大豆磷脂脂质体对谷氨酸所致体外神经细胞损伤的保护作用

目的：观察大豆磷脂脂质体对谷氨酸引起培养神经细胞兴奋毒性损伤的保护作用，并探讨其可能的作用机制。 方法：①实验于2004-11／2005-06在锦州医学院生化实验室完成。选用清洁级新生0～1dSD大鼠12只。取大脑皮质神经细胞进行原代培养8—10d后，随机分为3组：正常对照组、损伤组和大豆磷脂脂质体保护组。损伤组加入谷氨酸（终浓度1&;#215;10^-4mol／L）作用3h，造成神经细胞的损伤，大豆磷脂脂质体保护组在谷氨酸损伤处理的同时加入0．2，0．4，0、8，1.6g／L的大豆磷脂脂质体。②参照由南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书测定培养液中乳酸脱氢酶活力和一氧化氮含量。培养神经细胞中丙二醛含量、超氧化物歧化酶及一氧化氮合酶活力测定参照由南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书进行。蛋白质定量用考马斯亮兰试剂盒测定。③多样本均数检验采用方差分析的方法，方差分析差异有显著性后再进行样本的两两比较（Q检验）。 结果：①培养上清液中乳酸脱氢酶活力、一氧化氮含量及培养神经细胞一氧化氮合酶活力：损伤组明显高于正常对照组（P〈0．01），大豆磷脂脂质体各质量浓度保护组明显低于损伤组（P〈0．01）。②培养神经细胞丙二醛含量：损伤组明显高于正常对照组（P〈0．01），大豆磷脂脂质体各质量浓度保护组明显低于损伤组（P〈0．01）。③培养神经细胞超氧化物歧化酶活力：损伤组明显低于正常对照组（P〈0．01），大豆磷脂脂质体各质量浓度保护组明显高于损伤组（P〈0．01）。大豆磷脂脂质体保护作用随着其质量浓度增加（0．2-0．8g／L）而增强，但当剂量达到一定浓度（1．6g／L），该保护作用不再随着浓度的升高而增强。 结论：大豆磷脂脂质体对谷氨酸引起的培养神经细胞兴奋毒性损伤具有显著的保护作用，且存在大豆磷脂脂质体质量浓度依赖性；该种保护作用发生机制可能与大豆磷脂脂质体抗脂质过氧化作用有关。     

藻酸双酯钠对培养大鼠神经细胞缺氧缺糖性损伤的保护作用

目的：观察藻酸双酯钠对缺氧缺糖培养所致大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用。方法：实验于2002年在郑州大学医学院药理教研室完成。体外培养大鼠胚贻皮质神经细胞，以缺氧加缺糖培养建立神经细胞损伤模型，通过测定乳酸脱氢酶，一氧化氮，丙二醛及超氧化物歧化酶活性和细胞内钙离子浓度，以观察藻酸双酯钠对培养神经细胞缺氧缺糖性损伤的保护作用，并采用流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率。结果：①神经细胞缺氧缺糖性损伤后，细胞死亡数明显升高，乳酸脱氢酶含量显著增加，藻酸双酯钠各浓度（50，100，150mg／L）均能显著减少细胞死亡，降低乳酸脱氢酶漏出量[（865．17&;#177;69．18），（733．48&;#177;58．51），（504．27&;#177;80．02）．（1051．88&;#177;46．84）μkat／g，P〈0．05／P〈0．01]；②神经细胞损伤后，一氧化氮含量及细胞内丙二醛含量显著增加，超氧化物歧化酶活性显著降低。藻酸双酯钠各浓度（50，100，150mg／L）均可显著降低一氧化氮及丙二醛含量、升高超氧化物歧化酶活性（P〈0．05，P〈0．01）；③神经细胞损伤后细胞内钙离子含量显著增加，藻酸双酯钠各浓度（50，100，150mg／L）均可显著降低细胞内钙离子含量（抑制率分别为：27％，35％，54％）；④神经细胞平均凋亡率为（32．8&;#177;6．5）％，藻酸双酯钠50，100，150mg／L分别使细胞平均凋亡率降为（22．3&;#177;5．1）％、（13．2&;#177;4．4）％、（7．9&;#177;3．5）％。结论：藻酸双酯钠对培养神经细胞缺氧缺糖性损伤具有显著的保护作用，其机制可能与藻酸双酯钠降低一氧化氮含量、降低细胞内钙离子累积，抗过氧化作用以及抑制细胞凋亡有关。     

脑力智宝对乳鼠脑皮质神经细胞和PC12细胞生长发育的影响

目的：从细胞学角度研究脑力智宝在维持神经元存活和促进神经突起生长方面的保护作用。方法：将SD大鼠分为脑力智宝提取物高剂量组(0．63g／L)、低剂量组(0．04g／L)和对照组，连续给药7次后眼球取血制备含药血清，用MTT法检测脑力智宝对原代培养神经细胞生长发育的影响；用分散培养法培养PCI2细胞，测定加入不同浓度脑力智宝提取物(0．63和0．04g／L)、脑力智宝含药血清(6和3g／kg)、神经生长因子后PC12细胞在24，48和72h的突起阳性细胞百分比。结果：脑力智宝对PC12细胞具有营养作用。使细胞突起增加增长。阳性细胞数增多，48h时0．63g／L脑力智宝提取物可使阳性细胞百分数从模型组的17．2％提高到38．4％(t=4．89，P&;lt;0．01)，3g／kg脑力智宝含药血清可使阳性细胞百分数达到69．0％(t=9．37，P&;lt;0．01)，并可促进原代培养鼠脑皮质神经细胞的生长发育，MTT法检测A值明显增加，尤以0．63g／L脑力智宝提取物(t=4．79，P&;lt;0．01)和3g／kg脑力智宝(P&;lt;0．01，t=8．81)组作用明显。0．63g／L脑力智宝提取物可显著促进PCI2细胞增殖，在2，4和6d时分别可使PC12细胞数目较对照组分别增加1．56，1．85和2．96倍，差异均有显著性意义(t=2．67，5．27，3．12；P&;lt;0．05-0．01)，均与对照组比较有显著性差异；6g／kg含药血清组亦显著增加。脑力智宝提取物和含药血清均可促进无血清培养神经细胞轴突生长，对原代培养的神经细胞均具有促进生长作用，使突起阳性细胞数增加。结论：脑力智宝具有促进乳鼠脑皮质神经细胞和PC12细胞生长发育的作用。     

人参皂甙Rb1抗新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡研究

目的探讨人参皂甙Rb1对体外培养的新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的保护机理。方法应用“Neurobasal加B2 7Supplement”体外培养大鼠大脑皮层神经细胞 ,并在缺氧条件下使用台盼蓝拒染法、Hoechst 3 3 3 42荧光染色法、免疫细胞化学染色法观察人参皂甙Rb1对原代神经细胞的抗凋亡保护作用。结果在 10— 10 0 μg/ml的浓度范围内 ,人参皂甙Rb1能降低缺氧诱导的神经细胞凋亡率 (10 0 μg/ml组 ,P <0 .0 5 ) ,增加缺氧神经细胞Bcl 2蛋白的表达 (5 0— 10 0 μg/ml组 ,P <0 .0 5 ) ,同时减少Bax蛋白的表达 (5 0— 10 0 μg/ml组 ,P <0 .0 5—P <0 .0 0 1) ,提高Bcl 2 /Bax比值 (5 0— 10 0 μg/ml组 ,P <0 .0 5 )。 结论在 5 0— 10 0μg/ml的浓度范围内 ,人参皂甙Rb1通过上调缺氧神经细胞Bcl 2表达和下调Bax表达 ,避免缺氧神经细胞凋亡。     

神经细胞老化过程中细胞内脂质过氧化反应程度和超氧化歧化酶活性的动态变化

目的：观察体外培养的小鼠神经母细胞瘤细胞A2无血清培养条件下分化成神经细胞过程中，细胞内脂质过氧化的主要产物-丙二醛和自由基清除剂超氧化物歧化酶的变化，探讨脂质过氧化反应程度和抗氧化能力与细胞老化的相关性。方法：实验于2004—04／2005—02在上海第二医科大学附属仁济医院神经内科神经生物学实验室进行。①建立神经细胞老化实验模型：传代培养的小鼠神经母细胞瘤细胞A2中加入无血清培养液后，在37℃、含体积分数为0．05的CO2的空气中培养，24h后换培养液，以后每隔3d更换培养液；按不同的培养天数分为培养1，7和14d组。各组在培养至相应的天数后终止培养。②评估神经细胞变化的指标检测：采用显微荧光分光光度计测定细胞老化指标脂褐素水平（相对荧光值）反映细胞老化程度；以比色法测定细胞内丙二醛浓度评估细胞脂质过氧化程度，亚硝酸盐比色法得出超氧化物歧化酶活性反映细胞的抗氧化能力。结果：①细胞内脂褐素相对荧光值：培养1，7和14d组分别是（11．55&;#177;0．9）％，（22．41&;#177;1．99）％和（29．51&;#177;4．57）％，组间比较差异显著（F=478．04，P〈0．01）。②丙二醛浓度：培养1，7和14d组分别是（0．90&;#177;0．20），（1．91&;#177;0．19）和（2．98&;#177;0．20）μmol／L；组间比较差异显著（F=148．31，P〈0．01）。③超氧化物歧化酶活性：培养1，7和14d组分别是（685．30&;#177;107．85），（372．07&;#177;74．35）和（175．04&;#177;29．67）μkat／L：组间比较差异显著（F=66．10，P〈0．01）。结论：①随着无血清培养天数的增加，小鼠神经母细胞瘤细胞A2细胞内脂褐素逐渐增多，细胞在不断衰老。②细胞内丙二醛浓度随细胞老化而不断增加，而超氧化物歧化酶活性却随着细胞老化而下降。说明神经细胞的老化与细胞内脂质过氧化反应呈正相关，与细胞的抗氧化能力呈负相关。③体外神经细胞老化实验研究模型是科学和客观的，具有很强的应用价值。     

黄芪多糖对粒单核系造血细胞的抗凋亡作用

本研究探讨黄芪多糖（astragalus polysaccharide,ASPS）体外对骨髓粒单核前体细胞的增殖作用和对HL-60细胞株凋亡的影响及其可能的作用机理.观察不同浓度（0,50,100,200 μg/ml）的黄芪多糖和TPO（100 ng/ml）对骨髓集落形成单位CFU-GM和HL-60集落生成的影响.用无胎牛血清（或1％）的改良型RPMI 1640培养液诱导HL-60细胞凋亡,加入或者不加入黄芪多糖共培养72 h后,进行细胞计数并用Annexin V/PI双标记流式细胞术检测凋亡指标Caspase-3和JC-1的表达,并与正常组比较.结果表明,黄芪多糖（100,200 μg/ml）与TPO在体外能明显促进人骨髓细胞集落CFU-GM形成,同时黄芪多糖（50,100 μg/ml）也能促进HL-60细胞集落生成且其最大作用浓度为100 μg/ml,未发现其与TPO具有协同促进增殖的作用.无胎牛血清的RPMI 1640培养液能降低HL-60细胞的增殖,诱导细胞凋亡.HL-60细胞经黄芪多糖作用72 h后,与对照组相比细胞计数明显上升,由19×104个上升到34×104个（P＜0.05）,caspase-3表达相对于对照组明显下降,分别由10.5％,14.1％降至7.2％（P＜0.05）,7.8％（P＜0.05）.结论：黄芪多糖和TPO均能促进骨髓CFU-GM和HL-60细胞集落的生成;在无胎牛血清RPMI 1640培养液诱导细胞凋亡的情况下,黄芪多糖显著减少HL-60细胞的凋亡,保护HL-60细胞.     

抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞的影响

目的：观察体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞在模拟脑缺血再灌注损伤中的活性、存活率和无血清条件培养液蛋白含量的变化以及中药抗呆Ⅰ号的影响。方法：先对分离纯化培养的星形胶质细胞进行体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立，然后采用MTT法对星形胶质细胞的活性和存活率进行测定以及用Bradform法对星形胶质细胞条件培养液中蛋白质含量进行测定。结果：体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞在体外模拟脑缺血再灌注损伤中的活性、存活率、无血清条件培养液蛋白含量的变化具有一定的规律性，可分细胞损伤期、功能代偿期、功能低下期和功能恢复期。抗呆Ⅰ号可使受损的星形胶质细胞的活性明显增强(与模型组相比多数时间点比较(t=2．074，P&;lt;0．05)。存活率显著提高(与模型组相比多数时间点P&;lt;0．05，t&;gt;2．219)，使其条件培养液中的蛋白含量迅速增高(与模型组相比多数时间点，t&;gt;5．087，P&;lt;0．001)。结论：抗呆Ⅰ号可能通过保护星形胶质细胞免受损伤或使其分泌功能增强，从而间接地发挥星形胶质细胞对神经元的保护和修复作用。     

三磷酸腺苷保护脊髓损伤神经元的细胞活力

目的：观察核苷酸类神经营养因子三磷酸腺苷对大鼠脊髓神经元损伤后细胞活力的影响。方法：取新生Wistar大鼠20只，切取脊髓，剪碎组织成糜状进行神经细胞培养。将培养的神经细胞分为3组，①无损伤对照组。继续完全培养液培养。②损伤组，培养第7天神经元用微量移液器塑料滴头行机械性划痕损伤后完全培养液培养。③三磷酸腺苷组，培养第7天神经元划痕损伤后加人终浓度为1．0mmol／L的三磷酸腺苷培养液培养。倒置相差显微镜观察细胞生长及不同时期细胞形态变化，各组于处理后10min，1，12，24和48h，细胞损伤程度，以乳酸脱氢酶法检测(乳酸脱氢酶渗漏量比值越大，说明细胞损伤越重)。检测各组细胞活性采用四甲基偶氮唑盐比色法(四甲基偶氮唑盐代谢率吸光度越高，说明细胞活性越高)。结果：①各组细胞损伤程度评估：以培养液中乳酸脱氢酶含量表示。伤后1，12，24和48h，损伤组和三磷酸腺苷组较对照组明显增加(P&;lt;0．05)；损伤24和48h，三磷酸腺苷组低于损伤组(17．94&;#177;0．82．23．05&;#177;1．04；18．52&;#177;1．12，24．88&;#177;1．16；P&;lt;0．05)。②体外培养的各组大鼠损伤神经元的变化：以四甲基偶氮唑盐代谢率表示。伤后1，12,24和48h，损伤组和三磷酸腺苷组明显低于对照组(P&;lt;0．05)，损伤24和48h，三磷酸腺苷组高于损伤组(0．24&;#177;0．03，0．18&;#177;0．04：0．27&;#177;0．03，0．15&;#177;0．05：P&;lt;0．05)。结论：细胞外三磷酸腺苷可以减轻机械性损伤后的脊髓神经元的损伤程度，增强细胞活力，对受损伤的神经元有一定的保护作用。     

水翁花对神经细胞氧化损伤保护作用的量效值

背景：水翁花为中药桃金娘科植物水翁的干燥花蕾,已有报道水翁花提取物能通过抑制Na＋/K＋-ATP酶的活性加强心脏的收缩功能,同时降低心脏的收缩频率,水翁花提取物是否具有抗氧化方面的生物活性？目的：观察水翁花对过氧化氢诱导的PC12神经细胞氧化损伤保护作用的量效关系.设计：非随机对照的实验.单位：华东理工大学生物工程学院生物反应器国家重点实验室.材料：实验于2002-05/11在华东理工大学反应器国家重点实验室鲁华生物技术研究所完成.选择昆明种雄性小鼠8只.PC12神经细胞购自中国科学院上海细胞所.方法：制备神经细胞氧化损伤模型.①水翁花细胞毒性测定：在96孔微量培养板中加入PC12神经细胞,水翁花以RPMI 1640培养液稀释成0.001,0.01,0.1,0.5,1 g/L 5个浓度,每个浓度3孔,每孔接种2&;#215;103个细胞,另设空白对照组,即无药培养液组.标准条件下培养48 h,噻唑蓝比色法测定.②PC12神经细胞预先接种于96孔板中,培养24 h贴壁,分为正常对照组（正常细胞,不加H2O2和水翁花提取物）、0,0.01,0.1,0.5,1g/L水翁花提取物共7个组.除正常对照组外,其余细胞用200 μmol/L的H2O2处理,加入不同浓度的水翁花水提物,作用12 h后用噻唑蓝法测定细胞的存活率.③氧自由基水平测定：PC12神经细胞处理同存活率测定法,采用CDCFH染色法测定细胞氧自由基水平.主要观察指标：①水翁花提取物对PC12神经细胞的毒性.②水翁花提取物对氧化损伤的PC12神经细胞存活率影响.③水翁花提取物对氧化损伤的PC12神经细胞内、细胞外氧自由基水平的影响.结果：①水翁花提取物在浓度低于0.055 g/L时,对神经细胞有保护作用,在0.055～1.00 g/L浓度时,对细胞生长几乎无任何影响.②在低于0.10 g/L的浓度下,水翁花提取物对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤没表现出明显的保护作用.但当浓度为1.00 g/L时,对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤表现出明显的氧化修复能力.③H2O2损伤后,PC12细胞内、外氧自由基水平显著升高,当水翁花提取物浓度为0.01 g/L时,能明显的降低氧化损伤神经细胞内、外的氧自由基水平.结论：①水翁花水提物对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤亦有很强的保护作用.②水翁花提取物抗氧化特性与提取液的浓度比有明显的关系,当浓度为1.00 g/L时,具有明显的修复能力;当浓度为0.01 g/L时能够降低细胞内外的氧自由基水平.     

脑损伤保护作用的基础研究：神经元兴奋性氨基酸损伤保护模型的建立

目的：建立体外培养神经细胞N-甲基-D-天冬氨酸(N．methyl-D-aspartate，NMDA)损伤及地佐环平(MK-801)保护作用模型。方法：采用原代培养的大鼠皮质神经细胞模型，给予NMDA直接损伤，加入MK-801，在不同时间窗测定不同剂量时神经细胞损伤的形态学，及生化改变。结果：NMDA 100μmol／L组细胞死亡率和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率分别为(54．30&;#177;3．79)％，(67．13&;#177;5．90)％，NMDA的损伤作用具有明显的浓度时间依赖性，至NMDA 1000μmol／L组细胞死亡率和LDH漏出率分别为(97．74&;#177;7．28)％，(94．10&;#177;6．31)％，MK-801具有明显的保护作用。结论：NMDA和其拮抗剂MK-801具有明显的剂量和时间依赖损伤和保护作用，LDH测定是检测其变化的良好指标，此实验可以作为神经元兴奋性氨基酸毒性损伤保护因素的检验模型。     

不同培养条件下胚胎神经干细胞分化细胞中神经元所占比例的比较

目的比较细胞因子(bFGF、EGF)、B27及血清对胚胎神经干细胞分化的影响。方法从孕16-18d大鼠胚胎脑室旁组织分离神经干细胞,进行原代培养,分为B27组、bFGF+EGF组(联合组)、血清组及对照组;每天观察细胞生长状况。结果培养细胞呈Nestin免疫阳性;各组均可见干细胞的生长及分化。免疫荧光双标及图象分析结果B27组及联合组神经干细胞分化为神经元的比例大,联合组更突出(P<0.01);血清组及对照组神经干细胞组分化为胶质细胞比例较大,血清组更突出(P<0.01)。结论神经干细胞的分化同时受到内在基因和外在环境的影响,bFGF、EGF可促进NSC细胞生长,并对细胞分化为神经元起很大作用。     

甲泼尼龙抑制神经干细胞并诱导其凋亡的研究

目的：研究甲泼尼龙对体外培养的神经干细胞的直接作用，为有效的结合这两种治疗方法提供依据和指导。方法：体外培养神经干细胞，加入MP培养12h、24h和48h后，用细胞活性检测试剂CCK-8，检测其对神经干细胞活性的影响，用Hoeehst 33258染色观察细胞凋亡，用Annexin V／PI双染色法检测神经干细胞凋亡比率。结果：甲泼尼龙对体外培养的活性有抑制作用，而且可以诱导体外培养的神经干细胞的发生凋亡。结论：甲泼尼龙不利于神经干细胞的生长，不宜在进行甲泼尼龙冲击疗法的同时进行神经干细胞移植。     

含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子培养基先后作用培养建立大鼠胚胎神经干细胞克隆的实验

背景体外培养获得神经干细胞的有效方法是干细胞实验研究中很值得关注的问题.目的观察应用含有不同生长因子的培养基体外培养神经干细胞的有效方法.设计单一样本观察.单位四川大学生命科学院细胞生物学实验室.材料孕14 d SD大鼠10只,DMEM/F12 11,碱性成纤维细胞生长因子,表皮生长因子;巢蛋白抗体IgG,β-微管蛋白Ⅲ抗体Ig G,胶质纤维酸性蛋白抗体Ig G,生物素标记二抗和三抗、异硫氰酸荧光素标记二抗.方法实验于1999/2001在四川大学生命科学院细胞生物学实验室完成.①从胎鼠前脑取出脑组织,采用酶消化、机械吹打、离心、培养原代神经干细胞克隆.②神经干细胞以2×108L-1密度接种培养,分4组,每组6瓶细胞,DMEM/F12组加入DMEM/F12(11)培养基含体积分数为0.1的小牛血清;碱性成纤维细胞生长因子组培养基为含20μg/L碱性成纤维细胞生长因子;表皮生长因子组培养基含30μg/L表皮生长因子;碱性成纤维细胞生长因子+表皮生长因子组先用含碱性成纤维细胞生长因子的培养基培养2 h后再换成含表皮生长因子的培养基培养.培养24 h后更换培养瓶,培养14 d后显微镜下计数原代克隆数,免疫组化法检测干细胞特殊标记蛋白巢蛋白的表达.主要观察指标①神经干细胞的原代克隆.②单细胞克隆培养结果.③诱导分化结果.结果①从胎鼠脑中分离的细胞具有连续传代形成克隆的能力,免疫荧光化学显示细胞球内细胞巢蛋白表达阳性.②采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子培养基先后作用培养的方法形成神经干细胞克隆率最高(0.630%).③培养的神经干细胞克隆能诱导分化成神经元和神经胶质细胞.结论①结果证实培养分离的细胞是神经干细胞.②采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子培养基先后作用培养的方法是获得神经干细胞的有效方法.     

骨髓间充质干细胞表达神经营养因子及对神经干细胞的保护作用

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）表达脑源性神经营养因子（BDNF）和神经生长因子（NGF）以及BMSC条件培养液对神经干细胞的保护作用。方法 取大鼠骨髓培养BMSC，用CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色进行鉴定。提取BMSCmRNA，RT-PCR检测BDNF和NGF表达，ELISA检测BMSC培养液中BDNF和NGF的含量。原代取材培养新生大鼠皮质神经干细胞，nestin染色鉴定。用不同比例的BMSC条件培养液培养神经干细胞24h后，热休克诱导凋亡，流式细胞仪检测凋亡细胞比率。结果 BMSC贴壁生长，免疫细胞化学染色CD44和CD71阳性表达．CD45阴性表达。BMSC表达BDNF和NGFmRNA，BMSC培养液中含有BDNF和NGF；随培养时间的延长，培养液中BDNF和NGF的浓度增加。BMSC条件培养液可以减少热休克诱导的神经干细胞凋亡比率．并且BMSC条件培养液浓度高者有更好的保护作用。结论 BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF，对神绎千细朐凋亡有保护作用．     

黄芪注射液与胎儿安方治疗复发性流产临床观察

目的:观察黄芪注射液、胎儿安方治疗先兆流产的临床疗效,探讨其作用机理。方法:选择符合诊断标准的患者56例,连续用药2个疗程。结果:56例中痊愈53例,无效3例,总有效率94.6%。结论:黄芪注射液、胎儿安方对复发性先兆流产有良好的治疗作用,并可预防胎儿宫内发育迟缓。     

远志皂苷元对新生大鼠海马神经干细胞分化的影响

目的观察远志皂苷元对体外培养的胎鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法利用无血清DMEM/F12 体外培养技术从新生Wistar 大鼠大脑海马中培养NSCs,添加不同浓度(0、1、2、4 μg/ml)远志皂苷元。应用免疫荧光技术对NSCs及其分化后的细胞进行鉴定。结果培养的NSCs能够表达Nestin,并具有分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力。在同一接种密度条件下,远志皂苷元干预组的Nestin 阳性细胞数较对照组减少(P<0.05),神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数较对照组增加(P<0.05)。结论远志皂苷元能促进新生大鼠大脑海马NSCs的分化。     

纤维连接蛋白在小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞中的作用(英文)

目的:观察采用ITSF和N2无血清培养方法诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法:小鼠胚胎干细胞的培养和N2无血清条件培养基诱导为神经前体细胞,细菌培养皿法或悬滴法制备胚体,小鼠胚胎干细胞采用NBT/BCIP染色,神经前体细胞的nestin免疫组化染色采用ABC法。结果:细菌培养皿法或悬滴法培养胚体、ITSF或N2无血清培养基均能将小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞。纤维连接蛋白预处理培养表面,对胚体的贴壁情况影响不大,但能使无血清培养后存活的神经前体细胞明显增多。结论:小鼠胚胎干细胞在ITSF和N2培养基均能分化为神经前体细胞,在N2培养基中加入纤维连接蛋白能使存活的神经前体细胞数量增多。     

复方丹参对脑梗死患者神经功能缺损程度及自由基的影响

背景脑梗死有多种发病机制,自由基及其脂质过氧化作用参与了动脉粥样硬化和脑缺血后神经细胞的损害过程.复方丹参是一种临床上常用的治疗脑梗死和冠心病的活血化瘀中药,其作用机制还有许多不明之处.目的观察复方丹参对脑梗死患者神经功能缺损程度及自由基的影响,并探讨其可能作用机制.设计随机对照研究.单位一所大学医院的神经内科.对象2002-02/12锦州医学院附属第一医院神经内科住院患者538例,其诊断符合第四届全国脑血管病学术会议通过的"各类脑血管疾病诊断要点",均经脑CT扫描确诊,均为发病在72 h以内的首次发病的动脉粥样硬化性脑梗死患者.排除伴有心肌梗死、心力衰竭、心房颤动,肝肾功能不全,消化道出血,血管性痴呆和延髓麻痹以及中途不合作者.符合上述标准的患者为68例,其中男38例,女30例;年龄52～78岁,平均(64.62±5.80)岁.入选病例按先后顺序和对照组自愿原则采用抽签法随机分成研究组和对照组.方法两组基础治疗相同,研究组在此基础上加用复方丹参注射液,加入生理盐水250mL中静脉注射,1次/d,连用14 d为1个疗程;对照组应用血栓通注射液15 mL,加入生理盐水250 mL中静脉注射,1次/d,连用14 d为1个疗程.主要观察指标①临床神经功能缺损程度评分.②临床疗效评定.③血清脂质过氧化物(lipoperoxide,LPO)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的测定.结果两组治疗后神经功能缺损程度评分的减少经自身对照均具有统计学差异(研究组28.62±6.76比13.84±8.16和对照组28.58±7.05比21.52±8.24,t=8.134和t=3.796,P＜0.001),而研究组评分的减少更明显,与对照组治疗后比较差异有非常显著性意义(t=3.861,P＜0.001);复方丹参治疗脑梗死的有效率为88.24%,显著优于对照组(67.65%)(x2=4.19,P＜0.05);复方丹参能使患者血清的LPO水平[(8.69±1.28)nmol/L比(5.86±1.42)nmol/L,t=8.628,P＜0.001]明显降低,与对照组治疗后相比亦具有统计学差异[(5.86±1.42)nmol/L比(8.56±0.95)nmol/L,t=9.125,P＜0.001];同时显著升高血清的SOD活性[(26.25±4.64)mkat/g比(30.01±3.87)mkat/g,t=3.629,P＜0.001],与对照组治疗后相比亦具有统计学差异[(30.01±3.87)mkat/g比(26.33±4.14)mkat/g,t=3.778,P＜0.001 ].结论复方丹参能显著改善脑梗死患者的神经功能缺损程度,治疗脑梗死疗效确切;能降低脑梗死患者血清LPO含量,升高血清SOD活性.推测清除自由基和抗脂质过氧化损伤可能是其重要的机制之一,为其在临床上治疗脑梗死提供了进一步的理论依据.     

茯苓生脉饮对体外大鼠脑海马神经元、超氧化物歧化酶、丙二醛及脂褐素水平的影响

背景脂褐素的沉积、超氧化物歧化酶下降和丙二醛升高是衰老的重要表现,一些研究提示.中草药在延缓衰老方面具有明显的优势.目的观察茯苓生脉饮药物血清对离体大鼠脑海马神经元超氧化物歧化酶、丙二醛及脂褐素水平的影响,并与维生素E血清及空白血清作对照.设计随机对照实验.单位华中科技大学同济医学院实验动物学部,华中科技大学同济医学院解剖教研室细胞培养中心,武汉市中医医院医科所.材料实验于2000-10/2001-2在华中科技大学同济医学院实验动物学部及华中科技大学同济医学院解剖教研室细胞培养中心完成.选用健康日本大耳白兔6只,兔龄不限,雄性,常规饲养,体质量(2.5±0.1)kg,随机分成3组,每组2只;清洁级SD大鼠30只,新生1～2 d,雌雄不拘.方法[1]将大鼠脑海马神经悬液,按2.5×108/L密度接种至24孔培养板各孔中培养.将每板各孔培养细胞随机分成3组,即茯苓生脉饮组(茯苓生脉饮由茯苓、人参、麦冬、五味子等中药制成,每毫升含生药1.5 g)、药物对照组(维生索E)和空白对照组,每组8孔.24h后,茯苓生脉饮组、药物对照组、空白对照组所在培养板每孔分别加入茯苓生脉饮含药血清、维生素E含药血清和空白血清1 mL.[2]在细胞培养的第6天加入黄嘌呤,一次黄嘌呤反应体系致细胞损伤,产生超氧阴离子自由基,成为衰老模型.[3]在培养过程中,每次更换培养液时,各组培养孔中均需重新分别加入上述相应的药液.[4]培养至第15天时,检测各组脑海马神经细胞超氧化物歧化酶、丙二醛、脂褐素水平.主要观察指标各组大鼠脑海马神经元超氧化物歧化酶、丙二醛及脂褐素水平.结果茯苓生脉饮组脑海马神经细胞超氧化物歧化酶水平显著高于空白对造组,丙二醛水平低于药物对照组,脂褐素水平低于空白对照组(P＜0.05).结论茯苓生脉饮中主要成分茯苓、人参、麦冬、五味子各单味药均有抗氧化清除自由基的作用,茯苓生脉饮能提高超氧化物歧化酶的活性,降低丙二醛的含量,抑制脂褐素的形成,从而延缓衰老的进程.     

胰岛素样生长因子1与神经干细胞源性神经元轴突的生长发育

背景:研究表明胰岛素样生长因子1具有神经保护作用并能增加神经干细胞向神经元及少突胶质细胞分化的比例。目的:观察胰岛素样生长因子1对神经干细胞源性神经元轴突生长发育的影响。方法:分离培养新生Wistar大鼠海马神经干细胞,传3~5代后接种于24孔培养板。其中12孔加入10μL胰岛素样生长因子1(500mg/L)作为实验组,余为对照组。结果与结论:培养1,2,3,4d时,实验组细胞死亡数较对照组明显减少(P<0.05),神经元轴突长度较对照组明显延长(P<0.05),但两组轴突的分叉数目差异无显著性意义(P>0.05)。结果证实胰岛素样生长因子1可以增加神经干细胞向神经元的分化比例并促进神经干细胞源性神经元轴突长度的延伸,但不能增加轴突的分叉数量。