CACNA1H基因敲除对小鼠孤独症样行为及海马神经元形态学的影响

目的: 研究CACNA1H基因敲除(knockout, KO)对小鼠孤独症样行为及海马神经元形态学的影响。方法: 25只3~4周龄C57BL/6背景的CACNA1H KO小鼠作为实验组,26只同年龄同背景的野生型(wild type,WT)小鼠作为对照组。通过三箱实验和旷场实验观察小鼠社交、焦虑和重复刻板行为后测量其脑质量与脑体积,用尼氏染色法(Nissl staining)观察海马神经元数目。将CACNA1H杂合子小鼠与Thy1-GFP-O小鼠杂交,构建CACNA1H^-/--Thy1⁺(KO-GFP)及CACNA1H^+/+-Thy1⁺(WT-GFP)小鼠,观察海马神经元树突棘密度及成熟度。结果: 三箱实验中,社交测试阶段,KO小鼠在陌生鼠箱中的时间比空箱更长(F_1,14=95.086,P<0.05;Post-Hoc:P<0.05),探索的偏好指数与对照组相比差异无统计学意义(t=1.044,P>0.05);新社交对象识别测试阶段,KO小鼠在新陌生鼠箱与陌生鼠箱中的时间差异无统计学意义(F_1,14=18.062,P<0.05;Post-Hoc:P>0.05),探索的偏好指数低于对照组(t=2.390,P<0.05)。旷场实验中,KO小鼠在旷场中心活动时间明显少于对照组(t=2.503,P<0.05),自梳理时间明显多于对照组(t=-2.299,P<0.05)。形态学结果显示,KO小鼠脑质量/体质量和脑体积与对照组相比差异均无统计学意义(t=0.356,P>0.05;t=-0.660,P>0.05),但其海马齿状回区神经元数目较对照组减少(t=2.323,P<0.05),且KO-GFP小鼠海马齿状回区树突棘密度较对照组增加(t=-2.374,P<0.05),而成熟度差异无统计学意义(t=-1.935,P>0.05)。结论: CACNA1H KO小鼠具有孤独症样行为,可能与海马齿状回区神经元数目减少及树突棘密度增高有关。     

柠檬酸对分化型甲状腺癌患者首次131I治疗后唾液腺功能的保护作用

目的：探讨柠檬酸对术后首次行¹³¹I治疗（简称清甲治疗）的分化型甲状腺癌（DTC）患者唾液腺功能的影响,阐明柠檬酸对¹³¹I治疗的甲状腺癌患者唾液腺功能的保护作用。方法：经患者知情同意,随机选择准备首次行¹³¹I治疗的68例甲状腺乳头状癌患者,随机分为对照组和柠檬酸组,每组34例。对照组患者无特殊准备,柠檬酸组患者于¹³¹I治疗前1周及治疗后3周内每天含柠檬酸1 min（0.2 g/次）后吐出。2组患者分别于¹³¹I治疗前24 h及¹³¹I治疗后3个月行2次^99mTcO^4-唾液腺显像检查,计算第15分钟摄取指数（15 min UI）和排泌分数（SR）,评估唾液腺功能。结果：与¹³¹I治疗前比较,对照组患者¹³¹I治疗后右侧腮腺和双侧颌下腺15 min UI差异无统计学意义（P>0.05）,左侧腮腺15 min UI降低（P<0.05）;与¹³¹I治疗前比较,柠檬酸组患者¹³¹I治疗后双侧腮腺及双侧颌下腺15 min UI差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,柠檬酸组患者¹³¹I治疗前后双侧腮腺和双侧颌下腺15 min UI差异均无统计学意义（P>0.05）。与¹³¹I治疗前比较,对照组患者双侧腮腺治疗后SR降低（P<0.05）,双侧颌下腺SR差异无统计学意义（P>0.05）,柠檬酸组患者双侧腮腺和双侧颌下腺治疗后SR差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组¹³¹I治疗后比较,柠檬酸组患者双侧腮腺SR升高（P<0.05）,双侧颌下腺SR差异无统计学意义（P>0.05）。结论：DTC患者术后首次¹³¹I治疗后唾液腺排泌功能可能受损,短期口含柠檬酸对唾液腺具有保护作用,可以减轻唾液腺的放射性损伤。     

脱细胞猪心包膜生物相容性及成骨性能的体内外评价

目的: 体外检测作为引导性骨再生术(guided bone regeneration, GBR)屏障膜的脱细胞猪心包膜(acellular porcine pericardium,APP)的形貌特性及生物相容性。建立动物模型,检测其体内屏障软组织长入骨缺损的作用及对促成骨的影响。方法: 扫描电镜检测APP膜的超微结构。细胞增殖检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验检测人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell, hBMSCs)接种于APP膜后第1、3、7天细胞增殖情况;接种后第5天,通过鬼笔环肽+DAPI(4,6-diamidino-2-phenylindole)对细胞骨架及细胞核进行染色,观察hBMSCs的增殖及黏附情况。体内实验建立3只比格犬、18个实验位点的牙槽嵴保存动物实验模型,随机分入APP组(拔牙窝内植入Bio-Oss^®骨粉并覆盖APP膜)、BG组(拔牙窝内植入Bio-Oss^®骨粉并覆盖Bio-Gide^®膜)和空白组(自然愈合),术后4周和12周进行Micro-CT扫描检测各组成骨情况,脱钙后进行HE染色,组织学观察各组愈合情况。结果: 扫描电镜下APP膜具有致密及疏松双层非对称及三维多孔超微结构。体外实验证实APP膜可以促进hBMSCs的增殖及黏附,在接种后第7天APP组细胞数量显著高于BG组(P<0.05)。体内实验拔牙窝整体成骨情况:术后4周,3组新生骨比例差异无统计学意义(P>0.05);术后12周,APP组、BG组间新生骨比例差异无统计学意义(P>0.05),但均高于空白组(P<0.05)。冠方成骨情况:术后4周,APP组及BG组膜下方成骨显著高于空白组(P<0.05),组间差异无统计学意义(P>0.05);术后12周,APP组及BG组膜下方成骨显著高于空白组(P<0.05),组间差异有统计学意义(P<0.05)。颊侧骨嵴顶相对吸收量表明:术后4周,APP组显著低于空白组(P<0.05),BG组低于空白组,差异无统计学意义(P>0.05);术后12周,各组颊侧骨嵴顶继续降低,APP组相对吸收量仍显著低于空白组(P<0.05),BG组低于空白组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论: APP膜具有良好的三维结构及细胞相容性,其在GBR中起到良好屏障软组织效果的同时,能够显著促进膜下方成骨及减少颊侧牙槽嵴顶吸收,推测其具有潜在的骨诱导能力。     

男性膀胱过度活动症的尿动力学分型及临床疗效随访

目的 介绍男性膀胱过度活动症(overactive bladder,OAB)的尿动学分型并探究其临床疗效的差异。方法 收集2015年1月至2017年1月北京大学人民医院泌尿外科诊断为OAB并且接受尿动力学检查的男性患者共126例,根据患者的主诉(是否可感知尿急)及尿动力学检查结果(是否有逼尿肌过度活动和终止不自主收缩的能力)将膀胱过度活动症分为四型,分析患者的基本信息、伴随疾病情况、治疗前后的OAB症状评分表(OAB symptom score,OABSS)以及国际前列腺症状评分(international prostate symptom score,IPSS)是否存在差异。结果 根据分型方法,Ⅰ型32例(25.40%),Ⅱ型27例(21.43%),Ⅲ型59例(46.83%),Ⅳ型8例(6.35%),四型患者的身高差异无统计学意义(P>0.05),Ⅳ型患者的年龄、体质量、伴随疾病数目显著大于其余三型,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型患者的年龄、体质量、伴随疾病数目的差异无统计学意义(P>0.05),Ⅳ型患者治疗前后OABSS和IPSS量表差值显著小于其余三型,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅲ型患者治疗前后OABSS和IPSS量表差值显著大于其余三型,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ型和Ⅱ型患者治疗前后OABSS和IPSS量表差值的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 在四型男性OAB患者中,Ⅲ型治疗效果最好,Ⅳ型治疗效果最差,此分型方法对男性OAB的个体化诊疗以及指导预后具有重要意义。     

酸刺激对腮腺和下颌下腺唾液流率及成分的影响

目的: 探讨酸刺激对腮腺和下颌下腺唾液流率及成分的影响,为全面评估健康和疾病状态时的唾液腺功能提供依据。方法: 采用自然留取法收集210名健康志愿者在静息状态下的全唾液,负压吸引法收集腮腺、下颌下腺分泌液; 2%柠檬酸每间隔1 min滴于舌尖进行酸刺激,共5次,收集酸刺激状态下全唾液、腮腺及下颌下腺分泌液,称量计算各项唾液流率。生化分析仪检测唾液样本的K⁺、Na⁺、Cl^-、Ca²⁺、总蛋白、总磷浓度及α-淀粉酶水平,对比分析不同类别唾液流率及成分的变化特点。结果: 与静息状态检测结果相比较,酸刺激后腮腺唾液流率增加的倍数(10.7倍)大于下颌下腺(2.9倍);腮腺唾液中的Na⁺、Cl^-、Ca²⁺、总蛋白和α-淀粉酶浓度明显升高(P<0.05), 总磷、K⁺差异无统计学意义(P=0.89,P=0.34);下颌下腺唾液中的Na⁺和Ca²⁺浓度显著升高(P<0.05), 总磷浓度显著降低(P<0.05), Cl^-浓度升高,但差异无统计学意义(P=0.068), 总蛋白、K⁺和α-淀粉酶差异无统计学意义(P=0.85,P=0.07,P=0.95)。下颌下腺唾液中总磷的复合分泌速率不变(P=0.066), K⁺、Na⁺、Cl^-、Ca²⁺、总蛋白、α-淀粉酶分泌速率升高(P<0.01)。腮腺唾液中K⁺、Na⁺、Cl^-、Ca²⁺、总蛋白、总磷及α-淀粉酶的复合分泌速率均升高(P<0.01)。腮腺唾液中Na⁺、Cl^-、K⁺、总磷、总蛋白、α-淀粉酶浓度高于下颌下腺(P<0.01),下颌下腺唾液中Ca²⁺浓度显著高于腮腺(P<0.001)。结论: 腮腺对酸刺激的反应更为强烈,下颌下腺分泌较为稳定; 酸刺激明显影响唾液中电解质的浓度,复合分泌速率是同时反映唾液流率和成分浓度的评价指标; 腮腺在唾液总蛋白、总磷和α-淀粉酶的分泌过程中起重要作用,而下颌下腺是唾液中Ca²⁺的主要来源。     

U0126对子宫内膜异位症大鼠MEK/ERK/NF-κB通路及增殖侵袭的影响

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶抑制剂U0126对子宫内膜异位症大鼠丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶蛋白(MEK/ERK)通路及增殖侵袭的影响。 方法 采用自体移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型,造模成功的18只雌性SD大鼠随机分为模型组、二甲基亚砜(DMSO组)和U0126组(20 mg/kg),每组6只。另设假手术组6只作为对照组。用药4周后统一处死大鼠,测量并计算各组子宫内膜异位病灶体积,采用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠内膜组织病理学形态变化,采用免疫组织化学染色法检测各组大鼠内膜组织中增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白表达,采用Western blotting法检测各组大鼠内膜组织中MEK、ERK及NF-κB蛋白表达。 结果 与模型组相比,U0126组异位病灶体积明显缩小(F=4.54,P=0.02);苏木精-伊红染色结果显示,对照组在位内膜组织见子宫内膜腺上皮呈柱状排列,腺体排列整齐,腺腔完整,腺体周围未见出血及炎性细胞形成;与对照组相比,模型组及DMSO组在位内膜组织显示多个大小不等的子宫内膜异位腺体囊肿及间质反应,可见多量炎性细胞浸润,腺体周围可见出血及新生血管生成;与模型组相比,U0126组见子宫内膜腺体明显减少,腺腔变小,腺上皮变薄,间质反应减轻;免疫组化结果显示,与对照组相比,模型组及DMSO组在位内膜组织中PCNA和MMP9蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组相比,U0126组PCNA和MMP9蛋白表达水平明显降低(P<0.05),DMSO组差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果显示,与对照组相比,模型组和DMSO组在位内膜组织中MEK、ERK、NF-κB蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组相比,U0126组MEK、ERK、NF-κB蛋白表达均明显降低(P<0.05),DMSO组差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 U0126可以明显抑制子宫内膜异位症大鼠异位病灶生长及腺体增生,其机制可能与抑制MEK/ERK/NF-κB通路活性降低在位内膜组织增殖侵袭能力有关。     

多囊卵巢综合征卵巢储备功能降低患者肥胖及糖脂代谢特征

目的 探讨中国多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）合并卵巢储备功能降低（diminished ovarian reserve,DOR）患者肥胖及糖脂代谢特征。方法 选取2015年1月至2017年1月在首都医科大学附属北京妇产医院内分泌科就诊的多囊卵巢综合征患者338名（包括PCOS合并DOR功能降低患者57名及单纯PCOS患者281名）及同期就诊的正常对照组70名,记录研究对象的年龄、月经情况,测量其身高、体质量、腰围、臀围,测定基础血清卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、雌二醇（estradiol,E₂）、睾酮（testosterone,T）、抗苗勒管激素（anti-Müllerian hormone,AMH）、空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）、空腹胰岛素（fasting insulin,FINS）、三酰甘油（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C）,测量基础窦卵泡数（baseline antral follicle count,bAFC）。对多囊卵巢综合征合并卵巢储备功能低下患者、单纯多囊卵巢综合征及正常对照组的各指标进行比较,并对各组AMH与其他指标进行相关性分析。结果 （1）单纯PCOS患者、PCOS合并DOR患者及正常对照组全身型肥胖（≥ 25 kg/m²）的发生率分别为38.1%、40.4%及22.9%,腹型肥胖[腰臀比（waist hip ratio,WHR）≥ 0.85]的发生率分别为46.6%、21.1%及28.6%。PCOS合并DOR患者全身型肥胖率与单纯PCOS患者及正常对照组间的差异均无统计学意义（P>0.05）,而腹型肥胖率低于单纯PCOS患者（P<0.05）。（2）PCOS合并DOR患者FPG、FINS、自我平衡模型分析法（homeostasis model assessment,HOMA）-计算胰岛素抵抗（insulin resistivity,IR）与单纯PCOS患者的差异均无统计学意义（P>0.05）,而FPG、HOMA-IR均高于正常对照组（P<0.05）。（3）单纯PCOS患者、PCOS合并DOR患者TC、HDL-C及LDL-C均高于正常对照组（P<0.05）,PCOS合并DOR患者TC、TG、HDL-C及LDL-C与单纯PCOS患者的差异均无统计学意义（P>0.05）。（4）单纯PCOS患者,AMH与FPG、HOMA-IR呈负相关关系（P<0.05）,与HDL-C呈正相关关系（P<0.01）;PCOS合并DOR患者AMH与肥胖及糖脂代谢指标均无相关关系（P>0.05）;正常对照组AMH仅与HDL-C呈正相关关系（P<0.01）。结论 PCOS合并DOR患者腹型肥胖率低于单纯PCOS患者,其糖脂代谢特征与单纯PCOS患者相似,但AMH与糖脂代谢指标的相关性不同于单纯PCOS患者及正常对照组。     

围绝经期及绝经后女性基于腰椎定量电子计算机断层扫描测定的内脏脂肪与糖脂代谢的相关性

目的 研究围绝经期及绝经后女性内脏脂肪与糖脂代谢的相关性。方法 回顾性分析2018年9月至2020年2月期间在首都医科大学附属北京妇产医院内分泌科就诊并接受腰椎定量电子计算机断层扫描（quantitative computed tomography,QCT）检查的患者185例,依据内脏脂肪面积分为内脏型肥胖组和正常组,记录患者一般信息,对人体测量学指标及糖脂代谢指标进行测定。结果 在围绝经期及绝经后患者中,内脏型肥胖组的空腹血糖,空腹胰岛素及稳态胰岛素指数均高于正常组,VAT与三者呈明显正相关。围绝经期三酰甘油浓度高于正常组,高密度脂蛋白胆固醇低于正常组（P<0.05）;总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A和B的浓度差异无统计学意义（P>0.05）。VAT与三酰甘油及载脂蛋白B呈正相关（P<0.05）,与高密度脂蛋白胆固醇及载脂蛋白A呈负相关（P<0.05）,尚未发现VAT与总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇具有明显相关性（P>0.05）。绝经后低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B浓度明显高于正常组,高密度脂蛋白胆固醇及载脂蛋白A浓度明显低于正常组（P<0.05）;总胆固醇及三酰甘油浓度差异无统计学意义（P>0.05）。VAT与载脂蛋白B呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇及载脂蛋白A呈负相关,尚未发现VAT与总胆固醇、三酰甘油及低密度脂蛋白胆固醇具有明显相关性（P>0.05）。结论 围绝经期及绝经后女性内脏脂肪与糖脂代谢密切相关,应该关注局部脂肪分布与健康的关系。     

综合干预治疗对多囊卵巢综合征患者雄激素浓度的影响

目的 评估多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）患者经综合干预治疗后雄激素浓度的变化。方法 选取2019年3月至2020年2月就诊于首都医科大学附属北京妇产医院接受综合干预治疗的PCOS患者88例为PCOS组,按2：1的比例匹配同期就诊的健康女性44例为对照组,比较PCOS组治疗前后、PCOS组治疗后与对照组观察指标间的差异,包括：体质量指数（body mass index,BMI）、腰围、卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、LH/FSH、总睾酮（total testosterone,TT）、游离睾酮（free testosterone,FT）、性激素结合球蛋白（sex hormone binding globulin,SHBG）、抗苗勒管激素（anti Müllerian hormone,AMH）。结果 治疗前两组患者年龄、身高差异无统计学意义（P>0.05）,PCOS组患者的体质量、BMI、腰围、AMH、LH、LH/FSH、TT、FT均显著高于对照组（P<0.05）,FSH、SHBG显著低于对照组（P<0.05）;PCOS组综合干预治疗前后比较,体质量、BMI、腰围、AMH、TT、FT、LH、LH/FSH均显著下降（P<0.05）,SHBG显著升高（P<0.05）;治疗后PCOS组与同期对照组的AMH、LH/FSH、TT比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 综合干预治疗3个月后能显著降低PCOS患者的雄激素浓度,尤其总睾酮浓度达到健康女性浓度。     

有氧运动结合抗阻训练对肥胖男性大学生身体成分、心血管功能及血清C反应蛋白水平的改善作用

目的：分析12周有氧运动（AE）和有氧运动结合抗阻训练（AE+RT）对肥胖男性大学生身体成分、心血管功能及血清C反应蛋白（CRP）的干预效果,为肥胖男性大学生运动处方的制定提供依据。方法：将36名肥胖男性大学生随机分为对照组、AE组和AE+RT组,每组12名。对照组肥胖男性大学生在整个试验期不进行任何规律的体育运动,AE组和AE＋RT组大学生进行每周5次、每次60 min共12周的运动干预。所有受试者在运动干预前和干预后检测体质量（BW）、体质量指数（BMI）、体脂肪量（FM）、体脂百分比（BF%）、肌肉质量（MM）、腰围（WC）和血清CRP水平,采用心血管功能测试仪评估心脏功能[心率（HR）、每搏心搏量（SV）和心输出量（CO）]、血管功能[平均收缩压（MSP）、平均舒张压（MDP）、血管弹性扩张系数（VDC）和总周阻阻力（TCR）]和血液黏度（V）。结果：与运动前比较,运动12周后AE组和AE＋RT组肥胖男性大学生BW、BMI、FM和BF%明显降低（P<0.05或P<0.01）,AE＋RT组肥胖男性大学生MM明显增加（P<0.01）,WC明显降低（P<0.01）。运动12周后,AE组和AE＋RT组肥胖男性大学生HR、MSP、TCR和V较运动前明显降低（P<0.05或P<0.01）,SV和VDC明显增加（P<0.01）;AE组肥胖男性大学生运动前后MDP、CO和血清CRP水平均无明显改变（P>0.05）,而AE＋RT组肥胖男性大学生运动12周后MDP和血清CRP水平较运动前明显降低（P<0.01）,CO明显升高（P<0.01）。与AE组比较,AE＋RT组肥胖男性大学生运动12周后FM、BF%、HR、MSP、TCR和血清CRP水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,MM、SV和CO均明显升高（P<0.05或P<0.01）,WC、BMI、MDP、VDC和V差异无统计学意义（P>0.05）。结论： 12周AE和AE＋RT均可改善肥胖男性大学生的身体成分及心血管功能,且AE＋RT的效果优于单纯AE,但只有AE＋RT可降低血清CRP水平。     

蚓激酶对胃癌SGC7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：探讨蚓激酶（LBK）对胃癌SGC7901细胞的调控作用,并阐明其作用机制。方法：取对数生长期SGC7901细胞,将细胞分为对照组和2、4、8 U·mL^-1LBK组。采用MTT法检测不同时间段（24、48和72 h）各组SGC7901细胞增殖抑制率,采用细胞划痕实验检测各组SGC7901细胞体外迁移能力,采用流式细胞术检测各组SGC7901细胞凋亡率和不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测各组SGC7901细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,作用24、48和72h后不同剂量LBK组SGC7901细胞增殖抑制率明显升高（P<0.01）。细胞划痕实验,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞划痕距离明显增加（P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,G₁期和S期细胞百分率明显降低（P<0.01）,G₂期细胞百分率明显升高（P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,8U·mL^-1LBK组SGC7901细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bax和caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：LBK可抑制胃癌细胞株SGC7901增殖和迁移能力,且能够诱导细胞凋亡,其可能的机制是通过调节Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达水平来实现的。     

槐耳浸膏对嘌呤霉素氨基核苷所致体外小鼠肾小球足细胞损伤的保护作用及其机制

目的：探讨槐耳浸膏对嘌呤霉素氨基核苷（PAN）处理小鼠体外肾小球足细胞滤过率、活动力和细胞骨架重排的影响,阐明槐耳浸膏对足细胞损伤的保护作用及机制。方法：体外培养的足细胞随机分为对照组、模型组和实验组,其中模型组足细胞以50 mg·L^-1 PAN作用24 h,实验组足细胞经10 g·L^-1槐耳浸膏处理1 h后再换用含50 mg·L^-1 PAN的培养液作用24 h。采用两室弥散系统检测足细胞对异硫氰酸荧光素标记的白蛋白（FITC-BSA）的滤过率,细胞划痕实验检测足细胞划痕修复率,Transwell细胞迁移实验检测穿膜细胞数,激光共聚焦显微镜观察Invitrogen鬼笔环肽直接荧光标记足细胞纤维状肌动蛋白（F-actin）后细胞骨架的重排情况。结果：与对照组比较,模型组足细胞FITC-BSA滤过率明显升高（P<0.01）;与模型组比较,实验组足细胞FITC-BSA滤过率明显降低（P<0.01）。与对照组比较,模型组足细胞划痕修复率和穿膜细胞数均明显升高（P<0.05）;与模型组比较,实验组足细胞划痕修复率和穿膜细胞数均明显降低（P<0.05）。与对照组比较,模型组足细胞F-actin表达水平明显降低（P<0.01）,F-actin重排率明显升高（P<0.01）,足细胞骨架结构紊乱;与模型组比较,实验组足细胞F-actin表达水平明显升高（P<0.01）,F-actin重排率明显降低（P<0.01）,骨架重排情况明显缓解。结论：槐耳浸膏能够降低病理状态下的体外足细胞对牛血清白蛋白的滤过率,其机制可能与槐耳浸膏降低了足细胞活动力,进而改善体外足细胞骨架的重排有关。     

树突状细胞疫苗特异肿瘤多肽联合树突状细胞体外刺激淋巴细胞功能评估

目的:利用树突状细胞(dendritic cell,DC)作为抗原递呈载体,检测树突状细胞疫苗特异肿瘤多肽在体外对淋巴细胞是否有刺激增殖、促进细胞因子分泌及促进对肿瘤细胞的杀伤功能。方法:外周血树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)分离及培养采用贴壁法;采用CCK-8法检测淋巴细胞增殖功能;酶联免疫斑点法检测淋巴细胞的细胞因子分泌功能;CCK-8法检测淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。实验分为肿瘤多肽组(肽+DC-CIK)、DC-CIK组和单纯CIK组进行各项功能检测与比较。结果:在白介素-2(interleukin-2,IL-2)存在时, 3组细胞均增殖明显。肿瘤多肽组在第4天、第6天(第4天Z=-3.79, P<0.001;第6天Z=-2.95, P<0.01)时,450 nm光密度显著高于CIK组,在第4天时,450 nm光密度显著高于DC-CIK组(Z=-2.02, P<0.05)。培养体系中无IL-2时,各组淋巴细胞均增殖缓慢,各时间点光密度差异无统计学意义。肿瘤多肽刺激组多种细胞因子产生量高于单纯CIK组,其中白介素-4(interleukin-4,IL-4)(Z=-2.61, P<0.01)、巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulation factor, GM-CSF)(Z=-3.85, P<0.001)、干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)(Z=-3.56, P<0.001)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-ɑ, Z=-3.40, P<0.001)的分泌量与单纯CIK组相比,差异均有统计学意义。肿瘤多肽刺激组与DC-CIK组相比,除IL-4分泌量差异有统计学意义外(Z=-2.15, P<0.05), 其余各项细胞因子分泌量差异均无统计学意义。DC-CIK组与单纯CIK组相比,IFN-γ(Z=-2.44, P<0.05)、TNF-ɑ(Z=-2.26, P<0.05)和GM-CSF(Z=-3.73, P<0.001)分泌量差异有统计学意义。肿瘤多肽组与DC-CIK组、单纯CIK组在18 h与24 h的杀伤效率虽然差异无统计学意义,但有高于其他两组的趋势。结论:树突状细胞疫苗特异肿瘤多肽联合树突状细胞体外可提高CIK细胞的增殖活性,提高多个细胞因子的分泌量。     

大剂量维生素C通过减少糖酵解和蛋白质合成抑制乳腺癌细胞增殖

目的: 观察大剂量维生素C对乳腺癌细胞增殖及荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,并探索其中的机制。方法: 以乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453为体外研究对象,分别给予小（0.01 mmol/L）、中（0.10 mmol/L）、大（2.00 mmol/L）剂量的维生素C。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖;蛋白质印迹法检测葡萄糖转运蛋白1（Glut1）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达;乳酸脱氢酶比色法测定乳酸含量。同时,取10只6周龄雌性BALB/c裸鼠,采用皮下接种乳腺癌Bcap37细胞建立荷瘤小鼠移植瘤模型,取5只小鼠腹腔注射维生素C（4 g/kg）,观察肿瘤重量和小鼠体质量的变化。结果: 体外细胞学实验结果显示,与空白对照组比较,大剂量维生素C作用下Bcap37和MDA-MB-453细胞增殖受到抑制（均P < 0.01）,Glut1转运蛋白表达减少（均P < 0.05）,乳酸分泌量减少（均P < 0.01）,mTOR信号通路相关蛋白表达水平下调（均P < 0.05）。体内实验结果显示,与对照组比较,大剂量维生素C组肿瘤重量明显减小（P < 0.05）,但体质量增长无明显变化。结论: 大剂量维生素C可抑制乳腺癌细胞增殖,这一效果可能与大剂量维生素C抑制乳腺癌细胞能量摄取和下调mTOR信号通路有关。     

非布司他对高尿酸血症模型大鼠血清尿酸水平和肾组织中NLRP3蛋白表达水平的影响

目的：探讨非布司他对高尿酸血症模型大鼠血清尿酸水平和肾组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）蛋白表达水平的影响,并阐明其作用机制。方法：将45只大鼠随机分为对照组、高尿酸血症组和非布司他组,每组15只。高尿酸血症组和非布司他组大鼠采用氧嗪酸钾灌胃建立高尿酸血症模型,非布司他组大鼠每天给予7.2 mg·kg^-1非布司他,对照组大鼠每天给予等量生理盐水,共4周。HE染色观察各组大鼠肾组织病理形态表现。全自动生化仪测定各组大鼠血清尿酸、肌酐和尿素氮水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定各组大鼠血清白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18）水平,免疫组织化学法测定各组大鼠肾组织中凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和NLRP3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,高尿酸血症组大鼠尿量和饮水量升高（t=5.317,t=3.674,P<0.05）,体质量降低（t=6.374,P<0.05）,血清尿酸、肌酐和尿素氮水平升高（t=21.463,t=15.342,t=4.603,P<0.05）,血清IL-1β和IL-18水平升高（t=35.761,t=44.168,P<0.05）,肾组织中ASC和NLRP3蛋白表达水平升高（t=17.064,t=26.314,P<0.05）;与高尿酸血症组比较,非布司他组大鼠尿量和饮水量降低（t=4.027,t=2.976,P<0.05）,体质量升高（t=3.694,P<0.05）,血清尿酸、肌酐和尿素氮水平降低（t=13.064,t=7.461,t=3.528,P<0.05）,血清IL-1β和IL-18水平降低（t=24.162,t=17.314,P<0.05）,肾组织中ASC和NLRP3蛋白表达水平降低（t=8.061,t=11.057,P<0.05）。结论：非布司他可能通过抑制大鼠肾组织中NLRP3炎症小体的激活及其下游炎性因子水平发挥对高尿酸血症模型大鼠的肾脏保护作用。     

JNK酶活性下调对人前列腺癌、肝细胞癌和乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的：通过c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125和脂质纳米粒子包裹的JNK-siRNA 2种方法在体内和体外分别对JNK基因的表达进行干扰,探讨下调JNK酶活性在肿瘤治疗中的作用。方法：体外实验,将实验分为siRNA组和抑制剂SP600125组。在siRNA组中,使用JNK-siRNA及其对照NC-siRNA分别转染人前列腺癌细胞（PC细胞）、人肝细胞癌细胞（SMMC-7721细胞）和人乳腺癌细胞（MCF-7细胞）;在抑制剂SP600125组中将SP600125导入肝细胞癌细胞中,采用Western blotting法检测转染JNK-siRNA和SP600125后人前列腺癌、肝细胞癌和乳腺癌细胞中JNK或磷酸化JNK（p-JNK）蛋白表达水平;采用WST-1增殖实验检测各组肿瘤细胞的细胞活力。体内实验,通过皮下注射SMMC-7721细胞建立小鼠皮下肝细胞癌移植瘤动物模型,将8只小鼠饲养至肿瘤生长至3 mm×3 mm,再将模型小鼠随机分为抑制剂SP600125组和阴性对照组,JNK-siRNA组和NC-siRNA对照组,共4组,各组小鼠分别瘤内注射5 nmol SP600125、阴性对照溶液、脂质纳米粒子包裹的JNK-siRNA和NC-siRNA阴性对照,观察各组小鼠肿瘤体积;采用免疫组织化学染色检测肿瘤组织中JNK或p-JNK蛋白表达。结果：体外实验,与NC-siRNA对照组比较,JNK-siRNA组人前列腺癌、肝细胞癌和乳腺癌细胞中JNK蛋白表达水平降低（P<0.01）,抑制剂SP600125组肝细胞癌细胞中p-JNK蛋白表达水平较其阴性对照组明显降低（P<0.01）。体内实验,以肝细胞癌细胞为例,抑制剂SP600125组小鼠肿瘤体积较阴性对照组明显减小,而JNK-siRNA组与其阴性对照组比较肿瘤体积变化不明显。免疫组织化学染色,抑制剂SP600125组小鼠移植瘤组织中p-JNK蛋白表达量和JNK-siRNA组小鼠移植瘤组织中JNK蛋白表达量较各自阴性对照组降低（P<0.01）。结论：在体外和体内实验中下调JNK酶活性在体内和体外均能降低JNK基因的表达水平,进而抑制肿瘤细胞的生长。     

梅花草提取物对幽门螺杆菌小鼠胃黏膜定植的影响及其机制

目的 探讨梅花草提取物对幽门螺杆菌（Hp）根除和胃黏膜的影响,阐明其在体内外抑菌消炎的机制。 方法 6周龄雄性昆明小鼠随机分为空白对照组、生理盐水组、Hp组、三联组、四联组、梅花草组、三联+梅花草组和四联+梅花草组。琼脂稀释法检测梅花草对Hp SS1标准株的最小抑菌浓度（MIC）,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测Hp定植黏附相关基因 mRNA表达水平。动物实验评估不同治疗方式对Hp的根除率,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清中白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素8（IL-8）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,快速尿素酶试验（RUT）检测各组小鼠胃组织中Hp感染率,HE染色和透射电镜观察小鼠胃组织病理形态表现和超微结构。 结果 梅花草的MIC为10 g·L^－1。RT-qPCR法检测,与Hp组比较,梅花草组Hp定植黏膜相关基因Bab A、Cag A和Vac A mRNA表达水平均降低（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学检测,Hp组小鼠胃黏膜部分糜烂和溃疡,出血和充血明显,Hp感染阳性;梅花草组小鼠胃黏膜出血和溃疡明显改善,胃黏膜Hp感染呈阴性。RUT实验检测,与Hp组比较,梅花草组小鼠Hp感染率降低（P<0.05）,三联组和四联组小鼠Hp感染率降低（P<0.05）;与梅花草组比较,三联组和四联组小鼠Hp根除率差异无统计学意义（P>0.05）;与三联或四联组比较,三联+梅花草组和四联+梅花草组小鼠Hp根除率升高（P<0.01）。三联+梅花草组和四联+梅花草组小鼠胃黏膜组织得到修复,胃黏膜上皮细胞的线粒体亚细胞器和微绒毛结构完整。与Hp组比较,三联组、四联组、梅花草组、三联+梅花草组和四联+梅花草组小鼠血清中IL-2水平均升高（P<0.05）,IL-8和TNF-α 水平均降低（P<0.05或P<0.01）。 结论 梅花草可以有效根除Hp和保护胃黏膜,其作用机制与降低Hp感染后IL-2、IL-8和TNF-α水平及保护胃黏膜亚细胞结构完整性有关。     

中药靛玉红衍生物E804对肺癌A549细胞增殖、凋亡和分化的影响及其作用机制

目的 探讨不同浓度靛玉红衍生物E804对非小细胞肺癌（ NSCLC）A549细胞增殖、凋亡和分化的影响,阐明其可能的作用机制。 方法 体外培养A549细胞,分为对照组（0 μmol·L^－1 E804）和不同浓度（2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1）E804组。采用MTT法检测各组细胞增殖率,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力,软琼脂克隆实验观察各组细胞分化及克隆形成能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白和Janus 激酶1（JAK1）/信号转导与转录激因活子3（STAT3）信号通路相关蛋白表达水平。 结果 MTT法,与对照组比较,2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1 E804组细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）,并呈时间和浓度依赖性。细胞划痕和软琼脂克隆法,与对照组比较,2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1 E804组细胞迁移距离和克隆形成数减少（P<0.05或P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1 E804组细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,2.5、5.0和10.0 μmol·L^－1 E804组细胞中B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、磷酸化JAK1（p-JAK1）和磷酸化STAT3（p-STAT3）蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）和裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（cleaved caspase-9）蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。 结论 E804可抑制A549细胞体外增殖、迁移和分化,并诱导其凋亡,其机制可能与下调JAK1/STAT3信号通路相关蛋白表达有关。