HPLC定量分析千斤拔药材中染料木苷和染料木素的含量

目的:建立千斤拔药材的质量控制方法。方法:采用高效液相色谱法测定其中的染料木苷和染料木素的含量;色谱柱为Kromasil 100-5 C18(250 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,流速为1 m L·min-1,检测波长为260 nm。结果:染料木苷和染料木素分别在质量浓度17.483~279.720μg·m L-1和4.088~65.406μg·m L-1与峰面积线性关系良好。平均回收率,染料木苷为104.27%,RSD为2.61%(n=9);染料木素为97.16%,RSD为5.54%(n=9)。不同产地千斤拔药材中染料木苷和染料木素的含量有明显差异。结论:建立的含量测定方法操作简便、分离效果好、准确,能满足千斤拔药材中染料木苷和染料木素含量的准确测定,为千斤拔药材的质量评价以及合理开发利用提供了科学依据。     

马鬃蛇药酒中染料木苷、染料木素、原儿茶酸和没食子酸的测定

目的:采用高效液相梯度洗脱法测定马鬃蛇药酒(MZSYJ)中染料木苷、染料木素、原儿茶酸和没食子酸的含量。方法:Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm);流速1.0 mL·min-1。染料木苷和染料木素:流动相A为乙腈-甲醇(2∶1),流动相B为0.2%甲酸水溶液,检测波长261 nm。原儿茶酸和没食子酸:流动相A为甲醇,流动相B为0.3%磷酸溶液,检测波长268 nm。结果:染料木苷和染料木素分别在0.010 4~0.208 0μg(r=0.999 3),0.004 8~0.096 0μg(r=0.999 6)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.18%,96.94%,RSD分别为1.52%,1.40%;原儿茶酸和没食子酸分别在0.038 2~0.764 0μg(r=0.999 1),0.011 6~0.232 0μg(r=0.999 4)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为95.97%,98.39%,RSD分别为1.10%,1.45%。结论:该方法测定结果准确、灵敏、重复性好。     

UPLC法测定大鼠血浆中染料木素浓度及其药代动力学参数

目的 建立大鼠血浆中染料木素浓度的UPLC测定方法 ,探讨其在大鼠体内的药代动力学过程.方法 色谱柱为Acquity UPLCTM BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水(26:74),流速为0.4 mL·nin-1,检测波长为260 nm,柱温40℃.采用UPLC法测定给药后大鼠血浆中染料木素浓度,利用DAS软件拟合并计算其药代动力学参数.结果 血浆中染料木素在5～1000 ng·mL-1范围内线性关系良好,提取回收率均大于90%,日间和日内精密度小于10%,符合生物样品分析要求.染料木素主要药动学参数Tmax、Cmax、t1/2、AUG(0→∞)分别为120 min、106.7 μg.L-1、306.59 min、31543μg·L-1·min.结论 该方法 操作简便、快速、灵敏、专属性强,可用于染料木素大批量生物样本的定量分析及药代动力学研究.     

染料木素自微乳在家兔体内的相对生物利用度研究

目的研究染料木素自微乳在家兔体内的药物动力学和相对生物利用度。方法家兔分别灌胃染料木素自微乳和染料木素CMC—Na混悬液，用HPLC法测定不同时间血浆样品中染料木素的浓度，绘制药-时曲线，计算药动学参数及相对生物利用度。结果染料木素自微乳和染料木素混悬液药-时曲线下面积（AUC0→10h）分别为（24．90±1．24）和（10．71±0．86）μg·h·mL^-1，血药峰浓度（Cmax）分别为（4．02±0．20）和（0．99±0．04）μ·mL^-1，达峰时间（Tmax）分别为2h和4h，染料木素自微乳较染料木素混悬液的相对生物利用度为232．49％。结论染料木素自微乳可显著提高染料木素的生物利用度。     

RP-HPLC测定染料木素-4''''-葡萄糖苷及其有关物质

目的 建立染料木素-4'-葡萄糖苷的含量测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法.Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(用磷酸调节pH至2.73)(2575),流速1.0 mL·min-1,检测波长261 nm,柱温35℃.结果 染料木素-4'-葡萄糖苷在0.505 5～101.1 mg·L-1内峰面积与浓度呈良好线性关系(r=1.000 0,n=6),平均回收率99.2%(RSD=1.1%,n=9),日内精密度RSD＜0.5%,日间精密度RSD＜0.7%,最低检测限0.2 ng.同时对样品中所含染料木素、染料木素-7-葡萄糖苷和染料木素-7,4'-二葡萄糖苷等微量有关物质的分离和检测也获得满意的结果.结论 该方法简便、可靠,可用于染料木素及其苷类的质量控制.     

染料木素自微乳的大鼠在体肠吸收机制研究

目的：研究染料木素自微乳在大鼠的在体肠吸收机制。方法：采用大鼠在体肠回流装置，UV，HPLC分别测定酚红和染料木素的含量。考察药物浓度、pH、不同肠段及P-糖蛋白( P-gp)抑制剂维拉帕米对染料木素吸收的影响。结果：染料木素自微乳在药物浓度为0.05～0.5 g·L^-1和pH为5.4～7.8时小肠吸收速率常数K_a均无统计差异；各肠段的吸收速率常数K_a空肠>回肠>十二指肠>结肠，空肠与其他肠段有统计差异(P<0.05)；维拉帕米显著增加染料木素的肠吸收 (P<0.05)。结论：染料木素自微乳在大鼠肠道的吸收呈一级动力学过程,吸收机制为被动扩散，在整个肠段都有吸收，最佳吸收部位在空肠。药物吸收受P-糖蛋白外排影响,而 pH对药物吸收无显著影响。     

HPLC/MS/MS测定人血浆中的染料木素

目的建立人血浆中染料木素的高效液相色谱-串联质谱检测方法(HPLC/MS/MS)。方法血浆样品中加入内标物橙皮苷,用固相萃取法处理,采用AglientC18色谱柱(150mm×2.1mm,3.5μm)分离,以甲醇-10mmol·L-1乙酸铵溶液-乙腈(70∶20∶10)为流动相,流速180μL·min-1,质谱在正离子多反应监测模式(MRM)下进行特征母-子离子对信号采集,以m/z271.0→243.0(染料木素)和m/z611.2→303.2(橙皮苷)进行定量分析。结果染料木素在3～1000ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,相关系数为r=0.9995,定量下限为3ng·mL-1,日内、日间RSD均小于10.73%(n=5),方法回收率在98.92%～104.30%。结论该方法简便、灵敏,适用于人体内染料木素血药浓度测定及临床药物动力学研究。     

HPLC测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的含量

目的:建立测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A含量的高效液相色谱方法.方法:Kro-masil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%H3PO4(40:60),流速:1.0 mL·min-1,检测波长:254nm,柱温:25℃.结果:大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的线性范围分别为0.0662～0.6620 μg,0.0978～0.9780μg,0.0866～0.8660μg和0.0992～0.9920μg.该方法回收率大豆苷元为98.9%(RSD=0.46%),染料木素为98.8%(RSD=1.21%),芒柄花素为98.8%(RSD=0.71%),鹰嘴豆芽素A为97.5%(RSD=1.33%).结论:该法简便、快速、准确.     

RP-HPLC测定槐角丸中槲皮素和染料木素的含量

目的:建立测定槐角丸(槐角、地榆、黄芩等)中游离和结合态槲皮素和染料木素的反相高效液相色谱法.方法:采用高效液相色谱仪,以Diamonsil ODS-C18(4.6 mm×150 mm,5.0 μm)为色谱柱;MeOH-H2O-HAc(2:3:0.25)为流动相;检测波长为254 nm;柱温30℃.结果:槲皮素在0.2048～1.229μg,染料木素在0.532 5～3.192 μg范围内线性关系良好,r值分别为0.999 1,0.999 8,2组分平均回收率在98.0%～99.1%之间,RSD分别为1.02%,0.40%(n=5).结论:该方法一次完成2种有效成分测定,方便、准确、灵敏度高,重现性好,可适用于槐角制剂的质检和生产企业的质控.     

RP-HPLC测定染料木素-4′-葡萄糖苷及其有关物质

 目的建立染料木素-4′-葡萄糖苷的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法。Diamonsil C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(用磷酸调节pH至2.73)(25∶75),流速1.0mL·min^-1,检测波长261nm,柱温35℃。结果染料木素-4′-葡萄糖苷在0.5055～101.1mg·L^-1内峰面积与浓度呈良好线性关系(r=1.0000,n=6),平均回收率99.2%(RSD=1.1%,n=9),日内精密度RSD<0.5%,日间精密度RSD<0.7%,最低检测限0.2ng。同时对样品中所含染料木素、染料木素-7-葡萄糖苷和染料木素-7,4′-二葡萄糖苷等微量有关物质的分离和检测也获得满意的结果。结论该方法简便、可靠,可用于染料木素及其苷类的质量控制。     

Genistein Mitigates Radiation-induced Testicular Injury

The present study investigated the radioprotective effect of a multifunctional soy isoflavone, genistein, with the testicular system. Genistein was administered (200 mg/kg body weight) to male C3H/HeN mice by subcutaneous injection 24 h prior to pelvic irradiation (5 Gy). Histopathological parameters were evaluated 12 h and 21 days post‐irradiation. Genistein protected the germ cells from radiation‐induced apoptosis (p < 0.05 vs vehicle‐treated irradiated mice at 12 h post‐irradiation). Genistein significantly attenuated radiation‐induced reduction in testis weight, seminiferous tubular diameter, seminiferous epithelial depth and sperm head count in the testes (p < 0.05 vs vehicle‐treated irradiated mice at 21 days post‐irradiation). Repopulation and stem cell survival indices of the seminiferous tubules were increased in the genistein‐treated group compared with the vehicle‐treated irradiation group at 21 days post‐irradiation (p < 0.01). The irradiation‐mediated decrease in the sperm count and sperm mobility in the epididymis was counteracted by genistein (p < 0.01), but no effect on the frequency of abnormal sperm was evident. Reactive oxygen species (ROS) were evaluated using DCFDA method and exposure to irradiation elevated ROS levels in the testis and genistein treatment resulted in a significant attenuation of radiation‐induced ROS production. The results indicate that genistein protects from testicular dysfunction induced by gamma‐irradiation by an antiapoptotic effect and recovery of spermatogenesis. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

染料木素的体外抗肿瘤作用研究

目的观察染料木素的体外抗肿瘤作用。方法采用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)检测法测定染料木素对子宫内膜腺癌细胞系(JEC)、人肝癌SMMC-7721细胞系体外增殖的影响,按台盼蓝排染法计数活细胞,绘制细胞生长曲线。结果MTT法检测显示,染料木素对JEC细胞和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用呈现剂量和时间依赖性;随染料木素浓度的升高,JEC和SMMC-7721细胞的生长曲线逐渐下移,10-4mol.L-1的染料木素作用下的JEC细胞生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势。结论染料木素具有一定的抗肿瘤作用。     

染料木素单硫酸酯的合成及其对乳腺癌细胞增殖的影响

目的合成染料木素单硫酸酯,并且考察其对乳腺癌MCF-7细胞增生的影响。方法以染料木素为原料,与苯甲酰氯生成染料木素-7-苯甲酸酯,再与氯磺酸反应生成染料木素-4′-硫酸酯;以染料木素与己酰氯反应生成染料木素-4′-己酸酯,再与氯磺酸反应生成染料木素-7-硫酸酯。结果与结论采用基团保护策略合成染料木素单硫酸酯,其结构经1H-NMR和MS确证,MTT检测表明染料木素单硫酸酯对MCF-7细胞的增殖有抑制作用。     

染料木素阴道片质量控制研究

目的: 建立染料木素阴道片的质量控制方法。 方法: 采用《中国药典》pH测定法测定染料木素阴道片的pH,采用薄层色谱法对染料木素进行定性鉴别,采用高效液相色谱法测定染料木素阴道片中染料木素的含量。 结果: 薄层色谱斑点清晰,分离度良好,专属性强;染料木素在0.201 2~1.006 0 μg（r=0.999 9）线性关系良好,平均回收率为97.72%,RSD 1.65%（n=6）,且不同批次染料木素阴道片的pH及其染料木素的含量无明显差异。 结论: 所建立方法简便准确,重复性好,适用于染料木素阴道片的质量控制。     

金雀异黄素的合成及工艺优化

 目的天然活性物质金雀异黄素的合成及工艺优化。方法以间苯三酚、对羟基苯醋酸为主要原料,经两步反应制得金雀异黄素;并采用均匀设计方法,分别考察了两步合成工艺。结果通过熔点测定、¹H-NMR确证了金雀异黄素结构;通过均匀设计找到了最佳合成工艺,总收率由20.3%提高到48%。结论该合成方法具有反应条件温和、成本低、适合工业化生产等优点。     

金雀异黄素壳聚糖微球胶囊的体内药动学研究

目的:比较金雀异黄素壳聚糖微球胶囊(M.C)与普通胶囊(C.C)的动物体内分布情况,探讨新制剂微球胶囊是否具有缓释靶向性。方法:采用高效液相色谱法分析,3P97软件拟合,进行微球胶囊与普通胶囊的体内药动学研究。结果:微球胶囊在体内各脏器的浓度与普通胶囊相比降低较缓慢,可以在较长时间维持一定的药物浓度;金雀异黄素普通胶囊在小鼠体内分布以肝脏为主,微球胶囊在体内分布与之相比有明显改变,以肺与脾脏为主。结论:金雀异黄素聚糖微球胶囊具有较好的缓释性,并在分布上对肺脾具有较高的选择性。     

染料木素脂质体的制备及其差示扫描量热考察

目的:分别制备含豆甾醇和胆甾醇的染料木素脂质体,研究脂质体热致相变的热力学性质,比较不同甾醇对脂质体热稳定性的影响.方法:用薄膜分散法制备空白和含药脂质体,差示扫描量热法( DSC)确定不同脂质体主相变的相变温度、相变焓等热力学参数.结果:含药脂质体的相变温度、相变焓均低于空白脂质体.在组成相同的情况下,豆甾醇脂质体与胆甾醇脂质体的相变温度和相变焓无明显差别.结论:染料木素进入脂质体膜的疏水区与磷脂分子的疏水尾链发生疏水相互作用.豆甾醇代替胆甾醇后脂质体的热稳定性变化很小,提示可用豆甾醇代替胆甾醇作为染料木素脂质体的膜材.     

染料木素对雌激素缺乏诱发的大鼠骨质疏松症的作用研究

 目的观察染料木素对实验性去卵巢大鼠诱发的骨质疏松症模型的治疗作用。方法SD雌性大鼠行去卵巢术后,随机分为正常对照组,模型组,骨疏康(GSK)组,尼尔雌醇组,染料木素大、中和小剂量组,每组10只。各组动物给予盐酸四环素25mg·kg^-1连续3d,同时给予治疗用药,剂量为GSK 5g·kg^-1,尼尔雌醇为1.5mg·kg^-1,染料木素分别为18,9,4.5mg·kg^-1,以上给药除尼尔雌醇每周1次外其他各组均为每日1次。给药后12周后进行相关指标的测定。结果①染料木素4.5,9mg·kg^-1连续给药12周可使其股骨干重、灰重、骨钙及股骨和腰椎骨密度显著增加,与模型组比较具有显著差异(P<0.05或P<0.01);②染料木素4.5,9mg·kg^-1连续给药12周可显著改善模型大鼠的股骨及椎骨最大载荷、最大桡度、弹性载荷、弹性桡度(P<0.05或P<0.01);③染料木素低、中剂量用药12周后可明显增加模型大鼠骨小梁面积百分比(BV/TV%)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁数目(Tb.N),减小骨小梁间隔(Tb.Sp)(P<0.05或P<0.01);④染料木素低、中剂量给药12周后,可使模型大鼠的血清ALP水平下降,尿Ca/Cr、Pyd/Cr水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论染料木素对模型动物的骨密度、骨生物力学及相关生化指标都具有改善作用,具有较好的抗骨质疏松作用。     

正交设计优选淡豆豉中染料木素的提取工艺

目的:建立淡豆豉中染料木素最佳提取工艺方案。方法:采用正交实验方法,考察颗粒度、乙醇浓度、提取次数、提取时间对淡豆豉中染料木素提取量的影响,确定最佳提取工艺。利用染料木素与氢氧化钠产生反应,在271nm波长处有最大吸收点,用紫外分光光度法测定淡豆豉中染料木素的含量。结果:淡豆豉中染料木素最佳提取方案为A3B1C3D1,即细颗粒,70%乙醇,提取3次,每次1h。结论:该工艺简单、节约、稳定性好,可以推广应用。