MAGE-A1在人脑胶质瘤中的表达及其意义

为探讨黑色素瘤抗原A1(melanoma antigen A1,MAGE-A1)蛋白在人脑胶质瘤中的表达与其恶性程度的关系,用免疫组织化学SABC法检测48例人脑胶质瘤标本、2株人脑胶质瘤细胞系U87、SHG-44及6名正常人脑组织中MAGE-A1蛋白的表达.同时采用免疫荧光染色后流式细胞仪分析及荧光显微镜观察2株胶质瘤细胞MAGE-A1的表达.结果显示,MAGE-A1蛋白在I～Ⅳ级胶质瘤组织中阳性率分别为25.0%,29.4%,38.5%和50.0%,正常脑组织无表达.胶质瘤细胞系U87、SHG-44细胞MAGE-A1的表达率分别为77.3%,95.8%.表明MAGE-A1蛋白表达于人脑胶质瘤细胞,并与其恶性程度相关.     

人卵巢癌中三种MAGE家族基因表达和患者HLA表型的初步分析

分析卵巢癌中MAGE家族基因成员MAGE 1, 2 , 3基因mRNA表达和患者HLAI类分子表型 ,为卵巢癌的免疫治疗提供依据。应用RT PCR技术检测卵巢癌和正常组织中MAGE 1, 2 , 3基因mRNA表达 ,同时采用血清学方法检测卵巢癌患者HLAI类分子表型 ,并分析基因表达和HLAI类分子表型分布的相互关系。 31例卵巢癌中阳性表达率分别MAGE 1为7/31(2 3% ) ,MAGE 2为 2 0 /31(64% )和MAGE 3为 6/31(19% ) ,其中至少一种MAGE基因表达为 2 7/31(90 % ) ,而正常组织除睾丸外未见任何一种基因表达。患者的HLAI类分子表型多为HLA A2、A11、A19和B15、B35、B40。对卵巢癌中MAGE 1, 2 , 3基因特异性表达分析和HLAI类分子表型的鉴定 ,有助于肿瘤的分子诊断和免疫治疗     

肿瘤-睾丸抗原SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在胰腺癌中的表达及其生物学意义

目的 检测肿瘤-睾丸抗原(CTA)SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在正常胰腺组织、慢性胰腺炎以及胰腺癌中的表达情况,寻找胰腺肿瘤中高表达的CTA.方法 应用免疫组织化学SP法检测8例正常胰腺组织、15例慢性胰腺炎组织、52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达.Western blotting检测52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达.结果 正常胰腺组织、慢性胰腺炎中SSX、MAGE-A1和NY-ESO-1均不表达,SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在52例胰腺癌的阳性表达率分别为48.08%(25/52)、7.69%(4/52)、5.77%(3/52);经相关分析,SSX、NY-ESO-1和MAGE-1的阳性表达与患者的年龄、性别、病变部位、分化程度均未见明显相关关系(P＞0.05); SSX的表达与肿瘤的浸润转移呈负相关(r=-0.306,P=0.028); 52例胰腺癌病例中55.77%(29/52)有1种以上的CTA表达.结论 不同种类的CTA在胰腺癌中的表达存在显著差异,SSX的阳性表达率最高;胰腺癌中SSX的高表达与肿瘤的转移呈明显的负相关关系;CTA在胰腺癌中的表达呈现簇生现象.     

神经胶质瘤中NQO1高表达在预后评估中的意义

目的探讨NQO1高表达在神经胶质瘤早期诊断及预后评估中的临床价值。方法应用免疫组化EnVision法检测NQO1蛋白在122例神经胶质瘤组织、17例癌旁正常组织中的表达,分析NQO1蛋白高表达与神经胶质瘤临床病理特征的关系;采用TCGA数据库分析NQO1 mRNA表达与神经胶质瘤患者生存期的关系。结果NQO1蛋白在神经胶质瘤中的阳性率和强阳性率分别为88.5%(108/122)和52.5%(64/122),均显著高于癌旁正常组织(P<0.01);NQO1蛋白高表达与神经胶质瘤患者的临床分期密切相关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位及浸润情况无关(P>0.05);TCGA生存分析结果提示,NQO1高表达与神经胶质瘤患者的总生存期无关,但NQO1高表达者的无瘤生存期明显低于NQO1低表达者(P<0.05)。结论NQO1可能参与神经胶质瘤的发生、发展,且其高表达有望成为神经胶质瘤早期诊断及预后评估的重要指标。     

肿瘤抗原MAGE-A3新的HLA-A2限制性CTL表位的发现与鉴定

目的:鉴定肿瘤抗原MAGE－A3新的HLA-A2限制性CTL表位。方法:采用CTL表位预测的基序法与二级锚点相结合预测 MAGE-A3的 HLA-A2限制性CTL表位;用计算机分子模拟进行表位的初步筛选;以标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果:在所筛选的4个候选CTL表位中,MAGE-A3201-209可在体外有效诱导特异性CTLs的产生,杀伤靶细胞。结论:MAGE-A3201-209为肿瘤抗原MAGE-A3的新的HLA-A2限制性CTL表位。为基于MAGE-A3的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计、研究奠定了基础。     

MAGE-3基因的表达检测和重组MAGE抗原的制备及其应用

目的 克隆MAGE－3基因并检测其在人食管癌组织中的表达情况；重组表达MAGE－1和MAGE－3抗原，用于食管癌的治疗性蛋白疫苗的免疫原性研究。方法 RT－PCR法检测了MAGE－3在人食管癌组织中的表达情况。采用DNA重组技术将MAGE－1和MAGE－3全长cDNA克隆至pET30a( )载体上，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，经SDS－PAGE和western blot鉴定后，制备其可溶性蛋白，研究其对人T细胞增殖能力的影响。结果 MAGE－3基因在食管癌组织中的表达率为50％（15／30）；在30例相应癌旁正常组织中未见表达。成功获得了MAGE－1和MAGE-3可溶性蛋白；人T细胞能够对自身抗原递呈细胞加工处理的MAGE－1和MAGE－3蛋白产生应答。结论 MAGE－1和MAGE－3蛋白可能是用于食管癌免疫治疗的免疫原性较强的靶抗原。     

MAGE-3抗原冲击外周血单个核细胞诱导抗肿瘤免疫应答

MAGE 3基因的表达产物是一种肿瘤排斥抗原 ,在抗肿瘤免疫治疗中可作为靶抗原。本实验以原核表达GST MAGE 3融合蛋白 ,体外观察MAGE 3蛋白抗原冲击外周血单个核细胞 (Pe ripharalbloodmononuclearcells,PBMCs) ,能否诱导特异性的抗肿瘤免疫应答。根据MAGE 3cDNA序列 ,设计引物 ,通过RT PCR从胎盘组织中扩增MAGE 3全部编码序列 ,片段长度 95 7bp ,将该片段克隆至pGEX 4T 2原核表达载体。重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经IPTG诱导表达 ,表达产物经电泳证实后再用GlutathioneSepharose 4B纯化 ,蛋白纯度在 90 %以上。纯化的蛋…     

MAGE-A家族与NY-ESO-1在乳腺癌中的表达及免疫治疗前景

以肿瘤特异性抗原为基础的肿瘤免疫治疗已经成为乳腺癌的新的治疗模式,癌睾丸抗原(CTA)是肿瘤免疫治疗研究的热点.MAGE-A家族与NY-ESO-1作为癌睾丸抗原家族的重要成员,在乳腺癌的诊断、治疗、预后等各个方面发挥重要作用.MAGE-A家族不同成员在乳腺癌组织中有不同程度的阳性表达,其表达机制可能和DNA甲基化和组蛋白去乙酰化相关.目前MAGE-A的肿瘤疫苗研究尚处于起步阶段,而且其应用也有一定的局限性.有人认为通过去甲基化药物激活MAGE-A表达,可以增加MAGE-A的免疫原性,增强免疫治疗疗效.NY-ESO-1在不同类型肿瘤组织中均有阳性表达,它也是判断肿瘤预后的重要指标.基因甲基化可能是调控NY-ESO-1在肿瘤中表达的机制.以NY-ESO-1为基础的多种疫苗已相继进入临床研究阶段.综上,MAGE-A和NY-ESO-1可成为现在以及将来免疫治疗的理想靶标.     

探索MAGE-A3和AKAP-4在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的检测癌睾丸抗原（CTA）MAGE-A3、AKAP-4在非小细胞肺癌（NSCLC）的表达及意义。方法应用间接酶免疫组化技术检测MAGE-A3、AKAP-4在45例肺癌组织中的表达情况,分析其与组织类型及淋巴结转移的相关性。结果 45例标本中MAGE-A3、AKAP-4在NSCLC中的敏感度分别为62.2%和73.3%,联合两种抗原可显著提高敏感性,为91.1%（P〈0.05）;MAGE-A3、AKAP-4在鳞癌中的表达率显著高于腺癌,与性别、年龄、淋巴结有无转移不相关。结论 MAGE-A3、AKAP-4是较好的NSCLC辅助诊断指标,联合应用两种蛋白可提高诊断敏感性。     

黑色素瘤相关抗原MAGE-E1 mRNA在胶质瘤中的定量表达研究

目的:了解MAGE-E1 mRNA在胶质瘤中的表达,探讨将它用于胶质瘤免疫治疗的可能性。方法:建立实时定量PCR方法,检测47例人胶质瘤及14例正常脑组织中MAGE-E1,管家基因HPRT1作为内参,以MAGE-E1/HPRT1值计算MAGE-E1 mRNA表达量,并对MAGE-E1 mRNA表达与临床指标的关系进行分析。结果:在正常脑组织及胶质瘤中,MAGEE1高度表达率分别为7.1%和66.0%,两者比较具有统计学差异(P0.05)。MAGE-E1 mRNA的表达与病人性别、年龄、病理类型和级别无关。结论:MAGE-E1 mRNA在胶质瘤中水平较高,提示MAGE-E1可能成为胶质瘤免疫治疗的候选靶抗原。     

Response of glioma cells to interferon-gamma: increase in class II RNA, protein and mixed lymphocyte reaction-stimulating ability

Previous results by ourselves and others demonstrated that brain cells and cell lines express major histocompatibility complex class II antigens. We examined interferon-gamma (IFN-gamma)-mediated induction of human class II antigen expression on the glioma cells. Purified IFN-gamma induced the expression of HLA-DR antigens on the surface of the glioma cell lines U-373 MG and U-105 MG. Concomitant increase of HLA-DR alpha- and HLA-DC beta-specific RNA in the cytoplasm was also observed after treatment with IFN-gamma. Increases of class II antigen paralleled the increased level of class II-specific RNA. The effect of IFN-gamma on the induction of human class II antigen expression was dose and time dependent. A marked induction of human class II antigen expression was observed when glioma cells were cultured with more than 100 U/ml of IFN-gamma. Little or no induction was observed with less than 50 U/ml of IFN-gamma. Compared to human blood monocytes, glioma cells needed higher concentrations of IFN-gamma for the induction of class II antigen expression. In allogenic mixed lymphocyte cultures, the glioma cell line U-373 MG stimulated a mixed lymphocyte response (MLR). MLR-stimulating capacity was augmented by IFN-gamma. The concomitant augmentation of class II antigen levels and MLR-stimulating capacity suggests that the most relevant factor for MLR stimulation may be antigen density. This is the first report of MLR stimulation by a glioma cell line.     

癌-睾丸抗原基因在神经胶质瘤干细胞中的表达

背景：癌-睾丸抗原基因在胶质瘤干细胞表达还不甚清楚。 目的：检测癌-睾丸抗原基因在神经胶质瘤干细胞中的表达。 方法：通过神经球培养的方法而分离干细胞。以半定量PCR及实时荧光定量PCR检测癌-睾丸抗原基因在母细胞、干细胞与分化细胞中的表达。 结果与结论：以神经球培养方式从胶质瘤细胞系中可分离出肿瘤球,将肿瘤球培养在含血清的培养基中,它的形态呈贴壁分化,且与母细胞没有区别。半定量PCR及实时荧光定量PCR检测发现与母细胞和分化细胞相比,癌-睾丸抗原基因在干细胞中的表达最高。提示癌-睾丸抗原基因可能为肿瘤干细胞的表面抗原。     

IgG在人脑胶质瘤中的表达及其与OPN、MMP-2、MMP-9、P16的关系

目的检测IgG在人脑胶质瘤中的表达及其与OPN、MMP-2、MMP-9、P16表达的关系。方法免疫组化检测IgG、OPN、MMP-2、MMP-9、P16在80例胶质瘤组织中的表达,原位杂交和RT—PCR检测IgG mRNA在组织和胶质瘤细胞系U373细胞中的表达。结果胶质瘤组织和U373细胞系细胞中有IgG蛋白及IgG mRNA表达,IgG、OPN、MMP-2、MMP-9和P16的表达阳性率在不同级别胶质瘤组均有显著性差异,IgG与OPN、MMP-2、MMP-9的表达呈正相关,与P16表达呈负相关。结论胶质瘤中IgG、OPN、MMP-2、MMP-9高表达,P16低表达,可能在胶质瘤的发生发展中起一定作用。     

神经胶质瘤中β-抑制蛋白1的表达及意义

目的检测神经胶质瘤中β-抑制蛋白1(ARRB1)的表达水平及临床意义。方法采用RT-PCR和Western blotting检测胶质瘤细胞系中ARRB1的表达水平;通过肿瘤微阵列数据库(Oncomine)及Project Betastasis平台分析ARRB1 mRNA在神经胶质瘤中的表达情况;采用免疫组织化学方法检测神经胶质瘤组织及瘤旁脑组织中ARRB1的表达水平;应用Kaplan Meier分析ARRB1的表达水平与胶质瘤患者预后的关系。结果与正常人脑组织和人胚肾细胞系(HEK293)相比,神经胶质瘤细胞系中ARRB1的mRNA和蛋白水平降低;Oncomine数据库结果显示,多个神经胶质瘤基因芯片中ARRB1 mRNA水平较正常对照组明显降低(P0.001),ARRB1在恶性程度较高的胶质母细胞瘤中下降程度更加明显;免疫组织化学结果显示,与瘤旁脑组织相比神经胶质瘤中ARRB1表达降低,而且Ⅲ-Ⅳ期较Ⅰ-Ⅱ期神经胶质瘤降低更加明显。此外,Kaplan-Meier生存曲线结果显示,ARRB1的表达水平与神经胶质瘤患者的生存时间存在相关性(P0.05)。结论神经胶质瘤ARRB1水平下调,可作为反映神经胶质瘤临床病理学特点的指标;另外,ARRB1可作为判断神经胶质瘤患者预后的生物标志物。     

MicroRNA-613在人胶质瘤中的表达及其对增殖与转移的影响

目的 探讨microRNA-613(miR-613)在人胶质瘤中的表达及其对增殖与转移的影响。 方法 采用Real-time PCR法对30例人胶质瘤患者瘤组织和30例非胶质瘤患者的脑组织的miR-613表达水平进行检测,并分析其与胶质瘤临床病理特征及预后的关系;采用LipofectamineTM2000将miR-613模拟物（miR-613 mimics）和无关序列对照（miR-613 con）转入U87细胞中,Real-time PCR检测两组细胞miR-613的表达水平,CCK8法检测细胞增殖变化,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。 结果 miR-613在胶质瘤组织中表达低于正常的脑组织（P<0.05）。胶质瘤组织miR-613的表达水平与病理分级成负相关,与生存时间成正相关（P<0.05）;与miR-613 con比较,miR-613 mimics细胞增殖水平、侵袭与迁移能力显著降低（P<0.05）。 结论 miR-613具有抑制胶质瘤细胞的生长、侵袭与迁移的作用,有望成为胶质瘤的潜在治疗靶点。     

Characterization of a glial associated antigen GA-1 by monoclonal antibody

A glial antigen (GA-1) was identified by monoclonal antibodies (MAb) raised against C6 rat glioma cells. MAb-7D3 (IgG_2aκ) revealed GA-1 as a single protein band with a R_f value of 0.09 by the use of basic-PAGE Western blot. SDS-PAGE Western blot and radioimmunoprecipitation (RIP) further resolved Ga-1 into two subunits with a molecular weight of 200 and 78 kDa respectively. Subcellular localization by immunocytochemical staining revealed its cytosolic presence with a punctate pattern perinuclearly. Significant expression of GA-1 may be detected in 4 glioma or glial cell lines derived from rat brain. However, no expression may be detected in the rest of the 18 mammalian cell lines or primary neural cell cultures examined. All of the above data thereby suggest that GA-1 may be glial specific whereas the epitope of GA-1 defined by MAb-7D3 is species (rat) specific.     

ClC-3在人胶质瘤中的表达及分布

目的探讨ClC-3在人脑胶质瘤中的表达及其生物学意义。方法应用免疫组织化学染色技术检测24例人胶质瘤以及4例脑转移癌手术标本中ClC-3蛋白的表达;RT-PCR检测ClC-3蛋白表达阳性的手术标本中其mRNA表达。结果4例正常脑组织ClC-3蛋白的表达为阴性;而蛋白表达阳性的19例胶质瘤及4例脑转移癌中,ClC-3主要位于瘤细胞和微血管内皮细胞的胞浆或胞膜上。蛋白表达阳性的手术标本中16例胶质瘤和4例脑转移癌检测到ClC-3mRNA的表达。少突胶质细胞瘤Ⅲ级中ClC-3的mRNA和蛋白表达明显高于其Ⅱ级。结论ClC-3在人胶质瘤及脑转移癌组织中普遍表达,并且可能与少突胶质细胞瘤病理分级相关。     

ClC-3在人胶质瘤中的表达及分布

目的：探讨ClC-3在人脑胶质瘤中的表达及其生物学意义。 方法： 应用免疫组织化学染色技术检测24例人胶质瘤以及4例脑转移癌手术标本中ClC-3蛋白的表达；RT-PCR检测ClC-3蛋白表达阳性的手术标本中其mRNA表达。 结果： 4例正常脑组织ClC-3蛋白的表达为阴性；而蛋白表达阳性的19例胶质瘤及4例脑转移癌中，ClC-3主要位于瘤细胞和微血管内皮细胞的胞浆或胞膜上。蛋白表达阳性的手术标本中16例胶质瘤和4例脑转移癌检测到ClC-3 mRNA的表达。少突胶质细胞瘤Ⅲ级中ClC-3的mRNA和蛋白表达明显高于其Ⅱ级。 结论： ClC-3在人胶质瘤及脑转移癌组织中普遍表达，并且可能与少突胶质细胞瘤病理分级相关。     

MACC1基因在脑胶质瘤中的表达及其对U87细胞凋亡和增殖的影响

目的 探讨MACC1基因与脑胶质瘤的相关性及其表达改变对胶质瘤U87细胞凋亡和增殖能力的影响.方法 荧光定量PCR检测45例脑胶质瘤及相应癌旁组织MACC1基因的表达;设计并合成MACC1基因特异性的siRNA,转染U87细胞;Western blot检测转染后MACCI蛋白的表达;双标流式细胞法检测细胞凋亡;MTT法...     

High expression and frequently humoral immune response of melanoma-associated antigen D4 in glioma

MAGE-D4 is a novel member of MAGE super-family. It has preliminarily been demonstrated that MAGE-D4 mRNA is not expressed in majority of normal tissues except for brain and ovary in which only trace amount of MAGE-D4 mRNA can be detected, but predominantly expressed in glioma. MAGE-D4 protein expression and its immunogenicity in glioma have not been elucidated well. This study was designed to analyze MAGE-D4 expression both at mRNA and protein level, characteristic of humoral immune response, and their relationships with glioma patients’ clinicopathological parameters. Recombinant MAGE-D4 protein and antiserum were generated. Quantitative RT-PCR analysis revealed that MAGE-D4 mRNA expression was overall up-regulated in 41 glioma specimens compared with that in 14 normal brain tissues. Immunohistochemistry analysis showed that 78% (21/27) glioma tissues expressed MAGE-D4 protein, which was predominantly located in the cytoplasm of tumor cells, but absent in any neuroglia cell of normal brain tissues. ELISA analysis demonstrated that humoral response against MAGE-D4 was detected in 17% (7/41) of glioma patients’ sera but not in 77 healthy donors. No apparent correlation was observed between the expression and immunogenicity of MAGE-D4 with clinicopathological parameters of glioma. In summary, these results indicate that MAGE-D4 is highly expressed in glioma and can develop specifically humoral response in glioma patients, which supports that it may be a promising biomarker for glioma diagnosis and immunotherapy.