含癌胚抗原片段的重组腺相关病毒转染树突状细胞疫苗的体外杀伤作用

目的：观察研究人外周血单核细胞来源的树突状细胞（DC）转染含癌胚抗原（CEA）片段的重组腺相关病毒后所诱导的特异性T细胞对直肠癌细胞株LOVO和SW480的体外杀伤作用。方法：抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血，分离单核细胞，体外培养，使用含CEA片断的重组腺相关病毒转染未成熟DC，诱导特异性T细胞。检测体外培养的DC和CTL活性，并使用MTT法检测细胞毒性T细胞（CTL）对LOVO细胞的杀伤作用。结果：转染或未转染的体外培养的成熟DC高表达CD40、CD86、IL-12，诱导的细胞毒性T细胞高表达IFN-γ；转染后DC诱导特异性细胞毒性T细胞可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LOVO细胞。结论：重组腺相关病毒转染DC，不明显改变DC表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能，可诱导自体细胞毒性T细胞增殖，含CEA片断的腺相关病毒转染DC诱导自体细胞毒性T细胞对LOVO细胞有明显杀伤作用，DC疫苗可以作为直肠癌患者免疫治疗的有效补充。     

重组人p53腺病毒转染淋巴瘤源性树突状细胞的抗肿瘤免疫效应

本研究旨在探讨重组人p53腺病毒转染淋巴瘤源性树突状细胞的抗肿瘤免疫效应。采集初诊弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者肿大的淋巴结和外周血,分别分离单个核细胞,进行树突状细胞(DC)体外诱导培养,均分为实验组(rAd-p53-DC)、对照组(rAd-DC)和空白对照组。用重组人p53腺病毒(rAd-p53)转染2种来源的DC,流式细胞术检测DC免疫表型,Western blot鉴定P53蛋白的表达,ELISA法检测上清中的细胞因子IL-12的含量,用混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测经rAd-p53转染的两种来源DC的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。结果表明,实验组DC的表型(CD1a除外)CD83、CD80、CD86和HLA-DR表达均较对照组及空白对照组明显增高(P<0.05)。实验组P53蛋白的表达上调,培养上清液中IL-12分泌水平较对照组及空白对照组明显增高(P<0.05)。实验组明显刺激自体淋巴细胞增殖,且刺激能力随rAd-p53-DC与淋巴细胞比例的增加而升高。对照组及空白对照组也能刺激同种自体淋巴细胞增殖,但较实验组差(P<0.05)。对靶细胞的细胞毒作用(CTL效应)检测显示,实验组介导同种异体的淋巴细胞杀伤率显著高于对照组及空白对照组(P<0.05),且淋巴结来源DC的CTL效应明显高于外周血来源DC(P<0.05)。结论:rAd-p53-DC为基础的肿瘤疫苗有可能在解决淋巴瘤的微小残留病、DC免疫耐受等问题方面发挥作用。     

核糖体蛋白L8重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的:构建鼠核糖体蛋白L8(RPL8)基因的重组腺病毒载体,为转染小鼠树突状细胞(DC)为制备DC疫苗奠定基础。方法:用RT-PCR克隆目的基因RPL8,与载体连接、酶切、插入、并转移到pAdxsi腺病毒骨架载体上,包装扩增成腺病毒颗粒。用重组腺病毒及空病毒Ad-EGFP(作为阴性对照)转染小鼠DC细胞,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白的表达。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了携带RPL8基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度(1.6×1010PFU/mL)的重组腺病毒。结论:成功构建了携带RPL8的重组腺病毒,为进一步研究RPL8基因修饰DC疫苗奠定基础。     

用携有存活蛋白基因的重组腺病毒载体转染树突状细胞诱导细胞毒T细胞抗淋巴瘤免疫效应

本研究探讨转染survivin（SVV）基因的树突状细胞（DC）体外诱导特异性抗淋巴瘤的免疫效应。对人外周血DC进行诱导培养,以Ad-SVV转染DC,用Westernblot鉴定Survivin的表达,用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应,用混合淋巴细胞反应（MLR）测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,以ELISA法检测上清中的细胞因子IL-12含量。结果表明：在MLR中,刺激应答比（S/R）为1∶5、1∶10、1∶50和1∶100时,转染Ad-SVV的DC有较强刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;转染Ad-SVV的DC组所诱发的CTL活性明显高于对照DC组;转染病毒后第2天,转染Ad-SVV的DC组的IL-12分泌水平高于对照DC组。结论：含存活蛋白基因的DC能够在体外诱导特异性CTL效应,对CA46细胞有明显的杀伤作用。     

重组腺病毒载体介导IL-12基因在间充质干细胞中的表达

目的将大鼠骨髓间充质干细胞(MSC),经重组腺病毒载体Ad-IL-12转染,构建Ad-IL-12-MSC。方法 Percoll法分离与培养大鼠MSC,流式细胞仪测定细胞表面标志CD29,CD44,CD34。以重组腺病毒载体Ad-IL-12转染MSC,RT-PCR、Western Blott检测转染后IL-12基因mRNA和蛋白的表达。结果分离所得的大鼠MSCs细胞组成比较均一。流式细胞仪检测3种MSCs的表面抗原标志,CD29和CD44,阳性率分别达97.1%和98.2%,而CD34的阳性率仅为4.4%。转染后,Ad-IL-12-MSC细胞IL-12基因在mRNA水平和蛋白质水均有表达。结论 Percoll法分离与培养MSC较为可靠且简单,构建的Ad-IL-12-MSC能成功表达IL-12。     

双歧杆菌对过敏性哮喘儿童DC成熟及其分泌细胞因子的影响

目的研究青春型双歧杆菌对过敏性哮喘儿童外周血单个核细胞（PBMC）来源的树突状细胞（DC）表达CD86和HLA-DR及其分泌IL-1βI、L-6I、L-10、IL-12、IL-23和IFN-γ的影响。方法从15名过敏性哮喘儿童和15名非哮喘儿童的外周血单个核细胞诱导生成未成熟DC,分别加入青春型双歧杆菌或脂多糖（LPS）后继续培养DC 2天,①每天于倒置显微镜下观察DC形态;②用流式细胞仪检测各组DC表面CD86和HLA-DR的分子表达;③用ELISA方法检测培养上清中IL-1βI、L-6I、L-10、IL-12I、L-23和IFN-γ的水平。结果①DC经双歧杆菌和LPS分组处理后第2天,于倒置显微镜下观察到双歧杆菌组和LPS组的DC突起均较空白组明显,具有突起的细胞数量较空白组增多,而双歧杆菌组与LPS组比较,LPS组有突起的细胞数量明显增多,提示DC过度生长。②双歧杆菌刺激后,哮喘儿童DC表面CD86表达明显增高,HLA-DR表达无明显变化,非哮喘儿童CD86和HLA-DR表达均无明显变化;LPS刺激可明显增加哮喘儿童和非哮喘儿童CD86和HLA-DR的表达。③双歧杆菌刺激哮喘儿童DC分泌IL-12、IFN-γI、L-1β及IL-6水平增高,刺激非哮喘儿童DC分泌IL-12I、L-10I、L-1β及IL-23水平增高。结论①过敏性哮喘儿童DC表面CD86的表达可能存在缺陷,双歧杆菌能适度上调其表达,在DC的成熟过程中可能起调节作用。②双歧杆菌能刺激过敏性哮喘儿童DC分泌IL-12和IFN-γ,从而改变Th2优势分化,纠正Th1/Th2失衡。③过敏性哮喘儿童DC分泌IL-10可能存在缺陷,从而影响免疫耐受的形成。④双歧杆菌可能通过刺激哮喘儿童DC分泌IL-1β及IL-6增高,达到促进Th17细胞分化的作用。     

GITRL联合IL-21基因真核表达载体的构建及体外研究

本研究构建人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体（GITRL）联合白介素-21（IL-21）基因真核表达载体,为探讨目的基因对慢性髓系白血病（CML）来源树突状细胞（DC）的影响.应用脂质体介导法将重组真核表达载体转染至纯化的DC,而此纯化的DC来源于经伊马替尼治疗有效或无效的慢性期CML患者或健康志愿者.应用ELISA法检测转染后DC细胞因子的浓度变化.将转染后的DC与纯化的自体NK混合培养使之成为DC-CIK.以DC-CIK细胞为效应细胞,应用乳酸脱氢酶释放法观察其对靶细胞的杀伤率.结果表明：所获目的基因经测序 与GenBank比对序列一致,PCR及限制性核酸内切酶检测显示,真核表达载体质粒经限制性酶切鉴定片段大小正确,并均可转染至伊马替尼治疗有效、无效的慢性期CML患者及健康志愿者来源的DC细胞.成功转染相应载体后的DC分别表现出IL-2和IFN-γ分泌量增加;细胞毒活性试验表明,转染后的DC可增加自体NK细胞对K562细胞的杀伤活性.结论：DC能够通过转染IL-21和GITRL基因的方式获得自我活化、上调自身细胞因子分泌的能力,为酪氨酸激酶抑制剂治疗无效的CML患者的免疫治疗奠定了理论依据和实验基础.     

人肺腺癌细胞总RNA电穿孔法转染的树突状细胞疫苗的体外抗肿瘤效应研究

目的探讨人肺腺癌细胞A549总RNA电穿孔法转染的树突状细胞(dendritic cell,DC)的特征及其特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)从血细胞分离机分离出的外周血采集物中诱导DCs产生,同时从人肺腺癌细胞A549中提取总RNA用以转染DCs,并用转染后的DCs与自体T细胞共同培养,诱导成为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)。实验分未转染DCs组,转染PBS的DCs组,转染RNA的DCs组,以流式细胞术(FCM)鉴定DCs、T细胞表型、RT-PCR证明总RNA转染效率,MTT检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平并比较各组差异。结果 1)RT-PCR证明电穿孔法可成功使A549的总RNA转染入DCs并可使DCs表达肿瘤抗原。2)RNA转染组的DCs表面标志物CD40、CD80、CCR-7、CD83、HLA-DR都呈强阳性表达,表达率明显高于PBS转染组DCs和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);3)流式结果显示RNA转染的DCs刺激后的T细胞表面标志物CD8比例明显上升;4)RNA转染组IL-12、IFN-γ分泌水平明显高于PBS转染组和未转染组(P<0.05);5)RNA转染组DCs可以有效刺激T淋巴细胞增殖,并且诱导肿瘤特异性CTLs产生,对A549细胞产生特异性杀伤作用。而PBS转染组与未转染组则无明显作用(P<0.05)。结论利用电转染法可成功将A549的总RNA转入DCs内并使其表达肿瘤抗原,在体外能诱导肿瘤特异性免疫反应。     

银屑病患者外周血树突状细胞功能的体外研究

目的研究寻常型银屑病患者外周血树突状细胞(DC)激活及促进T淋巴细胞分化的功能。方法用体外培养细胞法培养DC,流式细胞术检测DC细胞表面标志,ELISA法检测培养细胞上清中IL-12、IL-4、IFN-γ和IL-1β的含量。结果银屑病患者DC与正常人相比,其细胞表面标志CD83和CD86表达率明显升高(P<0.001),分泌IL-12明显增多(P<0.05),IL-4和IL-1β分泌明显减少(P<0.001),IFN-γ分泌无差异。结论寻常型银屑病患者外周血DC的抗原提呈能力和激活T淋巴细胞的功能增强,而且促进TH0向TH1分化的能力增强。     

树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞增殖和抗白血病作用影响的研究

目的探讨树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)增殖能力、免疫表型、分泌细胞因子水平以及抗白血病细胞作用的影响。方法健康人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照。用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数,MTT法测定杀伤活性,流式细胞术分析免疫表型,ELISA双抗体夹心法检测分泌干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)的水平。结果DC-CIK细胞增殖能力明显高于CIK细胞(P<0.05);DC、CIK细胞共培养后,CD3 CD8 、CD3 CD56 双阳性细胞比率较同条件下CIK细胞组显著增多(P<0.05);共培养3d,DC-CIK细胞上清液中IL-12I、NF-γ分泌量均比CIK细胞单独培养的分泌量高(P<0.01,P<0.05);在5∶1~40∶1的效靶比范围内,DC-CIK细胞对白血病细胞的杀伤率显著高于CIK细胞(P<0.05),且杀伤率与效靶比呈正相关。结论DC增加CIK细胞的增殖能力和抗白血病活性。可作为一种临床有效的抗白血病免疫治疗策略。     

Induction of ErbB-2/neu-specific protective and therapeutic antitumor immunity using genetically modified dendritic cells: enhanced efficacy by cotransduction of gene encoding IL-12

Overexpression of ErbB-2/neu occurs in 20-30% of patients with breast cancer and indicates a poor prognosis. The presence of a detectable immune response to ErbB-2/neu in some patients suggests that this oncogene may be a useful target for vaccine therapy. We evaluated whether genetic immunization using dendritic cells (DC) transduced ex vivo with an adenovirus expressing the ErbB-2/neu gene (AdNeuTK) could induce protective and therapeutic immunity against a breast tumor cell line overexpressing ErbB-2/neu. Subcutaneous (s.c.) immunization with the DC vaccine elicited protective immunity in an average of 60% of animals. CTL analysis demonstrated specific cytotoxic activity against breast tumor cells, as well as syngeneic fibroblasts transduced with AdNeuTK. In vivo depletion studies demonstrated both CD4+ and CD8+ T cells were required. In a therapeutic setting, immunization with the DC vaccines could cure mice with pre-established tumors and efficacy was further enhanced by cotransducing DCs with a vector expressing murine IL-12 (AdmIL-12). These studies support DC vaccines as a therapeutic strategy for human breast cancer, while emphasizing the importance of optimizing an immune response by combining tumor antigen presentation with immunostimulatory cytokines.     

术后择时注射DC疫苗对乳腺癌患者免疫应答影响的研究

目的比较乳腺癌术后择时皮内注射树突状细胞（DC）疫苗对患者免疫应答的影响。方法将129例接受DC疫苗治疗的乳腺癌患者随机分为观察组和对照组,观察组于治疗当天下午19;00进行DC回输,对照组按常规治疗于上午8：00回输。两组患者均于治疗前、中（第2次回输后1周）、后（第4次回输后1周）检测血清中IL-2、IL-12、IFN-γ及TNF-α四种细胞因子浓度,比较两组患者的免疫功能及两组患者注射时的舒适度。结果两组患者DC治疗中、治疗后IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α,浓度与治疗前相比差异均有显著意义（P〈0．05）;两个回输时间对患者的舒适度影响差异有显著意义（P〈0．05）。结论乳腺癌DC疫苗治疗都能有效激发患者Th1型免疫应答,但回输时间对DC疫苗诱导的患者免疫应答无影响。择时注射DC疫苗可提高患者的舒适度。     

白细胞介素2基因和白细胞介素3基因共转染白血病瘤苗的抗白…

目的：研究白细胞介素２（ＩＬ－２）和白细胞介素３（ＩＬ－３）基因共转染的白血病细胞瘤苗对白血病的小鼠的治疗效果。方法：用ＩＬ－２重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－２）和（或）ＩＬ－３重组腺病毒转染红白轿病细胞株ＦＢＬ－３，＾６０Ｃｏ射后制备成瘤苗对实验性白血病小鼠进行治疗，观察肿瘤生长，小鼠生存期及治疗后小鼠腹腔巨噬细胞，ＮＫ细胞，诱导杀伤性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤活性，并与低剂量环磷酰胺合用，观察其抗肿瘤     

Adenovirus-mediated interleukin-12 gene therapy for prostate cancer: suppression of orthotopic tumor growth and pre-established lung metastases in an orthotopic model.

Interleukin-12 (IL-12) can elicit potent antitumoral effects that involve the recruitment of specific immune effector cells. We investigated the efficacy of a single injection of a recombinant adenovirus expressing murine IL-12 (AdmIL-12) directly into orthotopic mouse prostate carcinomas generated from a poorly immunogenic cell line (RM-9) derived from the mouse prostate reconstitution system. Significant growth suppression (> 50% reduction of tumor weight) and increased mean survival time (23.4 to 28.9 days) were observed compared with controls. Suppression of pre-established lung metastases was also observed following the injection of AdmIL-12 into the orthotopic tumor. Cytolytic natural killer cell activity was markedly enhanced 1-2 days after virus injection. Immunohistochemical analysis showed significantly elevated intratumoral infiltration of CD4+ and CD8+ T cells 7 days after virus injection. However, splenocyte-derived cytotoxic T lymphocytes were not detected during the 14 days following treatment. Increased numbers of nitric oxide synthase-positive macrophages were seen in the AdmIL-12 treated group 7 days following injection. Systemic inhibition of natural killer cells with antiasialo-GM1 serum led to increased numbers of lung metastases in AdmIL-12-treated orthotopic tumors but did not affect local tumor growth. In this model system the antitumor effects of a single injection of adenovirus-mediated IL-12 appears to be based to a large extent on the activation of nitric oxide synthase in macrophages and possibly T cell activities, whereas the relatively early cytolytic activity of natural killer cells are largely but not exclusively responsible for the antimetastatic effects.     

脐血DC—CIK细胞增殖及其对淋巴瘤细胞细胞毒作用的研究

目的研究脐血DC-CIK细胞增殖能力、免疫表型、分泌细胞因子水平及其对淋巴瘤细胞的细胞毒作用。方法采集脐血单个核细胞诱导DC和CIK细胞。将DC和CIK细胞按1：5的比例混合培养,以脐血CIK细胞为对照。用流式细胞术分析细胞表型,台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数,MTT法检测效应细胞杀伤淋巴瘤细胞的活性,ELISA法测定分泌干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF—α）、白细胞介素-12（IL-12）的水平。结果脐血DC—CIK细胞增殖能力显著高于单纯CIK细胞（P〈0．05）;DC,CIK细胞共培养后,CD3^＋CD8^＋和CD3^＋CD56^＋细胞比例较同条件下CIK细胞明显增多（P〈0．05）;混合培养3d,脐血DC—CIK细胞上清液中IL-12,IFN-γ,TNF—α含量均比CIK细胞单独培养分泌量高（P〈0．01,P〈0．05,P〈0．05）;在2．5：1～20：1效靶范围内,脐血DC—CIK细胞对淋巴瘤细胞的杀伤率明显高于CIK细胞（P〈0．05）,且对HL和NHL细胞杀伤活性无显著差异。结论脐血DC可增强同源CIK细胞的增殖活性和抗淋巴瘤效应。因脐血来源丰富,且输注不易引起严重的移植物排斥反应,其DC—CIK细胞在免疫治疗方面应有更广泛的临床应用前景。     

基因工程肿瘤细胞融合疫苗诱导Th1应答抗肿瘤

目的　探讨基因工程肿瘤细胞融合疫苗的抗肿瘤作用。方法　将鼠源性IL 12 (mIL 12 )基因转染J5 5 8细胞制备工程瘤细胞 ,再与树突状细胞进行融合后免疫BALB c小鼠 ,14d后再以不同剂量的瘤细胞攻击小鼠以观察其保护效力。结果　制备的工程瘤细胞J5 5 8经测试其培养上清中mIL 12表达量为 (870± 6 0 )pg·(10 5细胞 ) - 1 ·ml- 1 ;与树突状细胞体外融合后 ,镜下测得细胞融合率约为 30 % ;收集免疫小鼠腹股沟及月国窝淋巴结细胞与肿瘤细胞共培养 ,其上清IFN γ含量较对照组高 ;体内、外特异性抗肿瘤实验均显示该型瘤苗具有良好的抗瘤作用。结论　免疫小鼠体内诱导Th1应答 ,其明显的抗肿瘤功效为临床应用提供了可能性     

SOCS1-siRNA沉默SOCS1基因表达对脐血树突状细胞生物学活性的影响

目的采用RNA干扰技术抑制脐血树突状细胞(DC)SOCS1基因表达,并检测其对树突状细胞生物学活性的影响,为树突状细胞的临床应用奠定基础。方法针对SOCS1基因,采用化学合成法合成SOCS1siRNA,并转染脐血DC。RT-PCR和Western blot检测转染前后DC的SOCS1基因表达;流式细胞术检测细胞表面CD80、CD86及HLA-DR分子表达情况;ELISA法检测细胞培养上清中IL-12水平。结果与对照组相比,siRNA组SOCS1蛋白质表达水平降低,差异有统计学意义;DC表面CD80、CD86及HLA-DR分子表达上调,DC培养上清中IL-12的浓度显著提高。结论 RNA干扰技术能显著下调脐血树突状细胞SOCS1的表达,为以DC SOCS1为靶向的抗肿瘤治疗提供了新思路和新手段。     

树突状细胞疫苗调节慢性乙型肝炎患者细胞因子诱导的杀伤细胞相关免疫功能的研究

目的研究树突状细胞（DC）疫苗对培养的慢性乙型肝炎（CHB）患者细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）免疫功能的调节作用。方法采用体外细胞培养的方法培养30例CHB患者CIK细胞,分为DC疫苗组和无DC疫苗组,培养14d后用流式细胞术检测各组ClK中CD3’CIM’、CD3’CD8’及CD3’CD56’T细胞的所占比例,ELISA方法检测培养上清中自细胞介素-12（IL-12）、γ干扰素（IFN-1）及白细胞介素-4（IL4）的浓度。结果DC疫苗组CD3^＋CIM^＋、CD3^＋CD8^＋及CD3^＋CD56^＋T细胞所占比例分别为18．27％、64．36％和20．00％,无DC疫苗组则分别为17．79％（P〉0．05）、54．69％（t=4．130,P〈0．01）和13．39％（t=5．601,P〈0．01）。DC疫苗组的CIK培养上清中IL．12、IL4及IFN-1的浓度分别为（177．82±130．06）、（31．774-9．52）、（86．99±56．30）ng/L,无DC疫苗组分别为（80．83±50．15）n∥L（t=3．811,P〈0．01）、（40．33±19．74）ng／L（t=2．141,P〈0．05）和（42．07±19．68）ng／L（t=4．125,P〈0．01）。结论CIK细胞培养中加入DC疫苗进行诱导,增强了所培养CIK细胞的杀伤活性。     

白介素21对树突状细胞诱导的CTL抗白血病作用的影响

本研究探讨白介素21（IL-21）对树突状细胞（DC）诱导的CTL抗白血病的体外作用。以不同细胞因子诱导培养急性白血病（AL）患者缓解期外周血单个核细胞产生DC，自体AL细胞RNA作为抗原负载DC，与自体T淋巴细胞共培养诱导白血病特异性CTL产生；用LDH释放法检测CTL杀伤自体AL细胞的作用，并检测CTL产生IFN-γ和TNF-α的变化。实验共分2组：实验组，在DC—CTL共培养过程中加用IL-21（200ng／ml）；对照组，不加IL-21。同时对IL-21单独作用培养后成熟DC，检测其表面抗原表达变化以及诱导同种混合淋巴细胞反应能力。结果表明：对照组和实验组的CTL产生率分别为：（56．73±10．21）％，（73．43±18．01）％（P〈0．01）；培养上清中IFN-γ和TNF-α分别为：（154．91±67．20）ng／L，（310．62±141．15）ng／L（p〈0．01）和（8．77±5．09）μg/L，（15．25±6．56）μg／L（p〈0．01）。在效靶比为20：1时，两组对自体AL细胞的杀伤作用分别为（50．22±5．07）％，（75．38±9．47）％（P〈0．01）；IL-21作用后的成熟DC的CD1a、CD83、CD86、CD80和HLA—DR表达没有明显变化；诱导同种混合淋巴细胞反应能力亦没有明显不同。结论：IL-21可促进DC诱导的CTL增殖、增加IFN--γ和TNF—α产生从而增强其抗白血病作用；IL-21对成熟DC表面抗原表达及其免疫功能无明显影响；提示IL-21在白血病免疫治疗中发挥一定的作用，具有潜在的临床应用价值。     

人外周单个核细胞来源树突细胞成熟与肺炎支原体膜脂蛋白的影响

目的：实验着眼于肺炎支原体膜脂蛋白对人外周血单个核细胞来源的树突细胞的表型（CD83，CD86）及分泌细胞因子的作用，探讨肺炎支原体加重哮喘的机制是否是改变了树突细胞的性状。 方法：①对象：所有外周血采自正常人，志愿献血者为武汉大学医学院2005级硕士博士研究生6人：实验用肺炎支原体膜脂蛋白购自广州华银医药科技有限公司。②实验过程及分组：从肘静脉采集志愿者20mL新鲜全血，以不连续密度梯度离心法及贴壁法获取单核细胞，加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，重组人白细胞介素4培养5d得到不成熟树突细胞后，分别予肺炎支原体膜脂蛋白，脂多糖和空白刺激再培养2d。③评估：用流式细胞仪检测各组树突细胞表面表达CD83，CD86的情况，用酶联免疫吸附法检测各组树突细胞分泌白细胞介素12的水平。 结果：①肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞表达CD83，CD86高于未刺激组（P〈0．01，P〈0．01）;脂多糖组树突细胞表达CD83，CD86高于末刺激组（P〈0．01，P〈0．01）;肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞表达CD83较脂多糖组无差异，表达CD86高于脂多糖组（P〈0．05）。②肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞分泌白细胞介素12高于未刺激组（P〈0．01）;脂多糖组树突细胞分泌白细胞介素12高于未刺激组（P〈0．01）；肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞分泌白细胞介素12低于脂多糖组（P〈0．05）。 结论：肺炎支原体膜脂蛋白可刺激未成熟树突细胞分化成熟，但较脂多糖刺激的不同，前者刺激成熟的树突细胞在呈递抗原给T细胞时，可进一步使T细胞向Th2极化，导致Th1／Th2平衡失调，从而加重哮喘。