中文文摘

1．量子点荧光探针检测人舌鳞状细胞癌荷瘤裸鼠模型早期下颌下淋巴结转移的研究 传代培养人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞，接种于18只裸鼠舌体内（不过中线），建立人舌癌荷瘤裸鼠下颌下淋巴结转移模型。接种6周后，处死裸鼠，解剖下颌下淋巴结，将同一淋巴结分为两份。一份作石蜡包埋半连续切片，行 HE染色和 IHC 检测；另一份即刻液氮冷冻，制作冰冻切片行QDs605-CK（AE1／AE3）荧光探针检测。分别计算3种方法检测出的淋巴结转移率和微转移率。结果：量子点标记的免疫荧光染色检测出裸鼠下颌下淋巴结转移率为66．7％，其中微转移率为38．9％；IHC 染色检测的淋巴结转移率为61．1％，其中微转移率为33．3％；HE 染色检测的淋巴结转移率为27．8％。经统计学分析，3种方法的差异有统计学意义（P ＜0．05），量子点标记的免疫荧光染色和 IHC 检测都优于 HE 染色，但是量子点标记的免疫荧光染色和 IHC 染色间的差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论：量子点标记的QDs605-CK（AE1／AE3）免疫荧光探针能准确定位于下颌下淋巴结转移的肿瘤细胞的细胞质内，发出红色荧光，其特异性强，分辨率高，背景清晰，能够用于淋巴结转移灶及微转移灶的检测。     

口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移灶裸鼠移植瘤模型的建立

目的:建立口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移灶移植瘤原代模型,探讨建立模型的方法.方法:将口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移组织,通过组织块皮下接种法建立颈部淋巴结转移灶模型.观察其生长状况,对移植瘤、裸鼠肝、肾、肺及淋巴结行系列检查并与来源肿瘤组织进行比较.结果:成瘤率87.5%(7/8),移植瘤具有来源肿瘤组织类似的形态学特征,肝、肾、肺未见转移,腋下及腹股沟淋巴结反应性增生.结论:通过组织块皮下接种法,成功建立了口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移灶移植瘤原代模型.     

切取活检对裸鼠舌部Tca8113移植瘤生物学行为影响的研究

目的 通过建立裸鼠Tca8113移植瘤切取活检动物模型来了解活检对肿瘤生物学行为的影响,并初步探讨其机制。方法 将裸鼠分为两组。舌部注射Tca8113细胞,成瘤后建立切取活检模型。观测裸鼠生存情况,原发灶生长及淋巴结转移状况,并通过免疫组织化学染色检测肿瘤原发灶核因子κB（NF-κB）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质衍生因子-1（SDF-1）、细胞增殖抗原标记物（Ki67）表达水平及肿瘤淋巴结微转移情况。结果 移植瘤成瘤率达97.92%。切取活检后实验组原发灶生长速度,淋巴结转移率,微血管密度,NF-κB、MMP-9及SDF-1表达均高于对照组。各项指标表达具有一定相关性。结论 切取活检对肿瘤的生物学行为具有一定影响,可能加速原发灶的生长及转移。     

Cox-2在舌鳞癌细胞Tca8113增殖机制中的作用

目的:观察并探讨Cox-2在舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖机制中的作用。方法:通过免疫细胞化学检测Cox-2在Tca8113细胞中的表达;再通过建立裸鼠荷瘤模型及应用Cox-2特异性抑制剂(SC236)进行干预的方法,观察SC236对Tca8113细胞的增殖活性、致瘤性和成瘤速度的影响。结果:在Tca8113细胞中存在Cox-2的表达;将Tca8113细胞接种于裸鼠颈部皮下可成功诱导出组织学形态与人舌鳞癌基本一致、且表达Cox-2的移植瘤。SC236能够显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的生长(P<0.01),并明显延缓Tca8113细胞的成瘤速度(P<0.05)。结论:Cox-2在Tca8113细胞的增殖过程中可能发挥重要作用;Cox-2特异性抑制剂可显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的增殖和生长。     

微小核糖核酸-21反义寡核苷酸对人舌鳞癌细胞生长抑制的体内研究

目的研究微小核糖核酸-21（miR-21）反义寡核苷酸（AS-miR-21）对人舌鳞癌生长的抑制作用。方法采用稳定转染pGL6荧光素酶报告基因质粒的舌鳞癌细胞Tca8113-luc接种裸鼠,建立移植瘤动物模型,瘤体内注射ASmiR-21,应用活体成像和TUNEL等实验技术进行AS-miR-21对人舌鳞癌细胞系生长抑制的体内研究。结果通过转染pGL6荧光素酶报告基因质粒构建了稳定表达荧光素酶活性的Tca8113-luc细胞株。裸鼠皮下荷瘤模型成瘤率高,肿瘤生长稳定。在瘤体内注射AS-miR-21后肿瘤生长减慢,活体成像中光子数偏低,肿瘤标本中坏死灶少见,细胞核变小,染色变浅,异型性减低,新生血管数减少。肿瘤组织中miR-21表达明显下降,凋亡指数升高。结论肿瘤内注射AS-miR-21可以降低舌鳞癌细胞中miR-21的表达,促进舌鳞癌肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤的生长。     

量子点荧光探针检测人舌鳞状细胞癌荷瘤裸鼠模型早期下颌下淋巴结转移的研究

目的 利用量子点标记的特异性细胞角蛋白抗体QDs605-CK（AE1/AE3）免疫荧光探针检测人舌鳞状细胞癌荷瘤裸鼠早期下颌下淋巴结转移率及微转移率,并与传统的免疫组织化学（IHC）染色及苏木精-伊红（HE）染色方法进行比较,为舌鳞状细胞癌的早期诊断与治疗提供一种新的检测方法。方法 传代培养人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞,接种于18只裸鼠舌体内（不过中线）,建立人舌癌荷瘤裸鼠下颌下淋巴结转移模型。接种6周后,处死裸鼠,解剖下颌下淋巴结,将同一淋巴结分为两份。一份作石蜡包埋半连续切片,行HE染色和IHC检测;另一份即刻液氮冷冻,制作冰冻切片行QDs605-CK（AE1/AE3）荧光探针检测。分别计算3种方法检测出的淋巴结转移率和微转移率。结果 量子点标记的免疫荧光染色检测出裸鼠下颌下淋巴结转移率为66.7%,其中微转移率为38.9%;IHC染色检测的淋巴结转移率为61.1%,其中微转移率为33.3%;HE染色检测的淋巴结转移率为27.8%。经统计学分析,3种方法的差异有统计学意义（χ2=6.379,P<0.05）,量子点标记的免疫荧光染色和IHC检测都优于HE染色,但是量子点标记的免疫荧光染色和IHC染色间的差异无统计学意义（χ2=0.120,P>0.05）。结论 量子点标记的QDs605-CK（AE1/AE3）免疫荧光探针能准确定位于下颌下淋巴结转移的肿瘤细胞的细胞质内,发出红色荧光,其特异性强,分辨率高,背景清晰,能够用于淋巴结转移灶及微转移灶的检测。     

基因芯片对荷瘤裸鼠Tca8113/卡铂耐药基因表达谱的分析

目的:研究人舌鳞癌肿瘤组织和耐药组织中的基因表达差异,探讨肿瘤耐药的作用机制,为临床化疗提供实验依据。方法:BALB/c-nu/nu裸鼠皮下接种Tca8113细胞悬液,待成瘤后随机分为化疗诱导组(Tca8113/CBP)15只和对照组(Tca8113)5只。诱导组采用卡铂(CBP)进行小剂量连续诱导10周,将Tca8113组和Tca8113/CBP组肿瘤组织,用人16k cDNAv2.1SBC-R-HC-100-21基因芯片对其基因表达谱进行聚类分析。结果:舌鳞癌Tca8113荷瘤裸鼠和Tca8113/卡铂(CBP)诱发瘤裸鼠中表达差异基因上调基因435条,下调基因284条。结论:卡铂的诱导化疗使一组基因在舌鳞癌中表达改变,为筛选与舌鳞癌耐药发生有关的基因群,进一步深入研究其中某些关键基因提供导向性资料。     

中药"参阳"方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的:前瞻性研究表明,中药“参阳”方能够延长口腔癌患者的生存期并提高生存率,但其抗癌机制尚不十分明确。本研究的主要目的是观察中药“参阳”方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将体外培养的人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞接种于裸鼠皮下,建立人舌鳞癌移植瘤模型,共48只,随机分为4组:“参阳”方A组、B组、阳性对照组和阴性对照组。采用灌胃方法进行药物干预,共30d,观察各组的抑瘤效果及对裸鼠一般状况、生存时间和脾脏指数的影响。结果:每只鼠每天喂养“参阳”方72.8mg,能轻度抑制Tca8113细胞移植瘤的生长,抑瘤率为22.04%;裸鼠的脾脏指数明显提高(t检验,P<0.05);生命延长率为18.9%。主要脏器的组织学检查未见病理改变,表明所用剂量药物无明显的毒副反应。结论:“参阳”方对荷瘤鼠的直接抗癌作用较弱,其对口腔鳞癌的治疗作用可能是通过调节机体的免疫功能而实现。     

兔VX2舌鳞癌移植瘤模型3种建立方法的比较

目的采用3种不同移植瘤方法建立稳定的兔VX2舌鳞癌移植瘤模型,并对这3种方法建立的模型的生物学特性进行比较。方法将72只新西兰大白兔随机分成3组,每组24只,分别用瘤组织块植入法、改良瘤细胞悬液注入法及瘤细胞悬液注入法植于兔舌侧缘中1/3黏膜下,建立兔舌鳞癌的移植瘤模型。观察和比较3种方法所建立的模型的肿瘤生长状况、成瘤率和自发转移发生率。结果瘤组织块植入组、改良瘤细胞悬液注入组、瘤细胞悬液注入组的成瘤率分别为83.3%、91.7%、33.3%,局部淋巴结转移率分别为71.4%、100.0%、37.5%,肺转移率分别为35.7%、81.3%、0;3种方法建立的兔VX2舌鳞癌移植瘤模型的组织学形态均符合中分化鳞状细胞癌特征。结论3种方法建立的移植瘤模型均较接近人舌鳞癌自然生长过程。其中,改良瘤细胞悬液注入法建立的动物模型,因成瘤率高、转移率高、同期瘤体大小差异较小,更适合于舌鳞癌研究。     

肿瘤靶向性沙门氏菌联合环磷酰胺治疗裸鼠Tca8113移植瘤的实验研究

目的：探讨肿瘤靶向性沙门氏菌VNP20009与环磷酰胺联合应用抑制人舌鳞癌细胞移植瘤的效应与毒副作用。方法：建立舌鳞癌Tca8113裸鼠皮下移植瘤模型64只,随机分为4组,治疗后测量肿瘤体积计算抑瘤率,检测血清VEGF、ALT、AST及肿瘤与肝脏内细菌浓度。结果：沙门氏菌与环磷酰胺联合比单用沙门氏菌或环磷酰胺能更有效地抑制Tca8113移植瘤的生长（P〈0.01）。结论：减毒沙门氏菌VNP20009与环磷酰胺有协同抗肿瘤作用,联合治疗可以增强抗肿瘤效果。     

肽段-量子点对鳞状细胞癌细胞成瘤及淋巴转移能力影响的动物实验

目的 观察肽段连接的最大发射波长为655 nm的荧光量子点(quantum dots,QD655)对人舌鳞状细胞癌(Tca8113)和昆明小鼠淋巴高转移鳞状细胞癌(U14)的体内生长、增殖、凋亡和淋巴转移能力的影响.方法 ①用QD655分别标记Tea8113细胞(TcaS113-QD655)和U14细胞(U14一QD655),将Tca8113-QD655和U14-QD655分别接种于裸鼠和昆明小鼠背部皮下,比较Tea8113-QD655和Tea8113、U14-QD655和U14的体内成瘤情况,并用流式细胞仪检测比较体内成瘤的Tea8113-QD655和TcaS113细胞、U14-QD655和U14细胞的增殖和凋亡情况;②将U14-QD655和U14分别接种于昆明小鼠颊黏膜下,建立颊癌颈淋巴转移模型,比较U14-QD655和U14颈淋巴转移能力的变化.结果 Tca8113-QD655组和Tea8113组肿瘤的平均重量分别为(1.25±0.14)、(1.30±0.16)g(P>0.05),肿瘤的平均体积分别为(2.81±0.68)、(2.69±0.63)cm3(P>0.05);U14-QD655组和U14组肿瘤的平均重量分别为(1.17±0.08)、(1.22±0.10)g(P>0.05),肿瘤的平均体积分别为(2.27±0.56)、(2.38±0.61)cm3(P>0.05).Tea8113-QD655和Tca8113体内成瘤细胞的平均增殖指数分别为(47.42±1.71)%、(48.33±1.52)%(P>0.05),平均凋亡指数分别为(12.38±0.75)%、(11.79±0.64)%(P>0.05);U14-QD655和U14体内成瘤细胞的平均增殖指数分别为(61.78±2.41)%、(60.9±2.26)%(P>0.05),平均凋亡指数分别为(13.65±0.91)%、(12.78±0.83)%(P>0.05).U14-QD655颊癌和U14颊癌的颈淋巴结转移率分别为41%(11/27)、43(13/30)(P>0.05).结论 用量子点标记Tea8113和U14后不影响体内肿瘤生长和淋巴转移能力.     

血管内皮生长因子-C基因转染对Tca8113细胞转移能力影响的研究

目的　研究血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对鳞癌细胞淋巴道转移能力的影响 ,以探讨其在口腔黏膜鳞癌淋巴道转移机制中的作用。方法　用本课题组前期建立的 VEGF-C高表达舌癌细胞株 ,以裸小鼠皮下接种构建动物肿瘤模型 ,观察VEGF-C高表达对移植瘤的生长和颈淋巴转移的影响。结果　VEGF-C高表达移植瘤实验组的颈淋巴结转移率高于对照 组 ,但实验组与对照组的移植瘤原发灶生长速度没有明显差异。结论　VEGF-C对舌鳞癌的淋巴道转移有相对特异的作用 ,可作为口腔癌颈淋巴转移预防和治疗的新靶位     

Celecoxib enhances the inhibitory effect of cisplatin on Tca8113 cells in human tongue squamous cell carcinoma in vivo and in vitro

J Oral Pathol Med (2010) 39 : 579–584 Background: Overexpression of cyclooxygenase‐2 (COX‐2) is associated with carcinogenesis, invasiveness, and metastasis of malignant tumors. Inhibition of COX‐2 is one hot topic of research in prevention and treatment of malignant tumors. Because of the selective and specific inhibition on the activity of COX‐2, the roles of celecoxib in prevention and treatment of tumors have attracted broad attention in recent years. In this study, we investigated the inhibitory effect of celecoxib combined with cisplatin on the proliferation of human tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 in vivo and in vitro. Methods: Human tongue squamous cell carcinoma tumor cells Tca8113 and a mouse model with Tca8113 cells were used to study the growth inhibition of cisplatin enhanced by celecoxib. Drug treatment of Tca8113 in vitro and mice bearing xenografts in vivo were used. The level of COX‐2 expression was detected by Western blotting. Sensitivity of cells to drug treatment was analyzed by MTT assay. Results: Treatment of Tca8113 cells with cisplatin (CDDP) had less effect on the expression of COX‐2, whereas the COX‐2 expression was significantly down‐regulated after treatment with celecoxib alone or in combination with CDDP for 24 h. In addition, the combination of celecoxib with CDDP was also able to inhibit the Tca8113 line heterotransplanted in Balb/c nude mice. Conclusions: Those findings indicate that a low dose of celecoxib could augment CDDP‐induced growth inhibition of Tca8113 cells and its xenograft in Balb/c nude mice.     

Tca8113细胞系耐药性的实验研究

目的：建立耐顺铂（CDDP）人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113/CDDP,对其耐药特性进行研究,方法：应用间歇性加药,逐步递增剂量,体外连续透导培养方法,获得Tca8113耐药细胞,采用MTT法,琼脂糖凝胶电泳和免疫组化法对细胞增增时间、裸鼠成瘤性、化疗药敏感性,P-gp和GST－π蛋白表达进行研究。结果：初步建成耐CCDP的人舌鳞癌细胞系（Tca8113／CDDP）,其耐CDDP浓度为10μmol/L。该细胞同时对卫猛（Vm-26)、博来霉素（BLM）、长春地辛、（VDS）、表阿霉素（E－ADM）、泰素（Taxol)等化疗药物产生交叉耐药。连续传代1月后,倍增时间从29．9h降至16．7h,具有裸鼠成瘤性,瘤体倍增加速。CDDP作用Tca8113细胞后,电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带,耐药细胞Tca8113／CDDP则无。P－gp（P－糖蛋白）及GST－π表达量升高,表明MDR－1mRNA表达水平增高,结论：CDDP能致Tca8113细胞耐药性。Tca8113／CDDP细胞系具有多药耐药特性,GSH／GST解毒系统可能与Tca8113／CDDP耐药性的产生。     

舌癌脑转移细胞系Tb的建立及形态和生长特性

目的：建立舌癌远隔脏器转移细胞系。方法：采用癌细胞尾静脉注射法、细胞培养法从裸鼠体内获取人舌癌Tca8113细胞的远隔脏器转移灶细胞系,用染色体显示、细胞形态及细胞致瘤性观察证明其性质,用细胞计数法,流式细胞仪检测细胞增殖速度。结果：20只受试探鼠中1只神经症状明显,取脑组织行细胞培养获得细胞系,传代150次以上,维持培养3年,生长稳定,倍增时间为20．1h,S期细胞占29．0％,染色体众数为66,保持人类染色体形态,细胞形态与Tca8113相似,所致棵鼠皮下肿瘤为典型鳞状上皮癌,将该细胞系命名为Tb。结论：Tb细胞系是八舌癌Tca8113细胞在裸鼠体内的脑转移细胞系。     

平阳霉素磁控缓释微球体内外抗肿瘤作用的实验研究

观察了自制的平阳霉素磁性明胶微球对人舌癌Ｔｃａ８１１３细胞株的体外杀伤作用及对人舌癌裸鼠移植瘤的治疗效果，结果表明，平阳霉素磁性明胶微球才游离平阳霉素均具有杀伤肿瘤细胞的作用，二者之间无显著性差异（Ｐ〉０．０５），体内实验中，平阳霉素磁明胶微球对人舌癌移植有明显的抑制作用，抑瘤率为８５．３３％，明显高于游离平阳霉素（３５．９％），而对正常组织中的毒副作用明显减轻。     

舌癌细胞淋巴道转移能力与淋巴管生成的关系

目的：诱导建立小鼠淋巴管良性肿瘤模型以及异种移植瘤模型,观察不同淋巴道转移能力的舌癌细胞对淋巴管生成的影响。方法：C57BL/6小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂,对诱导出的小鼠腹腔淋巴管瘤进行病理组织学鉴定。诱导的淋巴管瘤在纤维蛋白凝胶内应用Tca8113和LNMTca8113细胞条件培养基培养,倒置显微镜下观察淋巴管分支形成。此外,利用这2种细胞进行体外成瘤,免疫组化染色观察淋巴管生成情况。实验结果应用SPSS11.5软件包对数据进行分组t检验,Mann-Whitney U检验。结果：实验小鼠中膈肌腹腔面、肝脏表面可见边界清楚的散在分布白色肿瘤样组织,组织学病理证实为良性淋巴管瘤。与Tca8113细胞比较,在LNMTca8113细胞条件培养基作用下,从淋巴管瘤块长入纤维蛋白凝胶内的微淋巴管分支数目增加;在LNMTca8113肿瘤中,淋巴管密度显著提高。结论：小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂可稳定诱导小鼠腹腔淋巴管瘤,高淋巴道转移能力的舌鳞状细胞癌细胞对淋巴管生成具有更强的促进作用,适应淋巴道转移的需要。     

Oral cancer cells with different potential of lymphatic metastasis displayed distinct biologic behaviors and gene expression profiles

J Oral Pathol Med (2010) 39 168–175 Objective: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) often spreads from the primary tumor to regional lymph nodes in the early stage. Better understanding of the biology of lymphatic spread of oral cancer cells is important for improving the survival rate of cancer patients. Methods: We established the cell line LNMTca8113 by repeated injections in foot pads of nude mice, which had a much higher lymphatic metastasis rate than its parental cell line Tca8113. Then, we compared the biologic behaviors of cancer cells between them. Moreover, microarray‐based expression profiles between them were also compared, and a panel of differential genes was validated using real‐time‐PCR. Results: In contrast to Tca8113 cells, LNMTca8113 cells were more proliferative and resistant to apoptosis in the absence of serum, and had enhanced ability of inducing capillary‐like structures. Moreover, microarray‐based expression profiles between them identified 1341 genes involved in cell cycle, cell adhesion, lymphangiogenesis, regulation of apoptosis, and so on. Some genes dedicating to the metastatic potential, including JAM2, TNC, CTSC, LAMB1, VEGFC, HAPLN1, ACPP, GDF9 and FGF11, were upregulated in LNMTca8113 cells. Conclusion: These results suggested that LNMTca8113 and Tca8113 cells were proper models for lymphatic metastasis study because there were differences in biologic behaviors and metastasis‐related genes between them. Additionally, the differentially expressed gene profiles in cancer progression may be helpful in exploring therapeutic targets and provide the foundation for further functional validation of these specific candidate genes for OSCC.     

应用量子点荧光探针检测裸鼠舌癌组织中bcl-2表达

目的探讨应用量子点荧光探针检测裸鼠舌鳞癌移植瘤组织中bcl-2蛋白的可行性及其研究价值。方法 10只BALB/c-nu裸鼠皮下接种舌鳞癌Tca8113细胞悬液,待瘤体长至约1cm3时处死裸鼠,取瘤组织制成石蜡包埋组织切片和冰冻切片,经病理诊断证实为瘤组织后,应用量子点荧光探针通过间接免疫荧光法标记,在荧光显微镜下观察组织切片中的bcl-2蛋白,并与免疫组织化学检测的bcl-2蛋白进行比较。结果量子点荧光探针可分别与石蜡和冰冻组织切片中的bcl-2蛋白结合,在紫外荧光激发下发出特定荧光,主要分布于细胞浆,与免疫组织化学检测的bcl-2蛋白定位相同。结论量子点荧光探针可应用于裸鼠舌鳞癌移植瘤组织中检测特定蛋白。     

TNP—470、顺铂联合应用抗人舌癌生长的实验研究

目的：研究血管生成抑制剂TNP－470对人舌癌生长的抑制作用。方法：MTT法 定TNP－470、顺铂（CDDP）对体外培养人舌癌Tca8113细胞增殖的抑制作用。用Tca8113细胞形成裸鼠肿瘤皮下移植模型,移植二周后腹腔注射用药,TNP－470（30mg/kg)隔日一次,共七次,CDDP（5mg/kg)一周二次,共四次,同期测量肿瘤体积和裸鼠体笪“移植四周后处死动物,检测肿瘤体积和主要脏器。结果：TNP－470作用Tca8113细胞的半数抑制浓度（IC50）为70．79μg/ml。TNP-470 CDDP组抑瘤率分别为31．7％、40．3％和65．6％,实验组与对照组之间抑瘤率有显著性差异（P＜0．05）,TNP－470＋CDDP组抑瘤效果最佳,结论TNP－470对人舌癌体内生长有一定抑制作用,联合应用CDDP可进一步提高治疗效果。