过滤去除白细胞时温度对红细胞溶血的影响

目的:探讨在不同温度下过滤去除白细胞时对红细胞溶血的影响,寻找防止其溶血的措施。方法:将保存5d的红细胞悬液40 u随机分为对照组和试验组各20 u,前组红细胞悬液于4℃储血冰箱中取出后立即进行过滤,后组红细胞悬液置于35℃水浴箱复温10 m in再行过滤。测定各组红细胞悬液过滤前后的血浆K+和游离血红蛋白浓度。同时对保存5 d的650 u红细胞悬液(包括4℃立即过滤220 u红细胞悬液和经35℃复温10 m in后过滤430u红细胞悬液)滤后血浆的目测溶血情况进行回顾性分析。结果:对照组红细胞悬液滤后血浆K+、游离血红蛋白浓度分别为(6.41±0.16)mm o l/L、(37.84±6.15)m g/L,比滤前(5.62±0.15)mm o l/L、(23.31±4.24)m g/L明显升高(P<0.05);试验组滤后K+、游离血红蛋白浓度(5.72±0.16 mm o l/L、27.93±5.28 m g/L)与滤前(5.63±0.15 mm o l/L、23.51±4.26 m g/L)比较无显著性差异(P>0.05),但比对照组滤后明显降低(P<0.05)。两组滤前K+、游离血红蛋白浓度均无显著性差异(P>0.05)。4℃立即过滤与经35℃复温后过滤的红细胞悬液其溶血率存在显著性差异(P<0.05)。结论:现用的白细胞滤器能引起一定程度的红细胞溶血,红细胞悬液经35℃复温10m in后再行过滤可有效减少过滤引起的溶血。     

实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化

目的 建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法.方法 以肺癌细胞株NCI-H460作为RAssF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200 μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆.用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测.以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量.结果 实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆).15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%).5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml.结论 实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强.     

应用多元回归分析建立纠正高胆红素干扰酶法测定血清总胆固醇结果的校正公式及验证

目的 评价不同浓度胆红素对酶法测定总胆固醇(total cholesterol, TC)的影响,应用多元回归分析建立校正公式并验证其校正效果。方法 收集100 例来自于南京医科大学第一附属医院2020 年12 月门诊或住院患者的新鲜无黄疸血清标本。配制一系列浓度梯度的胆红素溶液,分别加入其中50 例患者的血清标本中,检测各标本总胆红素(total bilirubin,TB)和TC 浓度,分析胆红素水平对TC 检测结果的影响及二者的相关性。应用多元回归分析建立校正公式,并利用另外50 例患者标本验证该校正公式的性能。结果 黄疸实验组与生理盐水对照组间差异具有统计学意义(F=3.947,P<0.01),标本TC 浓度与TB 浓度呈负相关(r2=0.989 4);在胆红素加入浓度分别为100,200,300,400,500 和600 μmol/L 的实验组中,TC 浓度的平均偏倚依次为:-6.65%±4.89%,-14.21%±8.89%,-29.00%±13.43%,-31.07%±14.62%,-38.21%±13.95% 和-43.51%±12.69%,且初始浓度TC ＜ 3 mmol/L 的标本产生的平均偏倚均明显高于TC ≥ 3 mmol/L 的标本,差异具有统计学意义(t=9.192 ～ 14.836,均P ＜ 0.01);设无黄疸血清标本的TC 浓度为Y,其对应人工黄疸标本的TC 实测浓度为Z,TB 浓度为X,经多元回归分析,校正公式为Y =0.002 353·X + 0.973·Z+ 0.000 337·X·Z － 0.013 34;经公式校正后92.67% 的黄疸标本TC 浓度偏倚小于±10%。结论 黄疸患者血清标本中高胆红素水平可导致其TC 的检测结果偏低,偏倚大小与TB 浓度以及初始TC 浓度相关,运用校正公式可有效校正高胆红素对TC 测定的干扰,符合临床要求。     

miR-206-3p在小鼠皮肤中的表达及其作用

摘要：目的：对小鼠皮肤中miR-206-3p及其靶基因脑源性神经营养因子（Bdnf）进行表达与定位检测,以探讨其在皮肤发育过程中的可能作用。 方法：手术剪取13.5 dpc（交配后天数）、15.5 dpc、17.5 dpc胎鼠,1 dpp（出生后天数）、4 dpp乳鼠及16周龄雄鼠的背部全层皮肤,用实时荧光定量RT-PCR检测miR-206-3p与Bdnf mRNA的表达水平,western blot检测BDNF蛋白质表达水平,原位杂交与免疫组化分别检测miR-206-3p与BDNF的组织定位。 结果：皮肤中miR-206-3p在胚胎期持续升高,到17.5 dpc后逐渐降低,于成年鼠时回复至13.5 dpc时水平;BDNF表达趋势与miR-206-3p相反,而Bdnf mRNA在17.5 dpc至成年鼠并无显著改变。miR-206-3p的分布在皮肤发育过程中逐渐区域化,在出生后主要分布于上基部和毛囊外周,与同期BDNF表达区域毗邻但不重叠。 结论：miR-206-3p可能通过转录后调控Bdnf参与了小鼠皮肤神经发育过程。     

抗β2GPI/β2GPI复合物激活THP-1细胞表达炎性相关因子

目的探讨抗β2糖蛋白I(抗β2GPI)自身抗体与β2糖蛋白I(β2GPI)复合物刺激单核细胞株THP-1表达炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α及可能机制。方法用荧光定量PCR法检测抗β2GPI/β2GPI复合物刺激THP-1细胞不同时间(0.5、1、1.5、2、6 h)后IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达,用免疫荧光染色法及western blot观察THP-1细胞表达IL-6、IL-8、TNF-α蛋白的情况。荧光定量PCR及western blot观察Toll样受体4(TLR4)途径抑制物(TAK-242)干预抗β2GPI/β2GPI复合物对THP-1细胞的刺激作用。结果抗β2GPI/β2GPI复合物(100μg/mL)刺激THP-1细胞不同时间,可使细胞表达IL-6、IL-8及TNF-αmRNA水平逐渐上升,于刺激2 h时IL-6、IL-8及TNF-α达到峰值(P<0.01),免疫荧光染色及western blot证实细胞表达IL-6、IL-8及TNF-α蛋白水平也明显增加。TAK-242(5μmol/L)可显著抑制抗β2GPI/β2GPI复合物诱导的细胞IL-6、IL-8及TNF-α表达。结论抗β2GPI/β2GPI复合物通过TLR4途径,激活THP-1细胞表达炎性细胞因子IL-6、IL-8及TNF-α,参与抗磷脂综合征的病理机制。     

葡萄糖对尿液白细胞干化学法测定影响的探讨

目的 分析葡萄糖(Glu)对尿液白细胞(WBC)干化学酯酶法(简称干化学法)测定的影响,以提高检测准确率.方法 对584例WBC镜检阳性的临床尿液检测资料回顾分析其Glu和WBC干化学结果 ;选取只有WBC干化学结果 分别为±、+、+ +、+ + +阳性的新鲜尿液各5份,每份2管(每管10 mL),分为Glu加入组和H2O2加入组,分别对每组样本加入不同浓度Glu和H2O2,并进行干化学测定.在Glu加入组每次测定的同时,用去除Glu模块的试条进行重复测定.结果 584例尿检结果 中,Glu + + +组与Glu + + + +组的WBC干化学假阴性率均高于Glu阴性组(P=0.001,P=0.000).WBC干化学阳性检出数随尿Glu浓度的升高而减少[优势比(OR)=0.100,P=0.000],但不受H2O2的影响.结论 尿Glu浓度为83.33 mmol/L(15 g/L)时,尿WBC干化学测定已明显受干扰,其受干扰程度随尿Glu浓度的升高而增大,是Glu干扰了尿WBC干化学测定,而非Glu模块的反应产物H2O2.     

肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化定量检测研究

背景与目的：APC基因编码的蛋白参与信号转导途径,大量研究证实APC启动子区的高甲基化在肿瘤的发生发展中起重要作用。本研究建立血浆APC基因实时荧光定量甲基化特异性基因扩增（methylation—specific PCR,MSP）检测方法,并对临床肺癌患者血浆进行检测,以确定该方法在肺癌诊断中的应用价值。方法：将APC基因启动子甲基化阳性肺癌细胞株NCI—H460细胞用有限稀释法获取单个集落形成的细胞,以经典的酚一氯仿法提取细胞DNA,并用MSP对APC基因甲基化进行验证,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μL健康人血浆中．得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟肺癌及肺癌患者、肺部良性疾病患者和健康对照者血浆中提取DNA,对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰;以模拟血浆样品作为标准品,采用外标准曲线法对各种血浆样品中APC甲基化进行定量分析。结果：所建立的实时荧光定量MSP检测方法的线性范围为1．5×10^2-1．5×10^5拷贝／mL。用该方法检测甲基化肿瘤细胞的DNA其最低检测限为1．5×10^2拷贝／mL。78例肺癌患者有40例组织中检测出APC基因甲基化阳性．其中的19例（47．5％）肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化阳性,APC甲基化浓度为1．67×10^2-6．78×10^3拷贝／mL,中位浓度为1．60×10^3拷贝／mL。38例组织阴性的肺癌患者、31例肺部良性疾病患者和23例健康者的血浆APC基因启动子甲基化均为阴性。结论：实时荧光定量MSP检测血浆APC基因甲基化在肺癌诊断方面具有潜在应用价值。     

葡萄糖对尿液白细胞干化学法测定影响的探讨

目的分析葡萄糖(Glu)对尿液白细胞(WBC)干化学酯酶法(简称干化学法)测定的影响,以提高检测准确率。方法对584例WBC镜检阳性的临床尿液检测资料回顾分析其Glu和WBC干化学结果;选取只有WBC干化学结果分别为±、+、++、+++阳性的新鲜尿液各5份,每份2管(每管10 mL),分为Glu加入组和H2O2加入组,分别对每组样本加入不同浓度Glu和H2O2,并进行干化学测定。在Glu加入组每次测定的同时,用去除Glu模块的试条进行重复测定。结果584例尿检结果中,Glu+++组与Glu++++组的WBC干化学假阴性率均高于Glu阴性组(P=0.001,P=0.000)。WBC干化学阳性检出数随尿Glu浓度的升高而减少[优势比(OR)=0.100,P=0.000],但不受H2O2的影响。结论尿Glu浓度为83.33 mmol/L(15 g/L)时,尿WBC干化学测定已明显受干扰,其受干扰程度随尿Glu浓度的升高而增大,是Glu干扰了尿WBC干化学测定,而非Glu模块的反应产物H2O2。     

影响病人满意度可靠性的若干因素分析

满意度调查作为护理质控的主要方法之一,大家都很重视,力求全面真实地反映护理工作的实际状况,但我们在实际操作过程中却发现许多因素对满意度的可靠性有不可忽视的影响,本文就影响因素作一对比分析。     

血浆中APC基因甲基化检测在早期肺癌诊断中的应用

目的 研究血浆DNA中APC基因启动子甲基化与肺部实体瘤良、恶性的关系,确定血浆中APC基因甲基化检测对早期肺癌诊断的意义.方法 以92例CT检查发现肺部实体瘤(直径≤2 cm),并在CT引导下行肺部穿刺患者和23例健康人作为研究对象,收集血浆样本,利用磁珠法提取DNA,行亚硫酸氢盐化学修饰后,采用针对APC基因启动子区的甲基化引物和探针,以荧光定量MSP法(TaqMan探针)检测APC基因的甲基化.结果 92例肺部实体瘤患者经病理诊断,有58例确诊为肺癌、31例为肺部良性疾病、3例未明确诊断.58例肺癌患者中有11例(19%)测出APC基因启动子区甲基化阳性,31例肺部良性疾病、3例未明确诊断和23例健康对照组均为阴性.结论 检测血浆DNA中APC基因启动子甲基化有助于早期肺癌的诊断.