一氧化氮和内皮素在肝脏再灌注损伤和缺血预处理中作用的研究

目的 :观察缺血预处理一氧化氮 (NO)和内皮素 (ET)的变化及其与再灌注损伤和微循环变化的关系。方法 :建立大鼠肝脏 70 %缺血再灌注损伤模型 ,分为对照组、缺血组、缺血预处理组、L 精氨酸组、L NAME组 ,观察各组肝功能变化 ,检测肝组织和血清中NO和ET及透明质酸 (HA)的水平 ,以HA代表肝脏微循环情况。结果 :再灌注损伤后微循环的破坏和NO和ET的变化相关 ,缺血预处理可减少NO水平的下降和血浆ET升高 ,减少微循环破坏和肝功酶的升高 (P <0 .0 5 )。外源性给予NO合成前体L 精氨酸在升高NO水平降低ET水平的同时 ,可达到类似预处理的保护作用。结论 :血管活性介质NO的减少和ET水平增加是导致再灌注损伤微循环变化的原因之一。缺血预处理可诱导增加NO和减少ET ,并可能是其改善微循环和减少再灌注损伤的因素之一。给予外源性NO可起到类似缺血预处理的保护效果 ,而抑制NO产生并不能加重再灌注损伤。     

肢体缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注致心肌损伤的影响

目的 探讨单侧后肢缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注致心肌损伤的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠72只,体重200～250 g,随机分为3组(n=24),假手术组(S组)仅暴露肝门;肝脏缺血再灌注组(IR组)肝脏缺血60min后恢复灌注;后肢缺血预处理组(LIP组)阻断右侧后肢动脉、静脉和肌间侧支血流10 min后恢复灌注,30 min后建立肝脏缺血再灌注模型.于肝脏再灌注即刻、1、6 h各处死8只大鼠,测定血清脑钠素(BNP)浓度和心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性,观察心肌超微结构.结果 与S组比较,IR组和LIP组心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性降低,血清BNP浓度升高(P＜0.05或0.01).与IR组比较,LIP组心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性升高(P＜0.05),心肌病理损伤程度减轻.结论 单侧后肢缺血预处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注致心肌损伤的程度.     

肢体缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的探讨肢体缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法将32只Wistar大鼠随机分为假手术组(SO)、肝脏缺血再灌注组(IR)、肝脏缺血预处理组(IPC+IR)和肢体缺血预处理组(LIPC+IR)。观察术后各组大鼠血液中炎症因子(IL-6,TNF-α)及氧化应激水平的差异;同时观察各组大鼠术后生存率及肝脏酶学水平的差异。结果 LIPC组及IPC组大鼠术后血清AST、ALT均较IR组明显降低,术后第7天存活率较IR组明显提高,术后血清TNF-α、IL-6均较IR组明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。LIPC组与IPC组比较无统计学意义(P0.05)。LICP及ICP组大鼠术后体内MDA水平均较IR组降低,SOD水平均较IR组显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论肢体缺血预处理能减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,可能与减轻肝脏氧化应激水平有关。     

缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护机制

目的验证缺血预处理(IPC)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用,探讨一氧化氮(NO)与蛋白激酶C(PKC)在IPC过程中的作用.方法在原位灌流的大鼠肝脏缺血再灌注模型上,观察IPC的保护作用.同时经肠系膜上静脉注射NO前体L-精氨酸和蛋白激酶C特异性激动剂1,2-二辛酸甘油(DOG)以及两者的特异性阻滞剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(NAME)和多粘菌素B,来检测NO和PKC在IPC中的关系.结果预处理可阻止血清谷丙转氨酶(ALT)[(200.86±40.30)U/Lvs.(257.65±20.18)U/L],谷草转氨酶(AST)[(211.06±13.59)U/Lvs.(309.17±24.79)U/L],乳酸脱氢酶(LDH)[(824.73±127.11)U/Lvs.(1118.60±82.21)U/L]及脂质过氧化物(LPO)[(0.414±0.069)mmol/mgvs.(0.531±0.054)mmol/mg]水平升高(P＜0.05),而使组织超氧化歧化酶(SOD)保持在较高水平[(10.33±0.88)U/mgvs.(6.01±0.91)U/mg],(P＜0.05).NO与PKC均可模拟预处理的保护效应.结论缺血预处理对大鼠肝脏I/R有明确的保护作用,NO与PKC发挥IPC保护作用的途径不同.     

G9a抑制剂BIX-01294对小鼠肝缺血再灌注损伤的影响及其机制

目的探讨G9a抑制剂BIX-01294在小鼠肝脏缺血再灌注中的影响及潜在机制。方法将雄性C57BL/6J小鼠随机抽样法等分成空白组、缺血再灌注(IR)组、不同剂量BIX-01294预处理组(10、30、50 mg/kg), 每组8只, 连续5 d腹腔注射给药, 空白组及IR组给予等量无菌生理盐水, 药物干预组给予等量药物, 建立肝部分(70%)热缺血再灌注模型(缺血1 h, 再灌注6 h), 实验结束收集小鼠静脉血及缺血肝组织进行检测。结果苏木精-伊红(HE)染色显示, IR组肝小叶结构紊乱, 肝细胞大面积变性坏死;IR+BIX组肝细胞坏死面积减小, 肝组织结构损害较轻。IR+BIX(50 mg/kg)组血清[谷丙转氨酶(ALT):(348.82±95.4) U/L, 谷草转氨酶(AST):(220.7±43.38) U/L]较IR组[ALT:(1 384.96±183.61) U/L, AST:(1 111.39±167.08) U/L]显著下降(P<0.01), 以50 mg/kg效果最佳。与IR组[丙二醛(MDA):(1.76±0.54) nmol/mg prot;超氧化歧...     

肝脏缺血-再灌注2相损伤对胰岛β细胞分泌功能的影响

目的 研究大鼠肝脏缺血-再灌注2相损伤对胰岛β细胞分泌功能的影响.方法 36只SD大鼠随机分为假手术组(C组)和IR组,每组18只.IR组制成肝脏缺血1 h再灌注12 h的70%肝脏I/R损伤模型.每组取10只大鼠,再灌注12 h后采血,测定血糖及血胰岛素浓度并计算胰岛素分泌指数.每组另各取8只大鼠,进行高血糖钳夹试验.结果 IR组血糖水平明显高于C组[(9.02±1.37)mmol/L vs.(5.52±0.95)mmol/L](P<0.01),胰岛素浓度也显著高于C组[(116.45±10.87)mU/L vs.(73.65±22.87)mU/L](P<0.01),但IR组胰岛素分泌指数显著低于C组[(462.80±46.28) vs.(1 046.54±30.21)](P<0.01).高血糖钳夹试验显示,IR组2相胰岛素分泌量显著低于C组[(83.17±6.01)mU/L vs.(99.80±10.81)mU/L](P<0.05),葡萄槠代谢率也明显低于C组[(29.68±4.92)mg·kg-1·min-1 vs.(53.16±3.45)mg·kg-1·min-1](P<0.01),胰岛素敏感性指数显著低于C组[(30.97±8.11) vs.(64.34±7.21)](P<0.01).结论 肝脏缺血-再灌注损伤12 h后,大鼠胰岛β细胞分泌功能受损,外周组织的胰岛素敏感性明显下降.     

小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型的建立

目的 建立小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型并分析损伤评估指标的变化趋势.方法 采用96只7～8周龄的纯系C57BL/6雄性小鼠作为研究对象,建立70％肝脏缺血再灌注损伤模型.按照缺血时间将小鼠分为假手术组和缺血30、60、90 min组,每组24只.各组小鼠分别于再灌注后6、12、24和48 h处死.通过检测血清ALT、AST、TNF-α、IL-6和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)水平以及病理组织学评分、细胞凋亡指数等方法评估各组小鼠肝组织的损伤情况.两独立样本比较采用t检验.结果 术后88只小鼠存活,8只死亡,造模成功率为91.7％ (88/96).假手术组、缺血30、60、90 min组ALT水平分别为(35±24) U/L、(1703±442) U/L、(5133±681) U/L和(8233±808) U/L,缺血30、60、90 min组ALT水平显著高于假手术组(t=6.54,12.97,17.56,P＜0.05);AST水平分别为(87±28) U/L、(2667 ±451) U/L、(6333±778)U/L和(9967±1168) U/L,缺血30、60、90 min组AST水平显著高于假手术组(t=9.89,13.89,14.65,P＜0.05);TNF-α水平分别为(14 ±5) μg/L、(83±14) μg/L、(133±17) μg/L和(202±21) μg/L,缺血30、60、90 min组TNF-α水平显著高于假手术组(t=7.78,11.82,15.34,P＜0.05);IL-6水平分别为(32 ±9) μg/L、(493±168) μg/L、(844±166) μg/L和(1345±198) μg/L,缺血30、60、90min组IL-6水平显著高于假手术组(=4.74,8.46,11.48,P＜0.05);MIP-2水平分别为(37±11) μg/L、(102±35) μg/L、(177±32)μg/L和(279±50) μg/L,缺血30、60、90 min组MIP-2水平显著高于假手术组(t=3.05,7.28,8.19,P＜0.05);细胞凋亡指数分别为1.7％±2.1％、22.7％±8.6％、54.3％±11.2％和76.3％±14.8％,缺血30、60、90 min组细胞凋亡指数显著高于假手术组(t=4.10,8.04,8.63,P＜0.05).在缺血时间相同的情况下,随着再灌注时间的延长,各监测指标呈“抛物线”样变化趋势.结论 小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型能较好地反映小鼠肝组织的损伤情况.随着缺血时间的延长,小鼠肝脏的缺血再灌注损伤程度逐渐加重;随着再灌注时间的延长,ALT、AST、TNF-α、IL-6、MIP-2以及病理组织学评分和细胞凋亡指数均呈现“抛物线”样变化趋势.     

吗啡预处理-后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨吗啡预处理-后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重180～200 g,应用Langendorff体外灌流装置,采用全心停灌45 min、再灌注60 min的方法制备大鼠离体心脏缺血再灌注模型.取模型制备成功的心脏40个,随机分为5组(n=8):缺血再灌注组(IR组)、吗啡预处理组(M1组)、吗啡后处理组(M2组)、吗啡预处理-后处理组(M1+M2组)、5-羟葵酸(5-HD)混合吗啡后处理组(5-HD+M2组).M1组全心停灌前30 min灌注含3.0 μmol/L吗啡的K-H液20 min,随后灌注K-H液10 min.M2组再灌注即刻灌注含3.0 μmol/L吗啡的K-H液10 min,随后灌注正常K-H液50 min.5-HD+M1组再灌注即刻灌注含3.0 μmol/L吗啡+10-4nunol/L 5-HD的K-H液10 min,随后灌注正常K-H液50 min.于再灌注60 min时,测定心肌肌酸激酶(CK-MB)活性,计算心肌梗死区与缺血危险区的比值(IS/AAR).结果 与IR组相比,其余各组IS/AAR减少,CK-MB活性降低(P<0.05);与M2组比较,5-HD+M2组CK-MB活性及IS/AAR升高(P<0.05);M1组、M2组和M1+M2组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 吗啡预处理.后处理虽然可减轻大鼠离体心脏缺血冉灌注损伤,但是与单独应用时效果相似,其原因可能是两者单独应用减轻心脏缺血再灌注损伤的机制均与开放线粒体ATP敏感性钾通道有关.     

氯胺酮对大鼠全肝缺血/再灌注后肺损伤的保护作用及机制

目的 观察10 mg/kg氯胺酮对于大鼠全肝缺血/再灌注诱发的急性肺损伤保护作用及其机制.方法 30只9～10周龄雌性SD大鼠以区组随机法随机分为3组(每组10只),假手术组(Sham组),全肝缺血/再灌注组(IR组)以pringle's法阻断门静脉和肝动脉30 min后再灌注1h.全肝缺血/再灌注氯胺酮预处理组(Ket组),以10 mg/kg氯胺酮于全肝血流阻断前20 min经尾静脉注射预处理.测定各组肺组织干湿重比值(W/D比值);血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量;逆转录/实时聚合酶链式反应( RT-PCR)法测定肺组织中血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、细胞间黏附分子-1( ICAM-1 )mRNA含量;Western blot法测定肺组织中核因子-kb( NF-kJ )/P65含量;各组肺组织HE染色后病理评分.结果 血清AST、ALT含量:IR组[AST:(91±25)U/ml,ALT:(67.0±19.4) U/ml]和Ket组[AST:(85±12) U/ml,ALT:(51.3±9.9) U/ml]均高于Sham组[AST:(29±9) U/ml,ALT:(7.8±2.7) U/ml] (P＜0.05).血清TNF-α、ICAM-1含量:IR组[TNF.α:(23.1±4.8) μg/L,ICAM-1:(34±9)μg/L]和Ket组[TNF-α:(19.1+5.8)μg/L,ICAM-1:(41±7) μg/L]均高于Sham组[TNF-α:(8.7±2.4) μg/L,ICAM-1:(13±5)μg/L](P＜0.05).而Ket组和IR组之间无统计学差异(P＞0.05).W/D比值:IR组(6.9±1.7)和Ket组(5.1±1.1)高于Sham组(3.7±0.7)(P＜0.05),IR组高于Ket组(P＜0.05).肺组织中TNF-α mRNA、ICAM-1 mRNA和NF-kb/P65含量:IR组[TNF-α mRNA:(2.91±0.49)μg/L,ICAM-1 mRNA:(2.39±0.58) μg/L,NF-kb/P65:(1.97±0.17) μg/L]高于Sham组[TNF-αmRNA:(1.75±0.29) μg/L,ICAM-1 mRNA:( 1.63±0.33) μg/L,NF-kb/P65:(1.06±0.24) μg/L]和Ket组[TNF-α mRNA:(2.19±0.52) μg/L,ICAM-1 mRNA:(1.78±0.28)μg/L,NF-kb/P65:(1.33±0.30μg/L](P＜0.05).Sham组和Ket组之间无统计学差异(p＞0.05).肺组织病理评分:Sham组低于IR组和Ket组(P＜0.05),Ket组低于IR组(P＜0.05).相关性:TNF-α mRNA与NF-kb/P65正相关,R=0.849(P＜0.05),ICAM-1 mRNA与NF-kb/P65正相关,R=0.639(P＜0.05).结论 10 mg/kg氯胺酮20 min前预处理对于全肝缺血/再灌注肺损伤有保护作用.     

大鼠肝脏缺血-再灌注损伤时齐墩果酸对氧自由基的影响

目的 探讨齐墩果酸(OA)对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤时氧自由基的影响.方法 128只雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH组)、缺血-再灌注组(IR组)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na组)和OA组.建立70%肝脏缺血-再灌注模型,测定肝脏缺血60 min再灌注0、3、6、12 h后血清ALT活性和肝组织丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)水平.结果 再灌注3、6、12 h,IR组、CMC-Na组、OA组血清ALT活性、肝组织MDA水平分别显著高于SH组(P<0.05),肝组织SOD活性、GSH水平分别明显低于SH组(P<0.05);OA组ALT活性、MDA水平分别较IR组和CMC-Na组明显降低(P<0.05),SOD活性和GSH水平分别较IR组和CMC-Na组显著升高(P<0.05).结论 OA对肝脏缺血-再灌注损伤具有一定保护作用,其抗肝脏缺血-再灌注损伤作用与抑制自由基的生成和释放有关.     

磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路在丁苯酞保护心肌缺血再灌注损伤中作用机制的实验研究

目的观察丁苯酞预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用以及磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路在此过程中的作用。方法将大鼠心肌细胞(H9C2)随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、丁苯酞预处理组(I/R+NBP组)。通过氧气剥夺以及无糖培养基的更换模拟6 h缺血4 h复灌心肌缺血模型。通过细胞计数检测试剂盒(CCK-8)检测不同药物浓度细胞活性,探索丁苯酞的最佳药物浓度;比色法检测各组乳酸脱氢酶(LDH)以及丙二醛(MDA)含量;蛋白质印迹法(Western blot)检测PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和Akt的蛋白表达水平;定量聚合酶链反应(qPCR)技术检测白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在核糖核酸(mRNA)水平的表达。多组之间比较采用单因素方差分析,两组之间比较采用t检验。结果丁苯酞的最佳用药浓度为100μmol/L;I/R组MDA、LDH的表达量高于Sham组[(172.03±14.99)nmol/L比(38.98±6.49)nmol/L、(195.04±14.50)%比(100.00±0.00)%,t=14.106、11.354,P<0.05];I/R组IL-1β、TNF-α的表达量高于Sham组(22.36±2.71比1.00±0.00、6.20±0.31比1.00±0.00,t=13.660、28.874,P<0.05);I/R组PI3K、p-Akt的表达量也高于Sham组(0.61±0.34比0.34±0.01、0.95±0.04比0.36±0.04,t=13.487、18.392,P<0.05),差异有统计学意义。I/R+NBP组MDA、LDH的表达量低于I/R组[(56.98±4.79)nmol/L比(172.03±14.99)nmol/L、(140.34±4.44)%比(195.04±14.50)%,t=12.661、7.890,P<0.05];I/R+NBP组IL-1β、TNF-α的表达量低于I/R组(6.66±0.60比22.36±2.71、1.76±0.11比6.20±0.31,t=9.798、23.352,P<0.05),差异有统计学意义;I/R+NBP组PI3K、p-Akt的表达量高于I/R组(1.00±0.05比0.61±0.34、1.27±0.04比0.95±0.04,t=11.440、10.432,P<0.05),差异有统计学意义。结论丁苯酞可以通过减少细胞损伤、抑制氧化及炎性反应进而减轻心肌缺血再灌注损伤,该过程可能有PI3K/Akt通路的参与。     

大鼠体外循环心肌胰岛素抵抗实验模型的建立

目的构建大鼠体外循环(CPB)心肌缺血再灌注损伤(MIRI)实验模型并评估其诱导心肌胰岛素抵抗(IR)的效果。方法12只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为两组,对照组不阻断主动脉(n=6),模型组主动脉阻断30 min再灌注15 min(n=6);经尾动脉置入灌注管、右侧颈外静脉插入右心房引流管、开胸阻断升主动脉,建立体外循环(CPB),于开放主动脉后15 min采集血液及心肌组织标本,检测血浆葡萄糖、胰岛素水平并进一步计算葡萄糖摄取率、胰岛素抵抗指数(IRI)的变化。采用蛋白质印迹法(Western blot)、免疫荧光检测心肌细胞膜葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达。组间比较采用独立样本t检验。结果缺血再灌注后15 min,模型组[静脉葡萄糖浓度(Glu-V)(20.23±0.30)mmol/L;胰岛素浓度(15.89±1.72)mIU/L;IRI(14.29±1.59)]高于对照组[Glu-V(8.31±0.67)mmol/L;胰岛素浓度(6.54±1.77)mIU/L;IRI(2.42±0.73),t=38.945、9.286、16.593,P值均<0.01],差异有统计学意义。而模型组葡萄糖摄取率为(7.68±2.29)%低于对照组[(45.46±3.67)%,t=21.410,P<0.01],差异有统计学意义。模型组左心室收缩压(LVSP)为(34.8±6.6)mmHg低于对照组LVSP[(60.4±6.9)mmHg,t=-6.586,P<0.01],差异有统计学意义。模型组Western blot所测心肌细胞膜蛋白相对表达量为(0.30±0.08)低于对照组(1.04±0.21,t=7.979,P<0.01),差异有统计学意义。结论成功建立操作简便、经济适用、个体差异小且更能模拟临床的CPB缺血再灌注心肌IR大鼠模型。     

丙泊酚对小鼠肝脏缺血再灌注损伤后氧化应激和炎症的影响

目的研究丙泊酚对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法 40只健康雄性C57小鼠随机分为假手术组(Sham)、肝脏缺血再灌注损伤组(IRI)、地塞米松组(DEM,5 mg/kg)和丙泊酚组(PPF,20 mg/kg),每组10只。用无创血管夹夹闭左、中叶肝蒂构建70%肝脏缺血再灌注损伤模型。再灌注6 h后,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和核因子κB(NF-κB)水平;评估肝脏过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,MDA含量和病理形态;并检测血清和和肝脏肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素6(IL-6)的m RNA表达。结果 IRI组ALT、AST和LDH水平分别为(395.12±35.81)U/L、(155.37±19.22)U/L和(776.32±59.27)U/L而PPF组血清中ALT、AST和LDH表达水平分别为(144.81±14.22)U/L、(55.13±6.71)U/L和(439.27±45.12)U/L,较IRI组均明显降低(P0.05)。此外,与IRI组相比,PPF组NF-κB、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平均明显降低(P0.05),肝脏病理损伤程度明显减轻,CAT、GPx和SOD活性均明显增高(P0.05)。结论丙泊酚对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制与丙泊酚减轻炎症反应和抑制氧化应激相关。     

ω-3多不饱和脂肪酸和淋巴引流对大鼠肠道缺血再灌注损伤时远隔器官的保护作用

目的 研究大鼠肠道缺血再灌注损伤时ω-3多不饱和脂肪酸干预和肠淋巴引流对远隔组织器官的影响.方法 将48只健康雄性SPF级SD大鼠随机分为正常饮食、普通肠内营养(EN)、普通肠内营养加ω-3多不饱和脂肪酸(PUFA)三大组,每组又分为肠淋巴引流组(I/R+D)和非引流组(I/R)(各8只).所有大鼠均行胃造口手术,分别给予不同营养5 d后行肠系膜上动脉夹闭60 min再灌注120 min.引流组在肠道缺血再灌注同时,进行肠淋巴液引流180 min.检测大鼠血清ALT、肺脏中髓过氧化物酶(MPO)、一氧化氮(NO)、总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的变化,观察肝脏,肺脏损伤程度以及Toll样受体4(TLR4)的内源性配体高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达.结果 PUFA I/R+D组和I/R组、EN I/R+D组血清ALT水平显著低于正常饮食I/R组,分别为(46±20)、(53±15)、(45±21)和(100±60)U/L(P＜0.05).肺脏MPO、NO、tNOS、iNOS在I/R+D组低于不引流I/R组(P＜0.05),分别为MPO(0.73±0.15)U/g湿片比(0.85±0.10)U/g湿片、NO(0.72±0.51)μmol/gprot比(1.79±1.32)μmol/gprot、tNOS(0.46±0.15)U/mgprot比(0.78±0.27)U/mgprot、iNOS(0.06±0.04)U/mgprot比(0.11±0.07)U/mgprot;PUFA I/R组tNOS显著低于正常饮食I/R组,分别为(0.56±0.13)和(0.78±0.27)U/mgprot(P＜0.05);PUFA组中MPO、NO、iNOS均小于EN和正常饮食组.HE染色以及免疫组化显示I/R组肺和肝组织均较I/R+D组损伤严重,I/R组细胞出现大量黄染,HMGB1的表达增加;PUFA组较另外两组损伤减轻,HMGB1的表达减少.结论 大鼠肠道缺血在灌注损伤时引流淋巴液能够减少HMGB1到达远隔器官组织从而减轻损伤,ω-3PUFA具有增加机体抗打击和促进恢复的能力.

Abstract：

Objective To investigate the sheltering effects of ω-3 polyunsaturated fatty acid (ω-3PUFA)and lymphatic drainage on distant organs in intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.Methods Forty-eight healthy Sprague-Dawley(SD)male rats(SPF grade)were randomly divided into 3 groups(16 rats in each group): normal diet group(N), enteral nutrition group(EN), enteral nutrition and ω-3PUFA group(PUFA group). Each group was divided into lymphatic drainage(I/R + D)group and no-drainage(I/R)group(n = 8). Each rats received gastrostomy. After given different nutrition for five days, the rats subjected to 60 min ischemia and 120 min reperfusion injury of the superior mesenteric artery.When the rats subjected to ischemia-reperfusion injury, drained intestinal lymph for 180 min in the I/R + D group. The serum level of alanine aminotransferase(ALT)and level of myeloperoxidase(MPO), nitric oxide(NO), total of nitric oxide synthase(tNOS), inducible nitric oxide synthase(iNOS)of lung were detected. The organ injury of lung and liver and the expression of high mobility group box 1(HMGB1, the endogenous ligand of TLR4)in these organs were investigated too. Results The serum level of ALT in PUFA I/R + D and I/R group and EN I/R + D group were significantly lower than that in normal diet I/R group:(46 ±20),(53 ± 15),(46 ±21)and(100 ±60)U/L(P ＜0. 05), respectively. The level of MPO, NO, tNOS, iNOS in lung in the I/R + D group were significantly lower than those in I/R group(P ＜0.05):MPO(0.73 ±0. 15):(0.85 ±0. 10)unit/grams wet slice; NO(0.72 ±0.51):(1.79 ± 1.32)μmol/gprot; tNOS(0.46 ±0. 15):(0.78 ±0.27)U/mgprot; iNOS(0.06 ±0.04):(0. 11 ±0.07)U/mgprot, respectively. The level of tNOS in PUFA I/R group was significantly lower than that in normal diet I/R group:(0. 56 ±0. 13):(0. 78 ±0. 27)U/mgprot(P ＜0. 05). MPO, NO, INOS levels in PUFA group were reduced compared with those in EN and normal diet group. HE stained sections and HMGB1 immunohistochemistry results showed that the organ injury in L/R group was severer than that in I/R + D group. The expression of HMGB1 increased in I/R group. The organ injury and the expression of HMGB1 in PUFA group were less than that in the other two main groups. Conclusions Lymphatic drainage can alleviate injury of distant organs after intestinal ischemia-reperfusion in rats. ω-3 polyunsaturated fatty acids can increase body resistance to injury and promote recovery.     

Remote preconditioning improves hepatic oxygenation after ischaemia reperfusion injury

Hepatic ischaemia reperfusion injury (IRI) lowers hepatic oxygenation and induces tissue acidosis. Remote ischaemic preconditioning (RIPC) reduces hepatic IRI through increased hepatic blood flow but its effect on hepatic oxygenation and acidosis is not known. This study investigates these effects through near infrared spectroscopy (NIRS). Twenty-four NZ rabbits were grouped into four: sham, RIPC, IRI alone, RIPC + IRI. RIPC was induced through three cycles of 10 min ischaemia and reperfusion to the limb. Total hepatic ischaemia was produced by complete portal inflow occlusion for 25 min. Serum transaminases, bicarbonate and hepatic venous nitrite/nitrate (NO(x) ) levels were measured 2 h postreperfusion. Hepatic oxygenation was monitored with NIRS. At 2 h post reperfusion, IRI alone resulted in reduced mitochondrial oxygenation (CytOx CuA Redox), serum bicarbonate, hepatic venous NO(x) with an increase in serum transaminases and hepatic deoxyhaemoglobin levels. RIPC before IRI caused significant improvement in mitochondrial oxygenation (P = 0.01), increased serum bicarbonate (P = 0.02), hepatic venous NO(x) (P = 0.025) with a decrease in serum transaminases (P = 0.04) and hepatic deoxyhaemoglobin levels (P = 0.03). There was a positive correlation (P = 0.02) between hepatic venous NO(x) levels and mitochondrial oxygenation. RIPC before IRI improves hepatic mitochondrial oxygenation and reduces acidosis and currently undergoing clinical study.     

G protein-coupled estrogen receptor reduces renal ischemia-reperfusion injury by improving diastolic function of renal interlobular artery

Objective To investigate the effect of G protein-coupled estrogen receptor (GPER) on the diastolic function of renal interlobular artery and reduce renal ischemia-reperfusion injury in rats. Methods Female ovariectomized rats were divided into control group; ischemia-reperfusion injury (IRI) group; GPER-specific agonist (G1) intervention group; GPER-specific blocker+GPER-specific agonist (G15+G1) intervention group. Histopathological examination (HE staining), renal function test and Paller score were used to identify the success of the model and the degree of kidney damage. In vitro microvascular pressure diameter measuring instrument was used to detect the relaxation and contraction activity of renal interlobular artery in each group. Immunofluorescence technique was used to observe the expression of GPER on the renal interlobular artery. Western blotting was used to detect the expression of GPER protein in renal interlobular artery of rats in each group. The NO content was determined by a nitrate reductase method. Results Compared with IRI group, serum BUN, Scr level and Paller score in G1 intervention group were significantly decreased (all P＜0.05). The systolic rate of renal interlobar artery was significantly increased [(40.76±1.57)% vs (29.78±1.87)%, P＜0.05]. The results of immunofluorescence showed that GPER was expressed in renal interlobular artery smooth muscle cells and endothelial cells, and the expression of IRI group was higher than that of the control group. The expression of G15+G1 intervention group was lower than that of G1 intervention group (all P＜0.05). Compared with the IRI group, the NO content in the G1 intervention group increased significantly (all P＜0.05). Conclusions During renal ischemia-reperfusion injury, GPER may regulate the systolic and diastolic activity of the renal interlobar artery by increasing the content of NO, so as to alleviate the renal ischemia-reperfusion injury.     

静脉应用抑肽酶对大鼠肺移植模型缺血再灌注损伤的作用

目的 探讨静脉应用抑肽酶对肺移植后肺缺血再灌注损伤的作用和机制.方法 利用移植肺冷缺血14 h建立的大鼠肺移植缺血再灌注损伤模型,考察抑肽酶对缺血再灌注损伤的影响,并检测细胞因子等指标探讨机制.结果 抑肽酶组较对照组移植肺氧合好、湿干比小,同时支气管肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-2[(113±32)μg/L和(162±43)μg/L,P＜0.05]、血清中IL-8[(7.26±1.01)ng/L和(9.43±0.97)ng/L,P＜0.05]和肿瘤坏死因子(TNF)-α[(152.3±36.4)ng/L和(211.6±52.7)ng/L,P＜0.05]、肺组织中髓过氧化物酶活性[(2.36±0.62)U/g和(3.98±0.36)U/g,P＜0.05]都显著降低.结论 静脉应用抑肽酶能够减轻缺血再灌注损伤,机制可能包括:减少IL-2的释放、抑制TNF-α活化和IL-8产生,抑制中性粒细胞的聚集、激活和脱颗粒.     

右美托咪定联合尼卡地平对老年脊柱手术患者控制性降压及炎症因子的影响

目的探讨右美托咪定联合尼卡地平对老年脊柱手术患者控制性降压及炎症因子的影响。方法前瞻性收集大连市第二人民医院2017年6月至2019年6月收治的老年脊柱手术患者100例(ASA分级Ⅰ~Ⅱ级),男56例,女44例,平均(70±6)岁。依据随机数字表法分为右美托咪定复合尼卡地平组(D+N组)和单用尼卡地平组(N组),每组50例,记录两组患者在麻醉前10 min(T₁)、手术开始后10 min(T₂)、手术开始后20 min(T₃)、手术开始后30 min(T₄)、停药时(T₅)、手术结束(T₆)时心率(HR)、平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)以及术前和术后2 h、6 h的炎症因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)和术野清晰度、术中失血量、不良反应发生情况。结果D+N组T₂、T₃、T₄、T₅、T₆的HR[(78.5±5.8)次/min、(80.3±5.7)次/min、(81.6±5.9)次/min、(81.8±6.12)次/min、(80.1±8.6)次/min]、MAP[(58.2±3.3)mm Hg、(58.8±3.5)mmHg、(59.1±3.5)mm Hg、(84.1±6.6)mm Hg、(83.1±6.2)mm Hg]、CVP[(4.0±0.5)cm H₂O、(4.1±0.5)cm H₂O、(4.2±0.5)cm H₂O、(5.2±0.5)cm H₂O、(5.1±0.5)cm H₂O]低于N组[(85.6±6.5)次/min、(88.1±6.7)次/min、(89.3±6.9)次/min、(88.7±6.57)次/min、(86.4±6.4)次/min,(62.2±3.5)mm Hg、(63.3±3.5)mm Hg、(63.6±3.8)mm Hg、(92.6±6.4)mm Hg、(90.2±6.2)mm Hg,(4.7±0.5)cm H₂O、(4.9±0.5)cm H₂O、(5.0±0.5)cm H₂O、(7.1±0.7)cm H₂O、(6.6±0.7)cm H₂O],差异有统计学意义(F=58.462,F=72.428,F=76.921;F=167.562,F=204.382,F=257.691;均P<0.05);D+N组术野清晰度评分[(2.1±0.3)分]、术中失血量[(392±71)ml]低于N组[(2.6±0.3)分、(684±95)ml],差异有统计学意义(t=8.333,t=17.331,均P<0.05);D+N组术后2 h、6 h的IL-6[(182.5±20.3)pg/ml、(253.6±30.2)pg/ml]、TNF-α[(35.7±4.0)ng/ml、(44.4±5.7)ng/ml]、CRP[(27.2±2.2)mg/L、(42.1±5.0)mg/L]低于N组[(214.3±25.7)pg/ml、(342.4±36.1)pg/ml,(41.5±4.7)ng/ml、(56.4±6.2)ng/ml,(34.3±2.7)mg/L、(58.4±6.4)mg/L],差异有统计学意义(F=64.871,F=82.653,F=93.254;F=94.268,F=125.436,F=151.367;F=74.216,F=90.843,F=98.630;P均<0.05);D+N组不良反应发生率(10.0%)明显低于N组(30.0%),差异有统计学意义(χ²=6.250,P<0.05)。结论右美托咪定联合尼卡地平可有效改善老年脊柱手术患者控制性降压效果,有利于改善患者血流动力学、术野清晰度,且可减少患者术后炎症应激反应及不良反应,值得临床推广。     

PI3K、ERK1/2、mito-K_(ATP)通道及mPTP在七氟醚后处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、线粒体ATP敏感性钾(mito-K_(ATP))通道及线粒体膜通透性转换孔(mPTP)在七氟醚后处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性清洁级SD大鼠,周龄7～10周,体重250～300 g,采用Langendorff法建立大鼠离体心脏灌注模型,取模型制备成功的心脏180个,随机分为12组(n=15),对照组(C组):持续灌注90 min;缺血再灌注组(IR组):停止灌注K-H液30 min,再灌注60 min;IR+LY组、IR+PD组、IR+ATR组、IR+5-HD组和IR+DMSO组:于再灌注即刻分别灌注PI3K特异性抑制剂LY294002(LV)15μmol/L、ERK1/2特异性抑制剂PD98059(PD)20 μmol/L、mPTP开放剂苍术甙(ATR)20 μmol/L、mito-K_(ATP)通道抑制剂5-羟癸酸(5-HD)100 μmol/L和溶剂二甲基亚砜(DMSO)0.02%15 min;七氟醚后处理组(S组):于再灌注即刻灌注经3%七氟醚饱和的K-H液15 min,随后更换正常K-H液再灌注45 min;S+LY组、S+PD组、S+ATR组和S+5-HD组:于再灌注即刻灌注经七氟醚饱和的K-H液同时分别灌注LY 15 μmol/L、PD 20 μmol/L、ATR 20 μmol/L、5-HD 100 μmol/L 15 min,随后更换为正常K-H液再灌注45 min.于平衡灌注20 min、停灌前即刻、再灌注15、30和60 min(T_(0～4))时测定冠状动脉流量(CF),记录心功能指标;C组、IR组和s组分别于T_0和T_4时收集冠状动脉流出液测定乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性和肌钙蛋白I(cTnI)浓度;于T_4时取左心室,测定心肌梗死面积,C组、IR组、IR+ATR组、IR+5.HD组、IR+DMSO组、S组、S+ATR组和S+5-HD组检测细胞凋亡情况,计算凋亡指数(AI),C组、IR组、IR+LY组、IR+PD组、IR+DMSO组、S组、S+LY组和S+PD组测定心肌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD~+)含量.结果 与C组比较,其余各组再灌注时心功能降低,CF降低,心肌梗死面积增大,IR组、IR+ATR组、IR+5-HD组、IR+DMSO组、S组、S+ATR组和S+5-HD组AI升高,IR组、IR+LY组、IR+PD组、IR+DMSO组、S组、S+LY组和S+PD组NAD~+含量降低,IR组和S组LDH、CK-MB活性和cTnI浓度升高(P<0.05);与IR组比较,S组再灌注时心功能提高,CF升高,心肌梗死面积减小,AI降低,NAD~+含量升高,LDH、CK-MB活性和cTnI浓度降低(P<0.05),其余组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 七氟醚后处理可能通过激活PI3K及ERK1/2、促进mito-K_(ATP)通道开放、抑制mPTP开放,从而减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

Remote ischaemic preconditioning of the hind limb reduces experimental liver warm ischaemia-reperfusion injury

BACKGROUND: Direct ischaemic preconditioning of the liver reduces ischaemia-reperfusion injury (IRI). Remote ischaemic preconditioning (RIPC) of a limb has been shown to reduce IRI to the heart. This study determined the effect of brief remote ischaemia to the limb in reducing early liver warm IRI. METHODS: Twenty-eight male rabbits were allocated to four groups: sham operated, RIPC alone, IRI alone, and RIPC plus IRI. RIPC was induced in the leg with a tourniquet, before liver IRI, by three alternate cycles of 10 min ischaemia followed by 10 min reperfusion. Liver IRI was produced by total inflow occlusion for 25 min. Markers of liver injury and systemic and hepatic haemodynamics were measured for 2 h after reperfusion. RESULTS: At 2 h, IRI alone was associated with increased serum levels of aminotransferases, and reduced mean arterial blood pressure, hepatic blood flow and peripheral oxygen saturation. There was significant improvement in these variables in animals that had RIPC before liver IRI, and hepatic venous nitrate/nitrite levels were also significantly higher. CONCLUSION: In this experimental model RIPC appeared to reduce liver IRI.