三七总甙对成骨细胞增殖、分化及0PG表达影响的研究

目的 观察不同剂量的三七总甙对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG表达的影响，探索体外作用的机制和最佳剂量。方法 第2代培养的成骨细胞分别加入终浓度为0μg／ml、10μg／ml、50μg／ml、100μg／ml的三七总甙，观察细胞生长、钙结节形成情况，碱性磷酸酶(ALP)染色、分泌量检测，骨钙素(OCN)检测，MTT法观察成骨细胞增殖，免疫组化SP法结合阳性细胞计数法检测成骨细胞OPG表达。结果 成骨细胞在7d可铺满瓶壁，30d可形成钙结节，三七总甙可促进成骨细胞的增殖ALP、OCN的分泌，以50μg／ml时作用明显。三七总甙可促进成骨细胞OPG的表达，在50μg／ml时作用明显。结论 三七总甙可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化，促进成骨细胞OPG的表达，以50μg／ml时作用明显。     

淫羊藿苷含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化的影响

目的 研究淫羊藿苷含药血清(Serum of rats administered icariin,SI)对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响.方法 以每1 kg体重0.25 g淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清.分别以2.5%,5%和10%3种浓度加入ROB培养基,检测对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙化结节数等的影响.结果 2.5%和5%SI均促进细胞的增殖,尤以5%浓度更为明显,该浓度含药血清提高ROB的ALP活性,增加Ⅰ型胶原表达,并显著提高钙化结节形成数量.结论 淫羊藿经口服后的代谢产物可刺激成骨细胞增殖,促进其分化成熟,是淫羊藿抗骨质疏松的有效成分.     

淫羊藿苷纳米微粒对大鼠成骨细胞成熟与矿化的影响

目的观察淫羊藿苷纳米微粒(ICA-NS)对出生48 h内的大鼠乳鼠颅骨成骨细胞成熟与矿化的作用。方法显微镜观察淫羊藿苷纳米微粒对成骨细胞形态的影响; Hoechst 3342/PI双染色法检测淫羊藿苷纳米微粒对成骨细胞的毒性反应;碱性磷酸酶检测试剂盒检测成骨细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性;茜苏红染料对淫羊藿苷纳米微粒处理过的细胞进行染色,观察钙化结节的数量和面积;检测成骨细胞中与成骨相关的特异性蛋白表达情况。结果与淫羊藿苷组相比,淫羊藿苷纳米微粒组细胞形态无明显变化,且Hoechst 3342/PI双染色法结果进一步显示淫羊藿苷纳米微粒对成骨细胞无明显毒副作用;碱性磷酸酶活性测定结果显示淫羊藿苷纳米微粒显著提高了成骨细胞中碱性磷酸酶水平,而且淫羊藿苷纳米微粒组茜苏红钙化结节染色面积明显增大,颜色显著加深,成骨性相关蛋白的表达量也显著高于对照组。结论淫羊藿苷纳米微粒能显著促进成骨细胞的矿化与成熟,且对成骨细胞无明显毒副作用。     

淫羊藿苷对钛颗粒作用下成骨细胞增殖和分化的影响

[目的]研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对钛(titanium,TI)颗粒作用下成骨细胞增殖和分化的影响。[方法]多次酶消化法体外分离新生大鼠颅骨成骨细胞,进行原代培养。双重荧光染色激光共聚焦显微镜下观察成骨细胞吞噬钛颗粒后的组织形态学改变。CCK-8法检测0.01、0.05、0.1、0.5、1mg/ml钛颗粒对成骨细胞增殖能力的影响,并筛选出半数致死浓度。在此浓度作用下分别加入10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L的淫羊藿苷进行干预,观察淫羊藿苷对钛颗粒作用下成骨细胞增殖能力的影响,找出最佳药物浓度。以最佳药物浓度干预钛颗粒作用下的成骨细胞,于第3、7、14 d ELISA法检测各组细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,观察药物对成骨细胞分化功能的影响。[结果]激光共聚焦显微镜下可见吞噬了钛颗粒的成骨细胞皱缩变形,微丝(F-actin)排列紊乱。不同浓度的钛颗粒均可抑制成骨细胞增殖,呈浓度依赖性,与对照组相比有显著差异(P<0.05),0.5mg/ml为钛颗粒的半数致死浓度。10-10-10-6mol/L的淫羊藿苷均能促进钛颗粒作用下的成骨细胞增殖(P<0.05),与钛颗粒组相比具有显著差异(P<0.05),10-9mol/L为淫羊藿苷的最佳作用浓度。在此浓度下的淫羊藿苷可以显著抑制钛颗粒引起的成骨细胞ALP活性下降(P<0.05)。[结论]淫羊藿苷可以在体外逆转钛颗粒对成骨细胞增殖和分化的抑制作用,有望成为防治人工关节无菌性松动的有效药物。     

淫羊藿甙对成骨细胞Smad4 mRNA作用的实验研究

目的检测淫羊藿甙对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1中Smad4mRNA的影响。方法用0、10、20、40ng/ml的淫羊藿甙刺激MC3T3-E1细胞。用倒置相差显微镜观察细胞生长情况。通过四甲基噻唑蓝(MTT)法测绘细胞生长曲线和计算细胞群体倍增时间;描述刺激MC3T3-E1细胞的增殖能力。用速率分光光度法测定ALP的含量,免疫组织化学法观察Ⅰ型胶原的产生,用以判断细胞的分化情况。用RT-PCR测定Smad4mRNA的数量。结果10、20ng/ml浓度淫羊藿甙可使MC3T3-E1细胞的生长曲线明显上移(P<0.01);0、10、20和40ng/ml组群体倍增时间分别为(39.37±2.35)h、(26.76±1.78)h、(29.30±2.12)h和(36.35±2.34)h,各组间比较差异有统计学意义(P<0.01);0、10ng/ml可使MC3T3-E1细胞产生ALP和Ⅰ型胶原量增加,刺激ALP作用呈现时间和剂量的依赖性(P<0.01);RT-PCR显示10、20ng/ml浓度淫羊藿甙可以刺激MC3T3-E1细胞Smad4mRNA的数量增加。上述作用以10ng/ml浓度最强(P<0.01)。结论淫羊藿甙刺激成骨细胞MC3T3-E1增殖与分化,可能是通过提高MC3T3-E1细胞Smad4mRNA的量而产生作用。     

老年大鼠含淫羊藿血清对成骨细胞的增殖与分化的影响

目的：观察老年雄性大鼠淫羊藿血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响。方法：雌性，19月龄SD大鼠24只，随机分为3组，分别为生理盐水组、淫羊藿低剂量组（1g/ml)、淫羊藿高剂量组（2g/ml），按0．5mg/100g的量，每日两次，连续灌胃1个月，处死前1h，再灌胃一次，取血清（灭活，过滤），最终稀释成1：20、1：40、1：80加入新生大鼠颅骨成骨细胞体系，用MTT法检测细胞增殖，另外，分别在第2天、第3天、第4天动态观察细胞生长过程，做生长曲线和检测分化指标ALP。结果：老年大鼠含药血清在1：80稀释比，MTT测得的OD值给药组高于对照组（P＜0．05）且以高剂量组高于低剂量组（P＜0．05），生长曲线表现为，在第2天各组无明显差别，从第3天开始，含药血清增殖速度加快，仍以高剂量组最快。ALP检测结果，含药血清OD值高于对照组（P＜0．05），但不同剂量之间没有差异（P＞0．05）。结论：老年雄性SD大鼠连续服用淫羊藿水提液1个月，其血清对新生大鼠颅骨成骨细胞有促进增殖和分化的作用。     

MAPK信号通路在淫羊藿甙促进成骨细胞Cbfa1蛋白表达中的作用

目的 观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响以及MAPK信号通路在淫羊藿甙促成骨细胞核心结合因子α1(core binding factor-1,Cbfa1)蛋白表达中的作用,以探讨淫羊藿甙对成骨细胞作用的信号传导机制.方法 用酶消化法分离24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养.在培养液中加入淫羊藿甙(10 ng/mL),作用于成骨细胞5 min、10 min、30 min、60 min,抽提总蛋白,用Western blot法检测细胞中ERK、p-ERK、P38和p-P38蛋白的表达.用雌二醇(10-8 mol/L)作用于成骨细胞5 min、10 min、30 min,同上法检测细胞中ERK、p-ERK、P38和p-P38蛋白的表达.用淫羊藿甙(10 ng/mL)、雌二醇(10-8 mol/L)和u0126或SB203580单独或共同干预成骨细胞24 h,抽提核蛋白,用Western blot法检测Cbfa1蛋白的表达.结果 ①淫羊藿甙作用于成骨细胞,30 min时可促进ERK蛋白的磷酸化,并可持续至60 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05);淫羊藿甙作用于成骨细胞,5 min时即可促进P38蛋白的磷酸化,在30 min时达高峰,并可持续至60 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05).②雌二醇作用于成骨细胞,在30 min时可促进ERK蛋白的磷酸化,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05);雌二醇作用于成骨细胞,在10 min时可促进P38蛋白的磷酸化,并可持续至30 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05).③淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中Cbfa1蛋白的表达,和空白组相比,差异有显著性(P<0.05).u0126和SB203580可以抑制淫羊藿甙和雌二醇促进Cbfa1蛋白表达的作用.结论 ①淫羊藿甙和雌二醇均可以激活成骨细胞中ERK/MAPK和P38/MAPK信号通路;②淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中核转录因子Cbfa1的表达,并且ERK/MAPK和P38/MAPK信号通路参与了此过程.     

淫羊蕾含药血清对成骨细胞增殖与分化影响的实验研究进展

近年，含药血清试验已成为研究中药淫羊藿对成骨细胞作用的热点。笔者回顾了淫羊藿含药血清对成骨细胞增值与分化影响的相关实验研究的文献，从淫羊藿含药血清试验、成骨细胞体外培养、淫羊藿含药血清对成骨细胞作用机理等方面进行分析，进一步探讨淫羊藿对成骨细胞功能产生影响的有效部位、活性成分和作用机制，为中药淫羊藿防治骨质疏松奠定基础。     

淫羊藿总黄酮调节骨代谢作用及药理机制的研究新进展

实验研究发现淫羊藿对不同类型骨质疏松大鼠模型均有骨代谢调节作用,临床研究亦发现采用淫羊藿治疗绝经后骨质疏松症也取得了明显的效果。其药理作用机制可能与降低破骨细胞内Ca2+浓度,影响成骨细胞增殖、分化、矿化;增加骨护骨素(OPG)mRNA的表达,提高成骨细胞Osterix基因表达水平,从而促进骨形成;通过升高人成骨细胞骨形成蛋白-2(BMP-2)mRNA的表达,增加骨形态生成蛋白2的生成刺激人类成骨细胞的增殖和分化;通过抑制TNF-αmRNA和促进TGF-β1mRNA的表达促进转化生长因子(TGF)-β1的产生,抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,进而阻止骨髓基质中破骨细胞的生成,减少骨质丢失;淫羊藿总黄酮增加骨桥蛋白(OPN)mRNA和Ⅰ型胶原的表达促进骨的生成;淫羊藿苷可通过选择性上调下丘脑和海马ERα,ERβmRNA的表达,降低骨组织中IL-6的表达,从而减少骨吸收;淫羊藿总黄酮可通过抑制DKK1蛋白的表达,调控去势雌性大鼠BMSCs成骨和成脂分化平衡调节骨代谢;淫羊藿苷通过上调Cbfal、BMP2和BMP4mRNA的表达而促进成骨细胞的分化,诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化;淫羊藿总黄酮可显著改善雄性生殖系统和生殖内分泌功能,促进性腺的分泌,产生类雄激素样作用而促进成骨细胞的增殖与分化。笔者从多个层面对淫羊藿黄酮类成分抗骨质疏松作用机制进行阐述,提出今后在此研究基础上尚需进一步深入全面、系统的研究和阐述。     

淫羊藿总黄酮含药血清促进骨髓问充质干细胞增殖与成骨性分化

目的 研究淫羊藿总黄酮(Total tlavonoid extract of Epimedium sagittatum，TFE)对大鼠骨髓间充质干细胞(Mysenchymal stem cells，MSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法 将TFE和含淫羊藿总黄酮大鼠血清(Serum of rats administered TFE，SES)分别以不同浓度加入大鼠MSCs培养液中，进行细胞增殖和成骨性分化的分析。细胞增殖分析采用MTT法，成骨性分化则检测碱性磷酸酶、骨钙素、钙盐沉积量等分化指标。结果 TFE直接加入培养液对MSCs增殖无明显影响，SES则强烈刺激细胞增殖，成倍增加碱性磷酸酶染色阳性的克隆数。TFE不影响MSCs的成骨性分化，但SES显著提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量和钙盐沉积量。结论 淫羊藿总黄酮活性代谢产物强烈刺激MSCs的增殖和成骨性分化，是淫羊藿总黄酮抗骨质疏松症的重要机制。     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

Frequency of complications of manipulation of the spine

Summary A survey of all members of the Swiss Medical Association of Manual Medicine was undertaken for the year 1989. Informative data were given by 425 respondents on the frequency of complications of manipulation as related to the spine. The number of thoraco-lumbar manipulations during 1989 (225 working days) was 805 for each respondent, and the number manipulations of the cervical spine 354. Thus, the total number of thoraco-lumbar manipulations was 342 125, and the total number of cervical manipulations was 150 450. The overall incidence of side-effects of transient complications due to cervical spine manipulation such as disturbance of consciousness or radicular signs was 1: 16716. Seventeen patients (ratio 1: 20 125) after manipulation of the lumbar spine presented, in addition to increased pain, a transient sensorimotor deficit with precise radicular distribution. Nine of the 17 patients (ratio 1: 38013) developed a progressive radicular syndrome with sensorimotor defict and radiologically verified disc herniation and had to be referred for surgery. Side effects and complications of cervical and lumbar spine manipulation are rare. Taking in to account the yearly number of manipulations performed by a single physician in Switzerland and the rate of complications, it can be calculated that a physician practicing manual medicine will encoutner one complication due to manipulation of the cervical spine in 47 years and one complication due to lumbar spine manipulation in 38 years of practice. However, it is important that a careful clinical assessment is carried out to avoid complications due to manipulation carried out on the basis of inappropriate indications. Furthermore, the decision as to which technique is indicated for any particular functional disorder of the spine should be made on the basis of rational criteria resting on a knowledge of clinical biomechanics, functional anatomy and neurophysiology. The authors recommend a prospective morbidity study to be carried out among physicians, chiropractors, osteopaths and physiotherapists, taking into account the different indications and therapeutic techniques in relation to complications.     

Pathogenesis of carcinoma of the papilla of Vater

Most adenomas and carcinomas of the small intestine and extrahepatic bile ducts arise in the region of the papilla of Vater. In familial adenomatous polyposis (FAP) it is the main location for carcinomas after proctocolectomy. In many cases symptoms due to stenosis lead to diagnosis at an early tumor stage. In about 80%, curative intended resection is possible. Operability is the most relevant prognostic factor. Most ampullary carcinomas resp. carcinomas of the papilla of Vater develop from adenomatous or flat dysplastic precursor lesions. They can be sited in the ampulloduodenal part of the papilla of Vater, which is lined by intestinal mucosa. They also can develop in deeper parts of the ampulla, which are lined by pancreaticobiliary duct mucosa. Intestinal-type adenocarcinoma and pancreaticobiliary-type adenocarcinoma represent the main histological types of ampullary carcinoma. Furthermore, there exist unusual types and undifferentiated carcinomas. Many carcinomas of intestinal type express the immunohistochemical marker profile of intestinal mucosa (keratin 7–, keratin 20+, MUC2+). Carcinomas of pancreaticobiliary type usually show the immunohistochemical profile of pancreaticobiliary duct mucosa (keratin 7+, keratin 20–, MUC2–). Even poorly differentiated carcinomas, as well as unusual histological types, may conserve the marker profile of the mucosa they developed from. These findings underline the concept of histogenetically different carcinomas of the papilla of Vater which develop either from intestinal- or from pancreaticobiliary-type mucosa of the papilla of Vater. Molecular alterations in ampullary carcinomas are similar to those of colorectal as well as pancreatic carcinomas, although they appear at different frequencies. In future studies, molecular alterations in ampullary carcinomas should be correlated closely with the different histologic tumor types. Consequently, the histologic classification should reflect the histogenesis of ampullary tumors from the two different types of papillary mucosa.     

静脉皮瓣成活过程的实验研究

我们以兔为实验动物，通过微循环观察及血管内灌注填充剂，研究静脉皮瓣的成活过程。这一过程可分为２个阶段。第一阶段（术后７２小时内）为静脉血营养期：静脉血由静脉干通过小静脉吻合支、微静脉干间吻合支及终末微静脉吻合支回流至另一静脉。术后４８小时内毛细血管内无血液运动。第二阶段（术后７２小时～６周）为动脉血营养及血管改造期：术后７２小时新生血管开始向皮瓣内生长。术后７２无皮瓣动脉同主要来自皮瓣周围正常组织内的新生血管吻合使动脉血分布于整个皮瓣，这是静脉皮瓣成活的关键     

Management of sequelae of septic arthritis of hip

A nine years old boy, who had suffered septic arthritis at the age of two years and presented now with a limp, hip instability, leg length discrepancy. The patient was treated by adductor tenotomy and upper tibial pin traction. When head remnant reached the level of the acetabulum, open reduction and Pemberton osteotomy was done to achieve cover of the femoral head. The purpose of this report is to highlight the six years followup of reconstruction of sequale of septic arthritis of hip joint.     

Catamnestic study of childless patients of the Department of Andrology of Hamburg-Eppendorf University Hosptal

By means of a questionnaire, we carried out a catamnestic study of 1419 patients with a complaint of infertility. 27 per cent of the replying patients reported about the birth of children. 343 patients (38%) reported about one or more conceptions. Compared with previous studies, this investigation shows better results of therapies. We interprete this to be caused in better possibilities of therapy, esp. the Kallikrein therapy.     

主动脉窦瘤破裂外科治疗的临床研究

目的　探讨主动脉窦瘤破裂局部病理改变及其合并主动脉瓣关闭不全的手术方法。方法　 3 6例主动脉窦瘤破裂 (RASV)合并主动脉瓣关闭不全 (AI) 15例、室间隔缺损 (VSD) 2 6例。补片修补 3 5例 ,其中合并VSD的均以一片法修补 ,合并AI的主动脉瓣置换 (AVR) 6例 ,主动脉瓣成形 4例。手术取材作病理检查 5例。结果　本组 3 6例中手术死亡 2例 ( 5 .6% )。存活的 3 4例病人均经门诊复查或通信随访 0 .3～ 18年 ,其中 2例死亡。病理检查见RASV合并VSD的瘤壁为纤维素样坏死或玻璃样变性。结论　主动脉窦壁纤维素样或玻璃样变性可能是其形成的病理基础。合并主动脉瓣关闭不全时应探查其病变程度 ,酌情一期矫正 ,瓣膜损伤明显时宜行主动脉瓣置换 ,对主动脉瓣环细小的病例 ,可借修补VSD和RASV的补片扩大主动脉瓣环。     

骨盆骨折的治疗进展

对于骨盆骨折的治疗 ,传统方法以卧硬板床 ,股骨髁上持续骨牵引 ,骨盆兜等保守治疗为主 ,常常引起下肢不等长 ,骶髋痛 ,步态失常等而严重影响生活质量 ,同时长期卧床易引发肺部感染、褥疮、应激性溃疡、泌尿系统结石等并发症而危及生命。下面就骨盆骨折的治疗进展作一综述。1     

Oddi括约肌肌电活动实验模型的建立

目的建立研究Oddi括约肌肌电活动的动物模型和实验方法。方法将双极金属钩状电极通过浆膜层置入Oddi括约肌，记录不同条件干预下家兔的Oddi括约肌肌电活动信号，调整电生理实验参数并经放大、滤波及计算机处理后，对其大小、波形、幅度进行分析。结果不同条件干预下的家兔Oddi括约肌的肌电活动在波形、频率、幅度等方面均有明显的不同，具有明显的规律性。重复实验可得到相似的结果。结论使用双极金属钩状电极配以合理的电生理实验参数调整可以稳定地采集到在体的家兔Oddi括约肌肌电活动信号。这为今后广泛、深入地研究Oddi括约肌肌电活动搭建了一个技术平台。