丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HCV-RNA检测

目的 :了解丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞 (PBMC)中HCV RNA存在情况及其意义。方法 :采用套式PCR检测 38例急性丙型肝炎和 36例慢性丙型肝炎患者血清和外周血PBMC中HCV RNA。结果 :74例丙型肝炎患者血清HCV RNA阳性 6 8例 ,PBMC阳性 44例 ;急性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA阳性 15例 (39.5 % ) ,慢性丙型肝炎患者PBMC中阳性 2 9例 (80 .6 % )。慢性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于急性丙型肝炎患者 (P <0 .0 1)。 3例血清HCV RNA阴性 ,而PBMC中HCV RNA均阳性 ;8例患者血清抗 HCV阴性 ,而血清HCV RNA均阳性。结论 :PBMC可能为HCV肝外贮存和复制场所 ,PBMC中的HCV感染在丙型肝炎慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用 ;血清HCV RNA检测有助于抗 HCV阴性丙型肝炎的诊断。     

套式PCR法检测慢性丙肝患者PBMC及血清中HCV-RNA的意义

目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）内HCV－RNA与血清中HCV－RNA的相互关系及其在慢性丙肝发病机制中的作用。方法 用套式PCR（RT－nested-PCR)对124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者的PBMC及血清中HCV－RNA进行检测。结果 124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者中,PBMC及血清中HCV－RNA阳性率分别为53．23％（66／124）和64．52％（80／124）,经χ^2检验,两者差异无显著性（P＞0．05）。各慢肝组PBMC与血清HCV－RNA阳性率相比,差异均无显著性（P＞0．05）。结论 HCV可隐匿于患者PBMC中;PBMC中HCV－RNA与血清中HCV－RNA似有一致性倾向。PBMC中HCV－RNA检测不仅是对常规血清检测的重要补充,而且是HCV肝外感染的直接证据,是导致丙型病毒性肝炎患者易于慢性化的重要原因之一。     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞内HCV RNA的定量测定

目的：明确丙型肝炎患者外周血单个核细胞内是否可检测到HCV RNA,以及外周血清与PBMCs中HCV RNA载量的相关性。方法：通过SYBR Green Realtime PCR对丙型肝炎患者外周血单个核细胞内及血清中HCV RNA进行定量检测。结果：40例抗HCV阳性的患者中35例血清HCVRNA阳性,5例血清HCVRNA阴性,35例血清HCVRNA阳性的患者中30例PBMCs中可测定到HCVRNA,而5例血清HCVRNA阴性的患者中2例PBMCs中检测到HCVRNA。统计分析示患者外周血清与PBMCs中HCVRNA载量无相关性（P〉0.05）。结论：HCV患者PBMCs中可测定到HCV RNA,外周血清与PB-MCs中HCV RNA载量无相关性。     

HCV感染者血清及外周血单个核细胞HCV RNA检测及其意义

目的：探讨同时检测HCV感染者血清及外周血单个核细胞（PBMC）中HCVＲＮＡ的意义。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ方法对３１例ＨＣＶ感染者进行血清及ＰＢＭＣ ＨＣＶ ＲＮＡ检测。结果 ＰＢＭＣ ＨＣＶRNA阳性率（74．19％,23／31）显著高于血清HCV RNA阳性率（23．03％,9／31）。结论：同时检测HCV感染者血清及外周血单个核细胞（PBMC）中HCV RNA可减少漏诊,PBMC中的HCV可能是HCV感染慢性化的重要之一。通过对HCV感染者同时进行血清及PBMC中HCV ＲＮＡ检测,可为丙型肝炎的诊断、治疗及预后的判断提供较为可靠的指标,对丙型肝炎慢性化机制的研究具有重要意义。     

慢性HCV感染患者RNA、ALT、AST水平以及细胞因子之间的关系

目的：研究慢性HCV感染患者HCV RNA水平，ALT、AST以及外周血单个核细胞（PBMCs）体外细胞因子分泌之间的关系。方法：体外培养慢性HCV感染患者PBMCs72小时后，ELISA检测培养上清细胞因子（IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF—α）含量，荧光定量PCR检测患者血清HCV RNA含量。结果：RNA阳性患者ALT、AST水平明显高于阴性患者，但阳性患者之间，ALT、AST水平无显著差异。不论RNA滴度高低，细胞因子分泌水平均无差异。相关性分析表明IFN-γ与ALT、AST有一定相关性（r=-0．8178，P=0．02；r=0．7517．P=0．04）。结论：血清HCV RNA水平与肝损伤有关，INF-γ在抗HCV免疫应答的同时可能对肝脏也造成了一定损伤。     

慢性HCV感染患者PBMC体外Th1类细胞因子分泌及其相关因素分析

目的：研究慢性HCV（丙型肝炎病毒）感染患者外周血单个核细胞（PBMC）体外Th1细胞因子的分泌，进一步了解HCV感染慢性化和肝损伤机制．方法：体外培养慢性HCV感染患者PBMC72h后，ELISA检测培养上清Th1类细胞因子（IL-2，IFN-γ，TNF-α），荧光定量PCR检测患者血清HCVRNA含量，RT-PCR检测HCVRNA亚型．结果：与正常人相比，IFN-γ在HCV RNA阴性患者中明显增高，而在RNA阳性患者中无明显升高．TNF-α则不论RNA滴度的高低均较正常人显著增高．RNA阳性患者ALT（丙氨酸氨基转移酶），AST（门冬氨酸氨基转移酶）水平明显高于阴性患者．不同HCV基因型感染的患者IFN-γ，TNF-α的分泌无显著差异．结论：IFN-γ在清除病毒中起重要作用，TNF-α是引起肝脏损伤的重要因素之一．     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞的进一步研究

为进一步研究外周血单个核细胞 (PBMC)感染丙型肝炎病毒 (HCV)的状况。用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)、地高辛标记 HCV探针作原位杂交和链酶亲和素 -生物素 (SABC)作免疫组化三项技术 ,检测血清和 PBMC中的 HCV RNA和 HCV NS5 抗原。结果显示 RT- PCR检测的 2 0例慢性丙型肝炎患者 ,除去 4例接受干扰素治疗者 ,余16例中有 14例 (87.5 % )血清 HCV RNA阳性 ,2例血清 HCV RNA阴性者的 PBMC- HCV RNA阳性。对 RT- PCR检测的 9例 PBMC- HCV RNA阳性患者 ,进一步用原位杂交和免疫组化技术 ,分别检测 PBMC中的 HCV RNA和HCV NS5 抗原。显示这几种方法的检测结果是基本一致的 ,呈正相关关系。患者的 PBMC中的 HCV RNA和 HCV NS5抗原呈散在颗粒状或弥漫分布 ,主要位于胞浆中 ,HCV NS5 抗原还分布于胞膜上。证实 HCV可以感染 PBMC,并在其中复制 ,复制部位在胞浆。     

慢性丙型肝炎患者采用α2b干素治疗前后PBMC内HCV—RNA的变化

目的：探讨α2b干素对慢性丙型肝炎（丙肝）患者的治疗效果。方法：采用国产α2b干素（300MU／d）治疗，3个月为一疗程，共2个疗程，并设常规治疗组（VitC、门冬氨酸）为对照。于疗程结束后分别检测患者PBMC内HCV－RNA和血清内CV-RNA、抗－HCV。结果：α2b干素治疗组2个疗程后慢性丙肝患者PBMC、血清内HCV－RNA和抗－HCV转阴率分别为42．31％、57．69％、65．38％，常规治疗组慢性丙肝患者PBMC、血清内HCV－RNA和抗－HCV转阴率分别为13．64％、22．73％、27．27％，两组差异均有显著性（P＜0．05－P＜0．01）。结论：α2b干素对血清及PBMC内HCV－RNA具有肯定的治疗作用，其疗效优于常规治疗组，但对PBMC内HCV－RNA的疗效似有比抗血清内HCV－RNA和抗－HCV疗效弱的趋势。     

HIV、HCV复合感染患者HAART治疗后CD4＋细胞计数和HCV RNA变化的研究

目的了解河南省某县HIV感染者HIV、HCV复合感染状况以及高效抗逆转录病毒治疗（HAART）后CD4＋细胞计数和HCV RNA的变化。方法测定HIV感染者HCV—IgG、CD4＋细胞计数、血浆HIV和HCV病毒栽量。采用单因素方差分析比较应用HAART后CIM＋细胞计数和HCV RNA的变化。结果228名HIV感染者中，HCV—IgG阳性率88、6％（202／228）。在HAART超过6个月且HCV—IgG阳性的病人中，HIV RNA阴性（B组）的CD4＋细胞计数显著高于HIV RNA阳性的患者（A组）（P=0．020）；而两组的HCV RNA病毒栽量差异无统计学意义（P=0．749）。结论河南地区HIV、HCV复合感染在血液传播的HIV感染者中普遍存在。经HAART治疗的患者随着血浆HIV RNA转阴，CD4＋细胞计数显著升高，但血浆中HCV RNA的含量无显著变化。     

HCV感染者外周血CD4^＋T细胞计数与病毒载量的相关性分析

目的：通过分析HCV感染者CD4^＋T细胞计数与病毒裁量（HCVVL）的相关性,探讨HCV感染时病毒水平对机体免疫状况的影响。方法：采用流式细胞技术和荧光定量PCR技术,对64例HCV感染者外周血CD4^＋T细胞计数与HCV—RNA进行检测。结果：HCV—RNA阳性组与HCV—RNA阴性组间CD4^＋T细胞计数差异无显著性（P〉0．05）;HCV—RNA阳性组CD4^＋T细胞计数与病毒载量间无相关关系（r=-0．141,P=0．406）。结论：HCV感染是否影响患者的免疫功能有待进一步研究。