应用SELDI质谱技术筛选胰腺癌患者的血清标志蛋白

目的:探讨应用SELDI质谱技术对胰腺癌患者血清中特异性标志蛋白的筛选方法。方法:采用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术，选择WCX磁珠及蛋白芯片阅读机对胰腺癌及健康人(对照组)和胰腺良性疾病组的血清进行检测，以筛选胰腺癌患者血清中特异表达差异蛋白。结果:发现胰腺癌血清表达差异的潜在标志物（蛋白）4个，相对分子质量分别为5 705 Da，4 935 Da,5 318 Da和3243 Da，其中4 935 Da，3 243 Da差异表达蛋白质在对照组中低表达，而在胰腺癌组中高表达，5 705 Da和5 318 Da差异表达蛋白质在胰腺癌组中低表达而对照组中高表达。结论:应用SELDI技术筛选胰腺癌患者血清中的特异性生物标记物的方法快速、有效;检测到的4个差异蛋白质可能是胰腺癌患者血清特异性生物标记物。     

SELDI-TOF-MS在肿瘤性胆囊息肉样病变诊断中的作用

目的 寻找肿瘤性胆囊息肉样病变(PLG)患者血清中的特异性蛋白,并建立诊断模型.方法 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)和WCX型磁珠检测23例肿瘤性PLG、21例非肿瘤性PLG和26例正常人的血清蛋白质指纹图谱,并联合应用Biomarker wizard及Biomarker Patterns Software软件分析处理数据.结果 初步筛选出对诊断肿瘤性PLG有代表性的22个特异性蛋白,分析系统在设定条件下筛选出3个特异性蛋白(5064.52 Da,7916.33 Da,7643.32 Da)用于建立肿瘤性PLG的诊断模型.此模型对肿瘤性胆囊息肉样病变诊断的敏感度为100%,特异度为89.4%.结论 SELDI-TOF-MS技术可筛选出肿瘤性PLG的特异性蛋白并建立起肿瘤性PLG的诊断模型.     

肝癌病人血清蛋白质指纹图谱检测及其临床意义

目的用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS）和蛋白质芯片检测肝细胞性肝癌（以下简称肝癌）病人血清蛋白质指纹图谱，初步探讨筛选肝癌相关的血清候选标志物。方法应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测25例未经治疗的肝癌病人、25例经介入治疗的肝癌病人和50例性别、年龄匹配的正常健康人血清，获得弱阳离子交换芯片（weak cationic exchanger）蛋白表达图谱。用BioMarker Wizard软件分析肝癌差异蛋白并初步建立诊断模型。结果应用弱阳离子交换芯片在未经治疗的肝癌病人、经介入治疗的肝癌病人和正常人血清中检测到不同质荷比处有7个差异蛋白质峰，其蛋白质含量差异有统计学意义（P〈0．05）。2个蛋白峰（7777．27Da、9250．00Da）组合构建的诊断模型，鉴别未经治疗的肝癌病人和正常人的敏感性为92％（23／25），特异性为92％（46／50）。分别对这7个蛋白质峰进行数据库搜索，得到7种与之分子量最为接近的蛋白质。结论应用SELDL-TOF-MS筛选肝癌病人血清特异性生物标志物的方法快速、有效，操作自动化，检测到的这7个差异蛋白质可能是肝癌病人血清特异性生物标志物，可能参与了肝癌的发生、发展过程。     

SELDI-TOF-MS技术在胰腺癌诊断中的应用

目的 应用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)从胰腺癌患者血清中筛选标志蛋白,找出最佳的标志蛋白组合模式作为临床诊断指标.方法 收集29例胰腺癌患者血清标本和57例年龄、性别相匹配的非癌人群血清标本作为对照.采用SELDI技术检测其蛋白质指纹图谱表达,所得到的结果采用Biomarker Wizard及Biomarker Patterns system软件分析,筛选最终可能用于胰腺癌诊断的蛋白标志物并优化组合建立胰腺癌诊断模型.结果 发现胰腺癌患者和对照组血清蛋白质指纹图谱之间有26个差异表达特异性蛋白,分析系统筛选出一组包含4个标志蛋白(5705、4935、5318和3243 Da)建立起一个胰腺癌的诊断模型,对胰腺癌诊断的敏感性为100%,特异性97.4%.盲法验证此模型敏感性88.9%、特异性89.5%.结论 SELDI-TOF-MS技术的特异性及敏感性远远高于目前所采用的某一单独标志物的血清学诊断,其结果对进一步研究胰腺癌的蛋白质组学改变及其临床诊断应用可能具有重要意义.     

血清蛋白质指纹图谱在甲状腺癌诊断中的应用

目的 检测甲状腺癌、甲状腺良性结节和正常人血清中蛋白质组图谱，筛选特异的蛋白质标记物。构建用于甲状腺癌早期诊断的血清蛋白质指纹图谱模型。方法 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术检测108例血清标本的蛋白质质谱，其中甲状腺癌40例（Ⅰ～Ⅱ期26例，Ⅲ～Ⅳ期14例），甲状腺良性结节36例，正常人32例。随机抽取87例标本（甲状腺癌32例，甲状腺良性结节30例，正常人25例）作为训练组，应用支持向量机和判别分析的方法分析质谱数据，建立甲状腺癌诊断模型，留一法交叉验证。结果区分甲状腺癌和正常人的诊断模型交叉检验敏感性87．5％，特异性80．0％，用15例未知血清盲法测试敏感性100％。特异性86％。区分甲状腺癌和甲状腺良性结节的诊断模型交叉检验敏感性81％，特异性87％，用14例未知血清盲法测试敏感性88％，特异性83％。结论 SELDI-TOF-MS技术结合生物信息学方法检测甲状腺癌血清蛋白质指纹图谱是早期诊断甲状腺癌的一种特异性强。敏感性高的新方法。值得进一步研究。     

中药肾康灵干预阿霉素肾病大鼠血蛋白质质谱表达的实验研究

目的：应用血蛋白质组学筛选阿霉素肾病（AN）大鼠血清中差异表达的蛋白质,旨在蛋白质分子水平探索频复发性肾病综合征（FRNS）的诊断标志物及中药肾康灵治疗的作用靶点。方法：利用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）联合CM10蛋白质芯片技术检测各组大鼠血蛋白质组质谱的表达,采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机自动收集数据,使用Ciphergen Proteinchip Software3.2.1和Biomarker Wizard分析软件筛选出各组大鼠血清差异表达的蛋白质。结果：在质荷比值（M/Z）2000~50000范围内,P〈0.05,芯片共捕获到30种差异蛋白质,质谱仪筛选出B组与A组比较的25种差异蛋白,C组与B组比较筛选出5种差异蛋白,其中3种差异蛋白在B、C、D、E组间差异有统计学意义,且从B组→C组→D、E组→A组呈递减趋势,这3种蛋白峰分别为8837.7、15013.0、15053.2。结论：SELDI-TOF-MS能有效分析阿霉素肾病大鼠血清蛋白质质谱,中药肾康灵干预治疗后蛋白质质谱表达差异有统计学意义。     

结直肠癌肿瘤标记物的筛选及其表达变化

目的筛选结直肠癌肿瘤标记物,探讨其在术前、术后患者血清中的表达变化。方法用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测87例结直肠癌、68例结直肠良性病、56例正常人血清中的差异蛋白,进而检测87例结直肠癌术前及术后15d内血清中的差异蛋白,从而筛选出结直肠癌肿瘤标记物。结果筛选出质荷比为5955Da、5972Da的2种蛋白,与结直肠良性病组和正常人组比较,其在结直肠癌患者血清中高表达（P〈0．01）;与结直肠癌术前组比较,术后1d其表达水平明显增高（P〈0．01）,术后4d已经降至术前水平（P〉0．05）;与术后1d组比较,术后4d至15d其表达水平基本处于下降趋势（P〈0．01）,但术后15d仍未降至正常水平（P〈0．01）。结论质荷比为5955Da、5972Da的2种蛋白可作为结直肠癌肿瘤标记物,其在术前、术后15d内血清中的表达有一定的变化规律。     

应用2D-DIGE及MALDI-TOF-MS筛选胰腺癌血清标志物

目的 利用比较蛋白质组学的方法对胰腺癌患者血清和对照组血清例进行分析,寻找胰腺癌潜在的特异性候选标志物.方法 采用双向差异凝胶电泳分离40例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者、10例良性肿瘤患者和40例健康体检者外周血清蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对差异显著的蛋白进行鉴定.结果 成功鉴定出2个胰腺癌差异表达蛋白:转甲状腺素蛋白和载脂蛋白E.该组蛋白在胰腺癌组中呈高表达,在正常对照组、慢性胰腺炎组和良性肿瘤组中呈低表达.结论 双向差异凝胶电泳联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术筛选胰腺癌患者外周血清中的特异性生物标志物的方法具有较好的重复性和稳定性.检测鉴定的差异蛋白质载脂蛋白E、转甲状腺素蛋白可能是胰腺癌早期诊断潜在的血清特异性生物标志物.     

大肠癌手术治疗前后血清蛋白质谱的变化

目的观察大肠癌手术前后血清蛋白质谱的变化,从而筛选特异性蛋白标志物。方法选用IMAC#3蛋白质芯片和SELDITOF蛋白质芯片技术,对64例大肠癌患者和40名正常人的血清蛋白质谱进行分析。结果通过对大肠癌术前血清与正常人血清蛋白质谱分析发现共有19个蛋白质表达量有明显差异。并获得分子量为5908.55Da等5个蛋白质组成的模板,可将大肠癌与正常人正确分组,其正确分组率分别为97.5%(56/64)和80.0%(32/40)。术后血清蛋白质谱中,原高表达的蛋白质明显下调。利用该模板诊断大肠癌的灵敏度达96.8%,特异性达92.5%。结论血清中可以筛选到诊断大肠癌的特异性蛋白标志物并用以预后的判断。SELDITOF蛋白质芯片技术为建立蛋白质模板用以早期诊断大肠癌提供了可靠的技术平台。     

阿霉素肾病大鼠尿蛋白质组质谱的检测及中药肾康灵的干预作用

目的：应用尿蛋白质组学筛选阿霉素肾病（AN）大鼠尿液中差异表达的蛋白质,并检测中药肾康灵的干预作用,旨在蛋白质分子水平探索频复发性肾病（FRNS）的诊断标记物及药物治疗的作用靶点。方法：用阿霉素（ADR）5.5mg/kg诱导大鼠复制的阿霉素肾病（AN）模型,即类似于人类微小病变型（MCD）肾病模型。实验共分为5组,分别为正常组（A组）、AN病模组（B组）、泼尼松治疗组（C组）、泼尼松＋肾康灵（低浓度）治疗组（D组）、泼尼松＋肾康灵（高浓度）治疗组（E组）。利用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术联合CM10蛋白质芯片技术检测各组大鼠尿蛋白质组质谱的表达,采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机自动收集数据,使用Ciphergen Proteinchip Software3.2.1和Biomarker Wizard分析软件筛选出各组大鼠尿液差异表达的蛋白质。并观察各组治疗前后尿蛋白、血清白蛋白（Alb）、胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）及肾脏病理形态学等变化。结果：在质荷比值（M/Z）2000～50000范围内（P〈0.05）,芯片共捕获到近40种差异蛋白质,质谱仪筛选出B组与A组比较的38种差异蛋白,其中3种差异蛋白从B组→C组→D、E组→A组呈递减趋势。这3种差异蛋白峰的M/Z值分别为9321.0、9393.1、9477.5。结论：SELDI-TOF-MS能有效分析阿霉素肾病大鼠尿液蛋白质质谱,中药肾康灵干预治疗后蛋白质质谱表达差异有统计学意义,且中药肾康灵联合泼尼松治疗AN大鼠的疗效优于单用泼尼松治疗。     

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??Study of searching for the serum proteomic patterns of early liver metastasis of colorectal cancer by SELDI- TOF-MS CAI Xiang-jun*??WANG Fu-rong, WANG Chun-xi, et al. *Department of General Surgery, 202 Hospital of PLA??Shenyang110003,China
Corresponding author: CAI Xiang-jun, E-mail??caixiangjun61@126.com
Abstract Objective To detect the serum proteomic patterns in early liver metastasis of colorectal cancer patients by surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry (SELDI- TOF-MS). Methods The relative contents of serum proteins of 20 colorectal cancer patients and 20 early liver metastasis of colorectal cancer patients were detected by WCX2 chip and SELDI-TOF-MS between 2007 and 2009 in 202 Hospital of PLA. Results At the M/Z values range from 2000u to 30 000u, the contents of two proteins (3774u and 11 851u) had significant difference in the two groups. Conclusions SELDI-TOF-MS shows great potentiality for early liver metastasis of colorectal cancer in diagnosis and screening of tumor biomarkers, and deserves generalization.     

经阴道彩色多普勒超声及血清CA125检测在早期卵巢癌诊断中的应用

目的探讨经阴彩色多普勒超声及血清CA125检测对早期卵巢癌的诊断价值。方法对69例卵巢小肿块分别行经阴彩色多普勒超声检查及血清CA125检测,按血清CA12535 U/ml、阻力指数(RI)0.6为阳性,将检测结果与术后病理对照。结果术后病理证实早期卵巢癌35例,良性肿瘤34例,两组RI值分别为0.46±0.07和0.67±0.03,PI值分别为0.85±0.06和1.27±0.08,差异显著(P0.05)。RI检测早期卵巢癌的敏感性为74.3%,特异性为94.1%;血清CA125检测的灵敏度为71.6%,特异度为70.2%。结论彩色多普勒血流显像探查卵巢肿瘤的血流分布及动脉血流阻力指数、搏动指数联合血清CA125检测,能提高早期卵巢癌的诊断率。     

结直肠癌和息肉737例发病部位及病理分型分析

对结直肠癌和息肉发病部位及病理分型进行分析,为手术治疗方法提供依据,2009年7～12月,对电子结肠镜下结直肠癌和息肉737例患者的发病部位、类型、性别、年龄因素进行分析。结果显示,737例中,结直肠癌49例,占6．65％;结直肠息肉688例,占93．35％。40岁以上检出率明显升高。结直肠癌病理类型：腺癌36例,占73．47％;绒毛细胞癌5例,占10．20％;黏液腺癌4例,占8．16％。结直肠癌49例,距肛缘距离〈6cm14例,占28．57％;距肛缘距离6～20cm27例,占55．10％;距肛缘距离〉20cm8例,占16．32％;直肠、乙状结肠镜下可发现距肛缘距离20cm内的占83．67％;结直肠息肉688例,直肠、乙状结肠镜下可发现的占76．02％。结果表明,结直肠癌和息肉发病部位及病理分型决定了术式选择及预后,直肠、乙状结肠镜早期筛查至关重要,可达到早发现早治疗的目的。     

不同染色放大内镜方法在早期胃癌及癌前病变筛查中临床价值的前瞻性评估

目的前瞻性评价不同染色放大内镜方法在早期胃癌及癌前病变筛查中的临床价值。方法2010年3月至2011年10月期间．在复旦大学附属中山医院接受胃镜检查且年龄超过40岁的病例中,有699例发现胃黏膜可疑病灶。根据随机号将其分人肾上腺素染色放大组（240例）、靛胭脂染色放大组（246例）和靛胭脂冰醋酸混合液染色放大组（213例）。详细记录不同染色方法下病灶胃小区腺体开口形态和毛细血管网络情况等,作出镜下诊断。以病理诊断为金标准,采用Kappa一致性检验评价不同染色放大方法镜下诊断与病理诊断的一致性。采用MeNemar配对卡方检验,比较3种染色方法镜下诊断与普通白光、单独放大、窄带成像（NBI）放大镜下诊断的一致性。结果病理活检结果显示,699例病例中炎性病变415例,肠化生190例,低级别上皮内瘤变17例,高级别上皮内瘤变或早期胃癌77例。肾上腺素染色放大、靛胭脂染色放大和靛胭脂冰醋酸混合液染色放大镜下诊断与病理诊断一致的病例分别占77．1％（185／240）、80．5％（198／246）和81．2％（173／213）,Kappa值分别为0．579、0．502和0．667（均P〈0．01）。对于高级别上皮内瘤变或早期胃癌的筛查,3种染色方法镜下诊断的敏感度分别为84．0％、83.3％和92．9％,特异度分别为98．6％、97.3％和98．4％。3种染色方法均可显著提高普通白光对癌前病变镜下诊断的准确率（均P〈0．01）：靛胭脂染色和靛胭脂冰醋酸混合液染色还可显著提高单独放大对病变诊断的准确率（均P〈0．05）;但与NBI放大相比,3种染色方法镜下诊断的准确率均无明显优势（均P〉0．05）。结论NBI放大和3种染色放大方法均可显著提高早期胃癌及癌前病变镜下诊断的准确性。     

葡萄糖调节蛋白78kD和热休克蛋白20在左半及右半结肠癌差异表达的初步研究

目的分析左半结肠癌与右半结肠癌肿瘤组织中差异蛋白表达情况。方法收集人左半结肠癌和右半结肠癌组织标本各7例．提取组织蛋白并进行二维凝胶电泳、质谱分析及生物信息学分离．鉴定二者中差异表达蛋白质。应用免疫组织化学sP法检测葡萄糖调节蛋白78kD（GRP78）和热休克蛋白20（HSP20）在50例左半和50例右半结肠癌组织中的表达情况。结果筛选并成功鉴定出左半和右半结肠癌中16种差异表达蛋白质：与右半结肠癌比较,左半结肠癌10种蛋白表达上调,6种蛋白表达下调,其中GRP78在左半结肠癌中表达上调,HSP20在左半结肠癌中表达下调。免疫组织化学检测示．GRP78在左半和右半结肠癌组织的阳性表达率分别为78％（39／50）和56％（28／50）,差异有统计学意义（P〈0．05）;HSP20在左半和右半结肠癌的阳性表达率分别为34％（17／50）和72％（36／50）,差异亦有统计学意义（P〈0．05）。GRP78表达与肿瘤分化程度、浸润层次、TNM分期、有无淋巴结转移以及有无肝转移有关（P〈0．05）,而HSP20的表达与肿瘤大体形态、TNM分期以及有无淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论左半结肠癌和右半结肠癌的蛋白质组存在蒡异．这些可能是左半与右半结肠癌生物学行为存在差异的原因。     

达芬奇机器人直肠癌根治术的学习曲线

目的探讨达芬奇机器人直肠癌根治术的学习曲线。方法回顾分析我院微创胃肠外科中心2010年3月～2012年5月完成的60例达芬奇机器人直肠癌根治术的临床资料,按手术先后顺序分成A、B、C3组,每组20例,比较各组机器人安装时间、手术时间、出血量、淋巴结清扫数目、并发症、术后住院时间。结果A组机器人安装时间（66±6）min,显著长于B组（35±5）min和c组（32±4）min（q=27．365,P〈0．05;q=30．013,P〈0．05）,B、C2组无统计学差异（q=2.648,P〉0．05）。3组手术时间无统计学差异（F=1．28,P=0．286）,总手术时间差异（F=8．82,P=0．000）主要由于机器人安装时间差异,机器人直肠癌根治术学习曲线为20例。3组出血量、淋巴结清扫数目、并发症、术后住院时间无显著性差异（P〉0．05）。结论对于熟练掌握腹腔镜直肠癌根治术的外科医生,达芬奇机器人直肠癌根治术学习曲线约为20例。     

Snail介导的EMT在上皮性卵巢癌组织中的作用

目的：检测Snail、E-cadherin及Vimentin在上皮性卵巢癌组织中的表达,探讨Snail介导的上皮间质转化（EMT）在卵巢癌发生、发展及转移中的作用。方法采用免疫组化法分别检测Snail、E-cadherin、Vimentin在48例卵巢浆液性腺癌、卵巢交界性浆液性肿瘤及卵巢浆液性腺瘤中的表达,探讨EMT相关因子表达强度的相关性及与临床病理特征之间的关系。结果（1）Snail、Vimentin在卵巢浆液性腺癌中的表达率为（68.75%/66.67%）,高于卵巢交界性浆液性腺瘤的（41.67%/37.50%）及卵巢浆液性腺瘤的（25.00%/18.75%）,结果均具有显著的统计学差异（P＜0.05）,E-cadherin在卵巢浆液性腺癌中的表达率为27.08%,低于与卵巢交界性浆液性腺瘤的54.17%及卵巢浆液性腺瘤的75.00%,结果均具有统计学差异（P＜0.05）。而卵巢交界性浆液性腺瘤组与卵巢浆液性腺瘤组比较,三种蛋白的表达均无统计学差异（P＞0.05）。（2）Snail、E-cadherin及Vimentin的表达高低与FIGO分期、分化级别、有无淋巴结转移及腹膜种植有关。（3）在卵巢浆液性腺癌中,Snail与Vimentin的表达呈正相关（r=0.477,P＜0.05）,Snail与E-cadherin的表达呈负相关（r=-0.601,P＜0.05）,而E-cadherin与Vimentin表达的相关性不明显（r=-0.206, P＞0.05）。结论在上皮性卵巢癌组织中,Snail、Vimentin表达上调,E-cadherin表达下调,提示Snail介导的EMT可能与卵巢癌的发生、发展及浸润转移有关。     

血清蛋白质指纹图谱模型在肾癌诊断中的应用

目的 探讨肾癌早期诊断的新方法。方法 血清标本66份，其中肾癌患者34份，健康对照组32份，应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术获得WCX2蛋白芯片表达图谱，采用Biomarker Patterns^TM软件分析差异蛋白并初步建立肾癌血清标志物诊断模型。结果 在相对分子质量1000～50000范围内共检测到101个蛋白峰，其中7个有统计学意义（P〈0．01）。所建立肾癌诊断模型敏感性为88％（30／34），特异性为91％（29／32）。采用此模型盲法分析42份未知血清标本，敏感性为80％（16／20），特异性为82％（18／22）。结论 用SELDI—TOF—MS技术平台和生物信息学技术建立的诊断模型为肾癌早期诊断提供了新途径。