非霍奇金淋巴瘤患者免疫球蛋白及T细胞受体基因重排研究

目的 研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓或外周血免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因单克隆重排特点及其临床意义.方法 以BIOMED-2引物系统及多重PCR方法对139例NHL患者骨髓或外周血标本进行Ig及TCR基因重排检测.结果 在B系NHL(B-NHL)中,82例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中有70例(85.4％)检出Ig基因单克隆重排,其中IgH、IgK、IgL单克隆重排阳性率分别为46.3％(38例)、62.2％(51例)和1.2％(1例).其他类型的B-NHL患者有39.4％(33例中有13例)检出Ig基因单克隆重排,其中IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为33.3％(11例)和39.4％(13例),未检测到IgL基因单克隆重排.T系NHL(T-NHL)患者中有50.0％(24例中有12例)检出TCR基因单克隆重排,其中TCRB和TCRG单克隆重排阳性率分别为8.3％(2例)和45.8％(11例),TCRB和TCRG双重基因重排阳性率为4.2％(1例),未检测到TCRD单克隆重排.11例早期(Ann Arbor Ⅰ、Ⅱ期)与46例晚期(Ⅲ、Ⅳ期)患者的Ig/TCR基因单克隆重排阳性率分别为36.4％和45.6％;10例惰性患者和47例侵袭性患者的Ig/TCR基因单克隆重排阳性率分别为40.0％和44.7％,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).除外CLL的57例NHL患者骨髓涂片检测骨髓侵犯阳性率为12.3％,明显低于骨髓基因重排检测阳性率(43.9％),两者差异有统计学意义(P＜0.05).敏感性试验表明多重PCR检测恶性克隆的敏感性为3.12％～6.25％.结论 NHL的临床分期和恶性程度不同,其Ig/TCR基因单克隆重排阳性率有差异,但未能证实其相关性.联合应用BIOMED-2多重引物可提高PCR检测骨髓和(或)外周血Ig/TCR基因单克隆重排的敏感性.多重PCR对NHL患者骨髓侵犯检测的敏感性优于骨髓涂片检查,有助于早期发现骨髓侵犯及预防复发.     

BIOMED-2标准化基因重排检测在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的:利用BIOMED-2标准化免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因重排检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓Ig或TCR基因重排,探讨Ig/TCR基因重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用意义。方法:从骨髓及石蜡包埋组织(FFPE)标本中提取基因组DNA,采用BIOMED-2系统引物,进行多重PCR扩增并利用PCR片段分析法进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析。结果:在235例T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)中,TCRγ和TCRx单克隆重排阳性率分别为57.9%和50.2%,TCRγ和TCRβ的联合检出率为71.9%。在583例B细胞非霍奇金淋巴瘤(BNHL)IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为70.7%和69.3%,IgH和IgK的联合检出率为81.6%。套细胞淋巴瘤与滤泡淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤IgH(84.8%对34.0%(P0.001);84.8%对9.2%(P=0.025)和IgK(75.8%vs 50.9%,P0.001;75.8%vs 16.1%(P0.001)重排阳性率差异具有统计学意义。Ig基因重排阳性BNHL患者中,65例(13.7%)患者存在TCR重排阳性。TCR重排阳性T-NHL患者中,未见Ig基因重排阳性。30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者FFPE标本有25例(83.3%)检出Ig基因重排,与骨髓标本重排检出率相比较,差异具有统计学意义(P0.001)。结论:利用BIOMED-2标准化Ig/TCR基因重排检测对于淋巴瘤的诊断有辅助性作用,并且利用序列分析法可提高重排检测的敏感性和特异性,对于淋巴瘤的早期诊断有很高的价值。     

非霍奇金淋巴瘤患者血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排的检测及临床意义

目的 检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排并探讨其临床意义.方法 提取74例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法 检测IgH(FR3A/VLJH)和TCRγ(TVG/TJX)克隆性基因重排,并分别与外周血单个核细胞DNA、病理组织学检查进行比较.结果 74例患者中有58例(35例B-NHL和23例T-NHL)初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功,另16例临床缓解患者未提取出血浆游离DNA.35例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性31例(88.6%),无一例出现TCRγ基因单克隆重排,23例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性8例(34.8%),其中2例同时出现IgH基因单克隆重排.在50例同时获得病理活检标本基因重排结果 的病例中,30例B-NHL患者血浆DNA IgH基因重排阳性26例(86.7%),病理活检标本阳性24例(80.0%)(P＞0.05);20例T-NHL患者血浆DNA TCRγ基因重排阳性7例(35%),病理活检标本阳性6例(30%)(P＞0.05).结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便、相对无创,与病理活检标本的检测具有相同的临床意义.     

血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排在非霍奇金淋巴瘤患者微小残留病中的应用及临床意义

目的检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排,并探讨其在监测微小残留病变(MRD)中的临床意义。方法提取63例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法检测IgH(VH FR3-JH)和TCRγ(Vγ-Jγ)克隆性基因重排,与病理组织学检查进行比较。并随访患者以监测和检测MRD。结果 63例中有49例[30例B细胞NHL(B-NHL)和19例T细胞NHL(T-NHL)]初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功。30例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性27例(90%),19例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性14例(74%);其病理活检标本基因重排结果分别为87%和74%(P0.05)。另14例(9例B-NHL,5例T-NHL)临床缓解患者中,仅1例(B-NHL)提取出血浆游离DNA并检测到IgH基因单克隆重排。随访治疗缓解的患者共56例,其中24例患者血浆游离DNA基因重排持续阴性,2年存活率达83%;27例患者血浆游离DNA基因重排缓解时呈阴性随后转阳,5例患者缓解后始终能检测到血浆游离DNA基因重排,其2年存活率分别为26%和20%(P0.05)。结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便,与病理活检标本检测具有相同的临床意义。在MRD的监测中,利用血浆游离DNA检测单克隆性重排具有一定的早期预测复发的作用。     

多重PCR检测基因抗原受体重排在儿童急性淋巴细胞白血病诊断中的应用

目的 建立多重PCR方法检测免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因重排,探讨在儿童急性淋巴细胞白血病诊断和鉴别中的作用.方法 参照BIOMED-2协作组制定的Ig和（或）TCR检测方法,对儿童ALL患儿114 例,分别检测患者骨髓单个核细胞的IgH、IgK、TCRG和TCRB基因重排.结果 在105例B系儿童ALL患者中,克隆重排的检出率分别为IgH 73%、IgK34%、TCRG 44%和TCRB 35%,所有B-ALL患者Ig基因重排检出率可达85%;在11例T系ALL患者中,克隆重排的检出率分别为TCRB 82%和TCRG 73%,T-ALL 患者TCR基因重排检出率可达100%.结论 BIOMED-2引物系统可以检测出绝大多数儿童ALL患者的Ig/TCR基因重排,是一种有效的检测工具,值得在临床中推广使用.     

流式细胞技术在诊断B-NHL患者骨髓受累中的应用

本研究探讨流式细胞术(FCM)在诊断B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者骨髓受累中的应用意义。利用多参数FCM检测54例初治B-NHL患者的骨髓标本,并结合骨髓形态学和分子生物学检测结果进行分析。FCM诊断B-NHL患者骨髓受累的标准为出现单克隆B细胞。分子生物学方法诊断骨髓受累的标准为出现肿瘤性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排。结果表明,在诊断B-NHL患者骨髓受累方面,FCM的检出率最高(27.5%,14/54例),其次为分子生物学方法(22.2%,12/54例),而形态学检出率最低(5.6%,3/54例)。3种方法联合运用,可将B-NHL患者淋巴瘤骨髓受累的检出率提高至38.9%(21/54例)。FCM方法诊断淋巴瘤骨髓受累的14例患者中,骨髓B淋巴细胞kappa/lam bda轻链比值远超过诊断界值。FCM在早期患者(3/26例)中亦能检测到骨髓受累。在3例形态学诊断骨髓受累的患者中,FCM均检测到单克隆B细胞。FCM与分子生物学方法检测结果符合率为70.4%(38/54例,p=0.14)。结论:对于B-NHL患者,运用FCM检测骨髓中单克隆B细胞,在诊断淋巴瘤患者骨髓受累方面敏感性高、准确性好。B-NHL早期患者也存在骨髓受累的可能,应及时在治疗前评价骨髓是否受累。采用FCM、分子生物学检测技术能提高淋巴瘤患者骨髓受累的诊断效率。     

非霍奇金淋巴瘤患者骨髓单个核细胞BCL-2/IgH、IgH基因重排的检测

本研究检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者BCL-2/IgH基因主要断裂区重排、IgH基因重排,并探讨其对疾病的早期诊断、疗效评价等方面的意义。分别提取70例NHL(60例B-NHL、10例T-NHL)、7例淋巴结炎性肿大患者、20名正常人的骨髓单个核细胞DNA,通过PCR方法检测BCL-2/IgH、IgH基因重排,以凝胶电泳出现相应条带者为阳性,并与患者病理组织学检查进行比较,探讨此两种基因重排发生的相关因素,比较化疗后的动态变化。结果表明,①30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者(DLBCL)中,10例骨髓BCL-2/IgH重排阳性(33.3%),与30例其它B-NHL(除外滤泡淋巴瘤FL及DLBCL)阳性率(6.7%)、20名正常人阳性率(5%)比较均有显著性差异(p均<0.05)。所有T-NHL及7例淋巴结炎性肿大患者BCL-2/IgH重排均为阴性;②对8例BCL-2/IgH基因重排阳性患者进行动态监测,经2个疗程R-CHOP治疗后BCL-2/IgH基因重排明显减少,PCR半定量结果均值由初治0.59降至0.16(p<0.05),6个疗程R-CHOP治疗后PCR半定量均值为0,BCL-2/IgH基因重排完全转阴;③BCL-2/IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占81.8%,在重排阴性患者中占28.6%,两组间有统计学差异(p<0.05)。然而,BCL-2/IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性;④20例DLBCL(均为初治)骨髓单个核细胞DNA检测显示,9例IgH基因重排阳性(45%);30例其它B-NHL(均为初治或复发患者,DLBCL除外)中14例IgH基因重排阳性(46.7%),其两组间无统计学差异性(p>0.05),但对照组20名正常人、10例T细胞淋巴瘤患者及7例淋巴结炎性肿大患者均为阴性;⑤对7例IgH基因重排阳性患者进行动态监测表明,1个疗程的R-CHOP治疗就能显著减少IgH基因重排,PCR半定量结果均值由初治0.42降至0.13(p<0.05),2个疗程后PCR半定量均值为0,重排完全消除;⑥IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占90%,在重排阴性患者中占30%,两组间有统计学差异(p<0.05);IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性。结论:BCL-2/IgH、IgH基因重排均可作为B-NHL早期诊断及评价疗效的特异性指标,这两种重排均与LDH水平相关;BCL-2/IgH基因重排对DLBCL特异性较高。     

多发性骨髓瘤患者免疫球蛋白重链基因重排的检测及意义

目的 探讨免疫球蛋白重链（IgH）基因重排在多发性骨髓瘤（MM）诊治中的应用。方法 采用半巢式PCR技术,分别用MM患者的IgH基因的CDR2和CDR3区的两组引物,对61份MM患者的骨髓和外周血单个核细胞进行扩增。结果 27份骨髓标本中,IgH基因重排Fr2A阳性率为70．4％（19／27）,34份外周血标本阳性率58．8％（20／34）。骨髓标本的Fr2A阳性率略高于外周血标本,而Fr3A的阳性率两者无明显差异。MM患者的IgH基因重排与Ig型别,临床分期及浆细胞数有关。IgG和IgH基因重排阳性率高于IgA型及轻链型;Ⅲ,期患者IgH基因重排阳性率高于Ⅰ,Ⅱ期患者;浆细胞数大于5％时,IgH基因重排阳性率略高;7例达临床完全缓解的患者中,仅有1例IgH基因重排Fr2A,Fr3A均转为阴性。结论 PCR技术检测MM患者IgH基因重排可作为诊断,疗效观察,预后判断及微小残留病监测的参考指标之一。     

诊断小儿前B急性淋巴细胞白血病时骨髓与外周血之间IgH基因重排形式的差别

作者对30例小儿前B 急性淋巴细胞白血病(Pre B-ALL)骨髓和相应外周血细胞的IgH 基因和Igk 基因重排进行了分析.通过Southern 印迹杂交,用识别J_H 基因3'端序列的J_H 探针和识别J_K 基因3'端序列的J_K 探针,检测是否有IgH 基因和IgK 基因重排.结果表明,全部30例有IgH 基因重排或缺失,14/30伪有IgK 基因重排或缺失。在10/30例有IgH基因多次重排,6例是双亚克隆,4例是多亚克隆。其     

多重PCR法检测初诊成人急性淋巴细胞白血病患者克隆性免疫球蛋白和T细胞受体基因重排

目的 应用多莺PCR方法检测初诊成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的克隆性免疫球蛋白(Ig)和T细胞受体(TCR)基因重排,为实时定量RT-PCR(RQ-PCR)法监测ALL患者体内的微量残留病(MRD)奠定基础.方法 参照BIOMED-2协作组制定的Ig和(或)TCR检测方法,设计96条不同的PCR引物,分成14个混合管,通过多重PCR,分别检测患者骨髓单个核细胞的IgH、IgK、TCRB、TCRG、TCRD克隆性基因重排.结果 在22例成人B系ALL患者中,Ig克隆性重排检出率为96%,其中IgH为86%,IgK为14%.在18例成人T系ALL患者中,TCR克隆性重排检出率为100%,其中TCRB为83%,TCRG为78%,TCRD为39%.两个及两个以上克隆性标志物的检出率在B和T系ALL中分别为91%(22例中20例)和89%(18例中16例).结论 BIOMED-2协作组设计的14管多重PCR引物和方法,几乎可检测到淋巴细胞白血病患者体内所有占优势的克隆性T、B细胞增殖群体,方法简便、可靠、覆盖面广,适用于成人ALL患者基因重排检测和MRD监测.     

IgH基因重排PCR分析在淋巴组织细针穿刺中的辅助诊断价值

目的 探讨Ign基因重排检测在细针穿刺诊断淋巴组织病变中的价值.方法 收集淋巴组织细针穿刺病例159例,应用半巢式PCR检测IgH基因重排.将基因重排检测结果与细胞学诊断及组织学随访结果进行比较.结果 穿刺标本中,IgH基因重排检测B-NHL阳性率为72.22%,RH阳性率仅为3.92%.本法敏感性为72.22%,特异性达到96.08%.结论 IgH基因重排检测对辅助淋巴组织细针穿刺标本的良、恶性判断具有一定价值,并且单克隆性结果更有意义.但在淋巴瘤和转移性非淋巴细胞恶性肿瘤的鉴别上不建议应用.     

B-NHL患者骨髓和外周血细胞克隆性IgH基因重排的检测及临床意义

为探讨骨髓(BM)和外周血(PB)细胞克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)分期、疗效及预后判断方面的价值,采用半巢式PCR,对治疗前B-NHL患者BM 46例和PB 38例及治疗缓解后的BM和PB 10例进行了该标志的检测.对照组为非肿瘤或非B细胞来源肿瘤患者的BM或PB共33例.结果显示在B-NHL组,治疗前形态学有瘤细胞侵犯的3例BM及2例PB,克隆性IgHCDR3重排阳性;在形态学未见异常的BM和PB中克隆性IgH重排阳性率分别为65.1%及44.4%,与B-NHL分期及有无全身症状无关.10例病理组织克隆性IgH重排阳性的病人,7例缓解后BM和PB重排转为阴性,处于持续完全缓解状态;2例行自体外周血干细胞移植后BM或PB重排持续阳性者复发;1例移植后10个月BM克隆性IgH重排阳性,仍处于完全缓解.对照组33例中仅1例克隆性IgH重排阳性,本方法的特异性为97%.研究提示,PCR法能早期诊断BM及PB的瘤细胞浸润.临床缓解期BM或PB克隆性IgH重排阳性预示可能近期复发,阴性者可能持续缓解,个别IgH阳性者仍长期生存,其机理有待进一步研究.     

IgH基因克隆性重排检测在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

目的建立B-NHL临床诊断中IgH基因克隆性重排检测基本方法.方法应用PCR方法,采用IgH FR3A引物,检测了7例B-NHL及4例反应性增生的淋巴结石蜡样本中IgH基因重排情况.结果黏膜相关型边缘区B细胞淋巴瘤（MALT）3例中有2例（2/3）,弥漫大B细胞淋巴瘤2例中2例（2/2）,滤泡淋巴瘤1例中0例（0/1）,套细胞淋巴瘤1例中1例（1/1）检测到IgH基因的克隆性重排.总检测率为5/7（71%）,4例淋巴结反应性增生病例病例均为IgH基因的多克隆性重排.结论PCR-FR3A在鉴别淋巴组织肿瘤性或反应性增生和最终确诊B-NHL上是一项有效的辅助方法.     

Ig/TCR基因重排与基因突变检测在淋巴瘤诊断中的临床价值

目的探讨Ig/TCR基因重排和基因突变在淋巴瘤诊断中的应用价值。方法从227例患者石蜡包埋组织中提取基因组DNA,使用BIOMED-2系统引物和聚丙烯酰胺凝胶电泳法对标本基因组DNA中IGH、IGK、IGL、TCRG、TCRB、TCRD的重排进行分析,并对其中6例疑难病例进行相关基因突变二代测序检测。结果 178例诊断为淋巴瘤,分别为142例B细胞非霍奇金淋巴瘤,34例T细胞淋巴瘤和2例经典霍奇金淋巴瘤; 43例为反应性淋巴组织增生,6例疑难病例尚无法确诊。在178例确诊的淋巴瘤患者中,共发现168例Ig/TCR基因单克隆性重排,10例未发现基因单克隆性重排。142例B细胞非霍奇金淋巴瘤总体Ig基因单克隆性重排率为96.48%(137/142),其中,Ig基因单基因重排率为19.01%(27/142),为IGH和IGK单基因重排,重排率分别为11.97%(17/142)和7.04%(10/142),未发现IGL单基因重排; Ig基因双基因联合重排率为53.52%(76/142),其中IGH/IGK双基因联合重排率高达49.30%(70/142),IGH/IGL和IGK/IGL双基因联合重排率分别为1.41%(2/142)和2.82%(4/142); IGH/IGK/IGL三基因联合重排率为19.01%(27/142);另有7例发生Ig/TCR双阳性重排,重排率为4.93%(7/142)。34例T细胞淋巴瘤TCR基因总体单克隆性重排率为70.59%(24/34)。2例经典霍奇金淋巴瘤未检测出Ig/TCR基因单克隆性重排。43例反应性淋巴组织增生病例有2例TCRB基因单克隆性重排。在6例疑难病例中,3例发现存在STAT3、TMSB4X、B2M、KDM6A和ARID1A等淋巴瘤相关基因突变。结论利用BIOMED-2标准化Ig/TCR基因重排检测对于淋巴瘤的诊断有辅助性作用;二代测序技术对淋巴瘤的鉴别诊断中有一定帮助。     

B—HL患者骨髓和外周血细胞克隆性IgH基因重排的检测及临床意义

为探讨骨髓（BM）和外周血（PB）细胞克隆性免疫球蛋白重链（IgH)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）分期、疗效及预后判断方面的价值。采用半巢式PCR,对治疗前B-NHL患者BM46例和PB38例及治疗缓解后的BM和PB10例进行了该标志的检测,对照组为非肿瘤或非细胞来源肿瘤患者的BM或PB共33例,结果显示：在B-NHL组,治疗前形态学有瘤细胞侵犯的3例BM及2例PB,克隆性IgHCDR3重排大大万籁 ;在形态学未见异常的BM和PB中克隆性IgH重排阳性率分别为65.1%及44.4%,与B-NHL分期及有无全身症状无关,10例病理组织克隆性IgH重排阳性的病人,7例缓解后BM和PB重排转为阴性,处于持续完全缓解状态;2例行自体外周血干细胞移植后BM或BNP重排持续阳性者复发;1例移植后10个月BGM克隆性IgH重排阳性仍处于完全缓解,对照组33例中仅1例克隆IgH重排阳性,本方法的特异性为97%。研究提示,PCR法能早期诊断BM及PB的瘤细胞浸润,临床缓解期BM或PB克隆笥IgH重排阳性预示可能有近期复发,阴性者可能持续缓解,个别IgH阳性者仍长期生存,其机理有待进一步研究。     

BIOMED-2多重聚合酶链反应检测抗原受体基因重排在淋巴增殖性疾病诊断中的应用

目的 建立敏感而有效的检测免疫球蛋白(Ig)和T细胞受体(TCR)基因重排的方法,并探讨在淋巴增殖性疾病诊断和鉴别中的作用.方法 采用BIOMED-2多重聚合酶链反应,检测来自54例淋巴增殖性疾病患者的58份淋巴组织标本,分析抗原受体基凶重排状况及其克隆来源.结果 在88.0%(25份标本中22份)B细胞淋巴瘤/白血病和53.3%(15份标本中8份)T细胞淋巴瘤中检出Ig/TCR呈单克隆重排;在17例淋巴组织非恶性增殖患者的病理活检标本中,14例(82.4%)呈多克隆重排;在合格的57份标本中有44份(77.2%)的结果与最终诊断相符.联合检测Igλ和TCRδ并未提高Ig/TCR单克隆重排的检出率,但可能有助于Igλ和TCRδ+淋巴瘤的诊断.结论 对于分析淋巴增殖性疾病,尤其是不典型病例的克隆来源状况,BIOMED-2多重聚合酶链反应检测抗原受体基凶重排是迅速、敏感而可靠的方法.     

实时定量聚合酶链反应检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排

我们利用SYBR Green Ⅰ荧光染料，应用实时定量PCR（RQ-PCR）检测了15例B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者免疫球蛋白重链（IgH）基因重排情况，以探讨克隆性IgH基因重排在B-NHL诊断和鉴别诊断上的价值。     

儿童急性B淋巴细胞白血病中相关融合基因检测结合BIOMED-2标准化Ig基因重排的应用研究

目的:探讨ALL相关基因检测与BIOMED-2标准化Ig基因重排技术在儿童B-ALL诊治中的应用以及两者的之间的相关性。方法:采用ALL相关基因检测试剂盒与BIOMED-2系统引物,分别进行RNA/DNA的多重PCR扩增,并应用RQ-PCR进行荧光检测及PCR片段分析法进行Ig基因重排的克隆性分析。结果:251例B-ALL患儿中TEL-AML1~+77例,E2A-PBX1~+28例,MLL-AF4~+10例,BCR-ABL~+11例,总阳性率为50.2%;IgH V_H-J_H重排阳性率为82.5%,IgK重排阳性率为53.4%。融合基因与基因重排的联合检出率为99%。E2A-PBX1~+组及MLL-AF4~+组中Ig H及Ig K分别与阴性对照组相比,其中Ig K阳性率的差异具有统计学意义(P0.001及P=0.005)。对105例融合基因阳性患者同时检测染色体荧光原位杂交,其阳性符合率均大于94%。结论:ALL相关融合基因筛查与BIOM ED-2标准化Ig基因重排技术相结合,不仅可以大大提高在儿童B-ALL的检出率,还可以对疾病预后进行较为精确地分组,同时相对于染色体FISH检测更加快速灵敏。     

用多聚酶链反应技术检测多发性骨髓瘤患者免疫球蛋白重链基因重排的研究

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３５例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者的外周血（其中８例同时测骨髓）及１例未定性单克隆丙种球蛋白病（ＭＧＵＳ）患者的外周血和骨髓的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。８例ＭＭ的骨髓标本７例阳性。３５例外周血２３例阳性，阳性率为６５．７％。其中ＩＩ、ＩＩＩ期阳性率明显高于Ｉ期；ＩｇＧ型阳性率高于ＩｇＡ及ＩｇＤ型。另１例ＭＧＵＳ患者的外周血及骨髓均未测出ＩｇＨ基因重排。作者认为，ＩｇＨ基因重排的检测对ＭＭ诊断有一定的价值；骨髓标本优于外周血。     

双色荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病IgH基因易位

目的 了解慢性淋巴细胞白血病（CLL）中染色体14q32上IgH基因易位情况，探讨其与CLL疾病进展的关系。方法 运用位于14q32上IgH基因两端的序列特异性DNA探针IGHC、IGHV和双色间期荧光原位杂交（FISH）技术对70例初发的B细胞CLL（B—CLL）患者的间期细胞进行IgH基因易位重排情况的检测。结果 70例B—CLL中8例（11．4％）有IgH基因易位重排，其阳性细胞率为10．5％～53．0％之间，且IgH基因易位在不同性别、年龄和Binet分期中差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 IgH基因异位在B—CLL中属易发事件，对B—CLL的发生和发展的作用有待进一步研究。FISH是一种在分析B—CLL中IgH基因易位异常方面较为快速、准确和敏感的方法。