淫羊藿苷对强直性脊柱炎成纤维细胞向成骨型分化的影响

目的异位成骨是强直性脊柱炎病理过程的核心环节。成纤维细胞是AS异位成骨的靶细胞,BMP/Smad信号传导通路是骨形成过程中的一条重要通路。该研究通过观察淫羊藿苷对体外培养强直性脊柱炎成纤维细胞增殖和凋亡的作用,同期观察淫羊藿苷对体外培养AS成纤维细胞成骨表型表达及BMP/Smad信号通路蛋白表达的影响,初步探讨淫羊藿苷干预强直性脊柱炎异位成骨的分子机制。方法采用组织学原代培养法,建立人髋关节囊成纤维细胞系,应用免疫组化法鉴定细胞来源。以第3代对数生长期的AS成纤维细胞为研究对象,将实验分为AS空白对照组与淫羊藿苷小剂量组(25μg/mL)、中剂量组(50μg/mL)与大剂量组(100μg/mL)。MTT法检测淫羊藿苷干预下AS成纤维细胞的增殖情况;Annexin V法流式细胞术检测淫羊霍苷对AS成纤维细胞凋亡的影响。检测淫羊藿苷作用下AS成纤维细胞成骨表型的表达状况,观察其ALP活性、胶原合成及OC分泌量。Western blotting技术检测在不同剂量淫羊藿苷干预下,AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路中Smad1、Smad5、Smad4及成骨标志基因Cbfa-1蛋白的表达情况。结果淫羊藿苷100μg/mL可明显抑制AS成纤维细胞增殖(P0.05),且无细胞毒产生,各组细胞不同时间点增殖情况无显著差异;淫羊藿苷各剂量组对AS成纤维细胞凋亡均无明显作用。大剂量淫羊藿苷对AS成纤维细胞ALP活性、胶原合成及OC分泌均有明显抑制作用。与AS对照组相比,淫羊藿苷作用后AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路Smad1、Smad4、pSmad1以及Cbfa-1蛋白表达受明显抑制(P0.05)。结论淫羊藿苷能有效抑制AS成纤维细胞增殖,且抑制AS成纤维细胞成骨表型的表达,其分子机制可能是淫羊藿苷通过干预BMP/Smad信号通路活化,从而调节成骨标志基因Cbfa-1表达,抑制AS成纤维细胞向成骨型分化,可能是淫羊藿苷干预AS异位成骨的机制之一。     

枳朴方中空栓对术后肠粘连大鼠肠浆膜的影响

目的 观察枳朴方中空栓对术后肠粘连大鼠肠浆膜的影响,并探讨其可能的机制.方法 Wistar大鼠40只随机分为模型组、枳朴方中空栓组、阳性对照组、空白组,每组10只.造模成功后立即给药,连续给药1周后杀检,取回肠组织扫描电镜观察肠浆膜变化,透射电镜观察肠浆膜细胞超微结构的改变.结果 扫描电镜下枳朴方中空栓组可见肠浆膜间皮细胞排列整齐,网状结构排列呈梭形,大小均匀,形态接近正常,基底层暴露的区域间皮细胞有新增生的趋势.透射电镜下可见枳朴方中空栓组间皮细胞修复较好,成纤维细胞增生不明显.模型组间皮细胞消失,成纤维细胞分泌胶原活跃.结论 枳朴方中空栓能促进肠浆膜问皮细胞增生,改善肠浆膜超微结构,保护肠浆膜,可预防肠粘连的发生.     

淫羊藿苷对细胞因子诱导下的强直性脊柱炎成纤维细胞成骨型表达及其分子机制的影响

目的:探讨淫羊藿苷对细胞因子诱导下的强直性脊柱炎成纤维细胞成骨型表达及其分子机制的影响。方法:以体外培养的AS髋关节囊组织的成纤维细胞为实验对象,在细胞因子BMP与TGF-β的诱导刺激下,观察BMP-2与TGF-β1作用下,AS成纤维细胞成骨型表达状况,以及淫羊藿苷对细胞因子诱导后的成纤维细胞成骨型表达及其分子机制的影响。结果:细胞因子作用后,AS成纤维细胞的ALP活性、胶原含量、骨钙素含量较正常对照组与AS对照组明显提高(P<0.01)。药物作用后,淫羊藿苷含药血清对细胞因子诱导下的AS成纤维细胞ALP、胶原含量、骨钙素含量活性有明显的抑制作用(P<0.01);而兔空白血清组SASP含药血清组则作用不明显(P>0.05)。结论:淫羊藿苷可以通过抑制细胞因子对成纤维细胞成骨型标志物的影响而达到抑制成纤维细胞进一步向成骨型的分化。     

粉防己碱抑制瘢痕形成机理的研究

目的：探讨粉防己碱对瘢痕形成的抑制作用及其机理。方法：采用瘢痕成纤维细胞体外培养和兔实验性瘢痕模型,观察粉防己碱对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。结果：体外实验粉防己碱组^3H－TdR掺入率和^3H－脯氨酸掺入率均较对照组明显降低,呈剂量依赖关系;动物实验粉防己碱能明显减少瘢痕组织中成纤维细胞的数量,降低胶原面密度,减轻瘢痕纤维化程度。结论：粉防己碱对瘢痕成纤维细胞过度增殖和胶原沉积具有抑制作用,可能是其抗瘢痕纤维化的主要机制之一。     

通痹灵和其它六个方药对强直性脊柱炎成纤维细胞的作用对比

目的：比较7个治疗强直性脊柱炎(AS)的临床方药对AS成纤维细胞的抑制作用，通过量化比较，以期筛选出最佳的治则方药，为临床中医药治疗AS提供指导或参考。方法：采用AS髋关节囊体外培养AS成纤维细胞系，经传代培养，运用中药血清药理学方法，制备7种AS有效代表方含药大鼠血清及对照组血清，分别通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法、羟脯氨酸(HYP)比色法、^125I标记放射免疫(RIA)法测定各含药血清对AS成纤维细胞的增殖、合成分泌胶原和骨钙素的影响，量化比较它们的抑制率。结果：各组含药血清对AS成纤维细胞都有一定的药理作用。对细胞增殖抑制的比较，各组作用强弱依次为C＞B＞D＞F＞A＞G＞E；对细胞外胶原合成抑制而言，作用强弱依次为B＞D＞C＞F＞A＞G＞E；对骨钙素的排泌的抑制作用，则强弱依次为B＞D＞F＞A＞C＞G＞E。结论：AS各有效代表方对AS成纤维细胞均有不同程度的抑制作用，综合分析，通痹灵(治则：扶正固本，化痰软坚散结)、复方雷公藤煎剂(治则：祛风湿止痹痛，益肝肾补气血)相对作用更强，因此，当临床运用中医药治疗AS，以延缓或阻断病情发展时，更有借鉴参考价值。     

补肾舒脊颗粒对强直性脊柱炎患者关节液成纤维细胞增殖的影响

目的:观察补肾舒脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)患者关节液成纤维细胞增殖功能的影响。方法:运用血清药理学方法,选择不同浓度的含药血清与AS患者膝关节液体外培养成纤维细胞共同孵育,于不同时间观察其增殖水平,并与空白血清,SSZ血清组作对照。结果:与正常成纤维细胞相比,AS的成纤维细胞增殖速度快,从第3天开始两者间即有统计学差异。给予补肾舒脊颗粒能明显抑制AS成纤维细胞的增殖,给药3d后,与空白血清对照组相比,差异有统计学意义,并且补肾舒脊颗粒对成纤维细胞增殖的抑制作用有明显的量效关系。结论:补肾舒脊颗粒可通过抑制AS成纤维细胞的增殖,发挥其临床抗炎、抗纤维化的作用。     

通痹灵胶囊对体外培养的强直性脊柱炎成纤维细胞的影响

为观察中药通痹灵胶囊及含药血清对体外培养的强直性脊柱炎 (AS)成纤维细胞增殖的影响 ,探讨其药理作用机制 ,采用体外细胞培养技术 ,以AS患者髋关节囊成纤维细胞为材料 ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)检测法、3 H TdR掺入法、流式细胞仪、绘制成纤维细胞生长曲线等方法观察中药通痹灵胶囊对AS成纤维细胞增殖、DNA合成及生长周期的影响。结果显示通痹灵胶囊浓缩液及含药血清不仅对成纤维细胞的增殖有明显抑制作用 (P <0 .0 1) ,还对其DNA的合成有抑制作用 (P <0 .0 1) ,流式细胞仪检测显示中药组G0 G1 期细胞增多 ,S期细胞明显减少 (P <0 .0 1)。说明中药通痹灵胶囊及其含药血清对体外培养AS成纤维细胞增殖所产生的明显抑制作用 ,可能是其治疗AS的药理机制之一。     

当归红芪超滤物对辐射后心肌成纤维细胞的增殖和胶原分泌的影响

目的:研究当归红芪超滤物对辐射后心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响。方法:采用差速贴壁法原代分离培养大鼠心肌成纤维细胞;当归红芪超滤物干预或射线辐射心肌成纤维细胞后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞分泌Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)的含量;心肌成纤维细胞通过2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色在流式细胞仪下检测活性氧(ROS)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测心肌成纤维细胞中COL-Ⅰ和转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白的表达。结果:低剂量射线(0.5 Gy)辐射心肌成纤维细胞后,细胞内ROS的升高促进细胞增殖和胶原分泌的作用;当归红芪超滤物可以促进细胞中转录因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白的核转位来清除ROS,最终抑制辐射诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原分泌;并且当归红芪超滤物明显抑制心肌成纤维细胞中COL-Ⅰ和TGF-βmRNA表达。结论:当归红芪超滤物可以抑制低剂量辐射诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌。     

莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖抑制作用.方法:MTT法观察莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制作用;天狼猩红染色法测定细胞胶原的分泌能力,流式细胞术检测细胞周期时相分布.结果:50～200 mg·L-1莪术醇作用细胞后能抑制人胚肺成纤维细胞的增殖和制胶原沉积,以96 h效果最为明显,并阻滞细胞停滞于G0/G1期,降低S期和G2/M期细胞时相比例.结论:莪术醇通过将细胞周期阻滞于G0/G1,减少DNA复制,抑制人胚肺成纤维细胞增殖和细胞分泌胶原.     

强直性脊柱炎髋关节软组织的扫描电镜和X线能谱观察及其临床意义

目的：采用扫描电镜—Ｘ线能谱联机观察强直性脊柱炎（ＡＳ）髋关节囊和滑膜组织的病理变化，用以指导临床治疗。方法：对６例年青ＡＳ病人的髋关节囊和滑膜组织进行固定、干燥、喷金行扫描电镜观察，并用２例老年股骨头坏死髋关节炎的同名组织作对照。对扫描图象中的组织进行Ｘ线能谱扫描以确定是否存在钙颗粒。结果：ＡＳ组的关节囊和滑膜组织中胶原排列紊乱，其间有钙颗粒沉积。而对照组同名组织仅见胶原排列紊乱，Ｘ线能谱显示无钙峰出现。结论：青年ＡＳ病人髋关节囊和滑膜组织均有成骨现象发生，而老年股骨头坏死髋关节炎同名组织无成骨现象。这种软组织病理变化是影响ＡＳ髋关节功能的主要原因。其关节清理术需将关节囊和滑膜全部切除。     

动脉粥样硬化大鼠“痰瘀”病理演变与相关基因表达研究

目的:探讨动脉粥样硬化(atheroselerosis,AS)大鼠痰瘀病理演变规律和形成机制。方法:复制AS模型大鼠,通过光镜、电镜观察主动脉组织学改变;运用RT-PCR法检测相关基因表达。结果:随着AS的进展,血脂增高、血液流变学异常逐渐加重;在造模第17天脂质代谢明显异常,造模第22天血液流变学显著异常,第32天动脉硬化程度达到2级;基因c-myc、PDGF-A、c-fos、Bcl-2mRNA表达量依次上调,p53mRNA表达下调。结论:基因c-myc、PDGF-A、c-fos、Bcl-2mRNA表达上调、p53 mRNA表达下调可能是AS痰瘀病理演变的分子基础。     

补肾强脊颗粒对细胞因子诱导下强直性脊柱炎成纤维细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探讨补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)的作用机制。方法以体外培养的AS髋关节囊组织的成纤维细胞为实验对象,分正常组,AS对照组,AS诱导组,兔空白血清组,补肾强脊颗粒小、中、大剂量组和SASP对照组。在细胞因子骨形态发生蛋白(BMP)与转化生长因子-β(TGF-β)的诱导刺激下,观察补肾强脊颗粒对细胞因子诱导后的AS成纤维细胞增殖(样本5个,采用酸性磷酸酶法)、细胞周期(样本3个,采用PI法流式细胞术)及细胞凋亡率(样本3个,采用Annexin V法流式细胞术)的影响。结果补肾强脊颗粒含药血清作用后,对细胞因子诱导下的AS成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01);使细胞因子诱导下的AS成纤维细胞G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),S期的细胞比例降低(P<0.01);促使细胞因子诱导下的AS成纤维细胞早期凋亡率、晚期凋亡率均有不同程度的增加(P<0.01)。结论补肾强脊颗粒可以通过抑制细胞因子对成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响而达到抑制成纤维细胞进一步向成骨型的分化。     

稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及其TGF-β表达影响的实验研究

目的：研究稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMs）增殖和TGF-β表达水平的影响,探讨其防治肺动脉高压的疗效及作用机制。方法：组织帖块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,MTT法确定高、中、低剂量分组及作用时间。MTT法进行细胞计数,流式细胞仪进行细胞周期测定,ELISA法进行细胞培养夜TGF-β含量测定。结果：贴块培养的细胞经电镜鉴定为动脉平滑肌细胞;台盼蓝染色倒置显微镜观察表明细胞生长状态良好。黄酮类化合物高、中剂量组细胞计数明显减少、细胞周期G0/G1期细胞增多,S期、G2/M期细胞减少;细胞TGF-β含量明显降低,与空白对照组比较有统计学意义（P〈0.05）;低剂量组与空白对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：稳心草黄酮类化合物可抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,延缓细胞周期进程,调节细胞分泌TGF-β水平。     

丹参对成纤维细胞成骨的扫描电镜观察

目的:阐明丹参对成纤维细胞成骨功能的影响。方法:用皮肤纯化的成纤维细胞作体外培养,分丹参组与对照组,在扫描电镜下观察。结果:0.2%、0.3%浓度的丹参能明显促使成纤维细胞由梭形向鳞片形方向转化,细胞量增多,胶原合成分泌增加,但未见骨结节形成。结论:适当浓度的丹参对成纤维细胞有促增殖、促分化、增加其功能活性的作用,但不能作为诱导因子来诱导成纤维细胞成骨潜能的显示。     

塔斯品碱诱导肺癌细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨塔斯品碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法:进行人肺腺癌细胞株A549细胞培养,不同浓度塔斯品碱干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,研究不同浓度塔斯品碱对其增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果:塔斯品碱可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,且呈时间剂量依赖性;FCM检测发现塔斯品碱阻滞细胞周期于S期;电镜下可见塔斯品碱能够诱导细胞出现核固缩、细胞核内染色质凝聚和凋亡小体等凋亡现象。结论:塔斯品碱有抗肿瘤和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

黄芪、当归及其组方促血管内皮细胞增殖作用的研究

目的：探讨黄芪、当归及其组方对人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响。方法：以离体培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,,HUVEC)为模型,采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪分析其细胞周期、SABC法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,对黄芪、当归及其组方的促HUVEC增殖作用进行了观察研究。结果：黄芪、当归单用或合用均可促进内皮细胞生长,增加细胞周期中S期细胞的数目,尤以复方作用明显(P<0．05或P<0．001)。同时,各给药组均能上调VEGF的表达,而对照组VEGF仅有微弱表达(P<0．05或P<0．01)。结论：黄芪、当归有促进血管内皮细胞增殖及DNA合成的作用,两药配伍应用时具有协同效应,提示在缺血心肌新生血管的发生和发展中可能具有一定作用。     

益气生骨颗粒提取液对体外成纤维细胞增殖的影响

目的:评价不同浓度益气生骨颗粒提取液对成纤维细胞增殖的影响。方法:采用体外培养9 d鸡胚皮肤的成纤维细胞,在成纤维细胞培养液中分别加入不同浓度的益气生骨颗粒提取液(简称益气)、黄芪注射液(简称黄芪)、复方当归注射液(简称当归),应用倒置显微镜每日观察细胞的生长情况和计数单位面积内的细胞数测定1-7 d的细胞增殖动力学。结果:各种药物对成纤维细胞生长的最佳浓度为:益气,0.25 mL%;黄芪,2 mL%;当归,0.125 mL%。与空白组(0%)相比,0.25 mL%益气组与2 mL%黄芪组在第3、5、7天的成纤维细胞均明显增多(均P<0.05);0.125 mL%当归组的细胞计数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益气生骨颗粒提取液能促进成纤维细胞增殖,0.25ml%是其最佳浓度。