非特异性下腰痛患者血清中人巨细胞病毒pp65抗体检测与腰背痛的相关性

目的:通过对非特异性下腰痛患者血清中人巨细胞病毒pp65抗体的检测,试图探究人巨细胞病毒潜伏感染在非特异性下腰痛中的潜在致病作用。方法:实验于2002-05/2004-01在安徽医科大学第一附属医院康复医学科门诊完成。比较3组不同人群外周血清人巨细胞病毒pp65IgM抗体阳性水平。分别采集3组空腹静脉血2mL,作为待检血清。用间接酶联免疫吸附法即人巨细胞病毒pp65重组蛋白抗原包被96孔酶标板,依次加入待测血清。经酶标抗人抗体显色后,用酶标仪(BIO-RAD,model550,US-A)测定A值。结果以(样品A450-本底)÷(对照组A450-本底)≥2.1判为阳性。结果:非特异性下腰痛组人巨细胞病毒pp65IgM阳性率为48.21%(27/56),高于健康大学生组的17.86%(5/28),差异有显著性意义(χ2=7.294,P=0.007);非特异性下腰痛组的人巨细胞病毒pp65IgM阳性率高于脑瘫患儿组的26.42%(14/53),差异有显著性意义(χ2=5.514,P=0.019)。结论:非特异性下腰痛患者出现腰痛症状时可能与人巨细胞病毒的再激活有关,但需进一步确定人巨细胞病毒pp65抗体阳性水平与临床症状的相关性、是否需要相应干预和干预后的变化,以及进行相应组织细胞的病毒分离从而获得腰痛与人巨细胞病毒再激活感染病源学结论的直接证据。对人巨细胞病毒感染与非特异性下腰痛的相关性进     

器官移植受者术后巨细胞病毒感染的监测

目的:评价外周血巨细胞病毒pp65抗原检测在器官移植受者移植术后巨细胞病毒感染监测中的价值,并与巨细胞病毒抗体检测进行对比.方法:选择2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院器官移植中心器官移植受者43例,于移植术后两三个月取外周血检测巨细胞病毒抗原和抗体.①巨细胞病毒早期抗原pp65检测:取5～7 mL外周血加入EDTA抗凝,采用间接免疫荧光方法进行,以每2×105个白细胞中发现1个或以上阳性细胞定为阳性.②巨细胞病毒特异性IgG,IgM抗体检测:取3 mL外周血,不抗凝,以间接ELISA法检测.结果:43例受试者均进入结果分析,无脱落.①43例中术后外周血巨细胞病毒早期抗原pp65阳性9例,均在检测同时或2～10d后出现明显的巨细胞病毒感染症状.②巨细胞病毒抗体IgG均为阳性,仅能说明受试者有过巨细胞病毒感染史.③巨细胞病毒抗体IgM阳性2例,检出率低于pp65抗原阳性者.结论:应用间接免疫荧光方法检测巨细胞病毒pp65抗原具有快速、特异、更易于接受的优点,适用于器官移植术后巨细胞病毒感染的监测,而巨细胞病毒抗体的检测仅能作为辅助参考.     

人巨细胞病毒pp65抗体检测方法的建立

目的 建立检测人巨细胞病毒pp65IgG抗体(HCMV pp65 IgG)的间接酶联免疫吸附试验(ELISA).方法 通过棋盘滴定法选择包被抗原和酶标二抗的最适浓度;以商品抗HCMV pp65单抗为阳性模拟标本,建立检测抗HCMV pp65 IgG抗体,并对临床收集的各类血清标本进行检测和分析.结果 检测间接ELISAHCMV pp65 IgG的最佳包被抗原浓度为10 ng/孔,酶标二抗的工作浓度为1∶3000.当阳性吸光度(A)值为0.298时,87份不同组的血清标本(HCMV感染活动组、HCMV感染不活动组、HCMV未感染组)阳性检出率分别为51.6%(16/31)、12.1%(4/33)和0.0%(0/23).3组两两间差异均存在显著性(P＜0.01).结论 本研究建立了检测HCMV pp65抗体的方法,应用该方法能从相应人群中检出该抗体,检测不存在假阳性,并发现该抗体与抗HCMVIgM的检出有关.     

2项对诊断儿童人巨细胞病毒活动性感染的比较

目的比较血清人巨细胞病毒(HCMV)-IgM抗体(以下简称IgM抗体)与HCMV pp65抗原(以下简称pp65)两种方法对HCMV活动性感染诊断检测的实用意义。方法采集临床疑似HMCV活动性感染儿童血标本91份,分离血浆和多形白细胞,分别用于IgM抗体检测和pp65抗原检测,同时用聚合酶链反应(PCR)检测HCMV DNA,与pp65抗原作平行比较。结果 pp65抗原检测的结果与IgM抗体检测的符合率为70.3%,与HC-MV DNA检测相比,pp65抗原检测的符合率、特异性和敏感度分别为85.5%、70.6%和75.6%,而且高pp65抗原血症与患者临床症状密切相关。结论 pp65抗原血症反映该病毒活动状况,可监测HCMV活动性感染。     

人巨细胞病毒pp65 IgG亲和指数在人巨细胞病毒原发感染小鼠模型中的标志作用

目的 通过对人巨细胞病毒(human eytomegalovims,HCMV)原发感染BALB/c模型小鼠感染状态的实验研究,探索检测HCMV pp65 IgG亲和指数(avidity index,AI)在原发感染诊断中的意义和作用.方法 取6～8周龄SPF(Specific Pathogen Free)级BALB/c雌性小鼠30只,分为5组,每组6只,分别用2×105、2×105、2×104、2×103和2×102PFU/ml的5个剂量的病毒悬液腹腔注射小鼠,1.0 ml/只;另取浓度为2×106PFU/ml剂量的病毒,经56℃30 min灭活后,1.0 ml/只腹腔注射雌性小鼠共6只,作为灭活对照组;同株同代的HF细胞悬液1.0 ml/只腹腔注射雌性小鼠共6只,作为HF细胞对照组.各组小鼠于屏障系统内饲养1个月后,检测小鼠的感染状态.病毒分离检测脑、肺组织中感染性病毒颗粒,观察HCMV特异性细胞病变效应,PCR试验检测细胞培养物UL83基因,间接免疫荧光试验检测细胞玻片pp65抗原;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠脑、肺组织中HCMV pp67的转录;同时,用本室自制的截短pp65抗原制备的ELISA试剂盒检测血清标本中HCMVpp65特异性IgM抗体和IgG-Al.结果 2×104PFU/ml和2×105PFU/ml剂量的病毒感染小鼠后,脑、肺组织中均可检测到感染性病毒颗粒,感染率均为100%;RT-PCR均可检测到小鼠脑、肺组织中pp67转录产物;血清学检测这两组小鼠HCMV pp65 IgM均为阳性,HCMV pp65 IgG-AI＜50%;检测结果判断该两组小鼠为HCMV原发感染.余低剂量病毒组、灭活病毒组和人胚成纤维细胞(HF)对照组检测结果均为阴性.结论 HCMV AD169株可感染BALB/c小鼠,初次感染病毒1个月后可表现原发感染状态;以HCMV pp65重组蛋白为抗原榆测特异性IgM抗体以及相应IsG-AI间接ELISA法,可作为对HCMV原发感染的初筛手段,是诊断HCMV原发感染有效的方法之一.     

酶联免疫吸附试验检测人类巨细胞病毒抗体在肝移植患者术后诊断及监测中的应用

目的 客观评价传统的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人巨细胞病毒(HCMV)抗体对肝移植患者术后诊断和监测HCMV感染的意义.方法 对108例肝移植术后患者分别用ELISA检测HCMV特异性抗体IgM、用免疫组化法检测HCMV低基质磷酸化蛋白(pp65)抗原血症、用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HCMV DNA,将这3种方法的检测结果进行比较.结果 108例患者中,IgM阳性者8例,pp65抗原阳性者10例,DNA阳性者12例.ELISA的敏感性较其他2种方法略低,但3种方法的特异性和阴性预测值之间差异无显著性.此外,ELISA检测HCMVIgM阳性者,其结果均在临床症状出现后6～14 d检出,而pp65阳性者和HCMV DNA阳性者均在临床症状出现前被检出.结论应用ELISA检测HCMV抗体可以用于诊断监测HCMV感染情况,但有一定的局限性.     

HCMVpp65抗原和IgM抗体检测诊断儿童HCMV活动性感染的比较

目的：比较人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原(以下简称pp65)检测和血清HCMV-IgM抗体(以下简称IgM抗体)检测两种方法对儿童HCMV活动性感染的诊断实用意义。方法：采集临床疑似HCMV活动性感染儿童血标本(共251份)，分离血浆和多形核白细胞，分别用于IgM抗体检测和pp65检测。同时进行荧光定量PCR检测HCMVDNA，与pp65抗原作平行比较。结果：pp65抗原检测的结果与IgM抗体检测的符合率为73.3％。与HCMV DNA检测相比pp65抗原检测法的符合率、特异度和敏感度分别为85．5％，85．2％和86．2％。而且高pp65抗原血症与患者的临床症状密切相关。结论：pp65抗原血症反映该病毒活动状况，可监测HCMV活动性感染。由于儿童患者还存在原发感染的可能性，所以．联合HCMV-IgM的监测来提高临床的诊断率。     

不同方法检测同种异基因造血干细胞移植受者巨细胞病毒感染的探讨

本研究探讨同种异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后早期有效检测巨细胞病毒（CMV）感染的方法。应用荧光定量PCR和ELISA试剂盒分别检测19名allo-HSCT受者,214份标本的血浆DNA负荷量和血清IgM抗体,同时应用流式细胞术检测188份标本白细胞pp65抗原。结果表明：pp65抗原、DNA定量和IgM抗体的阳性检出率分别为30.85%（58/188）、35.51%（76/214）和13.08%（28/214）,连续阳性病例和临床诊断的符合率分别为7/8、7/8和3/8。DNA定量与pp65抗原阳性检出率的差别无统计学意义（P〉0.05）,但两种检测方法有明显的相关性（P〈0.05）。IgM抗体阳性检出率明显低于DNA定量和pp65抗原,其差别均有统计学意义（P〈0.05）,与另两种检测方法虽有关系,但不密切。结论：流式细胞术和荧光定量PCR检测allo-HSCT受者CMV早期感染可靠、简便快速,值得临床推广使用。     

尿巨细胞病毒检测在婴儿巨细胞病毒感染诊治中的临床意义

目的 通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测尿人巨细胞病毒(HCMV),来分析其在婴儿巨细胞病毒感染诊断和治疗中的应用价值.方法 用FQ-PCR法定量测定婴儿尿巨细胞病毒含量和用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清巨细胞病毒IgM抗体,根据两种方法 阳性检出率及治疗前后病毒含量的变化进行分析.结果 在126例婴儿中FQ-PCR法测定尿液CMV-DNA 阳性者32例(25.40%),ELISA法测定血清CMV-IgM 抗体阳性者12例(9.52%),FQ-PCR法测定尿CMV-DNA阳性检出率明显高于ELISA测定血清CMV-IgM 抗体阳性检出率,两者有统计学意义(P＜0.01).治疗后尿CMV-DNA 拷贝数明显低于治疗前(P＜0.01).结论 FQ-PCR法定量测定婴儿尿巨细胞病毒在婴儿巨细胞病毒感染诊断和评价治疗效果中有一定临床意义.     

检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较

目的　比较血pp6 5抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒 (CMV)活动性感染的诊断价值。方法　收集 5 8位移植患者的血标本 (共 2 0 8份 ) ,分离血浆和多形核白细胞 ,血浆用于CMVIgM抗体检测 (ELISA) ,白细胞用于pp6 5抗原血症检测(荧光免疫组化 )。同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析 ,检测CMVDNA。结果　pp6 5抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关 (r=0 .87) ,也与病人的临床症状密切相关 ,可用于监测移植患者CMV的活动性感染。IgM抗体与pp6 5抗原阳性的一致率为 2 1.2 % ,对CMV感染的敏感性为 2 2 .3% ,特异性为 95 .6 %。结论　pp6 5抗原阳性细胞数能反映CMV的数量 ,可监测CMV活动性感染 ,检测方法特异、灵敏、操作简单 ,适宜临床实验室应用。血清IgM抗体检测因为敏感性较低 ,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测。     

急性心肌梗死与巨细胞病毒感染相关性分析

目的探讨急性心肌梗死发病与人巨细胞病毒感染的关系。方法应用间接酶联免疫吸附试验检测急性心肌梗死患者血清中巨细胞病毒特异性IgM,IgA抗体。结果急性心肌梗死患者血清IgM,IgA搞体分别为69·2%和28·8%,明显高出对照组人群,两组间比较差异非常显著。结论急性心肌梗死发病与巨细胞病毒感染有关。     

非嗜肝病毒所致急性肝损害36例临床分析

对36例病例检测甲~戊型肝炎病毒标志物,排除甲~戊型嗜肝病毒感染,于入院时及出院后3、6个月各查1次巨细胞病毒、柯萨奇病毒、单纯疱疹病毒特异性IgG、IgM抗体。结果36例非嗜肝病毒引起的急性肝炎中巨细胞病毒IgM抗体阳性12例,柯萨奇病毒IgM抗体阳性9例,单纯疱疹病毒IgM抗体阳性8例,2例线粒体抗体和抗核抗体阳性,不明原因者5例。     

获得性免疫缺乏综合征患者合并巨细胞病毒性肺炎情况分析

目的调查获得性免疫缺乏综合征(AIDS)患者中合并巨细胞病毒性肺炎的发生情况,比较血清标本与痰液标本的巨细胞病毒阳性检出率。方法采用酶联免疫法和实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)分别检测AIDS患者中高度怀疑为巨细胞病毒肺炎的血清巨细胞IgM、血清和痰液的巨细胞病毒载量水平。结果 35例AIDS合并巨细胞病毒肺炎的患者中,入院时CD4~+T细胞水平均为(74.3±58.1)个/μL。其中血清中巨细胞IgM抗体阳性检出率为2.9%;血清中病毒载量阳性检出率为8.6%;痰液中巨细胞病毒载量阳性检出率为65.7%。CD4~+T细胞计数50个/μL患者中,巨细胞病毒检出率为70.6%;CD4~+T细胞计数在50~100个/μL患者阳性检出率为57.1%;CD4~+T细胞计数100个/μL患者的阳性检出率为63.6%。不同水平的CD4~+T细胞间巨细胞病毒的阳性检出率差异无统计学意义(P0.05)。结论在AIDS合并巨细胞病毒肺炎的感染初期,痰液标本的巨细胞病毒载量检测比血液的巨细胞病毒抗体及病毒载量检测阳性率更高,可作为临床早期快速的诊治病毒性肺炎的有效辅助诊断方法。     

山东地区0～12岁儿童人巨细胞病毒抗体阳性特征分析

目的分析山东地区0~12岁儿童人巨细胞病毒抗体的阳性特征。方法收集2014年1月至2016年12月在山东大学附属省立医院门诊就诊和住院的儿童患者1 429例。用化学发光方法检测血清人巨细胞病毒IgG和IgM抗体。用SPSS21.0软件进行统计分析。结果巨细胞病毒IgG抗体和IgM抗体阳性率分别为89.36%和16.59%,男性巨细胞病毒IgG抗体阳性率为88.04%,明显低于女性的91.32%(P0.05)。男性巨细胞病毒IgM抗体阳性率为14.07%,明显低于女性的20.31%(P0.05)。巨细胞病毒IgG抗体阳性率以6~12个月年龄组最低(73.68%),0~6个月年龄组最高(92.73%);巨细胞病毒IgM抗体阳性率以4~12岁年龄组最低(10.26%),1~3岁年龄组最高(21.57%)。巨细胞病毒IgM抗体阳性率冬季最高为22.92%,秋季阳性率最低为11.11%,四个季节之间阳性率差异有统计学意义(P0.05)。共检出4种巨细胞病毒抗体项目组合模式,以巨细胞病毒IgG抗体阳性、巨细胞病毒IgM抗体双阴性模式最多见,占73.27%。结论山东地区0~12岁儿童人巨细胞病毒抗体的阳性率存在性别、年龄和季节差异,应加强对儿童人巨细胞病毒感染的防控。     

巨细胞病毒两种实验室检测方法比较

目的 比较荧光定量PCR (FQ-PCR)检测人巨细胞病毒(HCMV) DNA 水平和酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清HCMV-IgM 抗体对HCMV感染的诊断价值.方法 采用FQ-PCR检测188例临床疑似HCMV感染患者血液中HCMV-DNA 水平.同时采用ELISA法检测血清HCMV-IgM 抗体.结果 FQ-PCR检测血清HCMV-DNA 的阳性率为31.9%(60/188),ELISA检测血清HCMV-IgM 抗体的阳性率为14.9%(28/188).前者阳性率显著高于后者(P<0.05 ).在HCMV-DNA检测阳性患者中,IgM 抗体阳性组HCMV-DNA拷贝数显著高于阴性组(P<0.05).结论 FQ-PCR 检测HCMV-DNA是早期诊断HCMV感染的敏感有效的方法.     

肾移植受者人巨细胞病毒活动性感染的监测

目的:建立一种新的快速诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法.方法:运用免疫组织化学的催化信号扩增法通过抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体AAC10对外周血白细胞中的人巨细胞病毒pp65抗原进行标记识别.结果:检测61例肾移植受者中,HCMV pp65抗原阳性36例,活动性感染率为59%(36/61),有症状的HCMV 20例,占所有受者33%(20/61),平均抗原指数(98±31)个/2 ×105 WBC;而无症状的活动性感染HCMV pp65抗原指数平均为(21±22)个/2×105 WBC.同时检测50名健康人,结果pp65抗原全为阴性.结论:该法敏感、简便,可作为肾移植后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

肝移植术后巨细胞病毒感染的特点

目的:观察肝移植受者术后巨细胞病毒的感染情况及干预效果。方法:选择2002-07/2005-07在上海交通大学医学院附属新华医院行同种异体原位肝移植手术的患者20例,均知情同意。术后1个月内每周检测1次巨细胞病毒血清抗体,术后2~6个月每个月检测1次巨细胞病毒血清抗体,以后有感染症状时检测巨细胞病毒血清抗体。所有患者术后给予更昔洛韦0.5g静脉滴注,2次/d,维持2周;以后用阿昔洛韦800mg/d口服,维持3个月进行预防性治疗。所有患者术后采用三联免疫抑制治疗,根据术后血药浓度及肝功能改变调整免疫抑制药物用量。采用ELISA法检测患者血中巨细胞病毒抗体-巨细胞病毒IgG、巨细胞病毒IgM。巨细胞病毒血清抗体阳性者诊断为巨细胞病毒感染;巨细胞病毒血清抗体阳性合并组织器官受累者诊断为巨细胞病毒病。结果:20例患者全部进入结果分析,无脱落。20例患者中3例血中巨细胞病毒IgM转化为阳性,为巨细胞病毒感染,其中2例伴有呼吸系统症状及影像学改变,诊断为巨细胞病毒性肺炎。3例巨细胞病毒感染病例中2例治愈,1例死于呼吸衰竭。巨细胞病毒感染率为15%(3/20),巨细胞病毒肺炎发病率为10%(2/20),病死率为5%(1/20)。结论:肝移植术后进行巨细胞病毒感染的预防性治疗,定时监测尽早发现巨细胞病毒感染,及时治疗,阻断其向巨细胞病毒病演变是降低巨细胞病毒病死率的有效方法。     

住院患儿血清人巨细胞病毒核酸与IgM抗体检测比较研究

目的：比较核酸与IgM抗体检测对人巨细胞病毒（human cytomegalov virus,HCMV）感染的诊断价值。方法：用达安基因和安图生物两个公司的商品化试剂盒对我院217例住院患儿血清中的巨细胞病毒核酸和IgM抗体平行进行检测。结果：住院患儿巨细胞病毒核酸阳性率为22．1％,IgM抗体阳性率为29．5％,IgM抗体阳性率高于核酸,核酸阳性的样本中有83．3％为IgM阳性,IgM阳性的样本中有62．5％为核酸检测阳性。结论：核酸和IgM抗体检测对于住院患儿巨细胞病毒感染的诊断有较高的符合率。     

儿童巨细胞病毒IgG抗体亲和力指数测定的意义

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)特异性IgG抗体亲和力指数(AI)在儿童HCMV感染诊断中的意义。方法:对150例临床疑似HCMV感染的儿童,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和微粒子酶免化学发光法检测尿液HCMV DNA载量和血清HCMV IgM/IgG抗体;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定HCMV IgG抗体亲和力指数(AI)。结果:150例疑似HCMV感染的儿童尿液HCMV DNA阳性检出率为83%(124/150),病毒载量范围为2.67×103～1.31×106copies/mL;血清HCMV IgM阳性检出率为74%(111/150),HCMV IgG阳性检出率为91%(136/150),其中HCMV IgM单阳性检出率为6%(9/150),HCMV IgG/IgM双阳性检出率为68%(102/150);102例HCMV IgG/IgM双阳性标本,AI>60%占71%(72/102),40%≤AI≤60%占6%(6/102)例,AI<40%占24%(24/102)。结论:IgG抗体亲和力指数测定能准确地反映HCMV感染的活动状况,有助于HCMV感染的诊断与治疗。     

人巨细胞病毒pp150-gp52蛋白原核可溶性表达与IgM捕获ELISA方法建立和应用

目的原核系统内表达并纯化巨细胞病毒pp150-gp52融合蛋白优势抗原表位,建立IgM捕获ELISA方法并应用。方法通过重叠PCR技术扩增获得巨细胞病毒pp150-gp52优势片段核酸序列,在原核系统内可溶性表达DsbC-pp150-gp52融合蛋白并纯化,用Western blot和ELISA检测融合蛋白的特异性和应用价值。结果纯化获得的融合蛋白DsbC-pp150-gp52经酶标记建立IgM捕获ELISA方法,检测60份临床阳性血清和60份健康人血清。其中以酶标记DsbC-pp150-gp52蛋白建立的捕获ELISA法阳性检出率96.7% ,阴性检出率100%,初步验证DsbC-pp150-gp52融合肽具有非常好的抗原特异性。结论融合蛋白DsbC-pp150-gp52在大肠埃希菌中以可溶性表达形式存在,获得的高纯度重组融合蛋白具有抗原性和特异性强的特点,采用IgM捕获ELISA的实验方法,可开发检测试剂盒用于风疹病毒的早期检测。