Fas转染及抗体处理对舌鳞癌细胞Tca8113移植瘤形成和增殖的影响

目的　研究Fas转染和抗Fas单克隆抗体对舌鳞癌细胞系Tca8113裸鼠体内移植瘤形成和增殖的影响,探讨相关机制。方法　脂质体法以真核表达重组质粒pBK-fas转染舌鳞癌细胞系Tca8113。部分转染细胞行抗Fas单克隆抗体处理。未转染细胞、Fas转染细胞、Fas转染抗体处理细胞分别接种裸鼠皮下。观测移植瘤生长,绘制生长曲线。RT-PCR检测肿瘤细胞Fas mRNA表达。流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡、增殖及Fas蛋白表达。结果　Fas转染和抗体处理延迟肿瘤形成,抑制肿瘤增殖。Fas转染上调移植瘤Fas mRNA表达,提高Fas蛋白表达强度和凋亡指数,但不影响Fas蛋白阳性表达率和增殖指数。抗体处理不影响Fas mRNA和蛋白表达,但可提高凋亡指数,降低增殖指数。结论　Fas转染抑瘤效应是上调Fas转录和表达、促进凋亡的结果。抗Fas单克隆抗体抑瘤效应则与激活凋亡和抑制增殖有关。     

环氧化酶-2抑制剂对舌癌细胞侵袭及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨环氧化酶-2（Cox-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌细胞系Tca8113侵袭、黏附及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）分泌的影响。方法Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,免疫组织化学方法检测细胞Cox-2蛋白表达,细胞外基质黏附实验检测细胞黏附力,Boyden侵袭小室测定细胞的侵袭力,酶联免疫吸附法检测培养液中MMP-2的水平。结果Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,Cox-2蛋白表达明显受到抑制,Boyden侵袭小室细胞穿膜数和细胞外基质黏附率明显降低,同时,培养液中MMP-2水平也明显降低。结论Cox-2抑制剂塞来昔布可抑制Tca8113细胞Cox-2蛋白表达,其抑制细胞侵袭力和黏附率作用可能与抑制MMP-2分泌有关。     

人内皮抑素基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞生长的影响

目的 探讨人内皮抑素(hES)基因导入舌鳞癌Tca8113细胞后的表达情况及其抑制肿瘤生长效应。方法 以脂质体为载体将hES基因导入Tca8113细胞,通过动物实验观察转基因Tca8113细胞移植瘤生长情况,免疫组织化学检测肿瘤组织中hES及血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达,Weidner法行肿瘤微血管密度(MVD)计数,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率。结果 移植瘤生长第27天,实验组肿瘤组织中hES的表达率高于对照组(P<0.01);VEGF的表达率低于对照组(P<0.01)。实验组MVD计数低于对照组(P<0.01),而肿瘤细胞凋亡率则明显高于对照组(P<0.01)。hES基因转染对肿瘤生长的抑制率78.9％。结论 hES基因转染舌鳞癌细胞可体内诱导hES蛋白高效表达并具有抑制移植瘤生长的效应。     

雷帕霉素诱导自噬抑制舌鳞癌细胞增殖和迁移

目的探讨自噬诱导对舌鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法应用雷帕霉素(Rap)诱导上调舌鳞癌Tca8113细胞自噬活性,Western blot检测诱导后Tca8113细胞自噬标记蛋白Beclin1和LC3的表达变化;MTT法检测自噬诱导对细胞增殖的影响;Wound-healing检测诱导后细胞迁移能力改变;SPSS 19.0统计软件进行数据分析。结果 Rap诱导6h即可上调舌鳞癌Tca8113细胞自噬标记蛋白LC3-Ⅱ表达,24h时LC3-Ⅱ表达最强,自噬活性最高(P<0.05)。与对照组相比,Rap诱导后细胞生长明显抑制(P<0.05),迁移速率减慢。结论上调舌鳞癌细胞自噬活性可以抑制其增殖和迁移。     

NS-398诱导舌鳞癌细胞凋亡及其对E2F-1蛋白表达的影响

目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及其对细胞核转录因子E2F-1蛋白表达的影响。方法NS-398作用于舌癌Tca8113细胞,噻唑蓝法检测细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞周期及其凋亡率的改变,放射免疫法测定细胞上清液中前列腺素E2(PGE2)含量,Western blot法检测细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达的变化。结果NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,其抑制作用随着时间的延长和药物浓度的增加而增强。NS-398(50μmol/L)可引起Tca8113细胞G0/G1期细胞的逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例数减少,并随着时间的延长细胞上清液中PGE2含量降低,细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达下调。结论NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,阻断细胞生长停滞于G0/G1期;该效应可能与其诱导细胞凋亡和降低细胞产生前列腺素E2有关;E2F-1蛋白可能参与了这些过程。     

基因芯片对荷瘤裸鼠Tca8113/卡铂耐药基因表达谱的分析

目的:研究人舌鳞癌肿瘤组织和耐药组织中的基因表达差异,探讨肿瘤耐药的作用机制,为临床化疗提供实验依据。方法:BALB/c-nu/nu裸鼠皮下接种Tca8113细胞悬液,待成瘤后随机分为化疗诱导组(Tca8113/CBP)15只和对照组(Tca8113)5只。诱导组采用卡铂(CBP)进行小剂量连续诱导10周,将Tca8113组和Tca8113/CBP组肿瘤组织,用人16k cDNAv2.1SBC-R-HC-100-21基因芯片对其基因表达谱进行聚类分析。结果:舌鳞癌Tca8113荷瘤裸鼠和Tca8113/卡铂(CBP)诱发瘤裸鼠中表达差异基因上调基因435条,下调基因284条。结论:卡铂的诱导化疗使一组基因在舌鳞癌中表达改变,为筛选与舌鳞癌耐药发生有关的基因群,进一步深入研究其中某些关键基因提供导向性资料。     

细胞周期蛋白D1反义寡核苷酸调控联合顺铂抑制口腔鳞癌耐药细胞的研究

目的通过体内外实验探讨细胞周期蛋白（cyclin D1）与舌鳞状细胞癌对顺铂（CDDP）耐药细胞系（Tca8113/CDDP）耐药的相关性.方法通过脂质体将cyclin D1正义、反义寡核苷酸序列分别导入Tca8113/CDDP细胞内.用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测转染细胞系和耐药细胞系体外生长增殖情况及对顺铂的敏感性.将被转染的细胞及Tca8113/CDDP细胞接种于裸鼠皮下,建立移植瘤模型,共18只,每组6只.给予顺铂腹腔注射治疗,观察移植瘤体积变化,绘制生长曲线;称取瘤重,计算抑瘤率;光镜下观察移植瘤组织病理学变化.结果转导mRNA 3＇cyclin D1反义寡核苷酸的Tca8113/CDDP细胞在动物体内外生长明显受到顺铂的抑制;裸鼠皮下移植瘤抑瘤率达74%（P＜0.05）,移植瘤重量较对照组和转导正义寡核苷酸序列组差异均有统计学意义（P＜0.05）;光镜下可见反义寡核苷酸组移植瘤坏死明显.结论cyclin D1基因的反义调控联合顺铂能抑制Tca8113/CDDP细胞的生长能力及体内移植瘤的生长.研究结果提示：抑制cyclin D1可能增加口腔鳞状细胞癌对顺铂的敏感度.     

HIF-1α对口腔癌裸鼠移植瘤生长及其CEACAM1及VEGF-C表达的影响

目的:建立口腔癌裸鼠移植瘤模型,探究HIF-1α对CEACAM1及VEGF-C表达的影响机制.方法:分别将Tca8113细胞、siRNA阴性对照Tca8113细胞、HIF-1α干扰的Tca8113细胞接种到裸鼠的右腋部皮下,建立口腔癌裸鼠移植瘤模型.观察各组裸鼠肿瘤生存情况和HIF-1α沉默对肿瘤的重量、体积抑制率的影响;采用ELISA方法检测移植瘤组织中HIF-1α干扰后其蛋白表达量的变化;分别利用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法检测各组裸鼠移植瘤组织中HIF-1α、CEACAM1及VEGF-C mRNA和蛋白的表达水平.结果:发现HIF-1α干扰组中裸鼠移植瘤的体积及重量均显著小于空白对照组,表明HIF-1α表达沉默显著抑制移植瘤的生长,同时明显下调CEACAM1及VEGF-C的表达.结论:口腔癌中HIF-1α可能通过调节CEACAM1及VEGF-C的表达来影响肿瘤的生长.     

PU-VEGF-siRNA对裸鼠皮下舌癌移植瘤生长的影响

目的：探讨针对血管内皮生长因子WEGF）的小干扰RNA（siRNA）对舌癌Tca8113细胞移植瘤在裸鼠体内生长的影响。方法：将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体（PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2）,经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以空载体组做实验对照,以未转染舌癌细胞作空白对照。将各组细胞接种裸鼠背部皮下,每组5只,观察裸鼠肿瘤生长情况,免疫组织化学染色法观察裸鼠肿瘤组织VEGF的表达。结果：与实验对照组和空白对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减缓,VEGF表达降低（P〈0.05）。结论：siRNA抑制VEGF的表达,可显著抑制舌癌移植瘤在裸鼠体内的生长。     

Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用

目的体外观察顺铂（DDP）诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用, 同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT- PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖, 其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0 μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡, Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。     

舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系CD133+亚群生物学特性的研究

目的研究CD133在人舌鳞癌Tca8113细胞系中的表达,观察纯化的CD133肿瘤细胞体外生长特性。方法采用有限稀释法观察单细胞体外增殖的能力;利用超低黏附板,观察舌鳞癌Tca8113细胞体外悬浮肿瘤细胞成球;流式细胞仪检测舌鳞癌Tca8113细胞系中的CD133表达;免疫磁珠分选技术纯化CD133肿瘤细胞,体外培养并观察其增殖及分化能力。结果单细胞体外增殖12 d后,仅有5.23%的细胞具有持续增殖的能力。体外观察发现,超低黏附96孔培养板中细胞悬浮生长,部分可以形成肿瘤球;Tca8113细胞系中有占肿瘤部分0.95％的CD133肿瘤细胞呈阳性表达,且分选出的CD133+肿瘤细胞的增殖能力均高于CD133-肿瘤细胞及未分选的肿瘤细胞;CD133在培养体系中的比例逐日下降,由培养第1天的92.45％下降至第12天的1.62％。结论Tca8113细胞系中肿瘤细胞具有异质性,且CD133+细胞占肿瘤细胞比例较低,在体外分化和增殖能力较强,CD133可能是肿瘤起始细胞的表型标志之一。     

舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株醛脱氢酶高表达亚群细胞生物学特性的研究

目的检测醛脱氢酶（ALDH）在舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中的表达,研究ALDH高表达（ALDHhig）亚群细胞的生物学特性。方法采用流式细胞仪检测Tca8113细胞株中ALDH的表达;分选ALDHhig与ALDHlow亚群细胞,体外培养观察其增殖、分化及在无血清培养基中的成球能力;利用抑制消减杂交（SSH）技术筛选ADLHhig亚群细胞高表达基因。结果舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中仅有1.3%的细胞高表达ADLH;分选出的ADLHhig肿瘤细胞增殖能力高于ALDHlow细胞和未分选的肿瘤细胞;随着培养时间的延长,体外培养的ALDHhig细胞比例逐渐下降至分选前水平;ALDHhig亚群细胞能够在无血清培养基中悬浮生长形成肿瘤球,且高表达干细胞相关基因。结论舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中有一小群细胞高表达ALDH,具有干细胞的生物学特性;ALDH可能是舌鳞状细胞癌干细胞的标志物之一。     

Tca-8113细胞系单细胞体外增殖的实验观察

目的:观察舌鳞癌Tca-8113细胞系的单细胞体外增殖能力,寻找肿瘤干细胞存在的依据,从而为鉴定其表面标记物奠定理论基础。方法:采用有限稀释法对舌鳞癌Tca-8113细胞进行单细胞体外培养,了解舌鳞癌细胞(Tca-8113)的分裂、增殖特点。结果:单细胞培养8d后,舌鳞癌Tca-8113细胞株中具有持续增殖能力的细胞占肿瘤细胞的10.85%,12d后,继续分裂增殖的细胞比例为5.23%,16d后,仅有5.09%的细胞继续增殖。结论:舌鳞癌Tca-8113细胞具有异质性,仅有少量细胞具有持续增殖能力,而这部分细胞是否就是舌鳞癌Tca-8113细胞的肿瘤干细胞。还有待进一步的实验研究证实。     

表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞Tca8113的抑制增殖作用

目的:了解表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞的抑制增殖作用。方法:应用不同浓度(0、50、100、200nmol/L)的AG1487处理培养的舌鳞癌细胞Tca8113,采用MTT方法和流式细胞技术测定AG1487对细胞生长曲线和细胞周期分布的影响。结果:经不同浓度AG1487处理的肿瘤细胞,随抑制剂浓度的增加,其生长曲线逐渐向下移动,即随浓度的增加,抑制细胞增殖的作用逐渐增强。同时,AG1487使细胞周期的分布发生改变,G1期细胞显著增加,而S期细胞则明显减少;AG1487对细胞周期的影响具有明显的时间和剂量依赖关系。结论:表皮生长因子受体抑制剂AG1487可对舌鳞癌细胞产生明显的增殖抑制作用。     

三氧化二砷抑制口腔鳞癌细胞增殖的研究

目的:体外试验研究三氧化二砷对口腔鳞癌的可能治疗作用。方法:以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞为研究对象之一,采用台盼蓝拒染法计数活细胞,观察三氧化二砷作用于Tca8113细胞的量效关系、时效关系。采用平皿法姬姆萨染色观察三氧化二砷对Tca8113细胞的克隆形成抑制作用。以舌鳞状细胞癌临床新鲜标本组织块为研究对象之二,消化后细胞悬液与各浓度三氧化二砷、一定浓度的MTX、5Fu、PYM体外培养后MTT法测定临床舌癌细胞生长抑制率。结果:三氧化二砷对Tca8113细胞、临床舌癌细胞均有显著生长抑制作用。1μmolAs2O3台盼蓝染色活细胞计数Tca8113细胞生长抑制率28.57%,克隆形成抑制率31.01%;3μmolAs2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率58.36%,克隆形成抑制率76.63%;5μmolAs2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率86.03%,克隆形成抑制率91.30%。体外药敏测定:1μmol浓度As2O3的临床舌癌细胞的生长抑制率39.5%,3μmol浓度As2O3为47.2%,5μmol浓度As2O3为89%,MTX为36.5%,5Fu为41.3%,PYM为58.16%。临床药敏标准一般大于30%为敏感,PYM大于50%为敏感。结论:体外试验表明三氧化二砷可显著抑制人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞的生长,对临床癌细胞也表现了良好的抗增殖作用,三氧化二砷可能成为治疗口腔鳞癌的有效药物     

肽段-量子点对鳞状细胞癌细胞成瘤及淋巴转移能力影响的动物实验

目的 观察肽段连接的最大发射波长为655 nm的荧光量子点(quantum dots,QD655)对人舌鳞状细胞癌(Tca8113)和昆明小鼠淋巴高转移鳞状细胞癌(U14)的体内生长、增殖、凋亡和淋巴转移能力的影响.方法 ①用QD655分别标记Tea8113细胞(TcaS113-QD655)和U14细胞(U14一QD655),将Tca8113-QD655和U14-QD655分别接种于裸鼠和昆明小鼠背部皮下,比较Tea8113-QD655和Tea8113、U14-QD655和U14的体内成瘤情况,并用流式细胞仪检测比较体内成瘤的Tea8113-QD655和TcaS113细胞、U14-QD655和U14细胞的增殖和凋亡情况;②将U14-QD655和U14分别接种于昆明小鼠颊黏膜下,建立颊癌颈淋巴转移模型,比较U14-QD655和U14颈淋巴转移能力的变化.结果 Tca8113-QD655组和Tea8113组肿瘤的平均重量分别为(1.25±0.14)、(1.30±0.16)g(P>0.05),肿瘤的平均体积分别为(2.81±0.68)、(2.69±0.63)cm3(P>0.05);U14-QD655组和U14组肿瘤的平均重量分别为(1.17±0.08)、(1.22±0.10)g(P>0.05),肿瘤的平均体积分别为(2.27±0.56)、(2.38±0.61)cm3(P>0.05).Tea8113-QD655和Tca8113体内成瘤细胞的平均增殖指数分别为(47.42±1.71)%、(48.33±1.52)%(P>0.05),平均凋亡指数分别为(12.38±0.75)%、(11.79±0.64)%(P>0.05);U14-QD655和U14体内成瘤细胞的平均增殖指数分别为(61.78±2.41)%、(60.9±2.26)%(P>0.05),平均凋亡指数分别为(13.65±0.91)%、(12.78±0.83)%(P>0.05).U14-QD655颊癌和U14颊癌的颈淋巴结转移率分别为41%(11/27)、43(13/30)(P>0.05).结论 用量子点标记Tea8113和U14后不影响体内肿瘤生长和淋巴转移能力.     

PI3K/Akt信号通路抑制剂在舌鳞癌细胞系增殖和凋亡中的作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对舌鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:LY294002处理Tca8113细胞,MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot及ELISA分析LY294002作用前后p-Akt及Akt蛋白的表达。结果:随LY294002浓度(0、10、25、50、75μmol/L)的增加及作用时间(24、48 h)的延长,实验组Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关LY294002干预细胞24 h后,细胞凋亡率显著高于未干预组,p-Akt蛋白表达明显降低,而总Akt表达无显著改变。结论:LY294002可诱导Tca8113细胞凋亡,其作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路的效应分子p-Akt的活化有关。     

RhoA小干扰RNA对舌癌细胞Tca8113增殖、侵袭影响的体外实验

目的 体外实验研究Ras基因家族同源物A(ras homolog gene family,member A,RhoA)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在舌癌转移中的作用.方法 登录Genebank确定人RhoA基因序列,利用RNA干扰技术针对RhoA的基因序列设计4条短链RNA,构建干扰表达载体,利用LipofectamineTM2000介导法将RhoA siRNA转染至舌癌细胞系Tca8113.转染细胞后48 h检测瞬时表达效率,经杀稻瘟菌素筛选及克隆化培养获得稳定抗性克隆转染株后,蛋白质印迹法检测RhoAsiRNA转染后的抑制效应,细胞计数绘制细胞生长曲线以观察RhoA siRNA转染前后细胞株的生长速度;划痕实验和Millicell小室实验检测转染细胞株的迁移力与侵袭力.结果 舌癌细胞转染RhoA siRNA后:RhoA蛋白表达下降;细胞倍增时间从38.0 h延长至45.7 h;细胞克隆形成率由35.2%降低至15.8%;细胞迁移能力减弱;细胞侵袭能力由100%降至58.9%,显著减弱.结论 RhoA siRNA能有效抑制舌癌Tca8113细胞中RhoA的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力,表明RhoA siRNA具有抑制舌癌细胞生物学特性的能力,提示RhoA在舌癌转移中可能发挥重要作用.     

姜黄素和乳香酸对口腔鳞癌细胞系Tea8113抑制作用的研究

目的观察姜黄素和乳香酸对人口腔鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及对炎症代谢通路中Cox-2、5-Lox的作用。方法培养人口腔鳞癌细胞系Tca8113,采用不同浓度的姜黄素和乳香酸及二者联合处理Tca8115细胞24、48、72h。MTY方法检测对细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC／PI染色法流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,RT—PCR及Western—blotting法检测对Cox-2、5-Lox表达的影响。结果姜黄素和乳香酸均能抑制Tca8113细胞增殖,呈现一定的浓度和时间依赖关系。姜黄素和乳：香酸均能促进TcaSll3细胞凋亡,呈现一定的浓度依赖关系。两种药物联合应用抑制细胞增殖和促进凋亡的作用明显强于单独作用。姜黄素能抑制炎症代谢通路中限速酶Cox-2、5-Lox的表达,乳香酸可以抑制5-Lox表达,且有一定的剂量相关性,两者联合应用时对Cox-2、5．Lox的表达均有抑制作用,尤其是对5-Lox通路的抑制,联合应用较单独应用作用显著增强。结论姜黄素和乳香酸均能抑制口腔鳞癌细胞TcaS113的增殖,促进凋亡。姜黄素能抑制炎症代谢通路中Cox-2和5-Lox的表达。乳香酸能抑制5-Lox表达,天然植物药姜黄素和乳香酸可能通过抑制花生四烯酸代谢通路发挥口腔癌的化学预防作用。