现一组表达有显著差异的基因,包括CYR61,CTGF,ATF3和GADD45。结论这些表达差异的基因可能参与尿道下裂的发生和发展,为进一步研究关键基因提供了依据。     

Experience with free grafts in urethral reconstruction

A total of 33 patients underwent hypospadias or epispadias repair by patch or tubular grafts of skin or bladder epithelium from July 1980 to January 1985. Indications included previous circumcision, proximal primary hypospadias, severe chordee alone, inadequate local skin during extended urethroplasty at 2-stage hypospadias repair, multiple previous reconstructions and failed epispadias repair. Genital skin grafts were used in 25 patients, extragenital skin grafts in 4 and bladder epithelial grafts in 4. Complications occurred in 13 patients (39.4 per cent): 8 required reoperation for a fistula, stricture or diverticulum, and 5 underwent internal urethrotomy or urethral dilation. Of the 8 patients 3 needed more than 1 revision. These revisions were short and generally uncomplicated. Final results uniformly were good functionally and cosmetically. Based on our experience and that of others we believe that despite a high incidence of minor complications a free graft serves as an excellent substitute urethra for treatment of a variety of urethral problems in children.     

转化生长因子β1对体外培养尿道细胞的生物学作用研究

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对尿道黏膜上皮细胞及成纤维细胞的生长调节作用及在诱导靶细胞结缔组织生长因子(CTGF)的表达中的作用.方法 体外培养尿道黏膜上皮细胞及成纤维细胞并鉴定.取第4代细胞分别设立对照组(以不含TGF-β1的细胞培养液培养)和实验组(分别以TGF-β11、2、4、8 μg/L的细胞培养液培养),24 h后分别以MTT比色试验和细胞计数法检测细胞活力,RT-PCR检测细胞内CTGF mRNA的表达.结果 与对照组相比较,实验组尿道黏膜上皮细胞数量和吸光度值随TGF-β1浓度升高而降低(P＜0.05),成纤维细胞数量和吸光度值随TGF-βl浓度升高而升高(P＜0.05);CTGF mRNA在实验组上皮细胞和成纤维细胞中均有表达,且表达水平随TGF-βl浓度升高而增加(P＜0.05).结论 TGF-β1可抑制尿道黏膜上皮细胞生长,促进成纤维细胞生长,并能诱导尿道黏膜上皮细胞及成纤维细胞表达CTGF mRNA.     

ATF3和CTGF基因在尿道下裂患者包皮中的表达及雌激素调控研究

目的:雌激素与尿道下裂的发生关系密切,本研究旨在比较尿道下裂患儿包皮和同龄正常儿童包皮中转录激活因子3(ATF3)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达,明确二者与尿道下裂的关系,探寻雌激素引起尿道下裂的分子机制。方法:从包皮中分离成纤维细胞并原代培养,用不同浓度(1.0μmol/L、0.1μmol/L、10.0nmol/L、1.0nmol/L、0.1nmol/L)的17-β乙炔雌二醇(17-EE)处理2h,或选择0.1μmol/L的17-EE处理不同时间(0.5、1、2、4、8、16、24h),观察17-EE对ATF3和CTGF表达的影响。MTT法检测17-EE对细胞增殖的影响,RT-PCR法观察成纤维细胞ATF3和CTGF表达情况。结果:尿道下裂患者包皮中ATF3和CTGF的表达显著高于正常人包皮组织(P<0.05);高浓度的17-EE干预对包皮成纤维细胞有抑制作用;在17-EE干预早期(1～2h)ATF3的表达呈现一过性增加;CTGF的表达在24h内17-EE干预未见明显变化。结论:ATF3和CTGF是与尿道下裂密切相关基因,雌激素可能通过上调ATF3和CTGF的表达参与调节生殖结节的异常发育,导致尿道下裂。     

One-Stage Anterior Urethroplasty

Purpose

A deficient urethral segment was replaced with penile skin during a 1-stage procedure in patients with a long, tight urethral stricture, multiple attempts at hypospadias repair or severe hypospadias and circumcision.

Materials and Methods

In 29 patients a pedicled circumferential strip of distal penile skin was used to construct a neourethral floor. The roof was formed by regeneration of the epithelium from the edges of the floor over Buck's fascia. In our series the urethra was reconstructed because of an anterior urethral stricture in 11 patients, multiple failed hypospadias repairs in 6 and severe hypospadias with circumcision in 12.

Results

A neourethra of sufficient caliber and length was constructed with minimal postoperative complications in all patients. There were 2 cases of urethrocutaneous fistula at the subcoronal region, 1 meatal stenosis, 1 persistent chordee and 1 small distal penile skin patch slough that required only prolonged dressings. Mean followup was 19 months.

Conclusion

Our urethroplasty technique can be used to correct various types of anterior urethral stricture or hypospadias associated with insufficient penile or preputial skin.     

Hydrodissection technique to preserve the thin distal urethra when correcting chordee without hypospadias

PURPOSE: We introduce a hydrodissection technique to preserve the thin distal urethra when treating chordee without hypospadias. MATERIALS AND METHODS: A total of 18 patients with chordee but without hypospadias were surgically treated in 3 years, including 7 (38.9%) with a segment of thin distal urethra. A hydrodissection technique was used to preserve the thin distal urethra in 6 patients with a mean age plus or minus SD of 9.0 +/- 3.6 years. Artificial erection was induced after circumcision and penile skin degloving. Tunica albuginea plication to correct residual chordee was needed in only 1 patient. The thin distal urethra was covered by preputial subcutaneous tissue in 3 cases and by Y to I spongioplasty in 3. RESULTS: All 6 thin distal urethras were preserved. The thin distal urethra was a mean of 23.3 +/- 3.9 mm. long and mean followup was 17.8 months. Postoperatively penile cosmesis was excellent in all patients and urinary flow was normal. CONCLUSIONS: Using the hydrodissection technique to preserve the thin distal urethra simplifies the operation of correcting chordee without hypospadias by avoiding additional urethroplasty and tunica albuginea plication for residual chordee.     

先天性尿道下裂和单纯性阴茎下曲患者阴茎皮肤组织中雄激素受体表达研究

目的观察先天性尿道下裂和单纯性阴茎下曲患者阴茎皮肤组织中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达情况,探讨其在不同程度尿道下裂和阴茎下曲中的表达特征及规律。方法以2005年8月-2007年1月行矫正术的25例先天性尿道下裂和4例单纯性阴茎下曲患者为研究对象,采集阴茎背侧包皮、尿道口腹侧皮肤和尿道板组织。尿道下裂患者年龄1岁11个月～19岁,平均3岁7个月;阴茎下曲患者年龄3岁6个月～16岁,平均7岁1个月。以18例行包皮环切术患者的正常背、腹侧包皮作为对照。免疫组织化学染色观察并检测标本AR的表达水平和分布情况,行统计学分析。结果先天性尿道下裂、单纯性阴茎下曲和正常包皮组织中均有AR表达。正常阴茎背、腹侧包皮AR表达核阳性细胞率分别为62.94%±5.40%、62.87%±5.33%;先天性尿道下裂阴茎背侧包皮、尿道口腹侧皮肤及尿道板组织分别为59.00%±3.75%、58.46%±4.14%、52.30%±3.53%,AR表达均低于正常背、腹侧包皮(P<0.05);且尿道板组织AR表达显著低于自身背、腹侧包皮皮肤(P<0.05),自身背、腹侧包皮皮肤间差异无统计学意义(P>0.05)。与正常背、腹侧包皮比较:远、中段型尿道下裂阴茎背侧包皮AR表达差异无统计学意义(P>0.05),但尿道板组织AR表达显著降低(P<0.05);近段型背侧包皮、尿道口腹侧皮肤及尿道板组织AR表达均降低(P<0.05);下曲<45°者阴茎背侧包皮、尿道口腹侧皮肤AR表达差异无统计学意义(P>0.05),下曲≥45°者比较差异均有统计学意义(P<0.05),两组尿道板组织AR表达均降低(P<0.05)。单纯性尿道下曲患者阴茎背侧包皮、尿道口腹侧皮肤及尿道板组织AR表达核阳性细胞率分别为59.69%±2.73%、55.71%±1.67%、51.92%±1.87%,与正常包皮组织比较,AR表达呈减弱趋势。结论先天性尿道下裂及单纯性阴茎下曲阴茎皮肤组织AR表达低于正常阴茎,尿道板组织AR缺陷突出。     

后型尿道下裂二期膀胱黏膜半管状重建尿道术的临床研究

目的探讨采用二期膀胱黏膜半管状重建尿道术治疗后型尿道下裂的临床研究。方法81例后型尿道下裂病例采用二期手术：一期手术将阴茎海绵体完全伸直,阴茎包皮内板和背侧皮肤预置于阴茎腹侧;二期手术采用半管状阴茎阴囊皮肤＋半管状膀胱黏膜成形尿道术。结果81例后型尿道下裂患者矫形后形态几乎接近正常。手术成功率为86．4％（70／81）,尿瘘发生率为13．6％（11／81）,8例（9．9％,8／81）发生尿道狭窄,经尿道扩张治疗后痊愈。结论二期膀胱黏膜半管状重建尿道术治疗后型尿道下裂的手术成功率较高,值得临床推荐。