靶向人NHE-1 RNAi腺病毒表达载体的构建及细胞内酸化模型的建立

目的构建靶向人钠氢交换蛋白-1（NHE-1）RNA干扰（RNAi）腺病毒表达载体,感染SH-SY5Y细胞,建立细胞内酸化模型,为进一步研究细胞内pH值变化与散发性阿尔茨海默病间的关系奠定基础。方法利用基因重组技术构建4个含NHE-1前体微小RNA（miRNA）的重组干扰质粒pcDNA^TM6.2-GW/miR和阴性对照质粒pcDNA6^TM6.2-GW/neg-miR,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测NHE-1 mRNA表达变化,筛选最佳干扰靶序列;BP和LR重组系统获得腺病毒干扰质粒pAd-miR-NHE-1,经包装、纯化后检测腺病毒滴度;感染复数（MOI）值梯度试验确定靶向人NHE-1 RNAi腺病毒感染SH-SY5Y细胞最佳MOI值,以最佳条件感染SH-SY5Y细胞,荧光探针法检测不同处理组细胞内pH值。结果聚合酶链反应（PCR）提示最佳靶向人NHE-1 RNAi病毒表达载体构建成功,且能有效抑制NHE-1 mRNA表达;靶向人NHE-1 RNAi腺病毒感染SH-SY5Y细胞最佳MOI值为160。当最佳MOI值为160时,NHE-1 miRNA腺病毒感染24、48和72 h后SH-SY5Y细胞内pH值分别为5.97±0.03、5.98±0.02和5.98±0.02;空载体对照组为6.05±0.04、6.04±0.07和6.03±0.05;空白对照组为6.03±0.06、6.05±0.04和6.03±0.04。不同测量时间点,SH-SY5Y细胞内pH值均显著低于空载体对照组和空白对照组,差异具有统计学意义（24 h:p=0.002,0.015;48 h:p=0.030,0.012;72 h:p=0.018,0.010）;但感染RNAi腺病毒后不同测量时间点（24、48和72 h）SH-SY5Y细胞内pH值差异无统计学意义（p=0.762）。结论最佳靶向人NHE-1 RNAi腺病毒表达载体及细胞内酸化模型的成功建立,可为探索细胞内酸碱平衡与β-淀粉样蛋白产生之间的关系提供一种有效工具。     

消幻汤含药血清对人神经母细胞瘤细胞增殖及形态的影响

目的初步探讨消幻汤含药血清对人神经母细胞瘤细胞SH—SYSY的增殖及形态的影响。方法通过连续7d给家兔灌胃给药,制备消幻汤含药兔血清、利培酮含药免血清及空白兔血清。将上述血清作用于SH—sY5Y细胞24～72h,通过倒置显微镜观察舍药血清干预48h的SH—SY5Y细胞的形态,并且每24小时采用MTT法检测SH～SY5Y细胞的增殖情况。结果消幻汤含药血清处理48h的SH—SY5Y细胞突起较长,细胞间接触紧密,并且伸出伪足,虽表现为增殖旺盛,但消幻汤含药血清对SH—SY5Y细胞的增殖与空白血清相比,差异无统计学意义（P〉0．05）,而利培酮含药血清则可显著增加sH—SY5Y的细胞数量,呈现对数增殖趋势,与其他各组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论消幻汤含药血清对SH—SY5Y细胞的正常形态有促进作用,而对SH—SY5Y细胞的正常增殖无显著干预作用,与利培酮舍药血清作用不同。     

帕金森病脑内移植基因工程细胞系的构建

目的 为进行帕金森病（PD）的转基因细胞治疗，在实验室构建人类酪氨酸羟化酶（hTH）基因表达工程细胞系。方法 重组质粒pcDNA3/hTH经亚克隆、纯化后，用脂质体法转染到人类神经母细胞瘤细胞系SH－SY5Y细胞内，经G418筛选、克隆，分离培养经免疫细胞化学分析。结果 转染pcDNA3/hTH的SH－SY5Y细胞免疫细胞化学染色明显，与仅呈非特异性染色的对照组SH－SY5Y细胞形成鲜明的对比。结论 转染pcDNA3/hTH的SH－SY5Y细胞能够有效地表达hTH，在PD治疗的非人类灵长目实验中具有潜在的应用价值。     

突变型 TDP-43（A315T）蛋白诱导S H-SY5Y 细胞凋亡的机制研究

目的：探讨TDP‐43（A315T ）突变蛋白诱导SH‐SY5Y细胞凋亡的机制。方法采用真核细胞转染技术将Flag‐TDP‐43（w t）及Flag‐TDP‐43（A315T ）质粒转入SH‐SY5Y细胞,通过Western blot检测 TDP‐43截短型表达及自噬水平的变化;PI／Annexin‐V‐FITC检测细胞凋亡率;单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverin ,MDC）染色检测细胞自噬空泡的变化。结果与转染Flag‐TDP‐43（wt）组相比,过表达Flag‐TDP‐43（A315T）细胞截短型片段Flag‐TDP‐35及Flag‐TDP‐25表达明显上调,下调细胞内源性Beclin 1水平及LC3Ⅱ／LC3Ⅰ的比值降低。与转染Flag‐TDP‐43（wt）组相比,过表达Flag‐TDP‐43（A315T）诱导SH‐SY5Y细胞自噬性小泡聚集明显减少。与转染Flag‐TDP‐43（wt）组相比,过表达Flag‐TDP‐43（A315T）后SH‐SY5Y细胞凋亡率增加。结论 TDP‐43（A315T ）突变蛋白可通过增加其截短型表达及抑制细胞巨自噬水平诱导SH‐SY5Y细胞凋亡。     

α-突触核蛋白诱导的人神经母细胞瘤细胞凋亡与RhoGTPas-es信号通路的活化相关

目的：探讨α‐突触核蛋白诱导的人神经母细胞瘤细胞凋亡的分子机制。方法构建α‐Syn寡聚体诱导SH‐SY5Y细胞凋亡模型,流式细胞技术检测SH‐SY5Y细胞凋亡;免疫荧光检测SH‐SY5Y细胞内α‐Syn阳性包涵体;Pulldown检测SH‐SY5Y细胞Rac1、Cdc42、RhoA活性。结果与对照组相比,α‐Syn寡聚体诱导SH‐SY5Y细胞凋亡率显著增加,细胞内α‐Syn阳性包涵体数量增加,Rac1、Cdc42、RhoA活性增高。结论α‐突触核蛋白诱导的人神经母细胞瘤细胞凋亡与RhoGTPases信号通路的活化相关。     

腺病毒载体介导的RNAi对胶质瘤U251细胞肝细胞生长因子受体表达的影响

目的探讨腺病毒载体介导的RNA干扰技术对胶质瘤细胞肝细胞生长因子（HGF）受体（c—Met）的表达和细胞凋亡的影响。方法用PCR法获得人U6启动子及带有c—Met反向互补靶序列的片段HU6shmet：利用腺病毒载体将其传递至U251细胞；分别采用RT-PCR和Western blot方法检测U251细胞的c—Met mRNA和蛋白的表达．Annexin—V—PI双染法流式细胞术检测细胞的凋亡状况。结果获得了带有人U6启动子及c—Met反向互补靶序列的重组腺病毒载体rAdUshmet1和rAdUshmet2。转导了rAdUshmet1和rAdUshmet2的U251细胞的c—Met mRNA和蛋白相对表达量较未转导腺病毒及转导了rAdGFP和rAdU-sicon的U251细胞均有明显下降（P〈0．01），rAdUshmet1和rAdUshmet2转导的U251细胞凋亡率分别为（13．5±4．21％和（28．2±5．6）％，明显高于未转导腺病毒的及rAdGFP和rAdUsicon转导的U251细胞凋亡率（P〈0．05）。结论腺病毒载体rAdUshmet通过抑制HGF受体c—Met表达，能在一定程度上阻断HGF—c—Met信号通路，有可能成为对胶质瘤进行基因治疗的有效载体。     

小发夹RNA抑制Nogo基因表达促进脊髓损伤修复的实验研究

目的 利用RNA干涉（RNAi）技术使特定的基因（Nogo）沉默，探索脊髓损伤的治疗方法。方法 设计有小发夹结构的两条DNA序列，PCR扩增带有U6启动子的小发夹，腺病毒包装重组体，转染少突胶质细胞，采用Westernblot法分析Nogo-66的蛋白表达水平。结果成功地构建了靶向Nogo基因RNAi的带有U6启动子的小发夹重组体，Nogo-66蛋白表达水平明显下降。结论 靶向RNAi小发夹重组体经腺病毒包装后，成功转染少突胶质细胞并能有效抑制Nogo-66基因的表达。     

3-硝基丙酸多次化学预处理对多巴胺能神经元的保护作用

目的探讨3-硝基丙酸（3-NP）多次化学预处理对多巴胺能神经元的保护作用及可能机制。方法应用MPTP（30mg／kg）在C57BL小鼠上复制帕金森病模型，以3-NP（20mg／kg）行预处理，检测小鼠中脑黑质凋亡率和转录因子c-Jun的阳性细胞数量及c-Jun的蛋白水平；应用MPP^＋（0．25mmol／L）在SH—SY5Y细胞制作帕金森病模型，以3-NP（0．2mmol／L）进行预处理，并将携带显性突变体c—JuncDNA片段的真核表达载体质粒pcDNA3（HA）-Jun—dn转染SH—SY5Y细胞，检测各组细胞的c-Jun表达水平及凋亡率。结果小鼠中脑黑质凋亡率：MPTP组较对照组明显升高（P〈0.01），3-NP单次、多次预处理后均明显降低（P〈0．05，P〈0．01）；c—Jun阳性细胞数：MPTP组较对照组明显增加（P〈0．05），3-NP单次预处理组与MPTP组比较无明显差异，3-NP多次预处理后明显降低（P〈0．05）；c—Jun蛋白水平：与其阳性细胞数变化一致；细胞凋亡率：MPP^＋组较对照组明显升高，3-NP单次、多次预处理组细胞凋亡率明显降低（P〈0.05，P〈0．01）；c-Jun蛋白水平变化与中脑黑质一致；经pcDNA3（HA）-Jundn转染的细胞，其c-Jun的表达较未转染细胞明显降低（P〈0．01），其凋亡率也下降（P〈0．01）。结论3-NP单次、多次预处理对多巴胺能神经元确有保护作用，多次预处理保护效果更强，其机制与抑制转录因子c-Jun的表达，降低其蛋白水平有关。     

CT-1对脐血间充质干细胞神经分化作用

目的探讨心肌营养素1(CT-1)在诱导脐血间充质干细胞(hUCB-MSCs)向神经细胞分化中的作用。方法培养hUCB-MSCs,流式细胞术检测表面标志物CD34、CD29、CD44及CD105;将携带CT-1的腺病毒(Adv-CT-1)感染hUCB-MSCs,在不同时间点用免疫荧光染色检测CT-1表达率,摸索最佳感染复数(MOI);将细胞分为4组:(1)对照组;(2)神经诱导剂组(NIM);(3) CT-1组(Adv-EGFP-CT-1+NIM);(4)空病毒组(Adv-EGFP+NIM)。于6 h和4 d检测各组神经相关蛋白标志物(nestin、NeuN、GFAP)表达。结果 hUCB-MSCs高表达CD29、CD44、CD105,不表达CD34; MOI最佳转染复数为100PFU/细胞。诱导后6 h,CT-1组呈现类神经细胞样形态改变,Nestin阳性率最高(86. 82%±4. 29%),与其他3组相比,差异有统计学意义(P <0. 05);至4 d时,各组Nestin表达明显减少;诱导后6 h,CT-1组NeuN、GFAP均有少量表达(14. 26%±2. 20%、16. 96%±4. 41%),随后逐渐升高,4 d时阳性率分别达(48. 33%±2. 53%)、(65. 83%±5. 17%); CT-1组阳性率均高于其他各组(P <0. 05)。结论CT-1可促进hUCB-MSCs向神经细胞分化。     

携小鼠全长雌激素受体a基因腺病毒载体感染小鼠原代神经细胞：最佳感染复数选择

目的：用小鼠雌激素受体α（estrogen receptor α,Erα）重组腺病毒感染神经细胞,为研究Erα在神经系统发育中的作用及与一些神经系统疾病的关系奠定基础。 方法：无血清培养C57BL/6小鼠神经细胞,免疫组化方法鉴定神经元的纯度。Erα重组腺病毒感染原代培养的神经细胞,流式细胞仪检测细胞感染率及凋亡率用于判断最佳感染复数（multiplicity of infection, MOI）。实时定量PCR和 western blot分别检测受感染的神经细胞中ErαmRNA和蛋白的表达水平。 结果：成功培养了原代神经细胞,神经元纯度达90%以上。MOI=100可作为Erα重组腺病毒感染神经细胞的理想滴度,其转染效率为84.42±5.47％,凋亡率为3.62±0.72％。受感染的神经细胞中ErαmRNA及蛋白表达增高。 结论：MOI为100的Erα重组腺病毒能成功感染神经细胞并上调Erα mRNA和蛋白表达。     

通心络对体外培养SH-SY5Y细胞Aβ25-35毒性损伤的保护作用

目的 探讨通心络对体外培养SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤的保护作用。方法采用细胞培养法，以神经母细胞瘤SH～SY5Y细胞系为材料制备Aβ25-35损伤的离体细胞损伤模型。采用细胞形态学观察细胞形态及以MTT法测定细胞存活率。结果 不同浓度通心络作用不同时间其MTT代谢率均高于损伤对照组（P〈0．01），高、中浓度通心络治疗组均高于低浓度治疗组（P〈0．05），而高、中浓度治疗组间差异无统计学意义；相同浓度通心络作用不同时间其MTT代谢率相比较，36、24h组优于12h组（P〈0．05），而24h与36h组间比较差异无统计学意义。结论 通心络可促进神经细胞生存，具有神经细胞保护作用。     

缺氧诱导因子-1a在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达

目的观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在大鼠脊髓缺血再灌注损伤（SCII）中的表达变化及其意义。方法制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,分别于再灌注后8h、12h、24h,3d和5d取腰骶段的脊髓,以假手术组大鼠相同阶段的脊髓为对照,采用Westernblot法和免疫组织化学检测伤后脊髓组织中HIF-1α的表达变化。结果再灌注8h左右HIF-1α在整个脊髓灰质开始表达上调,在24h达峰值,在伤后3d表达回落,5d显著减少,灰度值在8h、12h、24h,3d和5d不同时相,分别为（211．39±5．58）μm2,（184．53±6．56）μm2,（167．39±5．76）μm2,（198．44±3．98）μm2和（228．39±2．87）μm2,分别与假手术组比较差异有显著性意义（P〈0．05）。HIF-1a在灰质中的表达以中央管周围和前角、后角最为显著。再灌注24h和3dHIF-1a在脊髓白质出现弱的表达,灰度值分别为（238．154-6．87）μm2和（236．87±7．41）μm2,分别与假手术组比较差异有显著性意义（P〈0．05）。但在白质后索,HIF-1a的表达相对较强。HIF-1α在灰质中主要定位于神经元和星形胶质细胞,在白质中主要定位于神经胶质细胞。结论脊髓缺血再灌注损伤后,HIF-1α呈现时序性的表达变化,这可能是脊髓缺血再灌注损伤的重要适应性调节机制之一。     

AQP-1在星形细胞瘤及瘤周水肿组织中的表达及其意义

目的 探讨人星形细胞瘤及瘤周水肿组织中水通道蛋白-1（AQP—1）的表达及其对瘤周水肿和肿瘤浸润性生长的影响。方法 采用免疫组化SABC法，分析30例星形细胞瘤和瘤周水肿组织中AQP-1的表达。根据MRI结果，采用“多田公式”计算水肿指数（EI）。并以EI评价肿瘤性水肿的程度。结果 AQP—1在低（Ⅰ-Ⅱ级）、高级别（Ⅲ-Ⅳ级）星形细胞瘤中的表达积分光密度值分别为2．76±0．13和6．73±0．18。在对应瘤周水肿组织中分别为4．52±0．08和8．58±0．27，而在正常对照组中几乎无AQP—1表达，三组相较，差异显著（P〈0．05）。EI值在低、高级别组分别为1．59±0．40、3．96±0．85，两组相较，差异显著（P〈0．01）。星形细胞瘤、瘤周水肿组织中AQP-1的表达和肿瘤的EI值均呈正相关（P〈0．01）。结论 AQP—1在星形细胞瘤的侵袭性生长和肿瘤性水肿的发生中可能起重要作用。     

血红素加氧酶-1基因转染对神经元损伤的保护作用

目的观察腺病毒介导的血红素加氧酶-1（HO—1）基因转染大鼠后对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法雄性SD大鼠随机分为4组：假手术对照组（SH）、生理盐水组（V）、空载体组（Ad）和Ad—HO-1转染组（HO）。后三组在缺血前3d于右侧脑室部分别注射20μl生理盐水、含1μl空载体腺病毒（1．0×10^10plaque-forming unit／ml,PFU／ml）的生理盐水或含1μl重组HO-1腺病毒（1．0×10^10PFU／ml）的生理盐水,连续注射3d后,采用右侧大脑中动脉栓塞法（MCAO）建立脑缺血再灌注模型。每组大鼠测定神经功能后,处死大鼠并取全脑标本,测定右脑梗死体积及细胞凋亡指标,荧光显微镜下观察脑组织荧光蛋白的表达情况,Western blot检测脑组织HO-1的表达。结果HO组中HO-1表达量明显高于Ad组和V组,Ad组和HO组可见有荧光蛋白表达,转染率为34．5％±3．4％。HO组神经功能显著优于Ad组和V组（P〈0．001）。与SH组比较,V组、Ad组脑梗死体积、神经细胞凋亡明显升高。与V组及Ad组比较,HO组脑梗死体积显著减小（P〈0．01）、神经元凋亡显著减少（P〈0．01）。结论腺病毒携带的HO-1基因能有效的转染脑组织,并在脑内稳定表达;HO-1基因转染显著减轻脑缺血再灌注后神经细胞损伤。     

细胞内pH降低对β分泌酶和γ-分泌酶的影响研究

目的研究细胞内pH值下降的情况下,β分泌酶和早老素-1的表达及活性的变化。方法培养人源性神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞,用RNA干扰技术和无血清培养分别制造细胞内酸化模型;实验分成4组,即正常细胞组、NHE-1基因敲低组、阴性对照组、无血清培养组。运用荧光分光光度计测定各组细胞内pH值,并通过Real-Time PCR和Western Blotting分别检测β分泌酶和早老素-1 mRNA及蛋白的相对表达量,通过ELISA检测β分泌酶和早老素-1的活性。结果 NHE-1基因敲低组及无血清培养组较正常细胞内pH值降低(P0.05),阴性对照组细胞内pH值无明显变化;与正常、阴性对照组相比,NHE-1基因敲低组β分泌酶mRNA表达为5.65±0.33,蛋白表达为0.37±0.030;早老素-1 mRNA表达1.75±0.04,蛋白表达分别为0.70±0.01,无血清培养组β分泌酶mRNA表达为2.40±0.55,蛋白表达为0.32±0.031;早老素-1 mRNA表达1.39±0.03,蛋白表达分别为0.68±0.08,其表达及活性均明显增强(P0.05);阴性对照组细胞与正常细胞比较,β分泌酶和早老素-1 mRNA和蛋白表达及活性均无明显变化(P0.05)。结论细胞内pH降低能够增强β分泌酶的表达和活性;因早老素-1被认为是γ-分泌酶的主要成分和活性中心,因此推测细胞内pH降低也能够增强γ-分泌酶的表达和活性,从而影响APP的剪切,增加Aβ生成。     

铁离子促进过量多巴胺引起SH-SY5Y细胞儿茶酚异喹啉物质生成和氧化损伤

目的帕金森氏病（Pakinson’s disease,PD）中多巴胺能神经元选择性缺失与胞内铁水平升高有密切关系,提示铁可能通过参与氧化应激在PD发病机制中起重要作用。本研究使用一定浓度的Fe^2＋和多巴胺诱导人多巴胺能成神经细胞瘤SH—SY5Y细胞产生氧化应激状态,并且检测胞内是否有多巴胺衍生类的神经内毒素物质产生。方法多巴胺添加不同浓度的Fe^2＋诱导SH—SY5Y细胞,24h后用乳酸脱氢酶法、水杨酸捕获法、硫代巴比妥酸法、Hoechst33258染色法和带有电化学检测器的高效液相色谱仪分别检测细胞存活率、羟自由基生成量、丙二醛含量、细胞凋亡和儿茶酚异喹啉物质的生成情况。结果（1）150μmol／L多巴胺添加40或80μmol／LFe^2＋后,胞内羟自由基和丙二醛含量较对照组显著增加：（2）单独多巴胺以及多巴胺加40或80μmol／LFe^2＋诱导后细胞发生凋亡：（3）在诱导后的胞内检测到Salsolinol和N-methylsalsolinol的含量高于对照组。结论一定浓度的Fe^2＋和多巴胺诱导SH—SY5Y细胞可模拟帕金森氏病人黑质区多巴胺能神经元所受到的氧化应激状态,胞内检测到的儿茶酚异喹啉物质,如去甲猪毛菜碱和N-methyl—salsolinol,可能作为一类潜在的神经毒性物质与帕金森氏病的发病有关。     

干扰长单一序列区83基因对人巨细胞病毒感染后人脑血管平滑肌促血管生成素及血管内皮生长因子表达的影响

目的 长单一序列区（unique l ong r egion 8 3,UL83）基因是人巨细胞病毒（human c ytomegalovirus, HCMV）感染再激活标志。本研究拟探索UL83对HCMV感染后人脑血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）中不稳定斑块破裂相关因子,如促血管生成素（angiopoietin,Ang）以及血管内皮生 长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的影响。 方法 ①采用流式细胞仪确定amidite荧光素（fluorescein amidite,FAM）标记的小干扰核糖核酸（small interfering ribonucleic acid,siRNA）通过脂质体转入人脑VSMC的转染效率;②将3条化学合成siRNA通 过脂质体转染入已感染HCMV AD169株（MOI＝10）的人脑VSMC当中,结合空白组、接毒组及接毒无效 干扰组筛选抑制UL83基因最强siRNA;③分别检测HCMV AD169株（MOI＝10）感染人脑VSMC后0 h、6 h、 12 h、24 h、48 h以及72 h Ang-1、Ang-2及VEGF-A信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）及蛋 白表达变化;④分别检测空白组、接毒高效干扰组、接毒无效干扰组及接毒组在感染48 h后Ang-1、 Ang-2及VEGF-A的mRNA及感染72 h后上述蛋白表达情况。 结果 转染6 h后,95.59%人脑VSMC转染了FAM标记siRNA。感染HCMV AD169株（MOI＝10）的人脑 VSMC在转染siRNA 48 h后,siRNA转染组与接毒组相比,UL83 mRNA相对表达量最多下降78.7%;转染 si RNA72 h后,UL83编码的pp65蛋白相对表达量最多下降81.3%。人脑VSMC感染HCMV AD169株（MOI＝ 10）0 h、6 h、12 h、24 h、48 h以及72 h时后,Ang-1 mRNA及蛋白相对表达量逐渐下降（P <0.01）,Ang-2 及VEGF-A mRNA及蛋白相对表达量则逐渐增加（P <0.01）。而通过转染高效siRNA抑制HCMV AD169株 UL83基因,使得Ang-1表达下降,Ang-2和VEGF-A表达增加均被抑制。 结论 H CMV AD169株具有同时促进人脑VSMC中Ang-1表达降低,Ang-2及VEGF-A表达增加功能。而通 过siRNA抑制HCMV AD169株UL83基因表达能够阻止上述变化。提示HCMV可能通过UL83基因造成靶细 胞产生促血管新生微环境。     

认知行为治疗联合药物治疗与单纯药物治疗强迫障碍患者的随机对照研究北大核心CSCD

目的比较单用SSRIs与SSRIs合并认知行为治疗（cognitivebehavioraltherapy,CBT）强迫障碍患者的临床疗效。方法选取符合DSM—IV中强迫障碍诊断标准的门诊患者共80例,采用随机数字表法分为单用SSRIs治疗组f简称药物治疗组,n=40）和SSRIs合并CBT组（简称联合治疗组,n=401,分别于0、4、8、12、24、36、48周末采用Y—BOCS、HAMA等对患者进行盲法评定比较药物治疗和联合治疗的临床治疗效果,采用Logistic回归分析治疗效果的影响因素。结果4周末联合治疗组[（20．0±6．4）分与（23．6±6．0）分]及药物治疗组[（20．8±7．0）分与（23．7±6．3）分]Y．BOCS总分均低于基线（t=4．05,P=0．000;t=3．46,P=0．001）。2组患者Y—BOCS总分（F=3．986～7．104,P=0．009-0．049）和Y—BOCS强迫行为因子分（辟5．370～5．895,P=O．017～0．023）自8周末开始至48周末组问差异有统计学意义;2组患者Y—BOCS强迫思维因子分在48周末差异有统计学意义（F=5．523,P=0．021）。Logistic回归分析显示,联合CBT、Y-BOCS总分4周末治疗是否有效对患者48周末的疗效有正性预测作用（OR=8．61、9．25,均P〈0．05）。结论药物联合CBT能有效缓解强迫障碍患者症状,且优于单纯药物治疗,尤其对强迫行为的改善更为突出,且接受CBT、4周末起效的患者在后续的治疗中能获得更好地改善。     

IFN-γ增强细胞毒类药物对神经母细胞瘤的诱导凋亡作用

目的探讨细胞毒类药物对神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y（SY5Y）细胞的作用及γ-干扰素（IFN-γ）对其抗瘤活性的影响。方法应用逆转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测IFN-γ作用前后半胱-天冬氨酸蛋白酶8（Caspase8）mRNA的表达;应用流式细胞仪检测细胞毒类药物[阿霉素、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）]及IFN-γ联合细胞毒类药物对SY5Y细胞的诱导凋亡作用;应用比色法测定Caspase8相对活性。结果SY5Y细胞不表达Caspase8,经IFN-γ作用后Caspase8mRNA表达明显增加。SY5Y细胞对阿霉素相对敏感,对TNF-α和TRAIL不敏感;经IFN-γ预处理后,表达Caspase8的SY5Y细胞对三种细胞毒类药物的诱导凋亡作用敏感并伴随Caspase8活性增高,此作用可被Caspase8抑制剂所阻断。结论IFN-γ通过上调Caspase8表达而增强细胞毒类药物对神经母细胞瘤细胞的诱导凋亡作用。