UGT2B7基因多态性与药物代谢关系的研究进展

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)是药物Ⅱ相代谢中至关重要的酶,而尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶2B7(UGT2B7)基因多态性对UGT的活性起着重要的作用。不同的UGT2B7基因型与患者体内的血药浓度有关,根据基因型的不同可分为强代谢组及弱代谢组。该文主要阐述UGT2B7基因多态性与药物代谢的关系,着重叙述UGT2B7基因多态性与血药浓度的相关性。     

人尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性与相关疾病易感性

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）是体内重要的药物代谢Ⅱ相酶，具有明显的基因多态性。评价基因多态性对疾病易感性影响的重要性，建立基因多态性数据库并进行致病基因 疾病易感性的种群研究具有深远意义。本文拟就人UGT基因多态性及相关疾病易感性进行简述。     

白杨黄素和天然香豆素类对大鼠和人原代培养的肝细胞UGT1A1和UGT1A6活性的影响

二磷酸尿核苷葡萄糖醛酸基转移酶(UGTs)是许多组织细胞内质网中的一种二相药物代谢酶,其家族中的UGT1和UGT2亚型在有毒物质的代谢过程中具有重要的生理意义。研究了白杨黄素和6种天然香豆素类化合物(缴形酮、香豆素、勒素、cis- avicennol、香柠檬烯和前胡醚)对人和大鼠原代培养的肝细胞中UGT1A1和(或)UGT1A6的影响。     

微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞定向分化肝细胞中的表达

目的:评价微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)定向分化肝细胞中的表达,为进一步探索酶蛋白表达及其催化活性提供依据。方法:ES细胞体外悬滴培养定向分化成肝细胞表型,RT-PCR法检测肝细胞发育依赖性基因AFP、ALB、CYP7a1的表达,免疫细胞化学法确认成熟肝细胞特异性标记物白蛋白(ALB)表达,RT-PCR法检测上述肝细胞中Ⅱ相代谢酶尿苷二磷酸葡萄糖醛酸结合酶系(UGTs)和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)基因表达。结果:ES细胞在定向分化至d8时,肝细胞发育依赖性基因AFP和ALB有较高表达,d18时AFP表达甚微而ALB表达显著增加,并伴有成熟肝细胞特异性基因CYP7a1的表达。定向分化呈肝细胞表型时,成熟肝细胞特异性蛋白ALB呈强阳性表达。分化过程中Ⅱ相代谢酶基因UGT1a1、UGT1a9在分化前后均稳定表达;UGT1a6表达呈发育依赖性;UGT2b5未见表达;mGST1在分化前后均有少量表达,但在成熟肝细胞中表达显著增加,与成熟小鼠肝相似。结论:ES细胞体外悬滴培养可定向分化为成熟肝细胞;Ⅱ相代谢酶UGTs、mGST1基因在分化成熟肝细胞表达与小鼠肝细胞相似,可望为Ⅱ相代谢酶代谢深层次研究提供高效模型。     

UGT2B7基因SNP rs7439366影响霉酚酸酯代谢的体外研究

目的 体外研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT2B7)基因单核苷酸多态性(SNP)rs7439366对霉酚酸酯(MMF)代谢的影响。方法 采用基因重组、定点突变技术构建UGT2B7基因rs7439366位点不同等位基因的过表达载体,Lipo2000转染法将重组载体转入HEK293细胞,采用LC/MS/MS系统检测霉酚酸(MPA)代谢产物7-O-葡醛酸苷(MPAG)24h的生成量来评估转染不同等位基因细胞的酶活性。结果 成功构建pIRES2-EGFP-prom(T)和pIRES2-EGFP-prom(C)重组过表达载体并转染至HEK293细胞。LC/MS/MS系统检测结果显示携带C等位基因的突变型UGT2B7转化MPA的酶活性降低,24h产物MPAG的生成量为野生型的63.3%(P<0.001)。结论 UGT2B7基因SNP rs7439366可影响对MMF的代谢能力,是导致患者间MMF代谢差异的因素之一。     

葡萄糖醛酸转移酶的分子生物学研究进展

葡萄糖醛酸转移酶的分子生物学研究进展刘茶珍边建超沈福民（上海医科大学流行病学教研室上海２０００３２）关键词葡萄糖醛酸转移酶功能基因结构分子生物学胆红素代谢缺陷性葡萄糖醛酸转移酶（ＵＤＰ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｓｙｌｔｒａｎｓ－ｆｅｒａｓｅ，ＵＧＴ）是化学...     

表达UGT1A1重组腺相关病毒载体的构建

目的 获得表达胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸酶（UGT1A1）基因；构建UGT1A1重组腺相关病毒载体，制备腺相关病毒。方法 设计、合成引物，通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）从HepG2细胞总RNA中扩增UGT1A1基因，最终连接于pAAV—MCS．双酶切、PCR鉴定阳性重组质粒。并在HEK293T细胞表达，制备高滴度重组腺相关病毒。结果 成功扩增了人类UGT1A1基因．构建表达UGT1A1基因重组腺相关病毒载体。并成功表达于HEK293T细胞。结论 本实验构建的人类UGT1A1重组腺相关病毒将为因UGT1A1活性不足导致的高胆红素血症的基因治疗奠定基础。     

UGT1 A10基因SNP rs10187694对吗替麦考酚酯代谢的影响

体外研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT1A10 ）基因SNP rs10187694 多态位点G/A变异对吗替麦考酚酯（MMF）代谢的影响,明确该位点变异是否与MMF个体代谢差异有关。方法采用基因重组、定点突变技术,构建UGT1A10基因SNP rs10187694位点含有不同等位基因的重组过表达载体,POLO 3000 转染法将重组过表达载体转染入HEK293细胞,采用液相色谱- 质谱联用仪（LC/MS/MS）系统,检测霉酚酸（MPA）代谢产物7-O- 葡醛酸苷（MPAG）的生成量,以评估转染不同等位基因HEK293 细胞中酶的活性。结果成功 构建pIRES2-EGFP-prom（G）和pIRES2-EGFP-prom（A）重组过表达载体,并转染HEK293 细胞。LC/MS/MS系统检测结果显示,携带A 等位基因的突变型1 10代谢MMF 产生MPAG 的能力降低,其24 h MPAG的生成量为（226.00±14.57）nmol/L,而野生型的生成量为（269.00±14.07）nmol/L, UGT1A10突变型MPAG 的生成量是野生型的84.00%,两者比较,差异有统计学意义（ p<0.05）。结论1 10基因SNP rs10187694位点G/A突变可影响MMF代谢产物MPAG的生成,可能是造成不同个体MMF代谢差异的重要原因之一。     

Crigler-Najjar综合征Ⅱ型2例报道并文献复习

目的 确定2例黄疸患儿的病因及基因突变类型.方法 根据黄疸诊疗思路确定2例患儿均为先天性高间接胆红素血症,分别采集2例患儿及其父母的外周血,针对尿甘二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1 A1(UGT1A1)基因进行DNA测序.结果 UGT1A1基因分析结果显示,患儿1存在c.1456T>G(Y486D)纯合突变,患儿2存在c.14...     

遗传性非结合性高胆红素血症研究进展

遗传性非结合性高胆红素血症是由尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（uridine diphosphate glucuronosyl transferase 1A1，UGT1A1）基因突变所致的以非结合胆红素升高为主的高胆红素血症，临床以不同程度的黄 疸为主要表现，没有溶血性疾病指征或肝功能异常指标。根据 UGT1A1 酶缺乏程度及血清非结合胆红素水平， 分为 Gilbert 综合征、Crigler–Najjar 综合征Ⅰ型及Ⅱ型。本文将对非结合性高胆红素血症 UGT1A1 基因研究进 展、临床诊断、治疗和预后等方面进行综述     

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A6基因多态性对丙戊酸钠代谢的影响

目的探讨尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A6（UGT1A6）基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响。方法选择单药服用丙戊酸钠且无肝肾功能异常的癫痫患者67例,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法分析患者的UGT1A6基因552位点的多态性;同时应用荧光偏振免疫法（FPIA）测定患者丙戊酸钠的血药浓度。结果67例患者中UGT1A6的552位点基因型为A／A,A／C及C／C的例数分别40（59．7％）、24（35．8％）及3（4．5％）。A／A组标准血药浓度均值（4．32±0．21）μg·kg·ml^-1·mg^-1和A／C组（3．43±0．30）μg·kg·ml^-1·mg^-1比较差异有统计学意义;含有C等位基因的A／C及C／C作为一组[标准血药浓度均值（3．40±0．28）μg·kg·ml^-1·ng^-1]与A／A组比较,其标准血药浓度均值差异具有统计学意义。结论UGT1A6是丙戊酸钠的代谢酶,UGT1A6基因多态性可影响丙戊酸钠的代谢,UGT1A6基因552位点含有C等位基因的患者应用丙戊酸钠应较常规增加用药剂量。     

细胞色素P4503A代谢模型的研究进展

细胞色素P450(CYPs)是一组结构和功能相关的超家族基因编码的同工酶,负责内源性底物、外源性物质和许多其他合成性化学物质的代谢.CYP3A亚家族成员因为其含量最多、底物谱大,是药物代谢反应中最主要的限速酶.本文综述了近年来CYP3A的代谢模型的研究进展,     

复方双黄连颗粒与黄芩颗粒剂中黄芩苷在大鼠胆汁中代谢的比较研究

目的:比较复方双黄连颗粒剂和黄芩单味药材提取物中黄芩苷在大鼠胆汁中代谢的差异.方法:运用高效液相色谱法和液质联用技术检测黄芩苷的代谢产物种类和数量,并初步确定其结构.结果:从给药后的大鼠胆汁中,发现了几个主要代谢产物并初步鉴定了其化学结构.黄芩颗粒剂和复方双黄连颗粒剂中黄芩苷经肝脏代谢后其主要的相同代谢物为5,6,7-三羟基黄酮-6-O-葡萄糖醛酸苷-7-O-葡萄糖醛酸苷,5,6,7-三羟基黄酮-6-O-硫酸酯-7-O-葡萄糖醛酸苷和5,7-二羟基-6-甲氧基黄酮-7-O-葡萄糖醛酸苷,胆汁中,黄芩单方代谢有原型黄芩苷和5,6,7-三羟基-6-O-葡萄糖醛酸苷,而复方双黄连颗粒剂则无.结论:黄芩颗粒剂与双黄连颗粒剂在黄芩苷的代谢产物存在明显差异,复方配伍促进了总黄芩素在胆汁中的排泄.     

核因子E2p45相关因子2基因在茶多酚调节结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A及其同工酶表达中的作用

目的探讨核因子E2p45相关因子2(Nrf2)基因在茶多酚中的主要化学物质epigallocatechin gallate(EGCG)诱导结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A及其同工酶UGT1A8、UGT1A10表达中的调节作用。方法EGCG分别作用Caco-2及HT-29结肠癌细胞12h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因表达水平的变化,免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜观察细胞内Nrf2蛋白定位的改变。此外,利用RNA干扰技术抑制细胞内Nrf2基因的表达,观察阻断前后EGCG对基因表达水平影响的改变。结果(1)Caco-2及HT-29结肠癌细胞系、结肠癌及癌旁组织中UGT1A、1A8、1A10基因表达水平存在差异。(2)EGCG作用Caco-2及HT-29细胞后Nrf2、UGT1A、1A8、1A10表达升高1.8~9.2倍(均P<0.05),免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜检测到Nrf2蛋白向细胞核内聚集。(3)酶切分析和测序证实成功构建了RNA干扰真核表达载体pSilence-Nrf2-A、B、C、D及随机序列对照pSilence-CON。(4)pSilence-Nrf2-B质粒转染可显著抑制Nrf2基因的表达,在Caco-2及HT-29细胞中抑制率分别为81.46%±1.68%及84.72%±2.08%(实验重复3次);稳定筛选建立的Nrf2低表达的细胞系Caco-2-siNrf2、HT-29-siNrf2,不仅基础UGT1A酶的表达水平降低,而且EGCG作用后酶诱导表达的作用消失。结论Nrf2基因参与了EGCG诱导UGT1A及其同工酶表达的过程并在其中起关键作用,为进一步论证EGCG在结肠癌化学预防中的作用及其可能的机制提供了新的论据。     

基因多态性与器官移植受者霉酚酸个体化治疗研究进展

霉酚酸(MPA)是新一代抗代谢免疫抑制剂,其广泛应用于肾移植术后抗排斥治疗,然而其药动药效及不良反应个体差异大.通过查阅近5年国内外相关文献,对各研究结果及发展趋势综合分析.总结了近年来国内外学者对基因多态性与MPA药动学、药效学影响的研究,得出了与MPA及其代谢物药动学有关的是:UGT1A9 C-440T、UGT1A9 T-275A 或 C-2152T、UGT2B7 C802T、UGT2B7 G211T、SLCO1B3 G334T、ABCC2C-24T;与药效学相关的是 IMPDH1rs2278293、 IMPDHlrs2278294 和 IMPDH2rs11706052;与不良反应相关的是:UGT1A8 * 2、UGT2B7-840G＞ A、ABCB1 C3435T、AB-CG2 C421A、ABCC2C-24T、SLC01B3 G334T.指出了 MPA 代谢酶、转运体及药效酶基因多态性对指导器官移植受者 MPA个体化用药具有十分重要的意义.但分析表明尚需更多高质量、大样本的体内研究.     

莱菔子素诱导结肠癌Caco-2细胞株葡萄糖醛酸转移酶1A的表达及其机制

目的探讨莱菔子素(SFN)对结肠癌Caco-2细胞株葡萄糖醛酸转移酶1A(UGT1A)表达的诱导作用及其机制。方法采用RT-PCR及Western印迹检测SFN诱导Caco-2细胞株UGT1A及其同功型的表达,高效液相色谱法测定UGT1A的催化活性;用共聚焦激光显微镜观察核转录因子Nrf2的转位。结果(1)10~35μmol/LSFN处理组UGT1AmRNA相对系数与对照组比较差异有统计学意义(P<0·05)。UGT1AmRNA表达量与SFN的剂量呈显著正相关(r=0·79,P<0·01)。25μmol/LSFN处理组的诱导作用随着时间延长而增强,呈时间依赖性。25μmol/LSFN处理组与对照组之间UGT1A1(P=0·006)、UGT1A8(P=0·017)、UGT1A10(P=0·008)表达的差异有统计学意义。(2)10~30μmol/LSFN作用于结肠腺癌Caco-2细胞株24h,随着浓度的增加,UGT1A蛋白带的灰度值比值增加。与对照组相比,差异均有统计学意义。(3)在SFN处理组N-OH-PhIP-N2葡萄糖醛酸甙的峰值明显增高。(4)共聚焦激光显微镜观察在对照组细胞质中看到Nrf2红色荧光标记,而在25μmol/LSFN处理24h组的细胞可在胞核内看到强烈的红色荧光,表示这种信号转导因子的细胞内转位。结论(1)小剂量的SFN能诱导UGT1A及其同工型UGT1A1、1A8、1A10mRNA表达,UGT1A蛋白表达增加,对杂环胺的葡萄糖醛酸结合能力增强。(2)SFN有可能通过核转录因子Nrf2激活UGT1A基因的转录表达。     

代谢酶基因多态性与结直肠癌临床病理特征的关系*

目的 探讨代谢酶基因谷胱甘肽S-转移酶M3（GSTM3）、二氢嘧啶脱氢酶基因（DPYD）、UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A1（UGT1A1）单核苷酸多态性（SNP）与结直肠癌临床病理特征的关系。方法 选取2016年1月—2017年7月江苏省肿瘤医院收集的结直肠癌患者外周血690份,使用TaqMan实时荧光定量PCR法对GSTM3 rs7483、DPYD rs1801159、UGT1A1 rs3755319 3个位点进行基因分型,应用Logistic回归分析3个 多态性位点与结直肠癌临床特征的关系。结果 隐性模型中GSTM3 rs7483 GG基因型在Ⅰ、Ⅱ期的频率高于Ⅲ、Ⅳ期（P?<0.05）,分层分析发现,在>60岁患者中,隐性模型中GG基因型携带者Ⅰ、Ⅱ期肿瘤比例是AA+GA基因型的0.321倍（P?<0.05）。DPYD rs1801159 AG+GG基因型携带者低分化肿瘤比例是AA基因型的1.398倍（P?< 0.05）,尤其与低龄（≤60岁）和女性患者的低分化有关系（P?<0.05）。未发现UGT1A1 rs3755319与结直肠癌临床病理特征的关系（P?>0.05）。结论 代谢酶基因GSTM3 rs7483、DPYD rs1801159多态性可能影响结直肠癌的临床进展。     

结肠上皮细胞和结肠癌细胞内溶酶体酶免疫电镜定位比较研究

采用后包埋免疫金技术，在透射电镜下识别确定Ｗｈｉｔｅ树脂包埋的结肠上皮细胞和结肠癌细胞内β－葡萄糖醛酸酶超微结构定位，和两者之间比较。结果发现，此酶金标颗粒定位于结肠上皮细胞和结肠癌细胞中的内质网、高尔基复合体和溶酶体中。癌细胞中β－葡萄糖醛酸酶的数量高于正常结肠上皮细胞。提示β－葡萄糖醛酸酶的增多可能与癌细胞旺盛的机能活动和异常的形态结构有关。     

人UGT1A3催化黄酮类化合物葡醛酸结合反应定量构效关系研究

目的 建立人UGT1A3催化黄酮类化合物定量构效关系,考察不同结构参数对葡醛酸结合反应的影响.方法 采用半经验量子化学计算法MOPAC-AM1及逐步回归方法对11个黄酮类化合物的结构参数和UGT1A3催化葡醛酸反应的Km值进行定量构效关系研究.结果 所建立的QSMR模型(pKm=-2.207 07+0.002 56HOF+3.212 90 QC5)具有较好的拟合性.结论 分子生成热(HOF)和5位C上的静电荷这两个结构参数是影响其葡醛酸结合活性的主要结构因素.     

葡萄糖醛酸转移酶异常性黄疸

葡萄糖醛酸转移酶异常性黄疸中国医科大学第一临床学院（１１０００１）消化内科周旭，傅宝玉在肝脏的胆红素代谢中，葡萄糖醛酸转移酶（以下称葡醛转移酶）居于重要地位。缺乏此酶，胆红素由非结合型到结合型的转化便不可能进行。因此葡醛酸转移酶的合成与成熟受阻或活性...