MHC-Ⅰ类分子在肿瘤浸润性淋巴细胞识别人黑色素瘤细胞中的作用

应用人白细胞抗原－Ａ２阳性（ＨＬＡ－Ａ＋２）黑色素瘤病人的瘤块中分离得到的肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ），进行ＨＬＡ－Ａ２限制性ＴＩＬ抗人黑色素瘤细胞作用的研究。在实验中发现，ＴＩＬ对自身和同种异体的ＨＬＡ－Ａ＋２黑色素瘤细胞具有杀伤作用，而对ＨＬＡ－Ａ－２黑色素瘤细胞及ＨＬＡ－Ａ＋２非黑色素瘤细胞无作用。选择重组白细胞介素４（ｒＩＬ－４）＋肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）能促进黑色素瘤细胞ＨＬＡ－Ａ２表达量，并增强ＴＩＬ对瘤细胞的杀伤活性。抗ＣＤ３、抗ＨＬＡ－ＡＢＣ和抗ＨＬＡ－Ａ２单抗具有明显抑制ＴＩＬ的抗瘤细胞活性。结果表明ＴＩＬ杀伤黑色素瘤细胞依赖于Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）对瘤细胞共同抗原的识别，并有主要组织相容性复合体－Ⅰ类分子参与。     

从卵巢癌cDNA文库中筛选新的肿瘤标志物

采用SEREX法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文库 ,得到 2 7个阳性克隆 ,其中 3个为全长cDNA。序列分析和同源性比对结果表明所获得的 2 7个克隆分属于分化抗原、细胞结构蛋白及功能未知三类。选择其中一个全长cDNAMY OVA 13(该基因编码的蛋白是MAD2 ) ,利用基因工程方法克隆、表达和纯化得到目的蛋白 ,采用点杂交方法检测了MY OVA 13目的蛋白与正常人和肿瘤患者中的血清学反应。MY OVA 13抗体只在肿瘤组中检测到 (5 / 74 ) ,在正常组中均为阴性 ;间接ELISA测定结果显示 ,MY OVA 13抗体的水平在肿瘤组中均高于正常组 ,其中肝癌和前列腺癌组与正常组相比 ,在统计学上有显著差异 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。我们的初步结果表明MY OVA 13及其抗体具有一定的肿瘤特异性 ,有可能作为肿瘤诊断的标志物     

人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型、细胞系建立及其生物学特性研究

目的建立人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和相应体外细胞系.方法将病理证实的人卵巢浆液性乳头状腺癌手术切除标本移植于SCID小鼠皮下,成瘤后行鼠间传代,取移植瘤细胞体外分离培养、传代和建系,并应用细胞、分子生物学手段对移植瘤和建系细胞进行一系列生物学特性检测.结果历时14个月传至5代,皮下移植瘤存活率为90%,持续6个月,体外建系(OVA-319)细胞生长稳定.镜下观察组织形态学和超微结构符合原肿瘤组织基本特征;染色体分布在12～46条之间,多为异倍体,显示人类肿瘤异常染色体;流式细胞术和RT-PCR技术分析原代、体内移植瘤和OVA-319细胞结果一致,表现为瘤细胞生长活跃、细胞周期分布相仿,MAGE-2基因在mRNA水平异常表达.结论人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和OVA-319细胞系为人类肿瘤的研究提供了良好的实验材料.     

肾透明细胞癌和卵巢癌与HLAI类抗原关联性研究

目的 分析HLAI类抗原与肾透明细胞癌和卵巢癌的关联性。为确定与这些肿瘤的易感性和抵抗性有关的基因。并为寻找肿瘤特异性的抗原肽,开展肿瘤免疫诊断和治疗奠定基础。方法 实验采用微量淋巴细胞毒试验。分析82例肾透明细胞癌和21例卵巢癌患者外周血HLA-A抗原和-B抗原的抗原频率。结果 与肾透明细胞癌和卵巢癌关联的HLAI类完全不同,其中与肾透明细胞癌关联的位点大大多于卵巢癌的位点,有A9、A11、A28、BG15、B22、B27和B40;而与卵巢癌关联的HLAI类抗原位点只有A10、A36和B12,且卵巢癌关联A10抗原保持显著关联。结论 HLAI类抗原关联性研究显示,HLA-A10可能为卵巢癌提供抵抗性。     

不同治法中药复方对H22肝癌小鼠瘤质量和体质量及免疫功能的影响

目的：比较不同治法的中药复方对H22肝癌小鼠瘤质量、体质量及免疫功能等的影响。方法：选择移植性肝癌H22小鼠为模型，观察不同治法的中药复方常规水煎剂的抑瘤作用，并通过检测各组小鼠T淋巴细胞增殖功能、自然杀伤细胞（naturalkiller，NK）杀伤功能、T淋巴细胞表型变化及7干扰素（interferon-7，IFN-7）和白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）含量来比较免疫功能状况。结果：以毒攻毒组小鼠瘤质量显著小于其他各组小鼠，抑瘤率达65．8%（P〈0．01）；其他4组抑瘤率在10.1％～17．1％之间。以毒攻毒组小鼠体质量明显下降，出现脱毛现象；扶正培本组小鼠毛发生长良好，活泼好动。以毒攻毒组小鼠T淋巴细胞转化刺激指数（stimulationindex，SI）增加显著（SI=4．34，P〈0.01），说明以毒攻毒组小鼠T细胞具有较强的增殖能力；其余各组小鼠sI均低于3，表明这些组的小鼠T细胞无明显增殖作用。清热解毒、活血化瘀和以毒攻毒组小鼠NK细胞百分数显著增高，分别为生理盐水组的5．05、4．07和5．17倍（P〈O．01）；扶正培本和化痰散结组小鼠NK细胞杀伤活性未见显著升高。IFN-7检测结果显示，以毒攻毒组小鼠T细胞分泌IFN-γ能力显著升高（P〈0．05）；IL-4检测结果显示，除扶正培本组外，清热解毒、活血化瘀、化痰散结和以毒攻毒组小鼠T细胞分泌IL-4的能力也均显著升高（P〈0．01）。结论：以毒攻毒法能有效抑制肿瘤细胞的生长，明显增强小鼠细胞和体液免疫功能；扶正培本法则有良好的强壮作用。     

扶正活血抗癌方对H22肝癌小鼠抑瘤及免疫调节的实验研究

目的：探讨扶正活血抗癌方对H22肝癌小鼠抑瘤及免疫调节的作用。方法：选择移植性肝癌H22小鼠为模型，设生理盐水组（对照组）10只，予生理盐水灌胃；实验组（治疗组）10只，予扶正活血抗癌方灌胃，均为15d。观察扶正活血抗癌方的抑瘤作用，检测T淋巴细胞增殖功能、NK细胞杀伤功能、T淋巴细胞表型变化及IFN-γ、IL-4含量。结果：扶正活血抗癌方对荷瘤小鼠肿瘤有显著的抑制作用，抑瘤率为28％；实验组小鼠NK细胞杀伤百分数均比生理盐水组显著增加（P〈0．01）；与生理盐水组相比，实验组更能改变T淋巴细胞亚群比例；实验组小鼠T细胞分泌IFN-γ及IL-4能力均有显著升高（P〈0．05，P〈0．01）。结论：扶正活血抗癌方具有抑制肿瘤组织生长的作用，对荷瘤小鼠的免疫功能有一定调节作用。其作用机制包括增强小鼠体内T细胞免疫功能、NK细胞的杀伤功能以及体液免疫功能。     

新的肿瘤相关抗原(OVA66)的研制和临床初步应用

目的　制备OVA6 6蛋白和其抗体,探讨其检测肿瘤的应用价值。方法　应用原核表达技术和Ni2 亲和层析法,制备纯化的OVA6 6蛋白,经SDS- PAGE电泳鉴定,将纯化蛋白加佐剂免疫家兔,获得抗OVA6 6蛋白抗血清,并应用WesternBlot测定其滴度和特异性。利用OVA6 6蛋白和其抗体分别建立ELISA和免疫组化法,测定正常人和肿瘤患者的血清OVA6 6抗体水平和肿瘤组织标本中OVA6 6蛋白表达量。结果　获得的高纯度OVA6 6蛋白和高滴度、特异性抗OVA6 6抗血清。ELISA检测显示,正常人和肿瘤患者血清抗体水平存在显著性差异(P <0 .0 0 1)。正常人组OD均值为0 . 2 0±0 0 5 ,肿瘤患者组OD均值为0 . 36±0. 12 ,肿瘤患者中阳性率为4 0 % (46 / 116 )。免疫组化法结果表明,肿瘤组织标本阳性率达81% (34/ 4 2 ) ,而正常组织均为阴性。结论　应用OVA6 6蛋白和其抗血清建立的检测方法,为临床肿瘤辅助诊断的应用奠定基础。     

紫杉醇和顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能影响

目的:本研究旨在探索紫杉醇、顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡后能否具有较强的免疫原性,并可以被抗原提呈细胞交叉提呈并促进免疫应答.方法:用巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)刺激人外周血单核细胞分化诱导为树突状细胞(DC),6d后将DC和经紫杉醇联合顺铂在体外诱导发生凋亡的人卵巢癌细胞株共同培养,并以冻融细胞共培养DC组和单独DC组作对照,共培养4 h后,进行激光扫描共聚焦显微镜观察DC细胞对凋亡细胞的吞噬作用,同时以流式细胞术(FCM)检测不同培养组DC的分化和成熟程度.结果:紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞可被DC有效吞噬,与对照组相比,凋亡组DCs的表达及成熟度均明显增高,并具有统计学意义(P＜0.05).结论:紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞具有较强的免疫原性,可以促进DC的分化和成熟.     

癌胚抗原放免分析(单克隆抗体)及其初步临床应用

本文报导在进行八株CEA-MAb免疫学性状研究的基础上建立的CEA-MAb合剂RIA;测定正常人、恶性肿瘤和良性疾病病人血清标本的初步结果以及CEA多克隆抗体(PAb)RIA法的对比研究.     

CD4+CD25+调节性T细胞与克罗恩病发病关系

目的研究克罗恩病（CD）患者外周血白细胞介素（IL）-6水平与外周CD4＋CD25^＋调节性T细胞（Treg细胞）频率及体外抑制功能的变化在CD发病中的作用。方法应用流式细胞术检测CD患者与正常对照者外周CD4^＋CD25^＋Treg细胞的频率及表型以及特征性标志叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的表达，同时通过MACS缓冲液分选出外周血CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4＋CD25^-T细胞，应用[^3H]-胸腺嘧啶渗入法研究CD4^＋CD25^＋T细胞对自体CD4^＋CD25^-效应T细胞增殖的抑制能力。酶联免疫吸附法（ELISA）检测外周血IL-6水平。结果活动性CD患者外周血IL-6水平显著高于非活动性患者及正常对照者。活动性CD患者外周CD4^＋T细胞中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞的频率显著低于非活动性CD患者，差异有统计学意义。体外抑制功能试验同样提示活动性CD患者的CD4^＋CD25^＋Treg细胞抑制功能减弱。结论CD4^＋CD25^＋Treg细胞抑制功能减弱与CD发病可能有关，可初步解释CD患者出现的免疫耐受缺失现象。