SELDI-TOF-MS技术在胰腺癌诊断中的应用

目的 应用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)从胰腺癌患者血清中筛选标志蛋白,找出最佳的标志蛋白组合模式作为临床诊断指标.方法 收集29例胰腺癌患者血清标本和57例年龄、性别相匹配的非癌人群血清标本作为对照.采用SELDI技术检测其蛋白质指纹图谱表达,所得到的结果采用Biomarker Wizard及Biomarker Patterns system软件分析,筛选最终可能用于胰腺癌诊断的蛋白标志物并优化组合建立胰腺癌诊断模型.结果 发现胰腺癌患者和对照组血清蛋白质指纹图谱之间有26个差异表达特异性蛋白,分析系统筛选出一组包含4个标志蛋白(5705、4935、5318和3243 Da)建立起一个胰腺癌的诊断模型,对胰腺癌诊断的敏感性为100%,特异性97.4%.盲法验证此模型敏感性88.9%、特异性89.5%.结论 SELDI-TOF-MS技术的特异性及敏感性远远高于目前所采用的某一单独标志物的血清学诊断,其结果对进一步研究胰腺癌的蛋白质组学改变及其临床诊断应用可能具有重要意义.     

应用2D-DIGE及MALDI-TOF-MS筛选胰腺癌血清标志物

目的 利用比较蛋白质组学的方法对胰腺癌患者血清和对照组血清例进行分析,寻找胰腺癌潜在的特异性候选标志物.方法 采用双向差异凝胶电泳分离40例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者、10例良性肿瘤患者和40例健康体检者外周血清蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对差异显著的蛋白进行鉴定.结果 成功鉴定出2个胰腺癌差异表达蛋白:转甲状腺素蛋白和载脂蛋白E.该组蛋白在胰腺癌组中呈高表达,在正常对照组、慢性胰腺炎组和良性肿瘤组中呈低表达.结论 双向差异凝胶电泳联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术筛选胰腺癌患者外周血清中的特异性生物标志物的方法具有较好的重复性和稳定性.检测鉴定的差异蛋白质载脂蛋白E、转甲状腺素蛋白可能是胰腺癌早期诊断潜在的血清特异性生物标志物.     

蛋白质芯片技术筛选膀胱癌尿液标记物的研究

目的　寻找膀胱癌尿液中新的肿瘤标记物。　方法　采用表面增强激光解吸 /离子化 飞行时间质谱 (SELDI TOF MS)技术 ,选用IMAC Cu 3蛋白质芯片对 6 1例膀胱癌及 95例对照组尿液标本进行检测以筛选膀胱癌患者尿液中差异表达蛋白质。　结果　两组尿液标本结果比较发现 ,膀胱癌差异表达明显的潜在标记物 4个 ,相对分子质量分别为 344 5、370 3、3896、5 932。其中 344 5蛋白质被鉴定为α defensin ,诊断膀胱癌的敏感性为 80 % ,特异性为 75 % ;370 3蛋白质诊断膀胱癌的敏感性为32 % ,特异性为 94 % ,阳性者中 97%为高级别浸润性膀胱癌 ;3896、5 932诊断敏感性分别为 78%、5 5 % ,特异性分别为 4 0 %、35 %。　结论　SELDI TOF MS蛋白质芯片技术是一种快速、简便易行、用量少和高通量分析方法 ,能直接筛选出膀胱癌患者尿液中相对特异的潜在标记物 ,具有较好的临床应用价值。     

肝癌病人血清蛋白质指纹图谱检测及其临床意义

目的用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS）和蛋白质芯片检测肝细胞性肝癌（以下简称肝癌）病人血清蛋白质指纹图谱，初步探讨筛选肝癌相关的血清候选标志物。方法应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测25例未经治疗的肝癌病人、25例经介入治疗的肝癌病人和50例性别、年龄匹配的正常健康人血清，获得弱阳离子交换芯片（weak cationic exchanger）蛋白表达图谱。用BioMarker Wizard软件分析肝癌差异蛋白并初步建立诊断模型。结果应用弱阳离子交换芯片在未经治疗的肝癌病人、经介入治疗的肝癌病人和正常人血清中检测到不同质荷比处有7个差异蛋白质峰，其蛋白质含量差异有统计学意义（P〈0．05）。2个蛋白峰（7777．27Da、9250．00Da）组合构建的诊断模型，鉴别未经治疗的肝癌病人和正常人的敏感性为92％（23／25），特异性为92％（46／50）。分别对这7个蛋白质峰进行数据库搜索，得到7种与之分子量最为接近的蛋白质。结论应用SELDL-TOF-MS筛选肝癌病人血清特异性生物标志物的方法快速、有效，操作自动化，检测到的这7个差异蛋白质可能是肝癌病人血清特异性生物标志物，可能参与了肝癌的发生、发展过程。     

肺腺癌患者术后血清蛋白质组构型动态随访研究

目的用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption ionization time of flightmass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术建立肺腺癌患者血清蛋白质组构型,并筛选出相对特异标记物,随访分析其手术后的动态变化及意义。方法肺腺癌患者71例,均经手术病理证实;正常志愿者71例,按照性别、年龄、吸烟史与71例肺腺癌患者配对。用弱阳离子交换芯片(WCX2)检测各血清标本,筛选肺腺癌相对特异性蛋白质峰。随访分析71例肺腺癌患者手术后3个月、6个月和9个月血清蛋白质组构型变化。结果与正常志愿者比较发现肺腺癌患者有5个显著高表达的潜在标记物,相对分子量分别为4 047.79,4 203.99,4 959.81,5 329.30和7 760.12 Da;肺腺癌患者手术后血清蛋白质组构型变化的个体差异较大,并与患者病理分期密切相关。结论SELDI-TOF-MS蛋白质质谱技术是一种快速、简便易行且高通量的分析方法,能直接筛选出肺腺癌患者血清中相对特异的潜在标记物,且可能具有较好的临床应用前景。     

结直肠癌肿瘤标记物的筛选及其表达变化

目的筛选结直肠癌肿瘤标记物,探讨其在术前、术后患者血清中的表达变化。方法用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测87例结直肠癌、68例结直肠良性病、56例正常人血清中的差异蛋白,进而检测87例结直肠癌术前及术后15d内血清中的差异蛋白,从而筛选出结直肠癌肿瘤标记物。结果筛选出质荷比为5955Da、5972Da的2种蛋白,与结直肠良性病组和正常人组比较,其在结直肠癌患者血清中高表达（P〈0．01）;与结直肠癌术前组比较,术后1d其表达水平明显增高（P〈0．01）,术后4d已经降至术前水平（P〉0．05）;与术后1d组比较,术后4d至15d其表达水平基本处于下降趋势（P〈0．01）,但术后15d仍未降至正常水平（P〈0．01）。结论质荷比为5955Da、5972Da的2种蛋白可作为结直肠癌肿瘤标记物,其在术前、术后15d内血清中的表达有一定的变化规律。     

应用蛋白质组学技术在人肾癌组织中发现2个特异性生物标志物

目的探讨人肾肿瘤组织和正常肾组织之间蛋白质的差异表达，寻找特异性生物标记物。方法应用蛋白质组学（SELDI）技术，检测12例人肾肿瘤和正常肾组织蛋白质谱图表达。结果与正常肾组织比较，在IMAC3蛋白质芯片上人肾肿瘤组织谱图中显示2个特异性蛋白质峰明显增高，相对分子质量依次为5750.4和5861.7，其特异性和敏感性高。结论人肾肿瘤组织中特异性蛋白质的发现，对进一步研究肿瘤发生机理及其临床特异性生物标志物的检测等具有重要意义。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞差异蛋白的初步分析

目的:筛选瘢痕疙瘩差异表达蛋白,为临床诊断提供实验依据。方法:以瘢痕疙瘩为实验组,正常皮肤组织为对照组,同时提取两组蛋白质,经初步消化、过柱、洗脱、收集后,加样到WCX2蛋白质芯片上,蛋白质芯片采用蛋白质芯片阅读机(PBSII-C型)读取数据。结果:实验结果表明瘢痕疙瘩组织相比较正常皮肤组织,蛋白芯片捕获262个蛋白峰。其中有33个蛋白质在瘢痕疙瘩成纤维细胞中出现明显的变化,有11个标志蛋白在瘢痕疙瘩成纤维细胞中高表达,22个标志蛋白相对正常皮肤是低表达。结论:运用SELDI分析了瘢痕疙瘩差异蛋白质,这些差异蛋白可为将来确定瘢痕疙瘩诊断标志物提供依据。     

采用SELDI技术检测肾移植患者尿液蛋白质指纹图谱诊断慢性移植肾肾病

目的 探讨应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI）技术检测慢性移植肾肾病（CAN）患者尿液蛋白质指纹图谱峰值的意义。方法 实验分为4组。对照组：身体健康者6例；肾功能衰竭组：慢性肾功能衰竭者5例，未进行肾移植；肾功能恢复组：肾移植术后移植肾功能恢复正常的长期存活者22例；CAN组：肾移植术后发生CAN者16例。取各组受试者早晨中段尿液，应用SELDI技术检测蛋白质指纹图谱峰值。结果 经检测，肾功能恢复组和CAN组之间有3个蛋白质的表达存在差异（P〈0．05）；在肾功能衰竭组和肾功能恢复组之间有7个蛋白质表达存在差异（P〈0．05），其中3个可能为潜在性的标记物（P〈0．01）；在对照组和肾功能衰竭组之间有19个蛋白质表达存在差异（P〈0．05），其中12个可能为潜在性的标记物（P〈0．01）。结论 SELDI技术可通过比较不同患者尿液蛋白质谱间的差异，分析出能区分CAN和其他肾病的特异性蛋白质峰值，初步筛选出有意义的差异蛋白，可为CAN的早期临床诊断提供一个可行的检测途径和方法。     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

结直肠癌患者血清蛋白质谱检测的意义

目的 比较原发性结直肠癌与结直肠癌转移患者血清蛋白质谱,筛选与结直肠癌转移相关的蛋白标志物.方法 采用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱技术测定219例结直肠癌患者和健康人血清标本.将标本随机分为训练组(无转移患者57例,转移患者63例,健康人42例)和盲法测试组(无转移患者26例,转移患者31例).分析比较训练组结直肠癌转移与无转移患者及健康人血清蛋白质谱差异,筛选与转移相关的蛋白标志物,并用单盲法验证筛选出差异标志物的灵敏度与特异性.结果 在平均分子质量为2000～30000范围内比较原发性结直肠癌患者与健康人血清蛋白质谱,发现31个蛋白质峰差异有统计学意义,按P值由小到大前5位的蛋白质峰分别为3240.7、9289.3、5334.4、4596.1和4792.4;比较结直肠癌转移患者与健康人血清,发现38个蛋白质峰差异有统计学意义,按P值由小到大前5位的蛋白质峰分别为3240.7、9289.3、9184.4、3191.5和9340.9;单独比较原发性结直肠癌与结直肠癌转移患者血清,筛选出两个蛋白质峰(9184.4和9340.9)差异有统计学意义,联合应用这两种蛋白可以将转移与无转移结直肠癌患者正确分组,正确分组率分别为93.6%和91.2%.经测试组盲法验证得出的灵敏度和特异性分别为90.3%和88.5%.结论 用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱技术可以监测结直肠癌转移,血清蛋白质谱中的差异蛋白可能是转移相关蛋白.     

运用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术建立结直肠癌预测诊断模型

目的 寻找与结直肠癌相关的蛋白质并建立结直肠癌血清蛋白指纹图谱诊断预测模型.方法 随机选取结直肠癌病例36例(结直肠癌组)和疝或行胆囊择期手术的患者36例(对照组),术前静脉采血,采用弱阳离子交换蛋白质芯片(CM10),经表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术测定,建立结直肠癌的血清蛋白指纹图谱诊断预测模型;选取88例结直肠癌患者和44例正常对照进行盲法验证.结果 通过两组比较,得到5个差异蛋白峰,并以此建立诊断预测模型,其敏感性为100%,特异性为97.2%.盲法验证显示敏感性为71.6%,特异性为72.7%.其中质荷比为8908与13707的蛋白均存在于结直肠癌组和正常组的比较中,提示上述蛋白质与结直肠癌相关.结论 运用SELDI-TOF-MS技术建立的血清蛋白指纹图谱模型对诊断结直肠癌具有较高的敏感性与特异性.质荷比为8908与13707的蛋白可能成为结直肠癌的肿瘤标记物.     

血清多肽谱在胃癌早期诊断中的应用价值

目的 寻找早期胃癌相关的血清标志物,并评价其诊断价值.方法 利用质谱联合纳米磁珠技术对433例胃癌患者（其中包括65例ⅠA期患者）和120名健康人群的血清多肽谱进行研究,用Biomarker Wizard软件筛选差异峰.将所有研究对象分为测试组（204例胃癌患者和70名健康人）和验证组（229例胃癌患者和50名健康人）.进一步用SPSS 12.0中ROC曲线分析差异峰,评价其灵敏度和特异性 并分析差异峰在不同分期的胃癌患者中分布情况.结果 通过42例胃癌患者和42名性别年龄匹配的健康人群血清比较筛选出13个差异峰（均P＜0.01）.在测试组和验证组中ROC曲线面积都在0.8以上的有2745、2768、6629、3402、6436 m/z 5个差异峰,同时鉴定出6629 m/z差异峰为甲状腺素运载蛋白.测试组分析显示,当6629 m/z取24.58这个截点时,可获得较高的诊断敏感度和特异度.验证组分析显示,6629 m/z总体诊断敏感度和特异度分别为65.5%和92.0%,对于ⅠA胃癌患者,其诊断敏感度为59.4%.结论 6629 m/z差异峰（甲状腺素运载蛋白）对于早期胃癌具有较高的诊断价值,有助于胃癌的早期筛查.     

前列腺癌骨转移血清蛋白质组学研究

目的:应用蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术筛选前列腺癌骨转移血清标志物。方法:收集前列腺癌伴骨转移、不伴骨转移各5例血清样本。血清样品用除白蛋白试剂盒除去血清中的白蛋白后进行双向凝胶电泳,ImageMaster 2D Platinum软件分析,有意义的差异蛋白质点行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果:双向凝胶电泳显示,前列腺癌骨转移组血清蛋白中有15个斑点与前列腺癌无骨转移组有显著差异,前列腺癌骨转移患者血清中10个蛋白质表达水平显著增加,5个蛋白质表达水平显著下降。5个差异蛋白点进行胶内原位酶解,肽质量指纹图谱分析成功得到了3个蛋白质肽质量指纹图谱,并查询数据库初步鉴定了该3个蛋白质分别为锌α2糖蛋白、结合珠蛋白和载脂蛋白CⅢ。结论:双向凝胶电泳结合质谱鉴定是血清差异蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具。所鉴定出的蛋白质与前列腺癌骨转移的发生、发展有关,可能是前列腺癌骨转移潜在的血清标志物。     

飞行时间质谱技术筛查上皮性卵巢癌患者血清特异性蛋白的研究

目的：应用飞行时间质谱技术筛选上皮性卵巢癌患者与正常人血清中差异性蛋白,探讨蛋白质组学诊断模型用于上皮性卵巢癌的早期诊断的可行性。方法：应用弱阳离子芯片（WCX2）及表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪（SELDI-TOF-MS）检测20例正常人（对照组）和40例上皮性卵巢癌（观察组）患者血清中的差异蛋白质,并检测差异蛋白筛选上皮性卵巢癌的特异性和敏感度。结果：对照组与观察组在1500～20000Da间,质荷比为3865Da、4318Da及5089Da的蛋白峰差异有统计学意义（P〈0.05）。3个蛋白区分对照组与观察组的敏感性与特异性为80.00%（32/40）、85.00%（17/20）。结论：SELDI-TOF-MS技术对上皮性卵巢癌早期诊断具有一定价值。     

胰腺癌患者循环microRNA及吉西他滨耐药的胰腺癌患者特异性microRNA表达谱分析

目的 检测胰腺癌患者血浆中表达差异的microRNA及对吉西他滨耐药的胰腺癌患者血浆中表达差异的microRNA,为寻找新的生物标志物用于胰腺癌的无创性诊断及吉西他滨的疗效预测提供新的思路.方法 采用qPCR方法检测并筛选出胰腺癌患者血浆中相比于健康人表达差异明显的microRNA,以及对吉西他滨耐药的胰腺癌患者血浆中相比于对吉西他滨不耐药的胰腺癌患者表达差异明显的microR-NA.结果 胰腺癌患者相较于健康人存在表达差异的microRNA有28个,对吉西他滨耐药的胰腺癌患者相较于不耐药患者存在表达差异的microRNA有28个.结论 胰腺癌患者血浆中microRNA表达与正常人群有较显著的差异,胰腺癌患者中对吉西他滨耐药和不耐药者血浆microRNA也存在较显著差异,其有可能作为胰腺癌的诊断及疗效预测提供潜在的生物标志物.     

胆囊癌血清标志物的蛋白质组学研究

目的 分析胆囊癌患者和健康人血清蛋白质组的差异,筛选胆囊癌血清分子标志物.方法 以6例健康人和6例早胆囊癌患者的血清为样本,图像分析两组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白点进行鉴定.Western blot和免疫组织化学方法检测差异蛋白质S100A10和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的表达.结果 建立了健康人和胆囊癌患者血清样品的二维凝胶电泳图谱,质谱鉴定出24种非冗余的血清蛋白质.Westernblot证实了S100A10蛋白和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的差异表达.免疫组织化学证实胆囊癌组织中S100A10及结合珠蛋白高表达.结论 24种血清差异蛋白质为筛选胆囊癌的血清分子标志物提供了实验依据.     

胰腺癌组织中差异表达蛋白的筛选与鉴定

目的:筛选并鉴定胰腺癌组织中的差异表达蛋白,并探讨其临床意义。方法:应用双向凝胶电泳技术对12对胰腺癌组织和癌旁组织样品进行分析,筛选出差异表达蛋白质;应用MALDI-TOF-MS/MS技术对差异表达蛋白质进行鉴定。结果:优化的胰腺组织双向凝胶电泳技术具有良好的分辨率和可重复性;应用双向凝胶电泳技术筛选出胰腺癌组织中30个差异表达蛋白质;应用MALDI-TOF-MS/MS技术鉴定了胰石蛋白、钙囊素、热休克蛋白B6等24个蛋白质,其中15个蛋白质在胰腺癌组织中表达上调,9个蛋白质表达下调。结论:双向凝胶电泳、生物质谱等蛋白质组学技术在胰腺癌的基础研究中有重要价值和应用前景,有助于筛选蛋白标志物和阐明分子发病机制。胰腺癌组织中有多个异常表达蛋白质,这些蛋白质与胰腺癌的发生相关,可能成为胰腺癌蛋白标志物和药物治疗的靶蛋白。     

大肠癌手术治疗前后血清蛋白质谱的变化

目的观察大肠癌手术前后血清蛋白质谱的变化,从而筛选特异性蛋白标志物。方法选用IMAC#3蛋白质芯片和SELDITOF蛋白质芯片技术,对64例大肠癌患者和40名正常人的血清蛋白质谱进行分析。结果通过对大肠癌术前血清与正常人血清蛋白质谱分析发现共有19个蛋白质表达量有明显差异。并获得分子量为5908.55Da等5个蛋白质组成的模板,可将大肠癌与正常人正确分组,其正确分组率分别为97.5%(56/64)和80.0%(32/40)。术后血清蛋白质谱中,原高表达的蛋白质明显下调。利用该模板诊断大肠癌的灵敏度达96.8%,特异性达92.5%。结论血清中可以筛选到诊断大肠癌的特异性蛋白标志物并用以预后的判断。SELDITOF蛋白质芯片技术为建立蛋白质模板用以早期诊断大肠癌提供了可靠的技术平台。