Blastocyst MHC 基因转染延长小鼠移植心脏存活时间

目的 探讨Blastocyst MHC基因经供心冠状动脉转染对移植心脏存活时间的影响. 方法 分别以近交系健康雄性Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠为供、受者,制备小鼠颈部心脏移植模型,对照组供心以0～4℃托马斯Ⅱ溶液灌注;环孢素A(CsA)组供心用前述方法灌注,术后受者腹腔注射CsA 5 mg·g1·d-1;转染组供心以含Blastocyst MHC基因转染质粒的托马斯Ⅱ溶液灌注;联合处理组供心以含Blastocyst MHC基因转染质粒的托马斯Ⅱ溶液灌注,术后腹腔内注射CsA.观察各组移植心脏存活时间和组织学变化,测定移植心脏组织中Blastocyst MHC基因mRNA表达以及外周血CD4+ CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)及CD3+ CD8+ T淋巴细胞的变化. 结果 CsA组、转染组和联合处理组移植心脏存活时间较对照组明显延长(P＜0.115),其中以联合处理组最为显著,达(20.50±5.61)d.转染组术后1、3 d的Blastocyst MHC基因mRNA表达水平较对照组明显升高(P＜0.05).术后7 d,联合处理组的排斥反应程度最轻,其冠状动脉内膜增生也最轻.术后7 d,CsA组和联合处理组Treg细胞明显多于对照组(P＜0.05),而CD3+ CD8+ T淋巴细胞明显少于对照组(P＜0.05). 结论 移植前转染Blastocyst MHC基因能够通过上调Treg细胞、抑制CD3+ CD8+ T淋巴细胞而延长小鼠移植心脏存活时间,与CsA联合有协同作用.     

槐耳清膏在小鼠心脏移植排斥反应中作用的初步探讨

目的 探讨槐耳清膏在小鼠心脏移植急性排斥反应中的作用.方法 实验分为3组:A组:同种异基因移植后槐耳清膏处理组(槐耳清膏组);B组:同种异基因移植财照组(移植排斥组)及C组:同系移植对照组(同系移植组).观察各组移植心脏的存活时间、术后第5天供心的组织病理改变.用免疫荧光检测移植心脏中CD8+T淋巴细胞的浸润和颗粒酶B的表达水平.结果 A组移植心脏的平均存活时间为(6.38±0.69)d,与B组(8.31±0.59)d相比明显缩短(P<0.01);心肌组织呈3级急性排斥反应病理改变,CD8+T淋巴细胞弥漫性浸润及颗粒酶B表达与两个对照组相比明显增强(P<0.05).结论 在术后早期单用槐耳清音会促进小鼠心脏移植物的急性排斥反应,可能机制足促进CD8+T淋巴细胞的组织浸润并增强颗粒酶B的表达.     

PD-L1.Ig与1,25(OH)2D3联合应用对异基因大鼠胰腺移植后急性排斥反应的影响

目的 探讨PD-L1.Ig联合1,25(OH)2D3对大鼠胰腺移植急性排斥反应的免疫调控作用以及对大鼠移植胰腺存活时间的影响.方法 以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,建立4组原位胰腺移植模型.每组12例,共48例.A组:对照组、B组:PD-L1.Ig组、C组:1,25(OH)2D3组、D组:PD-L1.Ig+1,25(OH)2D3组;观察术后各组血糖变化,移植物存活以及组织病理学改变;流式细胞检测受体血、脾以及移植胰CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测移植物局部白细胞介素(IL)-2、-4、-10、-12表达水平;于术后第7天分别杀死各组受体和供体鼠各2只,取受体脾细胞与供体作混合淋巴细胞反应(MLR).结果 与A比较,PD-L1.Ig组并未显著延长移植胰腺存活时间(P＞0.05),C、D组对改善血糖水平和延长移植胰腺存活时间作用明显(P＜0.01),其中,D组移植胰腺存活时间最长(23.9±0.8)d;与A组比较,B组无明显改善,C组排斥反应较A组明显减弱,而D组几乎未发生排斥反应;CD3+CD8+T细胞计数D、C、B与A组比较均有减少,差异有统计学意义(P＜0.01).CD4+T细胞D、C、B与A组的差异有统计学意义(P＜0.05).CD4+CD25+调节性T细胞A、B、C、D组逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.01),且以D组较为明显(C组比A组P＜0.01);D组明显抑制移植物局部Th1型细胞因子IL-2、IL-12的产生,显著提高Th2型细胞因子IL-4、10的水平;与对照组比较,各治疗组受体T淋巴细胞在MLR中表现对供体淋巴细胞特异性低反应性,能有效抑制T细胞对同种异体抗原的反应.结论 共刺激阻断剂PD-L1.Ig联合1,25(OH)2D3可有效抑制细胞免疫应答,干预急性排斥反应,显著延长大鼠移植胰腺存活时间.     

两种麻醉方法对直肠癌患者术后免疫功能的影响

目的:观察两种麻醉方法下直肠癌患者术后免疫功能的变化.方法:选择40例直肠癌手术病人,随机分为两组,每组20例:A组采用静脉麻醉;B组采用硬膜外阻滞复合静脉全麻.分别于麻醉前(T0)、切皮后2h(T1),术后6h(T2)、术后48 h(T3)测定CD4+%、CD8+%、血清白介素-2(IL-2)和可溶性白介素-2受体(sIL-2R).结果两组CD4+%、CD4+/CD8+比值JL-2水平下降(P＜0.05),T1至T3时B组CD4+%明显高于A组(P＜0.05),T2至T3时B组CD4+/CD8+比值、IL-2水平明显高于A组(P＜0.05);两组sIL-2R水平A组T1时显著高于T0,T2达最高峰;而B组各时间点与T0比较差异无统计学意义(P＞0.05);两组间比较,T1至T3时A组sIL-2R水平明显高于B组(P＜0.05).结论:硬膜外阻滞配合全麻可减轻围手术期直肠癌患者的细胞免疫功能抑制.     

腹腔镜下根治性肾切除术对机体细胞免疫的影响

目的 探讨腹腔镜下根治性肾切除术及传统开放手术对机体免疫系统的影响.方法 肾肿瘤患者53例.年龄25～82岁,平均51岁.分别行腹腔镜下根治性肾切除术(A组,27例)或开放手术根治性肾切除术(B组,26例).采用流式细胞学技术检测手术前及术后1、3、5 d T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8、CD25、CD69、CD95、CD95L),采用重复测量方差分析对T淋巴细胞亚群改变程度进行比较.结果 2组手术均获成功.A组平均手术时间(67±10)min,B组为(69±11)min,2组比较差异无统计学意义(P=0.6922).术中失血量A组(72±10)ml,B组(154±20)ml(P=0.00).术后使用止痛剂A组2例次、B组20例次,2组比较差异有统计学意义(X2=21.4,P＜0.01).2组患者术前CD95L[(1.974±0.75)%、(1.74±0.80)%]均高于参考值(0.3%～0.8%)(P＜0.05),其余差异无统计学意义(P＞0.05).B组术前及术后1、3、5 d CD25分别为(15.55±6.82)%、(15.99±10.78)%、(19.05±5.45)%、(15.09±7.93)%,术后3 d CD25升高(P＜0.05).A组CD25分别为(11.81±6.21)%、(15.26±9.39)%、(26.04±15.88)%、(14.80±7.78)%,术后3 d CD25升高(P＜0.05).2组术后3 d CD25比较,差异有统计学意义(P＜0.05).B组CD3分别为(68.80±11.73)%、(62.63±11.62)%、(64.10±13.38)%、(68.92±10.28)%,差异有统计学意义(P＜0.05);CD4分别为(42.15±7.81)%、(36.39±7.97)%、(38.10±7.58)%、(42.61±8.81)%,差异有统计学意义(P=0.0061).B组术后1、5 d CD8[(24.80±10.97)%、(23.54±9.86)%]高于A组[(23.01±6.73)%、(21.42±5.92)%],B组术后3 d CD69(5.96±2.65)%明显高于A组(3.53±1.61)%,B组术后5 d CD95(23.15±5.90)%明显高于A组,(19.20±4.47)%,B组术后1、5 d CD95 L[(2.25±1.13)%、(1.91±0.99)%]明显高于A组[(1.75±0.80)%、(1.33±0.43)%],差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 与开放手术相比,腹腔镜下根治性肾切除术能更好地保存机体细胞免疫功能.     

肝移植患者外周血辅助性T 17细胞的变化及意义

目的探讨肝移植术后患者外周血辅助性T(Th)17细胞(CD4+IL-17+T淋巴细胞)与急性排斥反应的关系。方法本文研究对象为2008年6月至2012年12月在首都医科大学附属北京朝阳医院肝胆胰脾外科因良性终末期肝病行原位肝移植术的76例患者。根据患者术后有否发生急性排斥反应,分为排斥组(17例)和非排斥组(59例)。所有患者均按常规定期随访。记录患者排斥反应发生情况及治疗经过。排斥组患者发生急性排斥反应时给予肝穿刺活组织检查确定排斥反应严重程度。所有患者分别于肝移植术前、出院后1年内定期(间隔3~6个月)、或急性排斥反应治疗前和缓解后(3~6个月),检测外周血CD4+IL-17+T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分比(CD4+IL-17+T%)。比较两组患者各时间点的CD4+IL-17+T%。分析CD4+IL-17+T%与排斥活动指数(RAI)、免疫抑制剂血药浓度的相关性。结果急性排斥反应发生在术后0.7~12.0个月,中位数2.5个月。肝移植术后,与非排斥组比较,排斥组患者CD4+IL-17+T%明显升高[(1.79±0.44)%比(2.56±0.43)%,P0.001]。排斥组患者发生急性排斥反应时,CD4+IL-17+T%均较未发生急性排斥反应时明显升高[(2.56±0.43)%比(1.50±0.25)%,P0.001)]。非排斥组患者不同时间点的CD4+IL-17+T%变化不明显(P0.05)。排斥组患者发生急性排斥反应时的CD4+IL-17+T%与RAI呈正相关(r=0.72,P=0.001)。排斥组和非排斥组患者他克莫司、环孢素血药浓度与CD4+IL-17+T%无明显相关性(r=0.21,-0.13;均为P0.05)。结论外周血CD4+IL-17+T%可作为诊断和评估肝移植术后急性排斥反应严重程度的监测指标,外周血CD4+IL-17+T%升高提示急性排斥反应严重。     

大鼠腹主动脉瘤形成过程中T细胞及CD4+CD28-T细胞的动态变化及意义

目的 探讨T淋巴细胞及其亚群在腹主动脉瘤发病中的作用.方法 50只Wistar大鼠随机分成A、B、C、D、E5组,每组10只,A组为正常对照组,B、C、D、E组分别为术后3、7、14、28 d组,运用猪胰弹力酶灌注法建立腹主动脉瘤模型.免疫组化方法检测上述各组大鼠腹主动脉局部T、B淋巴细胞及巨噬细胞的表达水平,流式细胞术检测各组大鼠外周血中CD4+ CD28-T淋巴细胞亚群的分布变化.结果 大鼠腹主动脉局部T、B淋巴细胞及巨噬细胞表达的变化:术后7dT细胞显著升高(40±15,P＜0.05),B细胞及巨噬细胞有升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);术后14 d,3种细胞表达升高最为显著(P＜0.05);术后28 d,3种细胞的表达较术后14 d明显下降.术后各组大鼠外周血CD4+、CD28-T细胞均有升高(P＜0.05),以术后7d比例最高(8.1％±2.1％,P＜0.05).结论 T淋巴细胞是腹主动脉瘤形成过程中最重要的炎症细胞之一,T淋巴细胞的浸润及其亚群分布变化所致的免疫及炎症反应在腹主动脉瘤形成早期可能起着重要的触发及调节作用.     

肾缺血后处理对热休克蛋白表达的影响及作用

目的 评价肾缺血后处理(ischemic postconditioning,IPo)对热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70、HSP27和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1,即HSP32)表达的影响及在减轻肾缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)中的作用.方法 健康雄性SD大鼠140只,体重250 g～280 g,采用随机数字表法随机分为4组(每组35只):假手术组(S组)仅开腹,游离双侧肾脏,分离双侧肾蒂不夹闭;缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组,夹闭双侧肾蒂缺血45 min,恢复灌注;IPo组,夹闭双侧肾蒂45 min,再灌注10 s,缺血10s,反复3次,恢复灌注;HSP抑制剂槲皮黄酮+IPo组(Q+IPo组),缺血前lh腹腔注射槲皮黄酮100 mg/kg,余操作同IPo组.于再灌注即刻(T0)、1、3、6、12、24、48 h(T1～6)时取5只大鼠经心脏抽血后迅速处死取肾,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法分别检测各时点肾组织HSP70、HSP27和HO-1的mRNA和蛋白表达,测定T3时血清肌酐(creatinine,Cr)和尿素氮(urea nitrogen,BUN)浓度、肾组织丙二醛(methylene dioxyamphetamine,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、肾组织核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达和血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)浓度,光镜下观察肾组织病理学结果. 结果 S组HSP70、HSP27和HO-1的mRNA有微量表达,蛋白几乎无表达,其余组在To时开始表达,逐渐升高,T3时达高峰,随后逐渐下降.与S组比较,其余组各时点HSP70、HSP27和HO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),IPo组较I/R组T2～5时HSP70、HSP27和HO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),Q+IPo组较IPo组T2～5时HSP70、HSP27和HO-1的mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).T3时血清Cr、BUN和TNF-α浓度I/R组分别为(102±5) μmol/L、(25.7±3.9) mmol/L、(2.29±0.18) μg/L,IPo组分别为(64±5)μmol/L、(11.3±3.0) mmol/L、(1.76±0.13)μg/L,Q+IPo组分别为(101±6)μmol/L、(26.5±4.5) mmol/L、(2.31±0.17) μg/L,均高于S组(46±6) μmol/L、(5.1±1.9) mmol/L和(1.13±0.14) μg/L(P＜0.05),IPo组三者浓度较I/R组降低(P＜0.05),Q+IPo组较IPo组升高(P＜0.05).T3时MDA含量I/R组(2.20±0.23) nmol/mgprot、IPo组(1.35±0.13) nmol/mgprot和Q+IPo组(2.25±0.16) nmol/mgprot较S组(1.02±0.19) nmol/mgprot升高(P＜0.05),SOD活性I/R组(104±6) U/mgprot、IPo组(124±4) U/mgprot和Q+IPo组(106±5) U/mgprot较S组(147±6) U/mgprot 降低(P＜0.05),IPo组与I/R组比较MDA含量降低和SOD活性升高(P＜0.05),Q+Ipo组与IPo组比较MDA含量升高和SOD活性降低(P＜0.05),肾组织NF-κB表达I/R组、IPo组和Q+IPo组较S组增高,IPo组较I/R组表达降低,Q+IPo组较IPo组表达增高(P＜0.05).I/R组与Q+Ipo组相比,各指标差异无统计学意义(P＞0.05).与S组比较,其余3组有程度不等的肾组织病理学损伤,IPo组损伤较I/R组减轻,Q+IPo组损伤程度与I/R组相似. 结论 IPo上调了HSP70、HSP27和HO-1的表达;HSP高表达参与了肾IPo减轻肾I/RI的过程.     

并发闭塞性细支气管炎的移植气管组织中核因子κB和肿瘤坏死因子的表达及意义

目的 探讨小鼠移植气管组织中核因子κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其在闭塞性细支气管炎(OB)中的作用.方法 实验分为实验组和同系移植对照组,实验组受者为C57BL/6小鼠,同系移植对照组受者为Balb/c小鼠,供者均为Balb/c小鼠.将2支供者气管分别移植于受者两侧背部,术后7、14、21 d 2组分别处死受者7只,取移植气管,于光学显微镜下观察并计算移植气管截面的管腔闭塞率.用免疫组织化学法和Western印迹法检测移植气管组织中NF-κB和TNF-α的表达;用凝胶电泳迁移率改变法检测NF-κB的转录活性;用逆转录聚合酶链反应法检测TNF-α mRNA的表达.结果 实验组移植后14 d和21 d时的管腔闭塞率分别为(31±7)%和(80±17)%,并可见移植气管发生OB病理改变,而同系移植对照组未见此改变.免疫组织化学法和Western印迹法结果均显示.实验组各个时点移植气管组织中NF-κB和TNF-α的表达均高于同系移植对照组.实验组移植后7、14和21 d时,NF-κB基冈的转录活性分别为1.35±0.52、1.72±0.43和2.43±0.33,均高于同时点同系移植对照组的转录活性(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05);实验组各时点TNF-α mRNA的表达均高于同系移植对照组(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.05).结论 发生OB的小鼠移植气管组织中NF-κB出及其下游靶基因TNF-α的表达升高.     

RNA干扰阻断B7/CD28共刺激通路在小鼠心脏移植中的抗排斥作用

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术阻断B7/CD28共刺激通路对小鼠异体心脏移植排斥反应的影响及其机制。方法经体外转录合成针对CD80 mRNA和CD86 mRNA序列特异性小片段干扰RNA(siRNA),转染供者骨髓来源的树突状细胞(DC),半定量逆转录聚合酶链反应、流式细胞仪检测DC转染CD80siRNA、CD86siRNA前后CD80 mRNA和CD86 mRNA的表达水平以及细胞表面CD80及CD86的表达情况。在小鼠异位心脏移植前7d．经静脉给受者输注经siRNA干扰后的DC(干扰DC组),同时设立同种异体对照组、环孢素A(CsA)治疗组(术后皮下注射CsA 5 mg/d)、同系移植对照组和未干扰DC组(移植前输注未转染DC),观察各组移植心脏的存活时间,对移植物的排斥反应进行病理分级,并测定移植物组织中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)及IL-10的mRNA表达水平。结果siRNA转染DC后,其CD80 mRNA及CD86 mRNA的表达受到明显抑制,CD80、CD86的阳性率分别由84%和67%下降至35%和30%。与同种异体对照组和未干扰DC组比较,干扰DC组移植心脏存活时间明显延长(P＜0．01),组织排斥反应病理分级显著降低(P <0．01),移植心脏组织中IL-2 mRNA和IFN-γmRNA的表达水平明显降低(P＜0．01),而IL-10 mRNA的表达水平明显升高(P＜0．01)。结论利用RNAi敲减供者骨髓来源的DC表面B7分子的表达,以阻断B7/CD28共刺激通路,具有抑制小鼠心脏移植排斥反应的作用,其机理可能是通过诱导T淋巴细胞无能并使T辅助细胞分化向T_H2型方向偏移。     

供肝不同程度的缺血再灌注损伤对大鼠肝移植后急性排斥反应的影响

目的 探讨大鼠供肝不同程度的缺血再灌注损伤(IRI)对肝移植后急性排斥反应(AR)的影响.方法 用随机数字表法将大鼠分为6组,每组供、受者各12只,同系移植组供肝热冷缺血时间分别为0～2和80 min,同种移植1～4组供肝热冷缺血时间分别为0～2和80 min、0～2 min和10 h、15和80 min及15 min和10 h,假手术组仅开腹游离肝脏后关腹,不行肝移植.肝移植采用改良的Kamada二袖套法.术后1、3、5、7 d,分别处死每组3只受者,取移植肝组织,行病理学检杏观察病理改变和IRI程度,按照Banff系统分级标准对AR进行评分,采用免疫组织化学法和实时聚合酶链反应法检测移植肝组织Fas、穿孔素及颗粒酶B的蛋白和mRNA表达,采用原位末端标记法检测移植肝细胞的凋亡情况.结果 假手术组、同系移植组及同种移植1～4组移植肝组织病理学改变及IRI损伤程度依次加重.术后1、3、5、7 d,假手术组、同系移植组及同种移植4组未发现AR,同种移植1～3组AR明显;随着术后时间延长,同种移植1～3组AR评分均逐渐升高,各组内不同时间点的差异均有统计学意义(P<0.05);术后相同时间点,同种移植1～3组AR评分依次升高,组间差异均有统计学意义(P<0.05).术后各时间点,假手术组、同系移植组移植肝组织中Fas、穿孔素和颗粒酶B的蛋白及mRNA均无表达,F组仅有少量表达,同种移植1～3组较其他组的表达明显升高(P<0.05);术后相同时间点,同种移植1～3组的表达量依次升高,两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 肝移植后AR的程度与一定程度内的IRI呈正相关,但如IRI造成移植肝严重损伤,则AR的发生明显降低,Fas/FasL和穿孔素/颗粒酶B细胞凋亡途径在其中发挥重要作用.     

羟考酮与舒芬太尼用于无痛人工流产术的镇痛效果比较

目的 研究羟考酮注射液复合丙泊酚在无痛人工流产术中应用的有效性与安全性. 方法 采用随机数字表法将60例行无痛人工流产术患者分为3组(每组20例):丙泊酚与羟考酮组(A组),丙泊酚与舒芬太尼组(B组),丙泊酚与安慰剂组(C组).记录3组麻醉诱导前(T1)、扩张官颈时(T2)、苏醒即刻时(T3)的MAP、HR、Sp02,围手术期的副作用,T3、苏醒后30 min(T4)、苏醒后3.5 h(T5)的VAS评分,3组患者应用阿托品与间羟胺的次数与离院时间,并进行比较. 结果 3组患者一般资料及手术时间差异无统计学意义(P＞0.05).A组、B组的丙泊酚用量[(130±22)、(141±27) mg]与苏醒时间[(1.2±0.8)、(1.3±1.1) min]比C组[(164±40) mg和(2.6.±1.6)min]明显减少(P＜0.01).A组T2时的MAP与HR[(77±10) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和(67±8)次/min]比T1时[(88±8) mmHg和(78±12)次nin]明显降低(P＜0.01).C组T2时的HR[(80±15)次/min]比T1时[(74±7)次/min]增加(P＜0.05).体动发生次数A组、B组比C组明显减少(P＜0.01),头晕发生次数A组、B组比C组明显增加(P＜0.01),且A组少于B组(P＜0.05).A组T3、T4、T5时的VAS评分明显低于C组(P＜0.01),B组T3、T4时的VAS评分明显低于C组(P＜0.01).A组T3、T5时的VAS评分低于B组(P＜0.05),尤其T5时更低(P＜0.01).3组之间的用药次数比较,差异无统计学意义(P＞0.05).C组的离院时间比A组、B组长(P＜0.05). 结论 丙泊酚联合羟考酮比丙泊酚联合舒芬太尼或单用丙泊酚在无痛人工流产术中具有更好的镇痛效果、更少的副作用,可安全、有效地用于无痛人工流产术.     

6％羟乙基淀粉130/0.4急性超容血液稀释对腰后路减压植骨内固定手术患者糖代谢的影响

目的观察6％羟乙基淀粉130/0.4(万汶)急性超容血液稀释(acute hypervolumic hemodilution,AHH)对腰后路减压植骨内固定手术患者糖代谢的影响。 方法60例ASA Ⅰ ～Ⅱ择期行腰后路减压植骨内固定手术患者,按随机表法分为3组：对照组(A),林格组(B),万汶组(C),每组20例。B、C组均于麻醉诱导后手术前20 min～30 min内分别输入15 ml/kg林格液、万汶,术中连续监测血流动力学变化。另外,分别于AHH前即入室后麻醉诱导前20 min (T1)、AHH后即术前麻醉诱导后25 min (T2)、术毕(T3)、术后2 h(T4)采集静脉血,检测血红蛋白(Hb)含量、红细胞压积(Hct)、皮质醇浓度(cortisol,cor)、血糖（glucose,glu）含量、胰岛素(insulin,ins)水平和胰高血糖素（glucagons,gln）水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-insulin resistance index,HOMA-IRI)和胰岛素敏感性指数（insulin sensitivity index,ISI）。结果B、C两组麻醉诱导后血流动力学相对平稳,A、B两组T3、T4时间点与T1时间点相比Hb、Hct、ISI显著下降（P＜0.05）,glu( 11.6±2.3) mmol/L、ins(11.2±2.5) mIU/L、cor (347±39) μg/L、gln(230±19) ng/L水平和IRI显著上升（P＜0.05）。C组与其他两组相比T3、T4时间点glu (8.0±2.0)mmol/L、ins(8.5±2.3) mIU/L、cor(282±21) μg/L、gln(197±28) ng/L;IRI的升高幅度和ISI的下降幅度明显减小(P＜0.05)。 结论术前万汶急性超容血液稀释可减轻应激性血糖的升高,减少皮质醇、胰高血糖素的分泌,减轻胰岛素抵抗。     

利用动态肺顺应性设定呼气末正压在胸腔镜肺叶切除术中的运用

目的 探讨单肺通气利用动态肺顺应性设定呼气末正压通气(positive end-expiratory pressure,PEEP)的优势及可行性. 方法 选择预行右侧肺叶切除患者80例,完全随机分为A组和B组,每组40例:A组,单肺通气实施肺膨胀(sustained inflation,SI)复张后加用20 cmH2O(1 cmH2O=0.098 kPa)的PEEP并递减滴定,随后以得到最大肺顺应性的PEEP值通气,直到恢复双肺通气;B组,通气PEEP值固定为5 cmH2O,其他通气方法同A组.记录患者血气、呼吸等参数. 结果 两组设定的PEEP值[A组(9.2±1.2) cmH2O,B组5 cmH2O]差异有统计学意义(P＜0.05);在单肺通气1 h(T3)、手术结束(T4)时,两组动脉血氧分压(partial pressure of oxygen,PaO2)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);B组的PaO2在T3～T4逐步降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而A组则维持较好(P＞0.05);T3、T4时刻A组的动态肺顺应性[(30.8±5.9)、(30.7±6.4) ml/cmH2O]与B组[(26.6±5.5)、(26.4±5.2) ml/cmH2O]比较,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 胸腔镜肺叶切除术中的单肺通气,利用动态肺顺应性设定的PEEP值通气能够得到更好的氧合及呼吸参数,并且维持较好.     

盐酸氢吗啡酮复合丙泊酚在无痛结肠镜检查中的应用

目的 观察盐酸氢吗啡酮复合丙泊酚麻醉用于无痛结肠镜的镇痛效果及安全性.方法 选择60例结肠镜检查患者,ASA分级Ⅰ、Ⅱ级,采用随机数字表法分为盐酸氢吗啡酮复合丙泊酚组(A组)和单纯丙泊酚组(B组),每组30例.A组给予盐酸氢吗啡酮0.5 mg(生理盐水稀释至5 ml缓慢静脉注射)复合丙泊酚麻醉,B组给予等量生理盐水复合丙泊酚麻醉.记录两组患者麻醉前(T0)、检查即刻(T1)、结肠镜到达回盲部时(T2)及术毕(T3)的SBP、HR及SpO2,并观察两组丙泊酚用量、副作用、术后疼痛VAS评分、苏醒时间、检查操作时间以及离院时间.结果 与T0比较,在T1、T2时点两组HR明显减慢,SBP和SpO2明显降低(P＜0.05),其中B组在T1、T2时间点的SBP和HR下降比A组明显(P＜0.05);丙泊酚用量A组[(103±14) mg]明显少于B组[(170±22) mg] (P＜0.05),术后VAS评分A组[(1.2±0.6)分]低于B组[(3.0±0.6)分](P＜0.05),体动反应A组(5例)明显少于B组(18例)(P＜0.05).结论 盐酸氢吗啡酮复合丙泊酚可安全用于无痛结肠镜检查并减少丙泊酚用量,麻醉平稳、效果确切.     

灯盏细辛对大鼠肾冷缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的 观察中药灯盏细辛对大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤(IRI)中肾脏细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 封闭群SD大鼠36只,随机分为3组,每组12只.假手术组(A组),对照组(B组),实验组(C组).药物应用:C组术前15 min,灯盏细辛注射液按1.2 ml/100 g通过尾静脉注射,A、B组按相应剂量注射生理盐水.动物手术:A组,切除右肾.B、C组采用的是冷IRI模型,3组大鼠均在术后24h再次手术切除左肾进行检测.透射电镜检查肾组织形态学,免疫组织化学检测凋亡相关的基因bcl-2与bax的表达,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 (1)超微结构检查(透射电镜):A组结构正常;B组细胞呈损伤形态:线粒体肿胀,微绒毛减少,胞质内空泡形成,部分细胞核可见凋亡迹象.C组病变较B组显著减轻.(2)免疫组织化学蛋白阳性染色指数(PI):缺血再灌注后B、C组的bcl-2表达分别为(21.21±1.18)％和(35.52±1.94)％,较A组(4.95±0.77)％均增多(P＜0.05),B组低于C组(P＜0.05).B、C组的bax表达分别为(58.55±2.90)％和(45.90±3.14)％,较A组(4.67±0.67)％增多(P＜0.05),而且B组高于C组(P＜0.05).A组的蛋白阳性染色指数的比值bcl-2/bax为(1.06±0.07)高于B组(0.35±0.03)和C组(0.78±0.07,P＜0.05),而且C组高于B组(P＜0.05).(3)细胞凋亡检测(TUNEL):细胞凋亡指数B组(28.57±3.58)％和C组(19.99±3.37)％均显著大于A组(2.33±0.42)％(P＜0.01),C 组小于B组(P＜0.01).结论 灯盏细辛减少大鼠肾脏冷IRI诱导的肾脏细胞的凋亡,与调节凋亡相关基因bcl-2与bax表达有关.     

雷公藤甲素预处理诱导Tregs细胞减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的实验研究

目的 探讨雷公藤甲素(TPT)预处理减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为4组(15只/组):假手术对照组;假手术雷公藤甲素组;实验对照组;雷公藤甲素实验组.两个雷公藤甲素组小鼠术前1周每天给予雷公藤甲素0.1 mg/kg腹腔注射,术前1h加用一次,而两对照组同期仅给予等体积无菌生理盐水腹腔注射.肝脏缺血90 min再灌注24 h后分别采集各组小鼠的血液和肝组织,检测血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)水平.以及肝脏组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量.光镜下观察肝组织的病理学变化.采用流式细胞术检测肝组织中CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞占CD4+T细胞的百分比,采用实时聚合酶链反应检测肝组织中Foxp3 mRNA的表达.采用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-10、IL-6、IL-1β和TNF-α细胞因子含量.结果 雷公藤甲素实验组和实验对照组小鼠血清ALT和AST明显升高,且雷公藤甲素实验组水平低于实验对照组(P＜0.05).假手术雷公藤甲素组和雷公藤甲素实验组与相应假手术和实验对照组相比MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05).两假手术组肝组织结构正常,实验对照组可见明显的肝组织片状坏死,雷公藤甲素实验组肝小叶结构基本正常.假手术对照组、假手术雷公藤甲素组、实验对照组和雷公藤甲素实验组CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞占CD4+T细胞的百分比分别为(7.55±1.87)%、(12.59±3.87)%、(7.85±1.07)%和(12.02±3.16)%.假手术雷公藤甲素组和雷公藤甲素实验组Foxp3 mRNA相对表达量高于相应的对照组(P＜0.05).雷公藤甲素实验组较实验对照组相比有升高血清IL-10,降低IL-6、IL-1β和TNF-α细胞因子的含量的作用.结论 雷公藤甲素可减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤,其机制可能与雷公藤甲素诱导上调体内CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞比例及增加IL-10分泌,抑制IL-6、IL-1p和TNF-α炎症细胞因子有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect and related mechanism of triptolide pretreatment to prevent from ischemia/reperfusion (I/R) injury in mice liver. Methods Sixty male C57BL/6 mouse were randomized into four groups (15/group): A:sham group with saline , B: sham group with triptolide, C: saline I/R group, D: triptolide I/R group. The mice were pretreated with either saline or triptolide (0. 1 mg/kg/d) through intraperitoneal (ip) injection for one week. The mouse partial liver model of I/R injury was established, and samples were collected at 24 h after the I/R injury. Results Serum ALT and AST levels were significantly decreased and histological damage was significantly alleviated in the triptolide I/R group as compared with the saline I/R group (P＜0.05), the concentration of MDA in the triptolide groups was significantly decreased, while SOD activity was significantly increased compared with that of the saline I/R group (P＜0.05). The percentages of CD4+ CD25+ regulatory T cells (Tregs) cells among CD4+ T cells in groups A, B, C, and D were(7. 55 ± 1.87)%, (12. 59±3. 87)%,(7. 85±1.07)%, and(12. 02±3. 16)% in liver tissue, respectively. The expression levels of Foxp3 mRNA were significantly higher in the triptolide I/R group than those of saline I/R group (P＜0. 05). ELISA showed that triptolide could significantly inhibit the levels of IL-6, IL-Iβ and TNF-αand promoted the level of IL-10 in the serum (P＜0.05). Conclusion Pretreatment with triptolide could effectively prevent from liver I/R injury, which may be related to the induction of Treg cells by triptolide, the increase in the level of IL-10 in serum, and the inhibition of IL-6, IL-1β and TNF-α production in serum.     

二十碳五烯酸对小鼠心脏移植慢性排斥反应的影响

目的 观察二十碳五烯酸(EPA)对于慢性排斥反应的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 建立近交系BALB/C(H-2d)至C57BL/6(H-2b)小鼠心脏腹腔异位移植模型,通过腹腔注射单克隆CD4抗体及CD40L抗体建立慢性排斥反应模型.设立对照组(NS)、慢排组(术后0、1、5、10 d腹腔注射抗CD4单克隆抗体100μg/d,术后0、2、4 d腹腔注射抗CD40L单克隆抗体200 μg/d)和EPA组[在慢排组的基础上EPA 100 mg/(kg·d)灌胃].术后60 d,EVG染色了解血管病变.利用Real-Time聚合酶链反应(PGR)检测各组移植物慢排相关细胞因子转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-17的mRNA水平,组织化学研究EPA作用受体PPARy的表达以及TGF-β通路重要分子Smad3活化情况.结果 利用CD4抗体及CD40L抗体成功建立慢性排斥反应模型,出现典型的血管病变.联合利用EPA明显减轻血管狭窄[闭塞(18±3)%比(59±7)%,P＜0.05]、并下调局部TGF-β、IL-17表达(TGF-β:12.0±2.5比4.0±0.9;IL-17:0.60±0.09比0.10±0.02;P＜0.05).同时上调PPARγ的表达[(25±7)比(2±0.5)个/高倍视野;P＜0.05],并抑制Smad3的磷酸化[(30±5)比(10±3)个/高倍视野;P＜0.05].结论 EPA可以激活和上调供心PPARγ的表达,明显减轻慢性排斥反应血管病变.

Abstract：

Objective To investigate the anti-chronic rejection effects of eicosapentaenoic acid (EPA) in a mouse fully mismatched cardiac transplantation model and the possible mechanism.Methods Heterotopic heart transplantation of male BALB/C(H-2d) mouse to C57BL/6(H-2b) mouse were performed.24 recipients were divided into 3 groups at random:group A ( treated with saline as control,n =8) ;group B recipients were treated with anti-CD40L mAb (200 μg intraperitoneally infusion on the day 0,2 and 4) and CD4 mAb (100μg intraperitoneally infusion on the day 0,1,5 and 10) ;GroupC (CD4 & CD40L mAb combined with EPA by gavage).The cardiac grafts were harvested on the 60th day after transplantation with HE&EVG stained.Real-Time polymerase chain reactio (PCR) was used to detect the transforming growth factor-β1 (TGF-β1),interleukin (IL)-17 mRNA,immunohistochemistry were used to detect the PPARγ and P-Smad3 protein expression respectively in cardiacgrafts from group B and C.Results Combined treatment with anti-CD40L mAb and anti-CD4 mAb resulted in significant prolongation of cardiac allografts survival but ultimately did not prevent the progression of chronic rejection,which showed transplant arteriosclerosis and in terstitial fibrosis.The combination of EPA reserved arterial intimal thickening and delay the process of cardiac allograft vasculopathy [Vascular occlusion rate (18 ± 3 )% vs (59 ±7) %;P ＜0.05].Real Time PCR revealed that IL-17 and TGF-β mRNA was expressed less in grafts from group C than group B (TGF-β:4.0 ±0.9 vs 12.0 ±2.5 ;IL-17:0.10 ±0.02 vs 0.60 ±0.09;P＜0.05).The cells in graft that express PPARγ protein was more in group C than from group B [( 25.0 ± 7.0) vs (2.0 ± 0.5 )/PHF ;P＜0.05],reversely the P-Smad3 protein [( 10 ± 3 ) vs ( 30 ± 5 )/PHF;P＜0.05].Conclusion The administration of EPA can inhibit the chronic rejection and reserve arterial intimal thickerring through PPAR-gamma agonist.     

AMPK attenuates inflammation to reduce fibrosis induced by acute ischemia reperfusion injury in mice

Objective To observe the effect of adenosine monophosphate activated protein kinase (AMPK) on attenuating inflammation in fibrosis induced by acute ischemia reperfusion injury (IRI) in mice. Methods Forty eight male C57BL/6 mice were randomly divided into four groups: sham operation group (sham group), IRI group, AMPK inhibitor+IRI group (AMPK/IRI group) and normal saline+IRI group (NS/IRI group), 12 mice each group. The mice with renal IRI were occluded for 30 min through clipping bilateral renal pedicle, then released renal perfusion. Mice in sham group were performed the separation of renal pedicle without clipping. Mice in AMPK/IRI group and NS/IRI group were respectively intraperitoneal injected AMPK inhibitor and normal saline before IRI. At the 2 d after operation, 6 randomly-selected mice from each group were blooded by extraction eyeball to detect BUN and Scr. The renal histopathological changes were observed through HE staining. The mRNA expression of IL-1β, IL-6 and TNF-α was detected by real time PCR, and the level of AMPK phosphorylation was detected by Western blotting. At the 14 d after operation, Collagen 1 (COL1), α-SMA and fibronectin (FN) were detected by immunofluorescence and Western blotting in 6 remained mice from each group. The degree of kidney fibrosis was observed through sirus red staining. Results Compared with those in sham group, tubular interstitial damage was aggravated (P＜0.05), BUN and Scr were increased (P＜0.05), the mRNA expression of IL-1β, IL-6 and TNF-α was increased at the 2 d after operation (all P＜0.05), and the level of AMPK phosphorylation was activated in IRI group and NS/IRI group (all P＜0.05); the degree of kidney fibrosis and the expression of COL1, α-SMA and FN were increased obviously at the 14 d (all P＜0.05). Compared with those in IRI group, in AMPK/IRI group tubular interstitial damage was aggravated (P＜0.05), BUN and Scr were increased (all P＜0.05), the mRNA expression of IL-1β, IL-6 and TNF-α was increased at the 2 d (all P＜0.05), and the level of AMPK phosphorylation was decreased (P＜0.05). Moreover, the degree of kidney fibrosis and the expression of COL1, α-SMA and FN were increased obviously at the 14 d in AMPK/IRI group (all P＜0.05). Conclusions AMPK can ameliorate the acute renal ischemia reperfusion injury induce fibrosis in mice, and the mechanism may be related to the decrease of inflammatory reaction.     

右美托咪啶对腹腔镜胆囊切除术全麻效果的影响

目的 探讨预先注射小剂量右美托咪啶( dexmedetomidine,Dex)对腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)患者全麻效果的影响.方法 择期行LC患者50例,ASA Ⅰ ～Ⅱ级,年龄21岁～57岁,体重42.5 kg～80 kg,按随机数字表法分为生理盐水组(C组)和...