5-羟色胺抗独特型抗体的制备和鉴定

抗独特型抗体(Ab_2)可分为四种类型。其中Ab_2β具有和抗原(配体湘类似的结构,能特异性地与配体的受体结合。用Ab_2β做免疫组织化学染色,可对配体的受体进行定位。5-羟色胺(5-HT)是一种重要的生物胺,对机体的生理功能具有广泛的调节作用。早在1986年,我们首先在国内成功地制备出兔抗5-HT抗体。该抗体已被广泛地用于5-HT能神经及5-HT阳性内分泌细胞在机体内分布的研究,为了探     

Monoclonal anti-idiotype antibody bearing the internal image of nasopharyngeal carcinoma associated antigen

目的　制备和鉴定具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型单克隆抗体 (Ab2 )。方法　用鼻咽癌单抗 (Ab1)免疫小鼠 ,免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 / 0融合获得杂交瘤细胞系。用SandwichELISA和结合抑制试验筛选阳性克隆。为进一步证实Ab2是否具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,用Ab2免疫小鼠获得抗血清 ,以ELISA和竞争抑制试验检测Ab3。用迟发性变态反应和T细胞增殖试验检测Ab2诱导的细胞免疫反应。结果　选用两株抗鼻咽癌单抗FC2、HNL5 (Ab1)为免疫原 ,制备两株抗相应Ab1独特型的抗独特型抗体 2H4和5D3(Ab2 )。 2H4、5D3能分别与FC2、HNL5特异性结合 ,并能抑制相应Ab1与靶细胞HNE2的反应 ,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3)。并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。结论　抗独特型抗体 2H4、5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 (Ab2 β) ,能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。     

卵巢癌抗抗独特型单克隆抗体3D12的制备及初步研究

目的:制备卵巢癌抗抗独特型单克隆抗体并进行初步鉴定,为深入研究卵巢癌疫苗的主动免疫机制奠定基础.方法:以卵巢癌抗独特型单克隆抗体6B11作为免疫原,采用杂交瘤技术制备抗抗独特型单克隆抗体3D12.经酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫组织化学、流式细胞学、免疫印迹杂交等检测其特异性结合抗原的性质;竞争抑制实验鉴定其特异性结合的抗原表位.结果:获得1株稳定分泌3D12的杂交瘤细胞,所分泌的3D12能够特异性结合6B11及卵巢癌初始抗原OC166-9,并能竞争抑制COC166-9(抗OC166-9的单克隆抗体Ab1)与OC166-9的结合.免疫印迹杂交显示,3D12与COC166-9免疫沉淀的蛋白的相对分子质量相同.该抗体为IgM,亲和力约为8.34×10⁷ L/mol.结论:卵巢癌抗抗独特型单克隆抗体3D12属Ab1样Ab3,间接证实6B11为抗原内影像型抗独特型抗体.     

5—羟色胺抗独特型单克隆抗体的功能鉴定

对5-羟色胺（5-HT）抗独特型单克隆抗体的功能进行鉴定．方法：细胞培养法，免疫组织化学ABC法和形态计量法．结果：培养平滑肌细胞显示5-HT受体免疫反应阳性，在正常培养基培养的平滑肌细胞的平均长度为（18．8±35．4）μm．培养基中含不同浓度的5-HT抗独特型单克隆抗体（分别为0．01％，0．03％，0．10％，0．30％，1％抗体原液），平滑肌细胞的平均长度分别缩短为（175．6±43．3）μm，（16．2±46．2）μm，（116．9±25．8）μm，（89．5±22．8）μm，（79．9±21．6）μm，除含0．01％抗体原液组外均比正常组有非常显著的差别（P＜0．01）．结论：该抗独特型单克隆抗体具有与5-HT相类似的诱导平滑肌收缩的功能，5-HT受体可能介导了这种功能．     

用单克隆抗-HBs免疫同系小鼠制备抗独特型抗体

单克隆抗-HBs在同系BALB/c 小鼠体内所诱生的抗独特型抗体,能模拟HBsAg的作用,该抗独特型抗体既能与抗-HBs发生特异性结合,又能在同系动物中添生出抗HBs的独特型抗体,从而为生产乙肝疫苗开辟了一条新的可能的途径。由于单克隆抗-HBs在同系动物体内只诱生抗独特型抗体,故无同种型和同种异型的干扰,且纯化程序简单,避免了许多干扰因素,有利于研究机体免疫网络中各细胞间的相互作用。     

湖南省2000年医药卫生科研进展

一、基础医学研究 1.鼻咽癌抗独特型抗体的制备及主动免疫机制研究:中南大学湘雅医学院研究人员根据Jerne免疫网络理论,首先用小鼠杂交瘤单克隆抗体技术,以鼻咽癌细胞株为免疫原,制备了一系列抗鼻咽癌的单抗(Ab1)。再用与钥孔(虫戚)血兰素的交联物抗体为免疫原和小鼠杂交瘤技术制备了作用与Ab1的V区的抗独特型抗体(Ab2),并证实其中某些Ab2具有鼻咽癌相关抗原的内影像(Ab2β),以此抗体(Ab2)免疫小鼠,诱导与鼻咽癌细胞发生特     

人OX40单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定

目的 应用杂交瘤技术,制备鼠抗人OX40单克隆抗体.方法 以本室纯化的OX40胞外段融合蛋白免疫6～8周龄的雌性BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞阳性克隆.用杂交瘤细胞接种小鼠腹腔诱生腹水,腹水经饱和硫酸铵纯化沉淀后用间接ELISA法测定抗体的Ig类别.SDS-PAGE分析抗体的纯化程度,用免疫组化技术鉴定单克隆抗体与表达有OX40分子的组织及细胞特异性结合的情况.结果 获得1株能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞株诱生的小鼠腹水纯化后抗体纯度较高,Ig类别为IgG,蛋白浓度为6.129g/L.制备的单抗经淋巴细胞免疫组化及炎性淋巴组织免疫组化技术初步鉴定结果表明,该抗体与OX40单克隆抗体标准品制剂相比具有类同的特异性.结论 成功获得能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体具有较高的纯度和活性.     

抗独特型抗体的简易制备方法及其对双克隆骨髓瘤蛋白的检测

各种骨髓瘤患者的M蛋白均有个体基因型(Idiotype)抗原决定簇,可产生抗独特型抗体(Anti-idjotype antibody)。一个病人的体内可产生两种以上的M蛋白,且常有相同的独特型。有人报道用吸收过的抗Id抗体检测IgA骨髓瘤独特型B淋巴细胞。但他们是按照Abdou法。采用患者血清制备抗体操作烦琐复杂。我们首次利用两例双克隆骨髓瘤患者的肾脏受损而排出非选择性蛋白尿的特点,从尿巾收集骨髓瘤蛋白,免疫家兔制备抗独特型抗休成功,报道如下。     

睫状神经营养因子单克隆抗体制备

目的：制备睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)单克隆抗体。方法：将CNTF免疫的BALB/c小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次克隆化培养,获得分泌CNTF单克隆抗体的杂交瘤细胞株;然后进行体内诱生获取含大量CNTF单克隆抗体的腹水和血清;再进行CNTF单克隆抗体鉴定和效价测定。结果：获得5株分泌CNTF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型为IgG2a;腹水和血清中该抗体效价分别为1∶107-1∶108和1∶106;该抗体能特异性地显示SD大鼠脑内表达CNTF的神经元,其中1株单克隆抗体能抑制CNTF促进体外培养新生SD大鼠骨骼肌细胞增殖的功能。结论：制备成功高效且特异的CNTF单克隆抗体,为CNTF结构、功能和机制的研究提供了有效工具。     

基因重组人睫状神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的　制备基因重组人睫状神经营养因子 (rhCNTF)单克隆抗体。方法利用rhCNTF免疫BALB/C小鼠 ,取其脾细胞与小鼠NS -1骨髓瘤细胞融合 ,制备 3株抗rhCNTF的单克隆抗体 ,分别命名为CA2 、CA6 和BB11。结果 3株抗体类型均为IgG2a,免疫印迹试验证明为特异性抗CNTF的单克隆抗体 ;抗体相加试验表明 3株单抗是针对CNTF两个不同的抗原决定簇。     

抗5-羟色胺抗体的制备

5-羟色胺(5-HT)抗体对5-HT能神经、5-HT免疫活性的APUD细胞的定性、定位和原位定量研究,对机体组织和血液中游离5-HT的定量分析等具有重要的作用,但5-HT是一种半抗原性的小分子,制备其特异性抗体难度较大,国内迄今未见有成功的报道,为此,我们进行了试制5-HT抗体的研究, 参照Ranadive(1967)和(Steinbusch(1978)等人的方法,并加以改进,以牛血清白蛋白作为载体,通过Mannich反应,与5-HT硫酸肌酐进行化学共价交联,摸索了各种反应条件,制得5-HT-牛血清白蛋白免疫原结合物。采用多点皮下注射的方法,以此结合物免     

具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型抗体研究

用抗人鼻咽癌单抗FC2 ,HNL5 (Ab1)分别免疫Balb/C小鼠 ,制备了两株抗独特型抗体 2H4和 5D3(Ab2 )。结果显示 :2H4和 5D3分别与FC2和HNL5特异性结合 ,抑制Ab1与靶细胞的反应 ,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3) ;并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。表明 2H4和 5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 (Ab2 β) ,能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。     

具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型抗体研究

用抗人鼻咽癌单抗FC2,HNL5(Ab1)分别免疫Balb／C小鼠,制备了两株抗独特型抗体2H4和5D3(Ab2)。结果显示：2H4和5D3分别与FC2和HNL5特异性结合,抑制Ab1与靶细胞的反应,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体(Ab3);并能诱发特异性迟发型超敏反应(DTH)和细胞增殖反应。表明2H4和5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像(Ab2β),能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。     

抗人B型红细胞单克隆抗体的研究——Ⅰ.ZMB1细胞株的建立

本文报道了用人B型Rh(+)红细胞免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NSI融合,获得了一株能分泌抗人B型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,定名为ZMB_1,血凝试验结果表明,ZMB_1具有较好的特异性。经临床574例已知ABO血型的献血员测定,该抗体只与B、AB型红细胞发生凝集反应。将该杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔及皮下可诱生含较高滴度(1:1024～4096)的腹水和肿瘤。单克隆抗体属IgM类。该细胞株经组织培养传代历时7个月,分泌“抗B”抗体性能稳定,并对建株及实用性作了探讨。     

肌源性神经诱向因子1及其受体在大鼠胃的免疫组织化学定位

肌源性神经诱向因子１及其受体在大鼠胃的免疫组织化学定位［｜｜张南玲，黄威权，周明华解剖学报，１９９４；２５（１）：５６～５８］作者用肌源性神经诱向因子１（ＭＮＴＦ１）单克隆抗体及抗独特型单克隆抗体的免疫组织化学染色研究了ＭＮＴＦ１及其受体在大鼠胃的分...     

大鼠腮腺内5-羟色胺受体的免疫组织化学探讨

目的：观察大鼠腮腺内5-羟色胺(5-HT)受体的分布。方法：免疫组织化学ABC法。抗5-HT的抗体是兔源性的抗5-HT独特型抗体，购于第四军医大学。结果：大鼠腮腺的各级导管的上皮细胞、毛细血管及小血管的内皮细胞均呈5-HT受体免疫反应阳性，免疫反应物分布于胞质，胞核为阴性反应。结论：大鼠腮腺各级导管上皮细胞内有5-HT受体，说明大鼠腮腺可能有自分泌5-HT的功能。     

基因重组人睫状神经营养因子单克隆抗体的缺备及初步鉴定

目的 制备基因重组人睫状神经营养因子（rhCNTGF)单克隆抗体，方法 利用rhCNTF免疫BALB/C小鼠，取其脾细胞与小鼠NS-1骨髓细胞融合，制备3株抗rhCNTF的单克隆抗体，分别命名为CA2、CA6和BB11。结果 三株抗体类型均为IgG2a，免疫印迹试验证明为特异性抗CNTF的单克隆抗体；抗体相加试验表明三株单抗是针对CＮＴＦ两个不同的抗原决定簇。     

抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 运用杂交瘤技术制备抗血红蛋白(hemoglobin, Hb)单克隆抗体,为进一步探讨Hb在帕金森病中的发病机制及早期诊断中的意义奠定基础。方法 用重组人Hb作为抗原免疫Balb/c小鼠,并将其脾细胞与同系骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤,经3次有限稀释法及酶联免疫吸附试验法筛选获得抗人Hb单克隆抗体杂交瘤株5B1。腹腔注射于免疫抑制Balb/c小鼠产生腹水,并利用Dot blotting、酶联免疫吸附实验,免疫共沉淀、Western blotting法及免疫组织化学染色法进一步测定抗体效价,获得一特异性抗Hb单克隆抗体。结果 成功制备出1株高亲和力、特异性好的抗Hb单克隆抗体。结论 制备的单克隆抗体对Hb具有特异性(包括人血、猴及小鼠),为进一步研究Hb在帕金森病(Parkinson's disease,PD)中的作用提供了有力的特异性工具。     

SARS冠状病毒单克隆抗体制备及在肺尸检标本染色中的应用

目的制备抗SARS冠状病毒的单克隆抗体,用于SARS的实验室诊断。方法灭活SARS冠状病毒(PUMC01)全病毒免疫BALB／C小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(NS-1)融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光法(IFA)及免疫印迹法对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,并用其中一株(M2)杂交瘤诱生的腹水单克隆抗体对SARS患者尸检肺组织切片进行免疫组织化学染色。结果共筛选出6株杂交瘤细胞,ELISA及IFA法证实其分泌的单克隆抗体与SARS冠状病毒有特异性反应,与其他常见呼吸道病原体均无交叉反应。免疫双扩散方法鉴定1株杂交瘤细胞(M2)为免疫球蛋白IgG3型,其余5株均为IgG1型。免疫印迹试验显示1株杂交瘤细胞(M2)分泌的抗体与相对分子质量68000的蛋白有特异性反应;4株杂交瘤细胞分泌的抗体与相对分子质量27000的蛋白有特异性反应,1株在免疫印迹上未见到结果。SARS患者尸检肺组织病理切片免疫组织化学染色阳性,在肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及巨噬细胞的胞浆均可见阳性颗粒。结论我们制备的6株单克隆抗体是抗SARS冠状病毒的特异性单克隆抗体,用于SARS尸检肺组织免疫组化染色,结果阳性。     

分泌抗白喉类毒秦单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

我们用白喉类毒素免疫小鼠的脾细胞与NS-1小鼠骨髓瘤细胞缸合,获得一株分泌抗白喉类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测此杂交瘤细胞培养上清液中特异性抗体效价:间接血凝法为1:640～1280,ELISA法为1:800～1600。细胞注入同系小鼠可诱生含高效价抗体的腹水(高于培养液1000倍)。用免疫双扩散法鉴定此单克隆抗体属小鼠I。GI亚类。杂交瘤细胞染色体数为86～102。此细胞株经连续传代六个月和在液氮中冻存复苏后仍保持稳定的分泌抗体能力。