间充质干细胞对大鼠心脏移植免疫的调节作用

目的:观察骨髓间充质干细胞(MSC)对大鼠心脏移植的免疫调节作用.方法:实验共分3组,同种同系移植组(Ⅰ组),供受体均为SD大鼠;同种异系非给药组(Ⅱ组),供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠;同种异系给药组(Ⅲ组),供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠.建立大鼠心脏移植动物模型,贴壁法分离培养大鼠MSC,由Ⅲ组受体颈外静脉注入.观察3组移植后大鼠的存活时间,苏木精-伊红染色观察移植心脏淋巴细胞浸润程度.结果:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的平均存活时间分别为(20.8±4.8)d、(6.6±0.9)d、(7.0±1.2)d,Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅰ组比较,均差异有统计学意义(P<0.05);但Ⅱ组与Ⅲ组间比较差异无统计学意义.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组移植心脏病理学分级评分分别为(0.24±0.27)、(3.10±0.55)、(3.00±0.61),Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅰ组比较,均差异有统计学意义(P<0.05);但Ⅱ组与Ⅲ组间比较差异无统计学意义.结论:MSC在体外混合淋巴细胞反应中能够抑制T细胞增殖,但是在体内实验中对移植物的存活时间无明显的延长及对移植物的淋巴细胞浸润无明显抑制作用.     

小鼠心脏移植后穿孔素及颗粒酶B表达水平与急性排斥反应的关系

目的:研究穿孔素和颗粒酶B蛋白在心脏移植后表达水平变化与心脏移植急性排斥反应的关系.方法:采用小鼠腹部心脏移植模型,分为移植排斥组、实验处理组和同系移植组,每组20对.观察移植物存活时间、供心病理改变.采用Western blot法检测受鼠脾脏淋巴细胞穿孔素及颗粒酶B蛋白表达水平,免疫荧光方法观察心脏移植物内穿孔素及颗粒酶B的表达情况.结果:移植排斥组及实验处理组移植物平均存活时间分别为7.8±0.77 d、14.80±1.01d,同系移植组移植物存活均超过28 d,三组差异有显著性.移植排斥组与实验组及同系移植组相比较,移植物内心肌细胞变性坏死严重并有大量炎性细胞浸润.移植术后7 d,移植排斥组与实验处理组和同系移植组相比,受鼠脾脏淋巴细胞穿孔素蛋白表达分别增加3.02倍、4.13倍.颗粒酶B蛋白表达分别增加3.44倍、2.50倍,差异有显著性.与另外两组相比,移植排斥组心脏移植物冠状动脉分支内充填大量穿孔素与颗粒酶B阳性细胞,组织间隙内也有较多双阳性细胞浸润.结论:穿孔素与颗粒酶B蛋白表达增加与急性排斥反应相关,可作为急性排斥反应的早期诊断指标.     

粉防己碱治疗大鼠移植心脏慢性排斥的实验研究

目的应用大鼠异位心脏移植模型研究粉防己碱(TET)对慢性排斥反应(CR)的抑制作用.方法异品系颈部心脏移植(SD大鼠移植于Wistar大鼠)受体鼠每日给予环孢霉素A(CsA)灌胃(1.5 mg/kg)以诱导CR;异品系大鼠分两组:25 mg/kgTET组大鼠同时每日给予25 mg/kgTET灌胃,50 mg/kg TET组同时给予50 rog/kg TET灌胃;Wistar大鼠间的心脏移植(同系对照组)不用任何药物治疗.12周后取移植心脏做组织学检查,以HPIAS-1000图像分析仪测量动脉管壁与血管直径的比值.结果对照组移植心脏可见明显的纤维化,大量单核细胞浸润,动脉硬化明显,动脉管壁与血管直径的平均比值明显高于同系对照(0.64±0.20vs0.23±0.07,P＜0.01)和TET 50mg/kg组(0.64±0.20vs0.33±0.11,P＜0.05),TET 25 mg/kg组的动脉管壁与血管直径的平均比值为0.40±0.13,高于同系对照组(P＜0.05),但与异系对照组及TET 50mg治疗组比较无统计学意义.结论TET具有明显的抗移植物CR作用,其主要作用机制有待进一步研究.     

受体胸腺内注射Fas抗体对急性移植排异的作用及机制

目的:探讨胸腺内注射死亡受体(Fas)抗体对心脏移植急性排异、半胱氨酸基天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)表达及心肌细胞凋亡的影响。方法:应用大鼠腹腔心脏移植模型(供体:Wistar大鼠,受体:SD大鼠),随机分为实验组、环孢素组和对照组。心脏移植前24h,向实验组受体胸腺内注射Fas抗体(0.1mg/kg)1次,腹腔注射生理盐水2mL1次/d;向环孢素组受体胸腺内注射磷酸缓冲液(PBS)(1mL)1次,腹腔注射环孢素(8mg/kg)1次/d;向对照组受体胸腺内注射PBS(1mL)1次,腹腔注射生理盐水(2mL)1次/d。术后5d取移植心脏,进行病理学检查,排斥分级;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植心脏Caspase-3 mRNA表达;免疫组化检测Caspase-3蛋白表达;原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果:1.排斥级别:实验组2.13±0.64低于对照组3.75±0.46高于环饱素组1.25±0.68(P<0.05);2.Caspase-3 mRNA水平:实验组0.62±0.05低于对照组0.87±0.12,高于环孢素组0.59±0.08(P<0.05);3.Caspase-3蛋白阳性细胞数:实验组113±12.5低于对照组223±4.80高于环孢素组95±4.50(P<0.05);4.凋亡指数:实验组7.32±0.58低于对照组11.07±1.18高于环孢素组5.67±0.43(P<0.05)。结论:受体胸腺内注射Fas抗体减轻心脏移植急性排异程度。机理是下调移植心脏Caspase-3基因mRNA及蛋白表达、减少心肌细胞凋亡。     

苏木提取物对心脏移植大鼠T淋巴细胞亚群的免疫抑制和对心肌的保护作用

目的 探讨苏木不同提取物对心脏移植后大鼠T淋巴细胞亚群的免疫抑制和对心肌的保护作用。方法 应用大鼠腹腔同种异位心脏移植模型。受体来源于SD大鼠，供体Wistar大鼠。实验分为苏木醇提物组，苏木酯提物组、苏木水提物组、心脏移植组、对照组。术前2天给药，术后第7天采血，应用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群的变化，并检测心肌组织的病理改变。结果 苏木醇提物及水提物可抑制大鼠心脏移植后外周血CD4^ ／CD8^ 的升高，并可减轻心脏移植后急性排斥反应所引起的心肌病理损害。结论 在苏木的不同提取物中，苏木醇提物和水提物对心脏移植后发生的急性免疫排斥反应有明显的抑制作用，对心肌有明显的保护作用。     

转化生长因子-β2在粉防己碱对抗大鼠移植心脏慢性排斥中的作用

目的研究转化生长因子-β2(TGF-β2)在粉防己碱(TET)对抗移植心脏慢性排斥反应中的作用.方法Wistar-Wistar和SD-Wister大鼠间的颈部心脏移植分别作为同系和异系对照.TET治疗组(SD-Wistar)大鼠每日另给予50mg/kg TET灌胃,异系对照和TET治疗组大鼠每日给予环孢素A灌胃(1.5 mg/kg),同系对照不用任何药物治疗.12周后取移植心脏做组织学检查,免疫组织化学检测组织中TGF-β2表达,以图像分析仪计算阳性率.结果异系对照动脉管壁占血管直径的比值为0.64±0.20,明显高于同系对照组(0.23±0.07,P＜0.01)和TET治疗组(0.33±0.11,P＜0.05);TGF-β2在同系对照低度表达,异系对照的表达明显增强,TET治疗组的TGF-β2表达则明显减少.结论TGF-β2在慢性排斥的发生中具有重要作用,抑制TGF-β2表达,可能是TET抗慢性排斥的作用机制之一.     

CsA对大鼠移植心脏细胞凋亡的影响

目的 :探讨细胞凋亡与心脏移植急、慢性排斥反应之间的关系。方法 :Wistar大鼠为供体 ,SD大鼠为受体 ,心脏移植术后给予环孢霉素A(CsA)治疗 ,在移植术后的不同时间 ,取下移植心脏 ,流式细胞术测定移植心脏组织的细胞凋亡率。结果 :CsA治疗的慢性排斥反应组 ,移植心脏的细胞凋亡率显著增高。结论 :细胞凋亡参与移植排斥反应 ,移植心脏细胞凋亡率的检测可作为诊断排斥反应和移植物能否长期存活的指标之一。     

RANTES在肝肾联合移植排斥反应中的表达及意义

目的:探讨大鼠肝肾联合移植排斥反应中移植物RANTES的表达.方法:将SD、Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、同种同基因移植组(B组)、同种异基因移植组(C组).应用袖套法建立大鼠肝肾联合移植模型.分别对A组肝肾组织及移植后1、4、7 d肝肾组织进行活检,行免疫组化染色,然后进行图像半定量分析,以检测正常及移植肝肾组织中RANTES的表达水平.结果:移植1、4、7 d后,C组大鼠肝肾组织RANTES分子表达与A组及B组比较有差异(A组,肝:168.10±13.62,129.10±9.04,97.60±15.16 vs 226.20±5.73;肾:174.40±14.23.149.19±18.88,141.70±14.95 vs 219.40±lO.70,均.P<0.05;B组,肝:224.25±12.15,217.05±15.82,214.28±12.00;肾:216.50±13.20,211.70±11.02,207.68±15.28),且RANTES分子表达与移植术后的排斥程度呈正相关.结论:移植肝肾中RANTES的表达可能对诊断肝肾联合移植急性排斥及判断反应的严重程度具有参考价值.     

血管内皮细胞生长因子在大鼠心脏移植急性排斥期的表达研究

目的:观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大鼠心脏移植急性排斥期中的表达及与排斥反应的关系。方法:实验分为对照组和环孢霉素A(CSA)组,每组27只。采用颈部心脏异位移植术式建立移植模型,于心脏移植手术后分别静脉给予0.85%氯化钠溶液及CSA干预。常规监测排斥反应发生情况。每组7只用于观察移植物存活时间,余20只移植术后1,3,7,11d各切取5例移植心标本。样本采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)的方法检测移植心VEGF的DNA表达水平。结果:CSA组移植心存活时间[(21.1±2.9)d]长于对照组[(12.4±2.3)d],P<0.01;对照组各采样时段VEGF的DNA表达强度均强于CSA组,P<0.01。结论:VEGF高表达与移植心的炎性浸润以及急性排斥有密切关系。     

胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响

目的:研究受体胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响。方法:应用大鼠同种异位腹腔心脏移植模型,将模型动物随机分为三组,每组8只动物。A组:移植前后不给予处置;B组:给环孢素A,按每日8mg/kg于术前1d口服;C组:胸腺注射Fas抗体,以0.1mg/kg剂量在术前注射。以免疫组化法和逆转聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察术后移植心脏局部的Fas及FasL的表达情况。结果:与A组相比,受体胸腺内注射Fas抗体可减少移植心脏局部的Fas/FasL基因表达(RT-PCR法半定量结果P0.05)和蛋白表达(免疫组化法P0.05)。结论:受体胸腺内注射Fas抗体是一种有效的抑制心脏移植急性排斥反应的方法,可使移植心肌局部Fas/FasL表达下调。     

Effects of alkaloid sinomenine on levels of IFN-γ, IL-1β, TNF-α and IL-6 in a rat renal allograft model

Aims: To evaluate the immunosuppressive efficacy of alkaloid sinomenine (SIN) and the synergistic effects in combination with cyclosporin A (CsA) in acute rejection after rat renal allograft. Materials & methods: Animals were treated with saline in group 1, SIN (30 mg/kg/d) in group 2, CsA (2.5 mg/kg/d) in group 3 and SIN (30 mg/kg/d) + CsA(2.5 mg/kg/d) in group 4. Another 12 syngeneic renal transplantation animals were treated with saline as control. Survival time is observed. The levels of serum creatinine (Scr) and blood urea nitrogen (Bun) were detected; the secretion of IFN-γ, IL-1β, TNF-α and IL-6 were detected by ELISA. The kidneys were fixed to perform histological staining. Results: The mean survival time was 8.00 ± 2.10 days in group 1, 10.67 ± 1.21 days in group 2, 11.00 ± 1.41 days in group 3 and 19.67 ± 2.80 days in group 4, while all the recipients survived more than 180 days in the control group. The 24-h urinary volume and urinary time of the other three groups were increased significantly compared with group 1. The levels of Scr and Bun, levels of IFN-γ, IL-1β, TNF-α and IL-6 were significantly higher in group 1 than that in the other three groups; there were significant differences between group 4 and group 2 or 3. Conclusion: Our study showed that SIN had immunosupression effects in rat renal allograft models, it also had a synergistic effect in combination with CsA, which provided a new immunosuppressant for clinical application.     

Formation of microchimerism in rat small bowel transplantation by splenocyte infusion

AIM: To investigate the effect of donor splenocyte infusion combined with cyclosporine A (CsA) on rejection of rat small bowel transplantation (SBT). METHODS: Male Sprague-Dawley (SD) rats and female Wistar rats weighing 230-270 g were used as donors and recipients respectively in the study. Heterotopic small bowel transplantation was performed. The rats were divided into three groups: group one receiving allotransplantation (SD rarr Wistar), group two receiving allotransplantation (SD rarr Wistar) + donor splenocyte infusion, group three receiving allotransplantation (SD rarr Wistar) + donor splenocyte infusion + CsA followed by CsA 10 mg/kg per day after transplantation, in which recipient Wistar rats were injected with 2 x 10(8) SD splenocytes 28 d before transplantation, and treated with CsA after transplantation. Finally, the specific DNA fragment of donor Y chromosome was detected in recipient peripheral blood and skin by PCR. The survival time after small bowel transplantation was observed. Gross and histopathological examinations were performed. RESULTS: The survival time after small bowel trans-plantation was 7.1 +/- 1.2 d in group 1, 18.4 +/- 3.6 d in group 2 and 31.5 +/- 3.1 d in group 3. The survival time was significant longer (P < 0.01) in group 3 than in groups 1 and 2. The gross and histopathological examination showed that the rejection degree in group 3 was lower than that in groups 1 and 2. CONCLUSION: Donor splenocyte infusion combined with CsA decreases remarkably the rejection and prolongs the survival time after rat small bowel transplantation.     

他克莫司治疗移植肾慢性排斥的初步临床观察

目的：探讨他克莫司（FK506）、环孢素A（CsA)治疗移植肾慢性排斥（CR)的可行性及安全性。方法：40例同种异体肾移植患者肾功能减退经病理证实为CR，随机分为CsA切我为FK506组20例、继续使用CsA组20例。观察各组移植肾功能、肾小球滤过率、蛋白尿、血压、血脂变化及急性排斥（AR）发生率，治疗后随访12个月。结果：追踪12个月，FK506组16例移植肾功能稳定（80％）；3例行血液透析治疗，1例死亡，人存活率95％。CsA组15例移植肾功能稳定，3例行血液透析治疗，逆转成功率75％；2例死亡，人存活率90％。结论：FK506可以延缓慢性移植物失功。FK506的使用是安全和有效的。     

培哚普利在糖尿病大鼠肢体缺血后血管再生中的作用

目的探讨培哚普利在1型糖尿病（T1DM）大鼠肢体缺血后血管再生中的作用及相关机制。方法对T1DM大鼠模型予单侧肢体股动脉离断。分为对照（DM）组、培哚普利治疗（DMA）组和培哚普利＋内皮型一氧化氮合酶（eNOS）阻断剂治疗（DML）组。治疗4周后比较各组缺血肢体血管再生情况以及eNOS、血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的mRNA和蛋白表达水平。结果与正常对照（Nc）组相比,DM组的缺血肢体微血管密度（MVD）、eNOS、VEGF和bFGF的mRNA和蛋白表达均下降,DMA组上述指标明显上调（P均〈0．05）。DML组的MVD、eNOS和bFGF的mRNA和蛋白表达降低（P〈0．05）,而VEGF表达不受影响（P〉0．05）。结论T1DM大鼠的缺血性血管再生受损,与之有关的生长因子表达下调。培哚普利能促进T1DM大鼠缺血肢体的血管再生,其机制与eNOS、VEGF和bFGF的表达上调有关。     

Pretreatment with cyclosporine and anti-interleukin 2 receptor antibody abrogates the anti-idiotype response in rat recipients of cardiac allografts.

A 10-day course with ART-18, a mouse monoclonal antibody (mAb) directed against the rat interleukin 2 receptor (IL-2R), prolongs the survival of (LEW x BN)F1 cardiac allografts in LEW recipients to approximately 3 weeks (acute rejection = 8 days, P less than 0.001). We examined host responses against ART-18 idiotype (Id) and mouse immunoglobulin in recipients immunomodulated with ART-18 mAb. Treatment with ART-18 elicited high titers of anti-Id antibodies 14 days after transplantation. However, naive rats given ART-18 before transplantation showed strong anti-Id responses as early as day 4 after engraftment, coinciding with abrogation of the treatment effect (graft survival, approximately 10 days). Preimmunization with irrelevant mouse IgG, which elicited high titers of anti-IgG, did not influence the efficacy of ART-18 upon graft survival (17 days). The use of cyclosporin A (CsA) in conjunction with ART-18 prior to transplantation suppressed the anti-Id response and led to dramatic graft prolongation (greater than 58 days), with two of five grafts surviving indefinitely. This striking effect of CsA plus ART-18 pretreatment did not depend upon CsA per se, as grafts were rejected within 12 days in animals pretreated with CsA alone; in both groups CsA trough levels were comparable. Moreover, administration of CsA before transplantation in concert with control IgG (instead of ART-18) prompted rejection within 2-4 weeks. Thus, discrete interaction(s) between anti-IL-2R mAb and CsA prior to engraftment induces partial host unresponsiveness/tolerance to anti-IL-2R mAb treatment following transplantation and suppresses the neutralizing anti-Id responses, which results in long-term/permanent graft acceptance. This study provides a strategy to overcome the anti-Id response mounted by graft recipients that otherwise limits the efficacy of anti-IL-2R mAb treatment.     

缺氧预适应通过蛋白激酶C途径上调心肌细胞促血管生成因子的表达

目的 :研究缺氧预适应 （HPC）对心肌细胞血管内皮生长因子 （VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子表达的影响。方法 :建立体外培养的新生大鼠心肌细胞 HPC模型 ,免疫组织化学法结合计算机图像分析 ,研究 HPC对心肌细胞血管内皮生长因子 （VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子 （b FGF）表达的影响以及蛋白激酶 C（PKC）在此过程中的作用。结果 :心肌细胞 HPC后 ,VEGF和 b FGF表达显著增多 ,阳性染色吸光度值明显升高。 PKC抑制剂 chel-erythrine chloride（Che）可拮抗 HPC促进心肌细胞表达 VEGF和 b FGF的作用。结论 :HPC可促进心肌细胞VEGF和 b FGF的表达 ,此作用是通过激活 PKC途径介导的     

血管内皮生长因子和内皮素在低氧性肺血管重建中的作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和内皮素(ET)-1在低氧性肺动脉高压(HPH)及其肺血管重建中的作用,并观察钾通道开放剂(pinacidil)对HPH的防治作用及对VEGF和ET-1的影响.方法Wister大鼠46只,随机分为3组,对照组15只,低氧组16只,治疗组15只.缺氧组和治疗组大鼠缺氧[氧浓度为(10.0±0.5)%]4周,每天缺氧8h,其中治疗组大鼠于每天缺氧前腹腔注射pinacidil3mg/kg.缺氧4周后测定各组大鼠血清VEGF和血浆ET-1水平、平均肺动脉压(mPAP)、右心室(RV)/[左心室(LV)+室间隔(S)]比值及肺小动脉病理及其形态计量学.结果(1)缺氧组大鼠血清VEGF[(118.73±55.40)ng/L]和血浆ET-1[(221.2±56.2)ng/L]水平明显高于对照组(P＜0.01);缺氧组较对照组mPAP升高,RV/(LV+S)比值增高,肺小动脉血管壁显著增厚,管腔明显狭窄.(2)治疗组大鼠血清VEGF[(78.20±16.45)ng/L]和血浆ET-1[(181.6±30.5)ng/L]水平明显低于缺氧组(P＜0.01);治疗组较缺氧组mPAP下降(P＜0.01),肺小动脉血管壁增厚、管腔狭窄等明显减轻,但治疗组上述各指标仍未完全恢复到对照组水平.结论VEGF和ET-1在HPH及其肺血管重建中发挥重要作用,钾通道开放剂对HPH及其肺血管重建具有一定的逆转作用.     

SHH信号通路激活对急性心肌梗死大鼠缺血心肌血管再生的作用

目的 探讨SHH(sonic hedgehog)信号通路激活对急性心肌梗死(AMI)大鼠缺血心肌血管再生作用及机制。方法 雄性成年SD大鼠80只,体质量（150~200）g采用结扎大鼠左前降支的方法制备AMI大鼠模型,随机分为单纯心肌梗死(AMI)组,外源性重组人SHH蛋白（rhSHH）处理组,SHH信号通路抑制剂Cyclopamine(CYC)处理组,连续处理7 d后,利用VIII因子免疫组织化学染色测定rhSHH对AMI大鼠缺血心肌微血管密度的影响;TTC染色观察各组心肌梗死面积;ELISA和RT-PCR方法测定AMI大鼠缺血心肌促血管再生相关的指标血管内皮生长因子(VEGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及血管生成素(Ang)-1的血清和mRNA表达;Western blot检测各组SHH信号通路相关蛋白SHH,SMO,Gli-1的蛋白表达。结果 与AMI组相比,rhSHH处理后缺血心肌微血管密度显著增加（P<0.05）,心肌梗死面积减小（P<0.01）,血管生长因子VEGF,bFGF,Ang-1的血清水平和mRNA表达显著增加（P<0.01）,心肌梗死边缘区SHH信号通路下游靶分子(SHH,SMO,Gli-1)的蛋白表达显著增加（P<0.05）;这种影响可以被SHH信号通路抑制剂Cyclopamine所逆转（P<0.01）。结论 激活SHH通路可增加缺血心肌血管生长因子VEGF,bFGF,Ang-1的表达,促进急性心肌梗死大鼠的血管再生。     

参芪止血胶囊对大鼠增生型子宫内膜VEGF和bFGF表达的影响

目的观察参芪止血胶囊(SQZC)对大鼠增生型子宫内膜中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响,探讨其治疗功能性子宫出血病的作用机制。方法 SD大鼠灌胃给予已烯雌酚1mg/kg,每天1次,连续10 d,建立大鼠子宫内膜增生模型。模型大鼠随机分为SQZC 90、180、360 mg/kg的低、中、高剂量组和模型对照组,连续给药14 d。采用免疫组化SP法检测各组大鼠子宫内膜中VEGF和bFGF的表达水平。结果模型组大鼠子宫内膜中VEGF和bFGF的表达水平均显著高于正常对照组(P<0.05)。SQZC中、高剂量组VEGF和bFGF的表达水平显著低于模型对照组(P<0.05)。结论 SQZC可以调理和保护子宫内膜,治疗功血的作用与抑制子宫内膜中VEGF和bFGF因子的过度表达有关。