血浆DNA定量用于监测成人急性淋巴细胞白血病患者化疗疗效

目的监测成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者化疗过程中的血浆DNA水平,初步探讨其与ALL化疗疗效的关系。方法采集55例成人ALL患者化疗前及其中45例患者化疗一疗程后的静脉血,根据骨髓象、血象及临床体征进行疗效分组。以80名体检健康者作为对照。用磁珠法提取血浆DNA和内参照质粒DNA,双重荧光定量PCR技术进行DNA定量检测。结果 ALL患者化疗前血浆DNA含量[M(P25,P75)]为248.1(97.1,448.7)ng/mL,显著高于健康对照组19.1(12.7,25.8)ng/mL(Z=8.916,P<0.01);化疗一疗程后血浆DNA含量为35.5(17.7,83.0)ng/mL,显著低于化疗前水平(Z=6.322,P<0.01);不同疗效化疗前组血浆DNA水平有显著性差异(χ2=6.960,P<0.05),不同疗效组化疗后血浆DNA水平有显著性差异(χ2=11.145,P<0.01)。完全缓解组化疗前、后血浆DNA水平有显著性差异(Z=3.92,P<0.01),部分缓解组、未缓解组化疗前、后无显著性差异。生存曲线分析显示,化疗一疗程后血浆DNA水平<50 ng/mL的ALL患者生存率高于血浆DNA水平≥50 ng/mL的患者(χ2=3.860,P<0.05)。结论血浆DNA定量检测对ALL的化疗疗效评价及预后评估有重要意义。血浆DNA水平降低提示预后良好。     

急性髓系白血病患者血浆循环DNA动态监测及其临床意义

本研究旨在动态监测急性髓系白血病(AML)患者血浆循环DNA的含量,探讨其临床意义。采集66例AML患者不同临床状态的静脉血,以60例体检健康者、20例良性血液病患者、20例实体肿瘤患者为对照,用磁珠法提取血浆标本中循环DNA和内参照质粒DNA,双重荧光定量PCR技术进行DNA定量检测。结果表明:AML患者诊断时血浆DNA含量为168.5(73.4-245.1)ng/ml,显著高于各对照组,男性患者血浆DNA含量显著高于女性患者(P=0.019),不同年龄、不同FAB型别的患者间血浆DNA含量无统计学差异。化疗后血浆DNA水平显著低于化疗前,完全缓解、部分缓解组患者血浆DNA水平与健康对照组已无显著差异,但与未缓解组有显著性差异(P<0.05)。缓解后复发的6例患者中有5例(83.3%)复发时血浆DNA水平明显升高,未复发的25例患者中有22例(88.0%)血浆DNA水平保持稳定。结论:血浆DNA定量检测对AML的化疗疗效判断及复发监测具有重要意义。     

系统性红斑狼疮患者血清催乳素水平与Th1/Th2细胞因子平衡研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血催乳素(PRL)水平、Th1/Th2细胞因子分泌模式与SLE患者病情活动的关系.方法 检测40例SLE患者(SLE组)血清PRL IFN-γ、IL-4水平,分析二者与SLE病情活动的关系并与20例健康献血者(对照组)比较.结果 ①SLE组较正常对照组血清PRL[(21.58±4.29)ng/ml与(11.87±2.57)ng/ml,P<0.01)]、IL-4[(26.79±5.08)ng/L与(10.71±1.35)ng/L,P<0.01)]高,而IFN-γ[(11.47±3.36)ng/L与(18.36±2.61)ng/L,P<0.01)]、IFN-γ/IL-4(0.76±0.29与2.30±0.15,P<0.01)较正常对照组低.②SLE病情活动组PRL[(28.07±6.36)ng/ml与(14.61±2.14)ng/ml,P<0.01)]、IL-4[(38.52±8.44)ng/L与(14.15±1.63)ng/L,P<0.01)]高于病情稳定组,而IFN-γ[(6.98±2.72)ng/L与(16.24±2.57)ng/L,P<0.01)]、IFN-γ/IL-4(0.35±0.14与1.24±0.29,P<0.01)水平低于病情稳定组.③SEE活动期组10例患者治疗好转后较治疗前PRL[(39.41±11.65)ng/ml与(14.49±8.65)ng/ml,P<0.01)]、IL-4[(45.12±10.44)ng/L与(17.53±5.42)ng/L,P<0.01)]下降,IFN-γ[(6.31±2.59)ng/L与(16.89±4.43)ng/L,P<0.01)]、IFN-γ/IL-4(0.16±0.11与1.16±0.27,P<0.01)回升.结论 SLE患者存在高PRL血症及Th2细胞因子优势,高PRL血症和Th1/Th2比值失衡程度与病情活动呈消长关系.     

小细胞肺癌患者血浆循环DNA定量检测和完整性分析

目的定量检测小细胞肺癌患者血浆循环DNA并进行完整性分析。方法收集60例肺癌患者(病例组)、40例健康者(对照组)样本,采用实时荧光定量PCR,以管家基因GAPDH为目的基因定量检测血浆DNA水平;以肌动蛋白基因β-actin为目的基因(长片段543bp,短片度230bp)分析完整性。应用SPSS19.0统计统计进行数据分析。结果病例组患者血浆DNA水平[(3.105×10~5±0.923×10~5)copies/μL]高于对照组[(1.522×10~5±3.241×10~4)copies/μL]。病例组患者血浆DNA完整度指数(0.208 2±0.132 8)明显高于对照组(0.077 96±0.038 6),差异均有统计学意义(P0.01)。结论小细胞肺癌患者血浆循环DNA水平和完整度均高于健康者。     

血清SCC-Ag检测在宫颈鳞癌患者的治疗与病情监测中的临床价值

目的探讨血清鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)指标在宫颈鳞癌的治疗与病情监测中的临床意义。方法回顾2084例不同临床分期的宫颈鳞癌患者的SCC-Ag水平并作统计处理;对手术前后5d内或放/化疗前后20d内均有SCC-Ag测定的患者进行治疗前后的对比及Ⅰa～Ⅱa期手术患者有无淋巴转移的病倒进行SCC-Ag值比较,同期收集90例健康体检者及1175例包括宫颈上皮细胞不典型增生、子宫肌瘤等妇科良性肿瘤病例的SCC-Ag值作为对照。结果按FIGO临床分期,SCC-Ag水平随病情分期进展而递增(P0.01),各期与妇科良性肿瘤组(1175,1.17±0.76ng/ml)和健康体检组(90,0.77±0.26ng/ml)相比均有明显差异(P0.01);统计显示疾病较早期(Ⅰa期～Ⅱa期)患者其手术后SCC-Ag水平(1.28±1.81ng/ml)比手术前(4.63±8.13ng/ml)有明显下降(P0.05);疾病较晚期(Ⅱb～Ⅳ期)患者其放/化疗后SCC-Ag水平(11.01±8.44ng/ml)对比放/化疗前(23.39±23.71ng/ml)有明显下降(P0.05);956例行根治术(子宫切除+盆腔淋巴结清扫)的患者,有淋巴转移的与无淋巴转移的,两者比较有差异(P0.01)。结论 SCC-Ag是宫颈鳞癌较特异的肿瘤标志物,是宫颈鳞癌的临床分期、疗效观察、治疗方案及病情监测状态中的重要参考指标。     

定量检测血浆RASSF1A甲基化在晚期肺癌患者个体化治疗中的应用

摘要:目的：定量检测晚期肺癌患者化疗过程中血浆RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)甲基化水平,探讨其在个体化治疗中的应用价值。 方法：采集24例晚期肺癌患者化疗前后静脉血共135份,用荧光定量甲基化特异性PCR (MSP)检测RASSF1A基因的甲基化水平,观察化疗前后的变化情况。 结果：13例部分缓解组(partial remission,PR)患者化疗后甲基化定量水平明显升高(P＜0.05),而11例未缓解组(stable disease,SD或progressive disease,PD)的患者化疗前后甲基化水平无明显变化;生存时间≥12个月的13例患者化疗后甲基化定量水平也明显升高(P＜0.01),而生存时间<12个月的11例患者化疗前后甲基化水平无明显变化。生存曲线分析显示,化疗后有甲基化水平升高改变的患者总体生存时间更长(P＜0.01）。 结论：晚期肺癌患者化疗前后血浆RASSF1A甲基化定量水平的检测,对评估化疗的疗效及预后有一定的价值,对个体化化疗的药物选择有一定的指导意义。     

血浆结缔组织生长因子对心力衰竭的诊断价值

目的探讨血浆结缔组织生长因子(CTGF)浓度对临床上心力衰竭患者的诊断价值.方法评估100例心力衰竭患者(心衰组),根据NYHA分级,心衰组按心功能Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级分为第一组、第二组、第三组、第四组,对照组为25例健康体检者,测定研究对象的血浆CTGF水平,将血浆CTGF浓度和其他纤维化标志物与临床及超声心动图的数据进行评估和比较.结果心衰各组患者血浆CTGF浓度均明显高于对照组,对照组测定值为(0畅7994±0畅1650)ng/ml,第一组测定值为(1畅1124±0畅2512)ng/ml(P<0畅01),第二组测定值为(1畅2563±0畅2983)ng/ml(P<0畅01),第三组测定值为(1畅2886±0畅3864)ng/ml(P<0畅01),第四组测定值为(1畅3539±0畅3241)ng/ml(P<0畅01),心衰患者中,血浆CTGF浓度与血浆脑钠肽的浓度显著正相关(r=0畅396,P<0畅01),与血浆转化生长因子β正相关(r=0畅518,P<0畅01),与组织多普勒评估的E/A值呈负相关(r=-0畅446,P<0畅05),但不与反映左心室收缩功能的EF值相关.结论血浆CTGF浓度可作为一种新的心衰诊断标志物应用于临床.     

纤溶酶原激活剂抑制物-1检测及其对脑血栓的诊断价值

目的 检测血浆纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1),了解脑血栓患者PAI-1在治疗前后的变化.方法 采用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测35例脑血栓伴高血压患者(混合组)、33例单纯脑血栓患者(血栓组)、30例高血压患者(高血压组)和30例对照者(对照组)治疗前后以及30例健康人(健康组)血浆PAI-1水平.结果 PAI-1治疗前后分别为:混合组(185.6±31.6) ng/mL和(87.2±26.7)ng/mL,脑血栓组(163.5±30.8)ng/mL和(80.4±23.6)ng/mL,高血压组(96.2±26.3)ng/mL 和(54.8±22.5)ng/mL,对照组(45.5±15.4)ng/mL 和(40.2±12.8)ng/mL,健康组(25.2±8.3)ng/mL.前二组治疗前后血浆PAI-1差异有统计学意义(P<0.01),前三组与健康组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论血浆PAI-1水平反映患者的凝血纤溶改变情况,与内皮细胞损伤密切相关,是观察脑血栓患者病情和疗效的有效实验指标.     

脑损伤伴呼吸衰竭患者血浆内皮素水平变化的临床意义

目的探讨脑损伤伴呼吸衰竭患者血浆内皮素水平的变化及其临床意义。方法34例脑损伤伴呼吸衰竭的患者(观察组),于治疗前后测定血浆内皮素浓度,并与32名健康体格检查者(对照组)作比较。分析观察组患者动脉血氧饱和度、氧合指数与内皮素的相关性。结果观察组入ICU治疗后第1日的血浆内皮素浓度为(82±15)ng/L、对照组为(48±6)ng/L,比较差异有统计学意义,P<0.01。观察组治疗后第3日,血浆内皮素浓度为(68±17)ng/L,较治疗第1日的血浆内皮素浓度明显降低(P<0.01)。观察组患者机械通气前、后的血浆内皮素水平与PaO2呈负相关(r值分别为-0.331、-0.430,均为P<0.01);与氧合指数也呈负相关(r值分别为-0.406、-0.372,均为P<0.01)。结论脑损伤伴呼吸衰竭患者的血浆内皮素明显上升,监测血浆内皮素浓度的变化,对判断脑损伤伴呼吸衰竭患者的病情严重程度、转归有一定参考价值。     

宫颈癌患者血浆游离DNA的含量变化研究

目的:检测宫颈癌患者血浆游离DNA含量并探讨其与临床病理特征之间的关系。方法:收集42例宫颈癌、20例宫颈鳞状上皮内瘤样病变Ⅲ患者和20例健康妇女的外周血,用微量基因组提取试剂盒提取血浆DNA,用双链DNA高敏试剂盒和荧光仪测定血浆DNA含量。结果:宫颈癌患者的血浆DNA水平(15.14±7.10)ng/mL明显高于宫颈鳞状上皮内瘤样病变Ⅲ(8.10±3.06)ng/mL和正常对照组(7.60±3.87)ng/mL(P<0.05),宫颈鳞状上皮内瘤样病变Ⅲ和正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅰ期宫颈癌患者的血浆DNA水平(12.78±5.58)ng/mL明显高于正常和宫颈鳞状上皮内瘤样病变Ⅲ组(P<0.05),Ⅱ~Ⅲ期患者的血浆DNA水平(17.99±7.81)ng/mL明显高于Ⅰ期组(P<0.05)。Ⅰ~ⅡA期患者中,肿块直径>4 cm者的血浆DNA水平(15.60±6.13)ng/mL明显高于肿块直径<4cm者(9.68±2.84)ng/mL(P<0.05)。以正常对照者血浆DNA水平的95%可信区间上限15.70 ng/mL为界值,其诊断的敏感性为38.10%,特异性为92.50%,阳性预测值为84.21%,阴性预测值为58.73%。结论:宫颈癌患者的血浆DNA水平与疾病的发生、发展和预后密切相关,血浆DNA水平可能有助于宫颈癌的鉴别诊断。     

Can plasma DNA monitoring be employed in personalized chemotherapy for patients with advanced lung cancer?

Personalized chemotherapy is the ideal treatment usually chosen to help improve the survival chances of patients with advanced lung cancer. However, there is no short-term evaluation protocol for predicting the efficacy of the therapy. The aim of this study was to determine the value of using plasma DNA to monitor chemotherapeutic efficacy and to select most appropriate chemotherapeutic regimen for patients with advanced lung cancer. Eighty-eight lung cancer patients and 200 healthy controls were included in this study. Plasma DNA was extracted from plasma samples with internal controls by using the BILATEST DNA Kit. The quantity of plasma DNA was determined by using duplex real-time quantitative PCR. After first-line chemotherapy, plasma DNA levels of partial response patients were significantly different from those of stable disease patients or progressive disease patients, but with no statistical difference from healthy controls (P = 0.014, P < 0.001 and P = 0.418, respectively). Survival analysis showed a statistically better survival time in patients who had lower levels of plasma DNA after the third cycle chemotherapy (P = 0.031). In this study, the correlation of the kinetics of DNA concentrations with chemotherapeutic efficacy during the whole therapy was also observed. The quantification of plasma DNA is a sensitive indicator of chemotherapeutic efficacy in advanced lung cancer patients, and it can be useful in predicting response to therapy and guiding medication.     

小细胞肺癌患者循环DNA水平的临床应用

目的研究循环DNA作为肿瘤标志物在小细胞肺癌患者中的临床意义。方法以荧光定量PCR方法检测67例小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）患者血浆及柏例健康对照者血浆循环DNA的水平,对比治疗前后的差异及与临床分期的相关性。结果67例SCLC患者Ct值与对照组比较显著降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;治疗后SCLC患者各组Ct值与治疗前比较均有增高。差异有统计学意义（P〈0．05）;临床分期晚则Ct值减少,其中广泛期SCLC患者Ct值明显降低。结论血浆循环DNA水平与小细胞肺癌患者的临床分期及治疗疗效具有相关性,是一种简单、有效的肺癌标志物。     

Plasma beta-thromboglobulin levels in lung cancer

beta-Thromboglobulin (beta-TG) is a platelet-specific protein that is released into plasma when platelets are activated in vivo. The involvement of platelets in tumor metastasis has been shown in animal studies. To study the role of platelets in tumor metastasis in humans, we measured plasma concentrations of beta-TG in 20 patients with newly diagnosed lung cancer and 11 healthy control subjects. The mean plasma concentration of beta-TG was significantly elevated in patients with advanced or metastatic lung cancer when compared with concentrations in healthy controls or patients with limited disease. This study suggests there is in vivo activation of platelets in patients with advanced or metastatic lung cancer.     

血浆DNA在肺癌诊断上的意义

目的研究血浆DNA 3P D3S1300和D3S1289位点杂合性缺失(LOH)作为肿瘤标志物在肺癌诊断中的意义.方法收集初诊69例肺癌患者全血及肿瘤组织,40例非肺癌病人全血,用PCR-银染法分析肿瘤患者血浆、肿瘤组织中及对照组血浆中DNA D3S1300和D3S1289 LOH情况,观察阳性率.结果 69例肺癌患者肿瘤组织DNA中D3S1300和D3S1289的LOH检出率分别为40.6%和31.9%,血浆检出率为29.0%和24.6%.对照组血浆仅有2例DNA检出D3S1300 LOH,3例检出D3S1289 LOH.与肺癌组相比P＜0.01.结论血浆DNA LOH可望作为一种新的肿瘤标志物.     

p16基因异常甲基化检测对周围型肺癌的诊断价值

目的:了解周围型肺癌患者外周血血浆中p16基因异常甲基化发生情况及其在周围型肺癌临床辅助诊断中的应用价值。方法:选取56例肺周围型结节手术患者的血浆和组织标本,其中31例为周围型肺癌,25例为肺部良性结节,采用甲基化特异性聚合酶链反应方法检测p16基因启动子的异常甲基化情况。结果:在周围型肺癌患者的血浆和肿瘤组织中,p16基因甲基化检出率分别为64.5%(20/31)和70.9%(22/31);周围型肺癌患者血清、肿瘤组织中p16基因的甲基化异常事件与肿瘤分期、分型无明显相关性。在25例良性肺部疾病患者中,3例血浆和手术切除标本检测出p16基因启动子的异常甲基化存在;良、恶性肺周围型结节的p16基因异常甲基化发生情况差异存在显著性。结论:检测周围型肺癌患者血浆中p16基因异常甲基化情况有可能成为有价值的临床辅助诊断手段。     

血浆中APC基因甲基化检测在早期肺癌诊断中的应用

目的 研究血浆DNA中APC基因启动子甲基化与肺部实体瘤良、恶性的关系,确定血浆中APC基因甲基化检测对早期肺癌诊断的意义.方法 以92例CT检查发现肺部实体瘤(直径≤2 cm),并在CT引导下行肺部穿刺患者和23例健康人作为研究对象,收集血浆样本,利用磁珠法提取DNA,行亚硫酸氢盐化学修饰后,采用针对APC基因启动子区的甲基化引物和探针,以荧光定量MSP法(TaqMan探针)检测APC基因的甲基化.结果 92例肺部实体瘤患者经病理诊断,有58例确诊为肺癌、31例为肺部良性疾病、3例未明确诊断.58例肺癌患者中有11例(19%)测出APC基因启动子区甲基化阳性,31例肺部良性疾病、3例未明确诊断和23例健康对照组均为阴性.结论 检测血浆DNA中APC基因启动子甲基化有助于早期肺癌的诊断.     

Quantitative measurement of cell-free plasma DNA and applications for detecting tumor genetic variation and promoter methylation in a clinical setting

An elevated cell-free DNA (cfDNA) level is often reported in patients with advanced cancer and is thought to represent nuclear material from a distant inaccessible tumor. cfDNA can become a valuable source to monitor tumor dynamics and evaluate genetic markers for predictive, prognostic, and diagnostic testing. DNA extraction and quantification were optimized with plasma collected from 20 patients with advanced cancer and 16 healthy controls. Plasma cfDNA from patients with advanced cancer was evaluated for TP53 genetic variation and methylation status of CpG islands in several promoters of known disease-related genes. Tumor biopsy and corresponding plasma specimens were collected from study participants to determine whether the same genetic variations were present in both samples. The cfDNA isolation method provided a lower DNA detection limit of 144 pg, equivalent to DNA from approximately 24 cells. Normal pooled human plasma cfDNA averaged 110 copies/mL of the ACTB gene. Extracted cfDNA was suitable for gene-specific variant detection, sequencing, and promoter methylation analysis. DNA extracted from tumor biopsy and corresponding plasma specimens from two patients with advanced cancer revealed an identical, nonsynonymous variant present in both samples. Immunohistochemical analysis confirmed the TP53 mutant phenotype in the tumor specimens. Quantitative measurement of cfDNA represents a useful biomarker to follow treatment outcome and is a valuable tool with which to characterize specific genetic alterations for both patient selection and personalized treatment.     

肺癌患者血浆RASSF1A和BLU基因甲基化检测及临床意义

【目的】探讨肺癌患者外周血血浆中抑癌基因Ras相关结构域家族1A（RASSF1A）和BLU基因启动子的甲基化状态及其临床意义。【方法】利用巢式甲基化特畀性PCR（nMSP）法检测肺癌患者外周血血浆与正常人血浆中抑癌基因RASSF1A和BLU基因启动子的甲基化状态。【结果】58例肺癌患者血浆样品中分别发现22例（37．93％）RASSF1A基因启动子的异常甲基化和17例（29．31％）BLU基因启动予的异常甲基化,20例正常对照血浆中都未检测到RASSF1A和BLU基因启动子的异常甲基化,差异有显著性（P〈0．01）;但血浆中两基因甲基化检出率与患者性别、肺癌组织学分型及临床分期无明显相关性（P〉0．05）。【结论】利用nMSP法检测外周血血浆中RASSF1A和BLU基因启动子的甲基化,可为肺癌的筛查、早期诊断提供有用的信息。     

肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化的检测及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化及其临床意义。方法选择120例非小细胞肺癌患者,用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测其肺癌组织、癌旁正常组织和外周血血浆p16基因的甲基化,并对120例正常对照组血浆样品进行p16基因甲基化检测,各组检测结果进行比较。结果肺癌组织p16基因甲基化率44.2%,高于癌旁组织的11.7%(P0.01);非小细胞肺癌患者血浆样品中p16基因甲基化检测率为32.5%,对照组血浆未检测到p16基因甲基化(P0.01);肺癌患者血浆样品与癌组织p16基因甲基化检出率比较差异无显著性(P0.05);患者血浆样品与癌旁组织p16基因甲基化检出率比较差异有显著性(P0.01)。结论肺癌患者癌组织和血浆样本p16基因甲基化的检测都为肺癌的早期筛查和诊断提供了有价值的参考信息。