器官移植受者外周血中人巨细胞病毒pp67-mRNA的RT-PCR检测

目的：探讨使用RT-PCR的方法对人巨细胞病毒pp67-mRNA检测的可行性。方法：对38例肾移植受者的外周血样本共68份分别进行免疫荧光技术检测pp65抗原和RT-PCR技术检测人巨细胞病毒pp67-mRNA。结果：在7例受者外周血中的13份外周血样本中检出pp65抗原阳性，并有1例诊断为HCMV病；在3例受者外周血中的3份外周血样本中检出pp67-mRNA阳性，其中包括2例受者的2份样本pp65抗原同时检出为阳性并有1例诊断为CMV病。结论：pp65抗原和pp67-mRNA检测结果不具有同一性，不能使用pp67-mRNA检测取代pp65抗原的检测。使用RT-PCR可以对人巨细胞病毒pp67-mRNA作出定性的判断。     

肾移植及骨髓移植受者术后巨细胞病毒早早期抗原的检测

背景:肾移植及骨髓移植后,随着免疫抑制剂的应用,潜伏的巨细胞病毒都将被激活.因此早期准确诊断巨细胞病毒感染具有重要的意义,及时而有效地控制巨细胞病毒感染的关键是在血液中迅速、定量地检测到巨细胞病毒的复制.目的:检测肾移植及骨髓移植受者术后的巨细胞病毒早早期抗原,探讨其临床诊断价值.方法:采用免疫组织化学方法对1 215例肾移植及骨髓移植受者外周血白细胞巨细胞病毒活动性感染的早早期抗原进行检测.结果与结论:巨细胞病毒早早期抗原指数阳性492例(占40.0%),早早期抗原指数阴性723例(占60.0%),巨细胞病毒抗体IgG明显升高318例(占26.0%),巨细胞病毒抗体IgM 90例(占7.0%).巨细胞病毒抗原血症检测技术对于巨细胞病毒活动性感染的诊断具有高度的灵敏性和特异性,同时对巨细胞病毒的发生还具有重要的预测意义,是一种经济可行的诊断方法.     

抗巨细胞病毒pp65抗原单克隆抗体的制备及临床初步比对检测

目的：制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体并建立外周血巨细胞病毒抗原血症免疫荧光检测方法。方法 CM V AD169感染人胚胎肺成纤维细胞M RC‐5后24、48、72h ,超声波破碎和甲醛灭活制备CM V抗原,以及CMV pp65重组抗原免疫BALB／C小鼠,标准方法制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体。利用所得单克隆抗体建立检测外周血巨细胞病毒抗原血症检测的实验方法,并与进口试剂盒CM V BriteTM Kit进行比对。结果共有两株杂交瘤细胞产生特异性抗体,克隆名称为13D1‐3和29F1‐1,免疫球蛋白亚型分别是IgG1型和IgG2a型,制备的腹水抗体纯化后仍具有良好的免疫学特性。单克隆抗体13D1‐3与 CM V BriteTM Kit试剂盒比对,阳性符合率为88．8％,阴性符合率为98．9％,总符合率为97．3％,Kappa值为0．895,吻合度较高。结论成功制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体,建立以13D1‐3单克隆抗体为基础的检测外周血巨细胞病毒抗原血症方法,与CM V BriteTM Kit试剂盒比对具有良好的符合性。     

更昔洛韦对原位肝移植术后巨细胞病毒感染的预防和治疗:19例临床资料回顾

目的:巨细胞病毒感染是器官移植后的一个严重并发症,回顾性分析肝移植术后患者巨细胞病毒感染的诊断和防治方法.方法:①回顾分析2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院全军器官移植中心收治的19例肝移植受者的临床资料,供者均为健康献肝者.供者、受者对治疗方案均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准.②术后1个月检测1次巨细胞病毒血清抗体,预防和治疗巨细胞病毒感染均采用静脉注射更昔洛韦.术后采用三联免疫抑制疗法,根据术后血药浓度及肝功能改变调整免疫抑制药物用量.③采用酶联免疫吸附法检测患者血中巨细胞病毒抗体巨细胞病毒IgG、巨细胞病毒IgM.结果:19例受者中6例发生巨细胞病毒感染,均无临床症状,并全部治愈.结论:更昔洛韦能够有效治疗肝移植术后巨细胞病毒感染.积极预防、早期治疗肝移植术后患者巨细胞病毒感染是治疗成功的关键.     

流式细胞技术检测肾脏移植受者pp65抗原血症的意义

背景:临床对pp65 抗原的检测主要采用免疫荧光技术,但是该方法步骤繁琐,需要对标本进行人工计数,在检测过程中受人为的影响因素较多。目的:探讨使用简便的流式细胞技术检测人巨细胞病毒 pp65 抗原血症的可行性及其特点。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-09/2008-03 在解放军总医院附属二院器官移植中心完成。材料:肾脏移植受者外周血标本145份。方法:分离人外周血白细胞,分别采用免疫荧光技术与流式细胞技术对人巨细胞病毒 pp65 抗原检测。主要观察指标:流式细胞仪在激发波长为 488 nm 处的吸收峰判断阳性检出。结果:对肾脏移植受者进行免疫荧光技术检测,在 15 例受者的 25 份标本中检出阳性,检出的特异性为 76.0%;对肾脏移植受者进行流式细胞技术检测,在 5 例受者的 11 份标本中检出阳性,检出的特异性为 54.5%。使用 Fisher 确切概率法对两种不同检测方法检出的效果进行检验,结果两种检测方法的检出效果差异无显著性意义(P > 0.05)。结论:免疫荧光技术和流式细胞技术两种 pp65 抗原检测方法的检出效果无差异,因此可以通过流式细胞技术对 pp65 抗原进行检测,并且结果更加客观。     

核酸基础序列扩增法检测移植术后巨细胞病毒IE-mRNA的实验研究

传统检测移植术后巨细胞病毒（Human cytomegalovims．HCMV）感染的方法很多，但各一定的局限性。我们自2004年1月建立了核酸基础序列扩增法（NASBA法）检测IE—mRNA和pp67-mRNA的试验条件，对42例器官移植受者的外周血标本进行了检测，并与pp65抗原检测结果相比较。     

非特异性下腰痛患者血清中人巨细胞病毒pp65抗体检测与腰背痛的相关性

目的:通过对非特异性下腰痛患者血清中人巨细胞病毒pp65抗体的检测,试图探究人巨细胞病毒潜伏感染在非特异性下腰痛中的潜在致病作用.方法:实验于2002-05/2004-01在安徽医科大学第一附属医院康复医学科门诊完成.比较3组不同人群外周血清人巨细胞病毒pp65 IgM抗体阳性水平.分别采集3组空腹静脉血2 mL,作为待检血清.用间接酶联免疫吸附法即人巨细胞病毒pp65重组蛋白抗原包被96孔酶标板,依次加入待测血清.经酶标抗人抗体显色后,用酶标仪(BIO-RAD,model550,USA)测定A值.结果以(样品A450-本底)&;#247;(对照组A450-本底)≥2.1判为阳性.结果:非特异性下腰痛组人巨细胞病毒pp65 IgM阳性率为48.21%(27/56),高于健康大学生组的17.86%(5/28),差异有显著性意义(x^2=7.294,P=0.007);非特异性下腰痛组的人巨细胞病毒pp65IgM阳性率高于脑瘫患儿组的26.42%(14/53),差异有显著性意义(x^2=5.514,P=0.019).结论:非特异性下腰痛患者出现腰痛症状时可能与人巨细胞病毒的再激活有关,但需进一步确定人巨细胞病毒pp65抗体阳性水平与临床症状的相关性、是否需要相应干预和干预后的变化,以及进行相应组织细胞的病毒分离从而获得腰痛与人巨细胞病毒再激活感染病源学结论的直接证据.对人巨细胞病毒感染与非特异性下腰痛的相关性进行开创性研究,从而为进一步研究非特异性下腰痛的可能病因及其发生机制、临床诊治提供新依据.     

pp67检测对器官移植术后巨细胞病毒活动性感染的诊断价值

目的：评价检测器官移植术后患者外周血中巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV)的信使核糖核酸编码的晚期基质表层蛋白（pp67)对移植术一CMV感染的诊断价值，以建立一种快速、客观的CMV活动性感染的新诊断方法。方法：采用核酸基础序列扩增法（nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)测定50例器官移植术后患者外周血中的pp67，并与CMV即刻早期抗原（pp65)检测结果作比较。结果：50例中，26例pp65阳性，其中同时检出pp67阳性者16例（两者符合率62％）；有症状的CMV病患者9例，其pp65与pp67均为阳性；pp67阴性34例无1例发展为CMV病；pp67的灵敏度为100％、特异度为82％、阳性预测值为56％、阴性预测值为100％。结论：pp67检测是快速、实用、客观诊断MV感染的方法，能准确反映CMV的活动状况。     

非特异性下腰痛患者血清中人巨细胞病毒pp65抗体检测与腰背痛的相关性

目的:通过对非特异性下腰痛患者血清中人巨细胞病毒pp65抗体的检测,试图探究人巨细胞病毒潜伏感染在非特异性下腰痛中的潜在致病作用。方法:实验于2002-05/2004-01在安徽医科大学第一附属医院康复医学科门诊完成。比较3组不同人群外周血清人巨细胞病毒pp65IgM抗体阳性水平。分别采集3组空腹静脉血2mL,作为待检血清。用间接酶联免疫吸附法即人巨细胞病毒pp65重组蛋白抗原包被96孔酶标板,依次加入待测血清。经酶标抗人抗体显色后,用酶标仪(BIO-RAD,model550,US-A)测定A值。结果以(样品A450-本底)÷(对照组A450-本底)≥2.1判为阳性。结果:非特异性下腰痛组人巨细胞病毒pp65IgM阳性率为48.21%(27/56),高于健康大学生组的17.86%(5/28),差异有显著性意义(χ2=7.294,P=0.007);非特异性下腰痛组的人巨细胞病毒pp65IgM阳性率高于脑瘫患儿组的26.42%(14/53),差异有显著性意义(χ2=5.514,P=0.019)。结论:非特异性下腰痛患者出现腰痛症状时可能与人巨细胞病毒的再激活有关,但需进一步确定人巨细胞病毒pp65抗体阳性水平与临床症状的相关性、是否需要相应干预和干预后的变化,以及进行相应组织细胞的病毒分离从而获得腰痛与人巨细胞病毒再激活感染病源学结论的直接证据。对人巨细胞病毒感染与非特异性下腰痛的相关性进     

肾移植受者人巨细胞病毒活动性感染的监测

目的:建立一种新的快速诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法.方法:运用免疫组织化学的催化信号扩增法通过抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体AAC10对外周血白细胞中的人巨细胞病毒pp65抗原进行标记识别.结果:检测61例肾移植受者中,HCMV pp65抗原阳性36例,活动性感染率为59%(36/61),有症状的HCMV 20例,占所有受者33%(20/61),平均抗原指数(98±31)个/2 ×105 WBC;而无症状的活动性感染HCMV pp65抗原指数平均为(21±22)个/2×105 WBC.同时检测50名健康人,结果pp65抗原全为阴性.结论:该法敏感、简便,可作为肾移植后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.