Effect of different dietary fatty acids on expression of sterol-regulatory elementary binding protein-1c and lipid metabolism in hepatic cells

目的 探讨不同膳食脂肪酸构成对肝细胞脂代谢及固醇调节元件结合蛋白-lc( sterol-regulatory elementary binding protein-1c,SREBP-1c)表达的影响.方法 以HepG2肝细胞为研究对象,分为空白对照组、二十碳五烯酸(EPA)组、棕榈酸(PA)组、EPA和亚油酸(LA)1:1混合组、PA和油酸(OA) 1:1混合组,EPA、PA单独处理组终浓度为150 μmol/L,混合处理组各组分浓度为75 μmol/L,总浓度为150 μmol/L,处理细胞24 h.采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,测定甘油三酯(TG)含量来评价细胞内脂质含量;采用RT-PCR、Western blot法检测SREBP-1c mRNA及蛋白的表达.结果 PA组、PA和OA 1:1混合组SREBP-1c mRNA及蛋白的表达上调,EPA和LA 1:1混合组、EPA组SREBP-1c mRNA及蛋白的表达下调,与对照组相比差异显著(P＜0.05).与对照组相比,EPA和LA 1:1混合组、EPA组肝细胞内TG含量显著减少(P＜0.05);PA和OA 1:1混合组、PA组肝细胞内TG含量显著增加(P＜0.05).结论 PA、OA上调肝细胞SREBP-1 c的表达并促进细胞内TG的合成,可能促进肝细胞脂肪变性;而EPA、LA下调肝细胞SREBP-1c的表达并显著降低肝细胞内TG含量,减轻肝细胞脂肪变性.     

TNF-α对脂肪变性肝细胞SREBP-1c的表达及甘油三酯含量的影响

目的 探讨TNF-α对油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型固醇调节元件结合蛋白1c(sterol-regulatory elementbinding protein-1c,SREBP-1c)mRNA的表达及甘油三酯(triglyceride,TG)含量的影响.方法 以正常肝细胞株L02进行细胞培养,用油酸诱导建立肝细胞脂肪变性模型,在对照组及模型组中加入TNF-α与抗TNF-α抗体分组进行培养,采用RT-PCR法检测SREBP-1c及脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)mRNA的表达;采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,并检测细胞内TG含量.结果 TNF-α作用组SREBP-1c mRNA的表达上调,与对照组相比差异显著(P＜0.01);而使用抗TNF-α抗体作用后表达下调.实验显示,TNF-α作用组较对照组脂变细胞数量增多,细胞内TG含量显著增加(P＜0.01),而使用抗TNF-α抗体作用后TNF-α作用组脂变细胞数量减少,细胞内TG含量显著下降(P＜0.01).结论 TNF-α上调L02肝细胞SREBP-1c mRNA的表达促进细胞内TG的合成,可能参与了肝细胞的脂代谢及脂肪变性的形成.     

脂肪变性肝细胞胆固醇代谢及合成相关基因的表达

目的探讨脂肪变性肝细胞胆固醇代谢及合成相关基因mRNA表达的变化。方法以软脂酸诱导正常成人肝细胞株L-02脂肪变性,建立肝细胞脂肪变性模型,分别于实验第3、6天收集细胞,同期设不含软脂酸培养的细胞作对照。试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,RT-PCR法检测固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)及其靶基因羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)mRNA表达。结果软脂酸诱导第3天即可产生肝细胞脂肪变性,第6天脂肪变性加重。随造模时间延长,模型组细胞内TG、TC含量逐渐增多,SREBP-2、HMGCR、LDLR mRNA表达逐渐增强;第3天和第6天细胞内TG含量均显著高于对照组(P<0.05),第6天细胞内TC含量显著高于对照组(P<0.05);第3天和第6天HMGCR、LDLR mRNA表达显著高于对照组(P<0.05);第6天SREBP-2 mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。结论脂肪变性肝细胞内存在胆固醇积聚,其机制可能是胆固醇合成相关基因表达上调。     

脂肪变性肝细胞胆固醇代谢及合成相关基因的表达

目的 探讨脂肪变性肝细胞胆固醇代谢及合成相关基因mRNA表达的变化.方法 以软脂酸诱导正常成人肝细胞株L-02脂肪变性,建立肝细胞脂肪变性模型,分别于实验第3、6天收集细胞,同期设不含软脂酸培养的细胞作对照.试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,RT-PCR法检测固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)及其靶基因羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 (HMGCR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)mRNA表达.结果 软脂酸诱导第3天即可产生肝细胞脂肪变性,第6天脂肪变性加重.随造模时间延长,模型组细胞内TG、TC含量逐渐增多,SREBP-2、HMGCR、LDLR mRNA表达逐渐增强;第3天和第6天细胞内TG含量均显著高于对照组(P＜0.05),第6天细胞内TC含量显著高于对照组(P＜0.05);第3天和第6天HMGCR、LDLR mRNA表达显著高于对照组(P＜0.05);第6天SREBP-2 mRNA表达显著高于对照组(P＜0.05).结论 脂肪变性肝细胞内存在胆固醇积聚,其机制可能是胆固醇合成相关基因表达上调.     

黄芩苷对高脂诱导HepG2细胞脂肪沉积及SIRT1相关因子表达的影响

目的   研究黄芩苷(Baicalin, BA)对游离脂肪酸(FFA)诱导HepG2细胞脂肪沉积的影响及机制研究。方法   选用0.75 mmol/L的FFA体外诱导HepG2细胞24 h,建立体外脂肪沉积模型。将细胞分为正常组、模型组、黄芩苷低、中、高剂量组。利用油红O染色及GPO-PAP酶法检测各组细胞内甘油三酯(TG)含量的变化,ELISA法检测各组细胞上清液炎症因子TNF-α、IL-6分泌量。Western Blot检测各组细胞内沉默信息调节因子1(SIRT1)、碳水化合物应答元件结合蛋白(ChREBP)、胆固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)以及脂肪酸合成酶(FAS)的蛋白含量。结果   FFA诱导的HepG2细胞内脂质积聚明显,细胞内TG含量显著上升;药物干预后,3个药物组细胞内脂滴较模型组均有减少,且呈药物浓度依赖性;细胞内TG含量呈下降趋势,其中中剂量和高剂量药物组与模型组相比,差异具有统计学意义(P < 0.05);Western Blot检测结果显示,与空白组相比,模型组SIRT1蛋白表达显著降低,SREBP-1c以及FAS的蛋白表达显著上升,与模型组相比,中、高剂量黄芩苷组细胞SIRT1蛋白表达显著上升,SREBP-1c、ChREBP以及FAS蛋白表达显著下降(P < 0.05)。结论   黄芩苷可以改善FFA诱导的HepG2细胞的脂肪沉积,减低细胞内TG的含量,其机制可能与调节SIRT1/SREBP-1c通路相关。      

滋阴益气活血解毒中药含药血清对脂肪变性HepG2细胞SREBP-1c和FAS表达的影响

目的 探讨滋阴益气活血解毒中药含药血清对脂肪酸孵育HepG2细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)和脂肪酸合成酶(FAS)表达的影响.方法 HepG2细胞分为对照组、模型组、15％含药血清组;对照组和模型组用正常大鼠血清DMEM培养,15％含药血清组用15％含药血清DMEM培养,模型组、15％含药血清组同时加0.5 mmol/L混合脂肪酸(油酸∶棕榈酸=2∶1);油红O染色法检测细胞内脂质沉积,RT-PCR检测HepG2细胞SREBP-1c和FAS mRNA表达,免疫组化检测HepG2细胞SREBP-1c和FAS蛋白表达.结果 15％含药血清能减少模型细胞脂质沉积,降低模型细胞SREBP-1c和FAS的mRNA及蛋白表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 滋阴益气活血解毒中药含药血清能够调节SREBP-1c和FAS表达,改善混合脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪性变.     

山银花黄酮类提取物对人肝L-02细胞甘油三酯蓄积及SREBP-1c表达的影响

目的观察山银花黄酮类提取物对人肝L-02细胞甘油三酯蓄积的影响,并初步探讨SREBP-1c蛋白及基因表达在其中的作用。方法油红O染色初步观察山银花黄酮类提取物对脂变人肝L-02细胞中脂滴形成的影响。然后以脂变人肝L-02细胞为模型,不同浓度(0、5、10、20 mg/L)山银花黄酮类提取物作用于细胞24 h以及10 mg/L山银花黄酮类提取物作用于细胞不同时间(0、12、24、48、72 h),生化试剂盒测定细胞内甘油三酯(TG)的含量,Western印迹法检测细胞内SREBP-1c蛋白表达变化,实时荧光定量PCR检测细胞内SREBP-1c mRNA表达变化。结果山银花黄酮类提取物显著降低人肝L-02细胞中脂滴含量,细胞内TG水平下降,SREBP-1c蛋白及基因表达下调,且呈现一定的剂量和时间依赖性。结论山银花中黄酮类提取物能引起人肝L-02细胞TG含量下降,且这种作用与SREBP-1c蛋白及基因表达下调有一定关系。     

二氢杨梅素上调SIRT1信号通路改善HepG2细胞甘油三酯蓄积

目的 探究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对肝细胞脂质代谢的影响及其与SIRT1信号通路的关系.方法 0.2 mmol/L棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h,诱导为脂肪变性肝细胞模型,再用0、5、10、20μmol/L DHM及20 μmol/L DHM+2μmol/L SIRT1抑制剂(EX527)分别干预24 h,CCK-8检测细胞增殖活性,油红0染色检测细胞脂滴形成情况,酶偶联比色法检测甘油三酯(triglyceride,TG)含量,蛋白免疫印迹法检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)的表达.结果 0.2 mmol/L PA和5、10、20 μmol/L DHM对细胞增殖活力没有显著影响(P＞0.05);5、10、20 μmol/L DHM处理后明显减少脂肪变性的HepG2细胞脂滴蓄积和甘油三酯含量(P＜0.01),增加磷酸化的AMPK(p-AMPK)和SIRT1的表达水平,并且降低脂质合成相关基因SREBP-lc、FAS、磷酸化的ACC(p-ACC)的蛋白表达,SIRT1抑制剂能显著增加脂肪变性的HepG2细胞的甘油三酯含量(P＜0.01),削弱DHM对脂肪变性HepG2细胞SREBP-1c、FAS、P-ACC表达的抑制作用.结论 DHM通过上调脂肪变性HepG2细胞SIRT1信号通路改善肝细胞脂肪变性.     

乙肝病毒X蛋白对油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积的影响

目的探讨乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)是否增加油酸钠诱导HepG2细胞的脂质沉积。方法将质粒pIRES2-eGFP-HBx瞬时转染入HepG2细胞中,建立表达HBx的细胞模型(HepG2-HBx);以转染空载体pIRES2-eGFP(HepG2-pIRES2)和HepG2细胞(HepG2)作对照。观察转染后绿色荧光蛋白(GFP)的表达;转染后16 h开始用油酸钠处理各组细胞24、48 h(分别命名为HBx/OA组、空/OA组、G2/OA组),细胞内甘油三酯(TG)含量测定及油红O染色了解细胞内脂质沉积情况;在油酸钠处理细胞24 h,RT-PCR法检测SREBP-1和LXRα的mRNA表达水平,Westernblot检测HBx、LXRα及FAS蛋白表达水平。结果转染后16 h HepG2-HBx细胞和HepG2-pIRES2细胞中开始有GFP的表达,提示转染成功;仅在HepG2-HBx细胞内有HBx表达,表明HepG2-HBx细胞模型构建成功。在相同油酸钠处理的条件下,HBx/OA组细胞内脂质含量和TG含量与对照组相比均明显增加(P<0.01)。在油酸钠处理细胞24 h,HBx/OA组细胞内LXRα、SREBP-1的mRNA表达量和LXRα、FAS蛋白表达量较对照组均明显增加(P<0.01/0.05)。结论 HBx通过上调HBx-LXRα-SREBP1/FAS通路脂质合成相关基因表达,可能增加HepG2-HBx细胞对外界脂代谢紊乱因素的易感性,从而增加油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积。     

不同膳食脂肪酸对大鼠肝脏SREBP-1c基因表达和非酒精性脂肪肝发生的影响

目的 探讨不同膳食脂肪酸构成对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)发生、发展的影响及其与固醇调节元件结合蛋白-1 c(SREBP-1c)的关系.方法 100只成年SD大鼠,按随机数字表法分为5组:对照组、NAFLD模型组、单不饱和脂肪酸组(monounsaturated fatty acid,MUFA)、n-6多不饱和脂肪酸组(n-6 polyunsaturated fatty acids,n-6 PUFA)和4∶1 n-6/n-3 PUFA组,每组20只.对照组用基础饲料喂养,其余各组饲料中加1％胆固醇和10％不同油脂(分别是10％猪油、10％橄榄油、10％玉米油、8％玉米油+2％鱼油).分别于第8、16周时,采用HE染色观察肝脏脂肪变性情况,测定血清和肝脏中脂质含量,采用实时定量PCR分析SREBP-1c、FAS mRNA表达,Western blot检测SREBP-1c、FAS的蛋白表达.结果 NAFLD模型组大鼠体质量显著高于对照组和其他膳食脂肪酸组(P＜0.05),模型组、MUFA组大鼠肝脏中TG含量显著高于对照组(P＜0.05),而n-6 PUFA组和4∶1n-6/n-3 PUFA组大鼠血清中TG及肝脏中TC、TG浓度显著低于模型组(P＜0.05);HE染色后,NAS量化评分显示模型组大鼠肝脏脂肪变性程度较对照组、MUFA组、n-6 PUFA组、4∶1 n-6/n-3 PUFA组严重;与对照组比较,NAFLD模型组大鼠肝脏SREBP-1c与FAS mRNA表达升高,MUFA组、n-6 PUFA组和4∶1 n-6/n-3 PUFA组SREBP-1c蛋白表达降低(P＜0.05).结论 降低膳食中饱和脂肪酸,增加不饱和脂肪酸(尤其是适当比例的n-6/n-3 PUFA)可下调高脂喂养大鼠肝内SREBP-1c的表达,延缓高脂膳食引起的NAFLD发生、发展.     

羟基肉桂酸对HepG2和C2C12细胞糖脂代谢的调节作用

目的 研究羟基肉桂酸对HepG2细胞脂质堆积和葡萄糖消耗及C2C12细胞葡萄糖摄取的调节作用及其机制.方法 利用油酸诱导HepG2细胞建立脂质堆积模型,通过油红O染色法观察不同浓度羟基肉桂酸对脂质堆积的作用,并检测细胞内总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量;同时,采用MTT法检测羟基肉桂酸对细胞活力的影响;通过葡萄糖消耗实验和葡萄糖摄取实验检测羟基肉桂酸对细胞葡萄糖利用的影响;采用实时荧光定量PCR技术分析糖脂代谢关键基因的表达.结果 羟基肉桂酸能够显著抑制油酸诱导的HepG2细胞脂质堆积,同时降低细胞中TC和TG含量;羟基肉桂酸还能够显著增强细胞对葡萄糖的消耗,促进葡萄糖的摄取,显著降低固醇调节元件结合蛋白-1a、-1c、-2和脂肪酸合酶,乙酰辅酶A羧化酶和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的mRNA表达水平,同时升高过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的表达.结论羟基肉桂酸具有调节细胞糖脂代谢的作用,能够改善HepG2细胞中的脂质堆积,并且显著提高葡萄糖的利用率.其作用机制可能与激活PPAR等关键基因的表达有关.     

Exendin-4对胰岛素抵抗人肝癌HepG2细胞脂代谢相关因子基因表达的影响

目的：探讨Exendin-4（Ex-4）对胰岛素抵抗（IR）人肝癌HepG₂细胞脂代谢相关因子表达的影响,阐明Ex-4改善IR的作用。方法：选取处于对数生长期的人肝癌HepG₂细胞,采用高浓度胰岛素诱导HepG₂细胞制备IR模型（HepG₂-IR细胞）,再将其分为对照组（不含胰岛素的HepG₂细胞）、IR组（IR模型,即HepG₂-IR细胞）和Ex-4组（IR模型中加入10 nmol·L^-1 Ex-4）。采用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD）检测细胞中葡萄糖消耗量,采用油红O染色观察细胞形态及胞内脂滴形成情况,应用甘油三酯（TG）试剂盒检测细胞中TG水平,采用荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）和载脂蛋白B100（apoB100）等脂代谢相关因子mRNA表达水平。结果：HepG₂细胞建立IR模型后,与对照组比较,IR组HepG₂-IR细胞葡萄糖消耗量明显降低（P<0.01）;与IR组比较,Ex-4组HepG₂-IR细胞葡萄糖消耗量明显增加（P<0.05）。油红O染色法,与对照组比较,IR组细胞含脂率明显升高（P<0.05）;与IR组比较,Ex-4组细胞中含脂率明显降低（P<0.05）。与对照组比较,IR组细胞中TG水平明显升高（P<0.01）;与IR组比较,Ex-4组细胞中TG水平明显降低（P<0.05）。qRT-PCR检测,与对照组比较,IR组细胞中ACC、FAS和SREBP-1c mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,apoB100mRNA表达水平明显降低（P<0.05）;与IR组比较,Ex-4组细胞中ACC、FAS和SREBP-1c mRNA表达水平降低（P<0.05）,apoB100 mRNA表达水平升高（P<0.01）。结论：Ex-4可通过调节人肝癌HepG₂细胞脂类代谢相关因子的表达进而改善IR。     

Kupffer细胞在果糖引起的非酒精性脂肪肝中的作用

目的探讨肝脏Kupffer细胞在果糖引起非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用及其可能的机制。方法选取48只雌性ICR小鼠随机分为4组:对照组、果糖组、三氯化钆(GdCl3)组和GdCl3+果糖组。对照组与GdCl3组小鼠均饮用自来水,GdCl3组同时给予GdCl3(10 mg/kg,ip)每周2次;果糖组与GdCl3+果糖组小鼠均饮用30%果糖水溶液,GdCl3+果糖组小鼠同时给予GdCl3(10 mg/kg,ip)每周2次。喂养10周后剖杀所有小鼠,取血清检测甘油三酯(TG)含量;取肝脏组织制备石蜡切片用于病理学检查,制备冰冻切片用于油红O染色;其它肝脏组织用于RT-PCR、Westernblot和肝脏TG含量检测。结果果糖组小鼠血清和肝脏TG含量显著升高,肝脏组织HE和油红O染色显示小鼠肝脏脂质沉积明显,而GdCl3干预明显降低果糖组小鼠肝脏TG含量,同时肝脏脂质沉积明显得到改善;果糖组小鼠肝脏核蛋白固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)明显激活,其靶基因肝脏脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)等TG合成相关酶表达水平显著上调,而GdCl3干预明显抑制肝脏核蛋白SREBP-1c的激活及其靶基因上调。结论果糖引起肝脏组织SREBP-1c激活导致肝细胞TG合成增加。肝脏Kupffer细胞激活在果糖诱导的小鼠肝脏SREBP-1c激活和脂质沉积中起重要作用。     

Regulation of Acyl-coenzyme A:Cholesterol Acyltransferase 2 Expression by Saturated Fatty Acids

Objective To verify the regulation of acyl-coenzyme A：cholesterol acyltransferase 2 （ACAT 2）, which is associated with cholesterol metabolism, by saturated fatty acids （SFAs）. Methods Palmitic acid （PA）, the most abundant saturated fatty acid in plasma, and oleic acid （OA）, a widely distributed unsaturated fatty acid, were used to treat hepatic cells HepG2, HuH7, and mouse primary hepatocytes. In addition, PA at different concentrations and PA treatment at different durations were applied in HepG2 cells. In in vivo experiment, three-month male C57/BL6 mice were fed with control diet and SFA diet containing hydrogenated coconut oil rich of SFAs. The mRNA level of ACAT2 in those hepatic cells and the mouse livers was detected with real-time polymerase chain reaction （PCR）. Results In the three types of hepatic cells treated with PA, that SFA induced significant increase of ACAT2 expression （P〈0.01）, whereas treatment with OA showed no significant effect. That effect of PA was noticed gradually rising along with the increase of PA concentration and the extension of PA treatment duration （both P〈0.05）. SFA diet feeding in mice resulted in a short-term and transient increase of ACAT2 expression in vivo, with a peak level appearing in the mice fed with SFA diet for two days （P〈0.05）. Conclusion SFA may regulate ACAT2 expression in human and mouse hepatic cells and in mouse livers.     

白藜芦醇通过上调脂肪变性HepG2细胞Sirt3表达改善线粒体功能

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对脂肪变性肝细胞线粒体功能的影响,以及沉默信息调节因子3(sirtuin 3,Sirt3)在其中的重要作用.方法 用0.2 mmol/L棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h建立肝细胞脂肪变性模型,再用40 μmol/L RSV和/或50 μmol/L Sirt3抑制剂3-TYP处理24 h.实验分为对照组、PA组、PA+ RSV组、PA+ RSV+ 3-TYP组、PA+ 3-TYP组.用相关试剂盒检测甘油三酯(TG)含量、沉默调节蛋白3(sirtuin 3,Sirt3)活性、ATP合酶活性、ATP生成量以及线粒体基础呼吸率,使用DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,Westernblot检测Sirt3蛋白表达.Sirt3 siRNA处理HepG2细胞后再用PA和/或RSV处理,分析ROS和甘油三酯含量.结果 相对于PA组,PA+RSV组HepG2细胞的甘油三酯、ROS含量明显降低(P＜0.05),ATP合酶活性、ATP生成量和基础呼吸率明显提高(P＜0.05).而3-TYP或Sirt3 siRNA处理后,RSV的上述作用被削弱(P＜0.05).结论 RSV通过上调脂肪变性肝细胞Sirt3的表达与活性而改善其线粒体功能.     

乙肝病毒X基因诱导肝细胞脂肪变性作用机制的研究

[摘要] 目的 探讨沉默肝X受体α(liver x receptor alpha,LXRα)对HepG2.2.15细胞脂质代谢相关基因表达的影响。方法 设立空白对照组（不转染任何质粒）、阴性对照组（转染阴性HK质粒）、shLXRα转染组（转染LXRα质粒）。构建针对LXRα基因的shLXRα质粒,转染HepG2.2.15细胞,荧光显微镜及Western blot检测转染质粒24～96h绿色荧光蛋白和LXRα蛋白的表达以确定质粒的最佳干扰时间,根据结果予油酸钠刺激细胞,甘油三酯（TG）检测细胞脂肪变程度,RT-PCR检测固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)mRNA的表达,Western blot检测乙肝病毒x蛋白(hepatitis B virus x protein, HBx)及脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)蛋白的表达。结果 成功构建shLXRα质粒并转染HepG2.2.15细胞;与空白对照组和阴性对照组比较,shLXRα转染组LXRα蛋白表达明显下降,于转染后48～72h表达最低[（0.43±0.03） vs (0.61±0.03),(0.33±0.03) vs (0.69±0.02),P＜0.01],差异有统计学意义;随着油酸钠处理时间延长各组TG含量、SREBP-1c mRNA水平、HBx和FAS蛋白表达均逐渐增加,同一时间点,HBx蛋白各组无明显差异（P>0.05）,而TG含量、SREBP-1c mRNA水平、FAS蛋白与空白对照组和阴性对照组比较, shLXRα转染组中表达较低[TG：（21.21±3.39）μg/mg vs（32.61±5.09）μg/mg];SREBP-1c：（0.418±0.051 vs 0.516±0.037;FAS：0.48±0.03 vs 0.63±0.03,P<0.01）,差异有统计学意义。结论 HBx对脂代谢的调控是通过LXRα/ SREBP-1c /FAS途径实现的。     

黄连碱促进肝细胞自噬及胆固醇外流改善脂肪肝的脂质蓄积

目的用油酸和棕榈酸处理HepG2细胞构建脂肪肝细胞模型,观察黄连碱（COP）对脂肪肝细胞中脂质蓄积的影响及其作用机制。方法采用100 μmol/L油酸和50 μmol/L棕榈酸诱导HepG2细胞脂肪变性形成细胞内脂质蓄积,构建脂肪肝细胞模型;通过CCK8检测不同浓度的黄连碱对HepG2细胞增殖活性的影响,设置4组细胞模型:对照组、脂肪肝细胞模型组（FFA组）、COP+HepG2组以及COP+FFA组;通过RT-PCR和Western blotting检测3组细胞的自噬基因LC3Ⅰ/Ⅱ、ATG5及胆固醇外流介导因子ABCA1 mRNA及蛋白水平的表达变化;采用油红O染色观察对照组、FFA组和COP+FFA组3组细胞的脂滴变化。结果油红O染色结果显示相较于对照组,HepG2细胞经过油酸和棕榈酸共同处理后的FFA组细胞内脂质明显增多;而COP+FFA组中细胞的脂滴明显减少。CCK8结果显示0~25 μmol/L的黄连碱对HepG2细胞活性无明显影响（P>0.05）。Western blotting与RT-PCR结果显示:相对于对照组,FFA组细胞自噬以及胆固醇外流ABCA1水平明显降低,而COP+HepG2组自噬基因LC3Ⅰ/Ⅱ和ATG5以及ABCA1表达水平明显升高;相对于FFA组,COP+FFA组细胞中脂质蓄积明显减少,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）,且自噬与胆固醇外流障碍也被改善。结论黄连碱可通过促进HepG2细胞自噬及胆固醇外流,减少油酸与棕榈酸诱导形成的脂肪肝细胞中的脂质蓄积。     

内质网应激诱导肝细胞脂肪沉积及可能机制

目的 利用毒胡萝卜素诱导肝细胞内质网应激模型,观察在内质网应激状态下肝细胞脂肪沉积情况,并初步探讨其分子机制.方法 以人L02、HepG2肝细胞株为研究靶细胞,将两种细胞均分为正常对照组和实验组(培养液内含毒胡萝卜素1 μmol/L),采用三酰甘油(TG)试剂盒、油红O染色检测肝细胞脂肪沉积情况,实时荧光定量PCR法检测SREBP-1c、LXRs的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测GRP78、SREBP-1c、LXRs的蛋白表达情况.结果 蛋白质印迹结果显示,实验组GRP78的表达较对照组升高(P＜0.05),表明肝细胞内质网应激模型建立成功.在内质网应激状态下,毒胡萝卜素作用48 h后实验组L02与HepG2细胞脂肪沉积均较对照组增加(P＜0.01).与对照组相比,实验组L02和HepG2细胞SREBP-1c在基因水平和蛋白水平表达均升高(P＜0.05),而LXRs在基因水平和蛋白水平的表达均无变化.结论 内质网应激可能通过上调SREBP-1c诱导肝细胞脂肪沉积,而LXRs未参与该过程.